维甲酸相关孤核受体α抵抗小鼠压力负荷型心肌损伤的作用及机制研究.pdf

中国体外循环杂志2023年12月29日第21卷第6期 Chin J ECC Vo1.21 No.6 December 29,2023维甲酸相关孤核受体抵抗小鼠压力负荷型心肌损伤的作用及机制研究杨家昌，张彬，朱瀚朝，李霞云，江丽青，金振晓，刘金成，段维勋，俞世强 摘要：目的 探究维甲酸相关孤核受体（ROR）在小鼠压力负荷引起的心肌损伤中的具体作用。方法 通过小鼠主动脉弓缩窄手术（TAC）后8周建立压力负荷型心肌损伤模型。实验小鼠分为以下4组：假手术（Sham）+空载病毒（null）处理组（Sham+null组）、Sham+心肌特异性过表达ROR病毒处理组（Sham+ROR组）、TAC+null组、TAC+ROR组。TAC后8周检测心肌ROR表达水平；心脏收缩功能；心肌纤维化指标包括心肌血管周纤维化百分比、组织间隙纤维化百分比、结缔组织生长因子（CTGF）、I型胶原蛋白（Collagen）表达水平；心肌肥厚指标包括心脏体重比、心肌细胞平均横截面积、脑钠肽（BNP）表达水平；氧化应激指标包括活性氧（ROS）产量、丙二醛（MDA）水平、超氧化物歧化酶（SOD）活性、核因子红系2相关因子2（Nrf2）、超氧化物歧化酶2（SOD2）表达水平；炎症反应指标包括核因子-基因结合（NF-B）含量、肿瘤坏死因子-（TNF-）表达水平。结果 与TAC+null组相比，TAC+ROR组小鼠心脏ROR表达水平明显增高；心脏收缩功能显著改善；心肌纤维化指标包括心肌血管周纤维化百分比、组织间隙纤维化百分比、CTGF、Collagen 表达水平显著降低；心肌肥厚指标包括心脏体重比、心肌细胞平均横截面积、BNP表达水平显著降低；氧化应激指标包括心肌ROS生成、MDA含量显著降低，而Nrf2、SOD2表达水平明显增高；炎症反应指标包括心肌NF-B、TNF-表达水平显著降低（均P0.05）。结论 心肌特异性过表达ROR处理可通过抑制心肌组织氧化应激和炎症反应、延缓TAC所致的心肌肥厚和心肌纤维化，最终发挥减轻压力负荷型心肌损伤的保护作用。关键词：维甲酸相关孤核受体；压力负荷；心肌损伤；氧化应激；炎症反应The effect and mechanism of retinoic acid-related orphan receptor-in the resistance ofpressure-loaded myocardium injury in miceYang Jiachang,Zhang Bin,Zhu Hanzhao,Li Xiayun,Jiang Liqing,Jin Zhenxiao,Liu Jincheng,Duan Weixun,Yu ShiqiangDepartment of Cardiovascular Surgery,Xijing Hospital,Air Force Medical University,Xian 710032,ChinaCorresponding author:Yu Shiqiang,Email: Abstract:Objective To investigate the protective effects and underlying mechanisms of retinoic acid-related orphan receptor-(ROR)treatment on myocardial injury induced by pressure overload in adult C57BL/6 mice.Methods The pressureoverload induced myocardial injury model was established in mice by 8 weeks after transverse aortic constriction(TAC)surgery.The experimental mice were divided into the following four groups:Sham+null,Sham+ROR,TAC+null,and TAC+RORgroups.The main detection indicators after eight weeks of TAC surgery were as follows:ROR expression levels,cardiac contractile function,myocardial fibrosis indicators include the percentage of myocardial perivascular fibrosis,the percentage