常用培养基配方.doc

(完整word)常用培养基配方

常用培养基配方

（微生物学与微生物检验学部分)

渤海大学生物与食品科学学院
2006年3月

目 录
01糖发酵管
02 ONPG培养基
03西蒙氏柠檬酸盐培养基
04缓冲葡萄糖蛋白胨水（MR和VP试验用)
05克氏柠檬酸盐培养基
06丙二酸钠培养基
07葡葡糖铵培养基
08　Hugh－Leifson培养基（O/F试验用)
09 马尿酸钠培养基
10营养明胶
11苯丙氨酸培养基
12 氨基酸脱羧酶试验培养基
13蛋白胨水(靛基质试验用)
14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用）
15 尿素琼脂
16 氰化钾(KCN）培养基
17 氧化酶试验
18 硝酸盐培养基
19 细胞色素氧化酶试验
20 过氧化氢酶试验
21 过氧化物酶试验
22 磷酸盐缓冲液
23明胶磷酸盐缓冲液
24 乳酸－苯酚溶液
25 肉浸液肉汤
26肉浸液琼脂
27牛肉（或牛心)消化汤
28血消化汤
29豆粉琼脂
30血琼脂
31营养琼脂
32营养肉汤
33 乳糖胆盐发酵管
34乳糖发酵管
35 EC肉汤
36 缓冲蛋白胨水（BP）
37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM）
38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)
39 四硫磺酸钠煌绿增菌液（换用方法）
40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC）
41 GN增菌液
42 肠道菌增菌肉汤
43 亚硫酸铋琼脂(BS）
44 DHL琼脂
45 HE琼脂
46 SS琼脂
47 WS琼脂
48 麦康凯琼脂
49 伊红美蓝琼脂（EMB）
50三糖铁琼脂（TSI)
51 三糖铁琼脂(换用方法）
52 克氏双糖铁琼脂(KI）
53 克氏双糖铁琼脂(换用方法)
54 葡萄糖半固体发酵管
55 5％乳糖发酵管
56 CAYE培养基
57 Honda氏产毒肉汤
58 Elek氏培养基(毒素测定用)
59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基
60 胰蛋白胨水
61 Rustigian氏尿素培养液
62 氯化钠结晶紫增菌液
63 氯化钠蔗糖琼脂
64 嗜盐菌选择性琼脂
65 3。5%氯化钠三糖铁琼脂
66 氯化钠血琼脂
67 3。5％氯化钠生化试验培养基
68 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用）
69 CIN－1培养基
70 嗜盐性试验培养基
71 改良Y培养基
72 改良克氏双糖
73 快速硫化氢(H2S）试验琼脂
74 DNA酶甲基绿琼脂（DTA)
75 Cary－Blair氏运送培养基
76 Skirrow氏培养基
77 TTC琼脂
78 甘氨酸培养基
79 改良磷酸盐缓冲液
80 氯化镁孔雀绿肉汤
81 胰酪胨大豆肉汤
82 Baird－Parker氏培养基
83 7.5％氯化钠肉汤
84 匹克氏肉汤
85 甘露醇卵黄多粘菌素琼脂
86 3。8%柠檬酸钠溶液
87 酪蛋白琼脂
88 木糖－明胶培养基
89 庖肉培养基
90 卵黄琼脂培养基
91亚硫酸盐－多粘菌素－磺胺嘧啶琼脂（SPS）
92液体硫乙醇酸盐培养基（FT)
93含铁牛奶培养基
94 动力—硝酸盐培养基(A法）
95 动力－硝酸盐培养基(B法）
96 血清肉汤
97 马丁氏肉汤
98 明胶培养基
99 察氏培养基
100 高盐察氏培养基
101 马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)
102 马铃薯琼脂
103 孟加拉红培养基
104 玉米粉琼脂
105 大米粉培养基
106 亚硒酸盐煌绿增菌液
107 煌绿肉汤增菌液
108 肠毒素产毒培养基
109 0。1％蛋白胨水稀释剂
110半固体琼脂

01 糖发酵管
成分：
　牛肉膏　　　　　　5g
　　蛋白胨　　　　　　10g
　　氯化钠　　　　　　3g
　　磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O)　　2g
　　0。2％滇麝香草酚蓝溶液　12mL
　　蒸馏水　　　　　　1000mL
　　pH7.4
制法：
　1葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0。5％加入葡萄糖，分装于有一个倒置小管的小试管内，121℃高压灭菌15min。
　　2其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶100mL，121℃高压灭菌15min。另将各种糖类分别配好10%溶液,同时高压灭菌。将5mL糖溶液加入于100mL培养基内，以无菌操作分装小试管。
注:蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌.