of myocardial interstitial fibrosis,connective tissue growth factor(CTGF)and collagen I expression levels;cardiac hypertrophy indicators include heart weight/body weight(HW/BW),average cross-sectional area of myocardial cells and expression levels of brainnatriuretic peptide(BNP);oxidative stress indicators include reactive oxygen species(ROS)production,malondialdehyde(MDA)levels,superoxide dismutase(SOD)activity,nuclear factor erythroid 2-related factor 2(Nrf2)and superoxide dismutase2(SOD2)expression levels;inflammatory response indicators include nuclear factors-Gene binding(NF-B)content and tumor necrosis factor-(TNF-)expression levels.Results Compared with the TAC+null group,the mice in TAC+ROR groupshowed significantly higher ROR level with a better cardiac contractile function(P0.05),lowered the percentage of myocardiDOI:10.13498/ki.chin.j.ecc.2023.06.11基金项目：国家自然科学基金-面上项目（81970213）作者单位：710032 西安，空军军医大学西京医院心血管外科杨家昌（研究生）、张 彬、朱瀚朝、江丽青、金振晓、刘金成、段维勋、俞世强）；710069 西安，西北大学生命科学学院（李霞云）通信作者：俞世强，Email：360中国体外循环杂志2023年12月29日第21卷第6期 Chin J ECC Vo1.21 No.6 December 29,2023al perivascular fibrosis and myocardial interstitial fibrosis(P0.05),CTGF and Collagen I expression level(P0.05),decreased the heart weight ratio,mean cross-sectional area of cardiomyocytes and BNP expression level(P0.05),reduced myocardial ROS production and MDA content(P0.05),increased Nrf2 and SOD2 expression levels,declined myocardial NF-Band TNF-expression levels(P0.05).Conclusion Myocardial specific has a protective effect in attenuating pressure overloaded myocardial injury by inhibiting oxidative stress and inflammatory responses in myocardial tissues,and delaying aortic arch reduction-induced myocardial hypertrophy and myocardial fibrosis.Key words:Retinoic acid-related orphan receptor-;Pressure overload;Myocardial injury;Oxidative stress;Inflammatoryreaction慢性心衰是冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）、高血压、心脏瓣膜病、扩张型心肌病等多种心血管疾病的终末期阶段，是心脏病患者致死致残的重要原因，易使患者反复、长期住院，带来巨大的经济负担1。在多种致心衰的因素中，压力负荷的作用不容忽视2。压力负荷在早期引起左室心肌代偿性肥厚，心功能尚能维持正常，但压力负荷长期且持续存在最终诱发病理性心肌重塑，导致心衰甚至猝死等严重心血管不良事件3。维甲酸相关孤核受体 （retinoic acid-relatedorphan receptor-,ROR）是近年来发现的一种褪黑素新型核受体，在心脏、肝脏、骨骼肌、皮肤、肺、脂肪、肾脏、胸腺和脑等多种组织器官中广泛表达，其编码基因位于人体第15号染色体上，而在小鼠体内则位于第9号染色体上4。ROR也是机体内源性心血管保护分子之一，具有抗氧化、抗炎等生物学活性5。激活ROR对于改善多种病理刺激引起的器官组织纤维化有明显保护作用，可有效缓解糖尿病心肌病、心肌缺血再灌注损伤等多种心血管疾病6，但ROR对压力负荷型心肌损伤的抵抗作用仍有待研究。本实验采用小鼠主动脉弓缩窄术（transverseaortic constriction,TAC），探讨ROR对压力负荷引起的心肌损伤的保护作用及其具体机制。1材料和方法1.1 实验材料1.1.1 主要试剂 小鼠ROR基因过表达腺相关病毒购买自上海汉恒生物科技有限公司；丙二醛（malondialdehyde,MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）检测试剂盒购买自南京建成生物工程研究所；超氧化物阴离子荧光探针（dihydroethidium，DHE）购买自美国Invitrogen公司；蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂购买自美国 Sigma 公司；抗 ROR、脑 钠 肽（brain natriuretic peptide,BNP）、结缔组织生长因子（connective tissue growthfactor,CTGF）、胶原蛋白I(Collagen I)、核因子-基因结合（nuclear factor-gene binding,NF-B）抗体购买自美国abcam公司；抗超氧化物歧化酶2（superoxide dismutase 2,SOD2）、核因子红系 2相关因子 2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2）、肿瘤坏死因子-（tumor necrosis factor-,TNF-）抗体购买自美国Cell signaling公司；磷酸甘油醛脱氢酶（glyceraldehyde-phosphate dehydrogenase,GAPDH）抗体购买自美国Proteintech公司；比霉素酸测定法蛋白定量试剂盒购买自美国Pierce公司；羊抗兔、羊抗鼠二抗购买自北京中衫金桥公司。1.1.2实验动物810周龄雄性C57BL/6小鼠，体重2022 g，购买自空军军医大学实验动物中心。1.2 实验方法1.2.1 动物模型的建立 通过TAC诱导小鼠心肌损伤。具体操作流程如下：在麻醉诱导仓中用与空气混合的2异氟烷（0.51.0 L/min）麻醉小鼠；使用 20 号管经口插管并以 100120 次/min 呼吸（0.15 ml潮气量）通气，吸入异氟烷（1%2）维持麻醉；剃除小鼠腹部毛发；消毒铺巾；行开胸术并暴露主动脉弓；在无名动脉和左颈总动脉之间放置5号垫针后结扎主动脉弓，随即移除该针，留下狭窄空间；关胸并对合皮肤，将小鼠转移到加热垫上密切监测。假手术（Sham）小鼠除不进行TAC，其他手术操作完全相同。1.2.2 实验分组及处理方式 将60只C57BL/6小鼠随 机 分 为 4 组：Sham+空 载 病 毒（null）处 理 组（Sham+null 组），n=10；Sham+心肌特异性过表达ROR 病毒处理组（Sham+ROR 组），n=10；TAC+null 组，n=20；TAC+ROR 组，n=20。各组小鼠Sham或TAC术前3周分别尾静脉注射小鼠ROR基因过表达腺相关病毒或对照空载病毒（100 l/只，11012PFU/ml）。1.2.3 心脏功能检测Sham及TAC 8周后，剃除小鼠胸前毛发。用 VEVO 770（VisualSonics 公司，加拿大）小动物超声仪和 30-MHz 超声探头（型号：RMV707B）检 测 左 室 射 血 分 数（left ventricularejection fraction,LVEF）、左室短轴缩短率（left ventricular fractional shortening,LVFS）、舒张期室间隔厚 度（interventricular septal thickness at diastole,IVSd）、收缩期室间隔厚度（interventricular septal361中国体外循环杂志2023年12月29日第21卷第6期 Chin J ECC Vo1.21 No.6 December 29,2023thickness at systole,IVSs）、舒张期左室后壁（leftventricular posterior wall at diastole,LVPWd）厚度、收缩期左室后壁（left ventricular posterior wall atsystole,LVPWs）厚度等心功能指标。