试验方法：从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36℃±1℃培养，一般观察2～3d。迟缓反应需观察14～30d。
02 ONPG培养基
成分：
　　邻硝基酚β－D—半乳糖昔（ONPG)　　　　　　　 60mg
　　（O－Nitrophenyl－β－D－galactopyranoside)
　　0.01mol/L磷酸钠缓冲液(pH7。5)　　　　　　　 10mL
　　1％蛋白胨水(PH7.5）　　　　　　　　　　　　　30mL
制法：将ONPG溶于缓冲液内，加入蛋白胨水，以过滤法除菌，分装于10mm×75mm试管，每管0.5mL,用橡皮塞塞紧.
试验方法：自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种，于36±1℃培养1~3h和24h观察结果.如果β－半乳糖苷酶产生，则于1～3h变黄色，如无此酶则24h不变色。

03 西蒙氏柠檬酸盐培养基
成分：
　　氯化钠　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　5g　
　　硫酸镁(MgSO4·7H2O)　　　　　　　　　　　　　　　　　 0.2g
　　磷酸二氢铵　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　1g
　　磷酸氢二钾　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　1g
　　柠檬酸钠　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　5g
　　琼脂　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　20g
　　蒸馏水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　1000mL
　　0。2%溴麝香草酚蓝溶液　　　　　　　　　　　　　　　　　40mL
　　pH6.8
制法：先将盐类溶解于水内,校正pH,再加琼脂，加热溶化.然后加入指示剂，混合均匀后分装试管,121℃高压灭菌15min。放成斜面。
试验方法：挑取少量琼脂培养物接种，于36±1℃培养4d,每天观察结果.阳性者斜面上有菌落生长，培养基从绿色转为蓝色.　　
04 缓冲葡萄糖蛋白胨水（MR和VP试验用)
成分：
　　磷酸氢二钾　　5g
　　多胨　　　　　7g
　　葡萄糖　　　　　5g
　　蒸馏水　　　　　1000mL
　　pH7.0
制法：溶化后校正pH,分装试管，每管1mL,121℃高压灭菌15min。
甲基红（MR)试验：自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中，于36±1℃培养2～5d，哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。鲜红色为阳性，黄色为阴性.甲基红试剂配法：10mg甲基红溶于30mL95%乙醇中，然后加入20mL蒸馏水。
V－P试验：用琼脂培养物接种本培养基中，于36±1℃培养2～4d。哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。加入6%α－萘酚－乙醇溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0。2mL，充分振摇试管，观察结果。阳性反应立刻或于数分钟内出现红色,如为阴性，应放在36±1℃下培养4h再进行观察。
　05克氏柠檬酸盐培养基
成分：
　　柠檬酸钠　　　　　　　　　　　 3g
　　葡萄糖　　　　　　　　　　　　 0.2g
　　酵母浸膏　　　　　　　　　　　 0.5g
　　单盐酸半胱氨酸　　　　　　　　 0.1g
　　磷酸二氢钾　　　　　　　　　　 1g
　　氯化钠　　　　　　　　　　　　 5g
　　0.2％酚红溶液　　　　　　　　　 6mL
　　琼脂　　　　　　　　　　　　　 15g
　　蒸馏水　　　　　　　　　　　　 1000mL
制法:加热溶解,分装试管，121℃高压灭菌15min。放成斜面。
试验方法：用琼脂培养物接种整个斜面，在36±1℃培养7d，每天观察结果。阳性者培养基变为红色。
06 丙二酸钠培养基
成分：
　　酵母浸膏　　　　　　　　　 1g
　　硫酸铵　　　　　　　　　　 2g
　　磷酸氢二钾　　　　　　　　 0.6g
　　磷酸二氢钾　　　　　　　　 0。4g
　　氯化钠　　　　　　　　　　 2g
　　丙二酸钠　　　　　　　　　 3g
　　0。2％溴麝香草酚蓝溶液　　　 12mL
　　蒸馏水　　　　　　　　　　 1000mL
　　pH6.8
制法：先将酵母浸膏和盐类溶解于水，校正pH后再加入指示剂，分装试管，121℃高压灭菌15min.　　