1.2.4 心脏重量、体重比值评估Sham及TAC 8周后，测定动物体重（body weight,BW）后对动物实施安乐死，解剖分离动物的心脏并测定心脏重量（heart weight,HW），根据数据计算出HW/BW比值。1.2.5 心脏组织学染色 Sham及TAC8周后，迅速取下心脏，将心脏浸入10甲醛溶液中，48 h后石蜡包埋，制备5 m厚度组织切片，使用小麦胚芽凝集素（wheat germ agglutinin,WGA）染色检测平均心肌细胞横截面积，使用苏木精-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色检查心脏横截面积，使用Masson染色检测心肌纤维化程度。用Image J软件（NIH，美国）在每个染色切片中随机选择10个高倍视野进行心肌细胞平均横截面积和胶原沉积程度的定量评估。1.2.6心 肌 组 织 活 性 氧（reactive oxygen species,ROS）含量测定 Sham及TAC 8周后，快速取下心脏，用预冷的磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline,PBS）洗涤后在液氮中快速冷冻并切成5 m厚度组织切片。按照 DHE 检测试剂盒说明书避光滴加DHE反应液，PBS洗片后置于OlympusFV1000 激光共聚焦显微镜（Olympus 公司，日本）下观察并采集图像，使用Image J软件对切片荧光强度进行分析。1.2.7心肌组织MDA含量及SOD活性检测Sham及TAC 8周后，迅速取下心脏，用生理盐水（1 9）制备蛋白匀浆。按照说明书分别检测心肌组织中脂质过氧化物MDA含量和抗氧化酶SOD活性。1.2.8心肌组织 NF-B 免疫荧光染色 Sham 及TAC8周后，快速取下心脏，用4%多聚甲醛固定48h后石蜡包埋并纵切。用3%H2O2处理石蜡切片30min，然后在室温下用 Immuno-Block 实际孵育 30min。使用抗NF-B抗体在4 加水浴箱中过夜，然后与Alexa荧光素标记的二抗在37 孵育1 h。最后切片用二脒基苯基吲哚（4 6-diamidino-2-phenylindole,DAPI）染 色 细 胞 核 并 在 OlympusFV1000 激光共聚焦显微镜（Olympus公司，日本）下进行成像。1.2.9 心肌组织蛋白表达测定 Sham及TAC 8周后，迅速取下心脏，提取蛋白样品并进行蛋白电泳。在电泳加样孔内蛋白样品经电泳、转膜、封闭等步骤后于 4 孵 育 抗 ROR、BNP、CTGF、Collagen 、SOD2、Nrf2、TNF-等各为（1 1000）一抗，过夜；继而室温孵育相应二抗（1 5000）1.5 h。使用BioRad成像系统检测蛋白质条带并使用Image J软件定量。1.3 统计分析 用GraphPad Prism 9.0统计学软件进行统计分析，实验数据均以均数 标准差（x SD）表示，差异显著性检验采用单因素方差分析（ANOVA），比较两组间差异用LSD-t 检验。P0.05 表示有统计学意义。2结 果2.1心肌特异性过表达 ROR 显著上调 TAC 小鼠心肌组织ROR表达对心肌组织中ROR蛋白表达检测的结果显示（见图 1），与 Sham+null组相比，TAC+null组小鼠心肌组织中ROR的表达量显著降低（P=0.032，n=5）；与 TAC+null 组相比，TAC+ROR组小鼠心肌组织中ROR的表达量明显提高（P=0.022，n=5）；与Sham+null组相比，Sham+ROR组小鼠心肌组织中ROR的表达量显著提升（P=0.025，n=5）。2.2心肌特异性过表达 ROR 改善 TAC 小鼠心脏收缩功能障碍 小鼠TAC 8周后用小动物超声测量仪检测心脏功能（见图 2）。