试验方法：用新鲜的琼脂培养物接种,于36±1℃培养48h，观察结果。阳性者由绿色变为蓝色。
07 葡葡糖铵培养基
成分：
　　氯化钠　　　　　　　　　　　　　　5g
　　硫酸镁（MgSO4·7H2O）　　　 　　　　0.2g
　　磷酸二氢铵　　　　　　　　　　　　1g
　　磷酸氢二钾　　　　　　　　　　　　1g
　　葡萄糖　　　　　　　　　　　　　　2g
　　琼脂　　　　　　　　　　　　　　　20g
　　蒸馏水　　　　　　　　　　　　　　1000mL
　　0。2％溴麝香草酚蓝溶液　　　　　　　40mL
　　pH6。8
制法：先将盐类和糖溶解于水内,校正pH，再加琼脂,加热溶化,然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121℃高压灭菌15min,放成斜面.
试验方法：用接种针轻轻触及培养物的表面，在盐水管内做成极稀的悬液，肉眼观察不见混浊，以每一接种环内含菌数在20～100之间为宜。将接种环灭菌后挑取菌液接种，同时再以同法接种普通斜面一支作为对照。于36±1℃培养24h。阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长；阴性者不生长，但在对照培养基上生长良好。如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果。
注：容器使用前应用清洁液浸泡。再用清水、蒸馏水冲洗干净，并用新棉花做成棉塞,干热灭菌后使用。如果操作时不注意，有杂质污染时，易造成假阳性的结果。
　　08 Hugh－Leifson培养基（O/F试验用）
成分：
　　蛋白胨　　　　　　　　　　　　　　 2g
　　氯化钠　　　　　　　　　　　　　　 5g
　　磷酸氢二钾　　　　　　　　　　　　 0.3g
　　琼脂　　　　　　　　　　　　　　　 4g
　　葡萄糖　　　　　　　　　　　　　　 10g
　　0。2％溴麝香草酚蓝溶液　　　　　　　 12mL
　　蒸馏水　　　　　　　　　　　　　　 1000mL
　　pH7。2
制法：将蛋白胨和盐类加水溶解后，校正pH至7。2。加入葡萄糖、琼脂煮沸，溶化琼脂,然后加入指示剂。混匀后，分装试管，121℃高压灭菌15min,直立凝固备用。
试验方法：从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种,同时接种两支培养基，其中一支于接种后滴加溶化的1％琼脂液于表面，高度约1cm，于36±1℃培养。
09 马尿酸钠培养基
成分：
　　马尿酸钠　　1g
　　肉浸液　　　100mL
制法：将马尿酸钠溶解于肉浸液内,分装于小试管内，并于管壁画一横线。以标志管内液面高度，高压灭菌121℃20min.
试剂:三氯化铁（FeCl3·6H2O）12g，溶于2%盐酸溶液100mL中即成。
试验方法:用纯培养物接种，于42℃培养48h，观察培养液是否到达试管壁上记号处，如不足时,用蒸馏水补足至原量.经离心沉淀,吸取上清液0.8mL，加入三氯化铁试剂0。2mL，立即混合均匀，经10～15min,观察结果。
结果：出现恒久之沉淀物为阳性。
10营养明胶
成分：
　　蛋白胨　　　　　5g
　　牛肉膏　　　　　3g
　　明胶　　　　　　120g
　　蒸馏水　　　　　1000mL
　　pH6.8～7。0
制法：加热溶解、校正至pH7.4～7.6，分装小管，121℃高压灭菌10min,取出后迅速冷却,使其凝固.复查最终pH应为6.8～7.0。
试验方法：用琼脂培养物穿刺接种，放在22～25℃培养,每天观察结果，记录液化时间。或放在36士1℃培养,每天取出，放冰箱内30min后再观察结果。　　
11苯丙氨酸培养基
成分：
　　酵母浸膏　　　　　　　　　　　　　　　3g
　　DI－苯丙氨酸（或L－苯丙氨酸1g)　　　 　2g
　　磷酸氢二钠　　　　　　　　　　　　　　1g
　　氯化钠　　　　　　　　　　　　　　　　5g
　　琼脂　　　　　　　　　　　　　　　　　12g
　　蒸馏水　　　　　　　　　　　　　　　　1000mL
制法：加热溶解后分装试管，121℃高压灭菌15min，使成斜面。
试验方法：自琼脂斜面上挑取大量培养物,移种于苯丙氨酸琼脂，在36±1℃培养4h或18～24h。滴加10％三氯化铁溶液2～3滴,自斜面培养物上流下,苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。
12 氨基酸脱羧酶试验培养基
成分：
　　蛋白胨　　　　　　　　　　5g
　　酵母浸膏　　　　　　　　　3g
　　葡萄糖　　　　　　　　　　1g
　　蒸馏水　　　　　　　　　　1000mL
　　1.6％滇甲酚紫－乙醇溶液　　1mL
　　L－氨基酸或DL－氨基酸　　 0。5或1g/100mL
　　pH6。8
制法:除氨基酸以外的成分加热溶解后，分装每瓶100mL,分别加入各种氨基酸：赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸.L－氨基酸按0.5%加入,DL－氨基酸按1%加入。再行校正pH至6.8。对照培养基不加氨基酸。分装于灭菌的小试管内,每管0.5mL，上面滴加一层液体石蜡，115℃高压灭菌10min。
试验方法：从琼脂斜面上挑取培养物接种，于36±1℃培养18～24h，观察结果。氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱，培养基应呈紫色。阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色。对照管应为黄色。　　
13蛋白胨水（靛基质试验用）
成分：
　　蛋白胨（或胰蛋白胨）　 20g
　　氯化钠　　　　　　　 5g
　　蒸馏水　　　　　　　 1000mL
　　pH7.4
制法：按上述成分配制，分装小试管,121℃高压灭菌15min.
靛基质试剂
柯凡克试剂：将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中。然后缓慢加入浓盐酸25mL。
欧－波试剂：将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内.然后缓慢加入浓盐酸20mL。
试验方法:挑取小量培养物接种，在36±1℃培养1～2d，必要时可培养4～5d。加入柯凡克试剂约0。5mL，轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色；或加入欧－波试剂约0.5mL，沿管壁流下，覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。
注：蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用。　　
14 硫酸亚铁琼脂（硫化氢试验用)
成分：
　　牛肉膏　　　　　　 3g
　　酵母浸膏　　　　　 3g
　　蛋白胨　　　　　　 10g
　　硫酸亚铁　　　　　 0。2g
　　硫代硫酸钠　　　　 0。3g
　　氯化钠　　　　　　 5g
　　琼脂　　　　　　　 12g
　　蒸馏水　　　　　　 1000mL
　　pH7.4
制法：加热溶解,校正pH，分装试管，115℃高压灭菌15min，取出直立候其凝固。
试验方法：挑取琼脂培养物，沿管壁穿刺,于36±1℃培养1～2d，观察结果。产硫化氢者使培养基变为黑色。
注：肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生，应采用三糖铁琼脂或本培养基。
15 尿素琼脂
成分:
　　蛋白胨　　　　　　1g
　　氯化钠　　　　　　5g
　　葡萄糖　　　　　　1g
　　磷酸二氢钾　　　　2g
　　0。4％酚红溶液　　　3mL
　　琼脂　　　　　　　20g
　　蒸馏水　　　　　　1000mL
　　20%尿素溶液　　　 100mL
　　pH7.2±0.1
制法：将除尿素和琼脂以外的成分配好，并校正pH，加入琼脂，加热溶化并分装烧瓶。121℃高压灭菌15min.冷至50～55℃,加入经除菌过滤的尿素溶液。尿素的最终浓度为2％,最终pH应为7。2±0.1。分装于灭菌试管内，放成斜面备用。
试验方法：挑取琼脂培养物接种，在36±1℃培养24h，观察结果.尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色.