与 Sham+null 组相比，TAC+null 组小鼠心脏功能明显受损，表现为图 1 心肌特异性过表达维甲酸相关孤核受体处理对其在心肌表达水平的影响注：A：免疫印记法检测维甲酸相关孤核受体（ROR）表达水平；B：ROR表达水平；#P0.05：与 Sham+null组相比；*P0.05：与TAC+null组相比362中国体外循环杂志2023年12月29日第21卷第6期 Chin J ECC Vo1.21 No.6 December 29,2023LVEF 与 LVFS 显 著 降 低（P=0.039，n=10）；IVSd/IVSs、LVPWd/LVPWs 显著升高（P=0.044，n=10）；与TAC+null组相比，TAC+ROR组小鼠的LVEF与LVFS 显 著 升 高（P=0.034，n=10），IVSd/IVSs、LVPWd/LVPWs 显 著 降 低（P=0.029，n=10）；与Sham+null组相比，Sham+ROR组小鼠心脏功能无显著改变。2.3心肌特异性过表达 ROR 抑制 TAC 小鼠心肌组织纤维化 石蜡切片胶原纤维染色显示（见图3AC），与Sham+null组相比，TAC+null组小鼠的左心室心肌组织血管周、组织间隙纤维化百分比明显提高（P=0.033，n=5）；与 TAC+null 组相比，TAC+ROR组小鼠的血管周、组织间隙纤维化百分比明显降低（P=0.024，n=5）；与Sham+null组相比，Sham+ROR组小鼠的血管周、组织间隙纤维化百分比无显著差异。对纤维化相关蛋白表达检测的结果显示（见图3D-F），与Sham+null组相比，TAC+null组小鼠心肌组织中 CTGF、Collagen 的表达量显著升高（P=0.019，n=5）；与 TAC+null 组相比，TAC+ROR组小鼠心肌组织中CTGF、Collagen 的表达量明显降低（P=0.041，n=5）；与Sham+null组相比，Sham+ROR组小鼠心肌组织中CTGF、Collagen 的表达量无统计学差异。2.4心肌特异性过表达 ROR 改善 TAC 小鼠心肌肥厚与 Sham+null 组相比，TAC+null 组小鼠HW/BW显著升高（P=0.027，n=10）；与TAC+null组相比，TAC+ROR 组小鼠 HW/BW 明显降低（P=0.046，n=10，见图4A）。WGA和HE染色显示（见图4BD），与 Sham+null组相比，TAC+null组小鼠的心脏显著增大、心肌细胞平均横截面积明显增大（P=0.022，n=5）；与 TAC+null 组相比，TAC+ROR 组小鼠的心脏显著减小、心肌细胞平均横截面积明显减小（P=0.027，n=5）。对心肌肥厚相关蛋白表达检测的结果显示（见图4E、F），与 Sham+null组相比，TAC+null组小鼠心肌组织中BNP表达量显著升高（P=0.034，n=5）；与 TAC+null 组相比，TAC+ROR组小鼠心肌组织中BNP表达量明显降低（P=0.029，n=5）。与Sham+null组相比，Sham+ROR组小鼠的以上指标均无明显差异。2.5 心肌特异性过表达ROR减轻TAC小鼠心肌组织氧化应激损伤 通过对心肌组织中ROS生成、MDA含量及SOD活性的测定显示（见图5AD），与Sham+null 组相比，TAC+null 组小鼠心肌组织中ROS生成及MDA含量显著上升、SOD活性明显降图 2 心肌特异性过表达维甲酸相关孤核受体处理对心脏功能的影响注：A：M型超声检测心脏收缩功能；B：左室射血分数统计图；C：左室短轴缩短率统计图；D：收缩期室间隔厚度统计图；E：舒张期室间隔厚度统计图；F：收缩期左室后壁厚度统计图；G：舒张期期左室后壁厚度统计图；#P0.05：与Sham+null组相比；*P0.05：与TAC+null组相比363中国体外循环杂志2023年12月29日第21卷第6期 Chin J ECC Vo1.21 No.6 December 29,2023低（P=0.024，n=5）；与TAC+null组相比，TAC+ROR组小鼠心肌组织中 ROS 生成及 MDA 含量显著下降、SOD 活性明显升高（P=0.026，n=5）。与 Sham+null组相比，Sham+ROR组小鼠心肌组织中ROS生成、MDA含量及SOD活性均无明显差异。进一步检测心肌组织氧化应激相关蛋白表达结果显示（见图5EG），与Sham+null组相比，TAC+null组小鼠心肌组织中Nrf2与SOD2表达量显著降低（P=0.040，n=5）；与TAC+null组相比，TAC+ROR组小鼠心肌组织中Nrf2和SOD2的表达量明显提高（P=0.018，n=5）；与Sham+null组相比，Sham+ROR组小鼠心肌组织中Nrf2和SOD2的表达量无显著变化。2.6 心肌特异性过表达ROR抑制TAC小鼠心肌组织炎症反应小鼠TAC 8周后通过NF-B染色检测心肌组织炎症反应结果显示（见图6A、B），与Sham+null 组相比，TAC+null 组小鼠心肌组织中NF-B 的表达显著升高（P=0.033，n=5）；与 TAC+null组相比，TAC+ROR组小鼠心肌组织中NF-B含量明显降低（P=0.047，n=5）。