16 氰化钾（KCN)培养基
成分:
　　蛋白胨　　　　　 10g
　　氯化钠　　　　　 5g
　　磷酸二氢钾　　　 0.225g
　　磷酸氢二钠　　　 5.64g
　　蒸馏水　　　　　 1000mL
　　0。5%氰化钾溶液　 20mL
　　pH7.6
制法：将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。放在冰箱内使其充分冷却.每100mL培养基加入0。5％氰化钾溶液2.0mL（最后浓度为1∶10000），分装于12mm×100mm灭菌试管，每管约4mL，立刻用灭菌橡皮塞塞紧，放在4℃冰箱内,至少可保存两个月。同时，将不加氰化钾的培养基作为对照培养基，分装试管备用。
17 氧化酶试验
试剂:
　　　1％盐酸二甲基对苯二胺溶液：少量新鲜配制,干冰箱内避光保存。
　　　1%α-萘酚－乙醇溶液。
试验方法:取白色洁净滤纸沾取菌落。加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴,阳性者呈现粉红色，并逐渐加深;再加α—萘酚溶液一滴,阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色。阴性于两分钟内不变色。以毛细吸管吸取试剂,直接滴加于菌落上，其显色反应与以上相同.
18 硝酸盐培养基
成分：
　　硝酸钾　　　　　　　　 0。2g
　　蛋白　　　　　　　　　 5g
　　蒸馏水　　　　　　　　 1000mL
　　pH7.4
制法:溶解，校正pH，分装试管，每管约5mL，121℃高压灭菌15min。
硝酸盐还原试剂：
　　甲液：将对氨基苯磺酸0。8g溶解于2。5mol/L乙酸溶液100mL中。
　　乙液:将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。
试验方法:接种后在36±1℃培养1~4d，加入甲液和乙液各一滴，观察结果。硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色。
注：本试验阴性的原因有三：细菌不能还原硝酸盐；亚硝酸盐继续分解，生成氨和氮；培养基不适于细菌的生长。如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解,可再加入锌粉少许，可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色。
19 细胞色素氧化酶试验
试剂:
　　1％盐酸二甲基对苯二胺溶液。
　　1%α-萘酚－乙醇溶液。
试验方法:取37℃（或低于37℃）培养20h的斜面培养物一支，将两种试剂各2~3滴，从斜面上端滴下，并将斜面略加倾斜，使试剂混合液流经斜面上的培养物.如系平板培养物，则可用试剂混合液滴在菌落上.
结果：于2min内呈现蓝色者为阳性。阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应，2min以后出现微弱或可疑反应均作为阴性结果。
20 过氧化氢酶试验
试剂：3％过氧化氢溶液：临用时配制.
试验方法：挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加3％过氧化氢溶液2mL,观察结果。
结果:于半分钟内发生气泡者为阳性，不发生气泡者为阴性.
21 过氧化物酶试验
试剂：2%儿茶酚溶液。
　　3%过氧化氢溶液。
试验方法：挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加2％儿茶酚溶液1mL及3％过氧化氢溶液1mL.静置于室温(20℃)中30～60min，观察结果。
结果:阳性反应，细菌变为黑褐色；阴性反应，细菌不变色。
注：过氧化物酶的作用可受氰化钾的抑制。
22 磷酸盐缓冲液
储存液
　　磷酸二氢钾　　　　　　　　34g
　　1mol/L氢氧化钠溶液　　　　175mL
　　蒸馏水　　　　　　　　　　825mL
　　pH7。2　　
制法：先将磷酸盐溶解于500mL蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠溶液校正pH后，再用蒸馏水稀释至1000mL。
稀释液：取储存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL。分装每瓶100mL或每管10mL，121℃高压灭菌15min。
23明胶磷酸盐缓冲液
成分：
　　明胶　　　　　　　　　2g
　　磷酸氢二钠　　　　　　4g
　　蒸馏水　　　　　　　　1000mL
　　pH6.2
制法：加热溶解,校正pH，121℃高压灭菌15min.
24 乳酸－苯酚溶液
成分：
　　苯酚　　　　　　　　　10g
　　乳酸(比重1.21)　　　　10g
　　甘油　　　　　　　　　20g
　　蒸馏水　　　　　　　　10mL
制法：将苯酚在水中加热溶解，然后加入乳酸及甘油.
用途：检验真菌形态时用。
25 肉浸液肉汤
成分：
　　绞碎牛肉　　　　　　　500g
　　氯化钠　　　　　　　　5g
　　蛋白胨　　　　　　　　10g
　　磷酸氢二钾　　　　　　2g
　　蒸馏水　　　　　　　　1000mL
制法：将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL，混合后放冰箱过夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补足原量。加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐，溶解后校正pH7.4~7。6煮沸并过滤，分装烧瓶,121℃高压灭菌30min。
26肉浸液琼脂
成分：
　　肉浸液肉汤(PH7.4）　　 1000mL
　　琼脂　　　　　　　　　17～20g
制法：加热溶化琼脂，分装烧瓶或试管,121℃高压灭菌30min。根据需要,倾注平板或放成斜面.
27牛肉(或牛心)消化汤
成分：
　　绞碎牛肉(或牛心）　　　1000g
　　15％氢氧化钠溶液　　　 27mL
　　胰蛋白酶　　　　　　　40mL
　　三氯甲烷　　　　　　　1mL
　　氯化钠　　　　　　　　10g
　　蒸馏水　　　　　　　　2000mL
制法:
　　1　称取碎牛肉，加蒸馏水,隔水加热到80℃，维持15min.
　　2　加氢氧化钠溶液，对pH试纸呈弱碱性，冷至40℃。
　　3　加胰蛋白酶、氯仿，在36±1℃放置4～5h，每小时摇动一二次。
　　4　4h后，吸取上层液5mL于试管中，加5%硫酸铜溶液0.1mL、4%氢氧化钠溶液5mL,混合之。若呈红色，则不须再消化，可由温箱取出。
　　5　加入15％乙酸溶液45mL，对pH试纸呈酸性.
　　6　煮沸15min，使胰蛋白酶破坏，冷后，放冰箱内一夜。
　　7　次日吸取上层清液，加氯化钠10g,并加水补足原量，煮沸。
　　8　校正pH7。4～7.6(加15％氢氧化钠溶液约10mL)，加热，用滤纸过滤,分装烧瓶，121℃高压灭菌20min。
注：①此培养基可作为琼脂培养基的基础，不需加蛋白胨。
　　②胰蛋白酶之配制：称取去脂绞碎的猪胰500g,加入乙醇500mL、蒸馏水1500mL,混合之,装人玻塞瓶内。每日摇匀三次。3d后,用绒布过滤挤出其汁，加盐酸至0。05％，放冰箱内保存备用。
28血消化汤
成分:
　　绞碎猪胃　　　　　100g
　　绞碎猪血块　　　　100g
　　蒸馏水　　　　　　1000mL
　　浓盐酸　　　　　　10mL
制法：
　　1　洗涤猪胃,除去油脂，保留胃粘膜，用绞肉机绞碎。
　　2　用绞肉机将猪血块绞碎。
　　3　将蒸馏水加热至55℃，加入猪胃、猪血块和盐酸，置55℃水浴中24h,时常加以摇动.
　　4　从水浴内取出,加入1moL/L碳酸钠溶液5mL,煮沸10min，置于冰箱内一夜。
　　5　吸取上层清液,加磷酸氢二钾1g，加热至75℃，加入1mol/L碳酸钠溶液45mL，煮沸,校正pH7。2～7.4。
　　6　用滤纸过滤,分装烧瓶，121℃高压灭菌20min.
29豆粉琼脂
成分：
　　牛心消化汤（PH7.4~7。6)　　　　　　 1000mL
　　琼脂　　　　　　　　　　　　　　　 20g
　　黄豆粉浸液　　　　　　　　　　　　 50mL
制法:将琼脂加在牛心消化汤内，加热溶解，过滤。加入豌豆粉浸液，分装每瓶100mL，121℃高压灭菌15min。
豌豆粉浸液制法:取豌豆粉5g、氯化钠10g，加入蒸馏水100mL。置100℃水浴内加热1h,放于冰箱中过夜。吸取上清液即为豌豆浸液。
30血琼脂
成分:
　　pH7.4～7.6豆粉琼脂　　　　　　　100mL
　　脱纤维羊血(或兔血）　　　　　　　5~10mL
制法:加热溶化琼脂，冷至50℃,以灭菌手续加入脱纤维羊血,摇匀，倾注平板。亦可分装灭菌试管,置成斜面。亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂.

31营养琼脂
成分：
　　蛋白胨　　　　10g
　　牛肉膏　　　　3g
　　氯化钠　　　　5g
　　琼脂　　　　　15～20g
　　蒸馏水　　1000mL
制法：将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15％氢氧化钠溶液约2mL，校正pH至7。2~7。4。加入琼脂,加热煮沸，使琼脂溶化.分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。
注：此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数，琼脂量为1.5%;如作成平板或斜面，则应为2%.