对炎症反应相关蛋白表达检测的结果显示（见图6C、D），与Sham+null相比，TAC+null组小鼠心肌组织中TNF-的表达量显著升高（P=0.038，n=5）；与 TAC+null 组相比，TAC+ROR组小鼠心肌组织TNF-的表达量显著降低（P=0.036，n=5）。与Sham+null组相比，Sham+ROR组小鼠心肌组织中NF-B与TNF-的表达量均无显著变化。3讨 论心肌重塑是慢性心衰发生发展最重要的病理基础2。随着对心衰防治认识的不断深入，心衰的治疗目标已从过去的增加心肌收缩力改善患者短期症状转变为逆转或延缓心肌重塑，降低心衰患者住院率和提高长期生存率7。心肌重塑主要表现为心肌肥大、心肌纤维化等，因此，寻找抑制心肌肥大和心肌纤维化的方法是延缓心肌重塑的有效途径8。心肌肥大与正常心功能相关时被称为生理性肥大，与心功能障碍相关时，被归类为病理性肥大。病理性肥大由高血压、心肌梗死等引起的异常血流动力学应激导致9，其中氧化应激、炎症反应被认为在心脏病理性肥大发展过程中起关键作用10。心肌纤维化的发生与心脏成纤维细胞产生胶原瘢痕组织相关11。心肌纤维化可导致左心室功能障碍，进而发展为心力衰竭12。有充分证据显示，氧化应激损伤和炎症反应是心肌纤维化的重要始动因素13。因此，寻找有效药物抑制心脏氧化应激损伤和炎症反应进而干预心肌肥大及心肌纤维图 3心肌特异性过表达维甲酸相关孤核受体处理对心肌纤维化的影响注：A：Masson染色检测心肌纤维化程度(200，n=5)；B：血管周纤维化百分比统计图；C：组织间隙纤维化百分比统计图；D：免疫印记法检测结缔组织生长因子（CTGF）、I型胶原蛋白（Collagen I）表达水平；E：CTGF表达水平统计图；F：Collagen I表达量化图；#P0.05：与Sham+null组相比；*P0.05：与TAC+null组相比364中国体外循环杂志2023年12月29日第21卷第6期 Chin J ECC Vo1.21 No.6 December 29,2023化的发生发展是心衰防治领域的重点研究方向。ROR参与包括生长发育、代谢和昼夜节律调控等多种生理过程，也是近年来新发现的机体内源性心血管保护分子之一4。有研究证实，通过腹腔注射链脲霉素构建型糖尿病心肌损伤模型，与野生型同窝小鼠相比，ROR基因缺陷小鼠心肌舒张功能障碍以及心肌重塑明显加重，而过表达ROR可以明显逆转糖尿病引起的心脏功能和结构损伤6。有研究证实，通过皮下包埋微量泵持续输注血管紧张素（Ang）以构建病理性心肌肥厚模型，与野生型同窝小鼠相比，ROR基因缺陷小鼠心肌肥厚、收缩功能受损程度更明显14。此外，ROR对于改善多种病理刺激引起的器官组织纤维化有明显保护作用11。激活 ROR 可通过抑制5-脂氧合酶抑制肝星形细胞的激活，从而缓解肝纤维化15。然而，激活ROR能否逆转压力负荷引起的心肌肥大和心肌纤维化反应，进而缓解心衰发生发展尚未阐明。而本研究结果证实，与 TAC+null组相比，TAC+ROR组小鼠心脏收缩功能明显改善，心肌肥大程度、心肌组织纤维化水平都显著降低，提示激活ROR在压力负荷型心肌损伤中的保护作用。ROR对于人体多个系统的氧化应激和炎症反应均有抑制作用。有研究证实，ROR可通过抑制氧化应激和NF-B表达来抑制法氏囊B淋巴细胞的凋亡16。ROR也可通过减少氧化应激和炎症图 4心肌特异性过表达维甲酸相关孤核受体处理对心肌肥厚的影响注：A：心脏体重比例量化图；B：HE染色检测心脏横截面积（20，n=5）；C：WGA染色检测平均心肌细胞横截面积（400，n=5）；D：平均心肌细胞横截面积统计图；E：免疫印记法检测脑钠肽（BNP）表达水平；F：BNP表达水平统计图；#P0.05：与Sham+null组相比；*P0.05：与TAC+null组相比365中国体外循环杂志2023年12月29日第21卷第6期 Chin J ECC Vo1.21 No.6 December 29,2023图 5 心肌特异性过表达维甲酸相关孤核受体处理对心肌氧化应激水平的影响注：A：活性氧（ROS）荧光染色检测ROS产量（400，n=5）；B：ROS平均荧光强度统计图；C：MDA含量统计图；D：SOD活性统计图；E：免疫印记法检测核因子红系2相关因子2（Nrf2）、超氧化物歧化酶2（SOD2）表达水平；F：Nrf2表达水平统计图；G：SOD2表达水平统计图；#P0.05：与Sham+null组相比；*P0.05：与TAC+null组相比来影响心血管系统的广泛生理和病理过程，包括动脉粥样硬化、心肌缺血/再灌注损伤、糖尿病心肌病等6。然而激活ROR能否通过抑制氧化应激和炎症反应减轻心肌肥大和心肌纤维化，进而发挥心脏图 6心肌特异性过表达维甲酸相关孤核受体处理对心肌炎症反应的影响注：A：核因子-基因结合（NF-B）荧光染色检测心肌组织炎症反应（400，n=5）；B：NF-B平均荧光强度统计图；C：免疫印记法检测肿瘤坏死因子-（TNF-）表达水平；D：TNF-表达水平统计图；#P0.05：与Sham+null组相比；*P0.05：与TAC+null组相比366中国体外循环杂志2023年12月29日第21卷第6期 Chin J ECC Vo1.21 No.6 December 29,2023保护作用仍待进一步探究。而本研究结果显示，与TAC+null组相比，TAC+ROR组小鼠心肌组织中ROS生成及MDA含量显著下降、SOD活性明显升高、NF-B 与 TNF-的表达量显著降低，证实了ROR对于心脏氧化应激和炎症反应的抑制作用。综上所述，本研究首次提出并证明，心肌特异性过表达ROR处理可通过抑制心肌组织氧化应激和炎症反应延缓TAC所致的心肌肥厚和心肌纤维化，最终发挥减轻压力负荷型心肌损伤的保护作用。本研究为临床上应用ROR治疗压力负荷引起的心肌损伤提供了新的理论依据。参考文献：1 Wang H,Shi J,Shi S,et al.Bibliometric analysis on the progressof chronic heart failureJ.Curr Probl Cardiol,2022,47(9):101213.2Di Palo KE,Barone NJ.Hypertension and heart failure:prevention,targets,and treatmentJ.Heart Fail Clin,2020,16(1):99-106.3 Ren Z,Yu P,Li D,et al.Single-cell reconstruction of progressiontrajectory reveals intervention principles in pathological cardiachypertrophyJ.Circulation,2020,141(21):1704-1719.4Matsuoka H,Michihara A.Identification of the RORalpha transcriptional network contributes to the search for therapeutic targets in atherosclerosisJ.Biol Pharm Bull,2021,44(11):1607-1616.5Zoccarato A,Shah AM.RORalpha nuclear receptors in protection against angiotensin II-induced cardiac hypertrophyJ.Am JPhysiol Heart Circ Physiol,2019,316(2):H357-H359.6Chen Y,Zhang SP,Gong WW,et al.Novel therapeutic potentialof retinoid-related orphan receptor alpha in cardiovascular diseasesJ.Int J Mol Sci,2023,24(4):3462.7Heidenreich PA,Bozkurt B,Aguilar D,et al.2022 AHA/ACC/HFSA guideline for the management of heart failure:a report ofthe American College of Cardiology/American Heart Association Joint Committee on clinical practice guidelinesJ.Circulation,2022,145(18):e895-e1032.8Roger VL.Epidemiology of heart failure:a contemporary perspectiveJ.Circ Res,2021,128(10):1421-1434.9 Zhu F,Li P,Sheng Y.Treatment of myocardial interstitial fibrosisin pathological myocardial hypertrophyJ.Front Pharmacol,2022,13:1004181.10 Oldfield CJ,Duhamel TA,Dhalla NS.Mechanisms for the transition 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