32营养肉汤
成分：
　　蛋白陈　　　　10g
　　牛肉膏　　　　3g
　　氯化钠　　　　5g
　　蒸馏水　　　　1000mL
　　pH7.4
制法：按上述成分混合，溶解后校正pH,分装烧瓶，每瓶225mL,121℃高压灭菌15min.
33 乳糖胆盐发酵管
成分:
　　蛋白胨　　　　　　　　　　20g
　　猪胆盐（或牛、羊胆盐)　　　5g
　　乳糖　　　　　　　　　　　10g
　　0。04%滇甲酚紫水溶液　　　 25mL
　　蒸馏水　　　　　　　　　　1000mL
　　pH7.4
制法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每管10mL,并放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min。
注：双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍。
34乳糖发酵管
成分：
　　蛋白胨　　　　　　　　　　20g
　　乳糖　　　　　　　　　　　10g
　　0。04%溴甲酚紫水溶液　　　 25mL
　　蒸馏水　　　　　　　　　　1000mL
　　pH7.4
制法：将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，按检验要求分装30mL、10mL或3mL，并放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min。
注：①双料乳糖发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。
　　②30mL和10mL乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用,3mL乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用.
35 EC肉汤
成分：
　　胰蛋白胨　　　　　　　　20g
　　3号胆盐（或混合胆盐）　　 1.5g
　　乳糖　　　　　　　　　　5g
　　磷酸氢二钾　　　　　　　4g
　　磷酸二氢钾　　　　　　　1.5g
　　氯化钠　　　　　　　　　5g
　　蒸馏水　　　　　　　　　1000mL
制法:将上述成分混合,溶解后,分装有发酵倒管的试管中,121℃高压灭菌15min，最终pH为6.9±0。2。
36 缓冲蛋白胨水（BP)
成分：
　　蛋白胨　　　　　　　　　　　　　　 10g
　　氯化钠　　　　　　　　　　　　　　 5g
　　磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O)　　　　 9g
　　磷酸二氢钾　　　　　　　　　　　　 1。5g
　　蒸馏水　　　　　　　　　　　　　　 1000mL
　　pH7.2
制法:按上述成分配好后以大烧瓶装，121℃高压灭菌15min。临用时无菌分装每瓶225mL.
注：本培养基供沙门氏菌前增菌用。
37 氯化镁孔雀绿增菌液（MM）
甲液
　　胰蛋白胨　　　　　　5g
　　氯化钠　　　　　　　8g
　　磷酸二氢钾　　　　　1.6g
　　蒸馏水　　　　　　　1000mL
乙液
　　氯化镁（化学纯）　　　40g
　　蒸馏水　　　　　　　100mL
　　4。13.3　丙液
　　0.4%孔雀绿水溶液。
制法：分别按上述成分配好后,121℃高压灭菌15min备用.临用时取甲液90mL、乙液9mL、丙液0.9mL，以无菌操作混合即可。
注：本培养基亦称Rappaport 10（R10）增菌液.
38 四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB)
基础培养基
　　多胨或眎胨　　　5g
　　胆盐　　　　　　1g
　　碳酸钙　　　　　10g
　　硫代硫酸钠　　　30g
　　蒸馏水　　　　　1000mL
碘溶液
　　碘　　　　　　　6g
　　碘化钾　　　　　5g
　　蒸馏水　　　　　20mL
制法：将基础培养基的各成分加入蒸馏水中，加热溶解，分装每瓶100mL.分装时应随时振摇，使其中的碳酸钙混匀.121℃高压灭菌15min备用.临用时每100mL基础培养基中加入碘溶液2mL、0.1%煌绿溶液1mL.

39 四硫磺酸钠煌绿增菌液（换用方法）
基础液:
　　蛋白胨　　　　　　 10g
　　牛肉膏　　　　　　 5g
　　氯化钠　　　　　　 3g
　　碳酸钙　　　　　　 45g
　　蒸馏水　　　　　　 1000mL
　　将各成分加入于蒸馏水中，加热至约70℃溶解，校正pH至7.0±0.1,121℃高压灭菌20min。
硫代硫酸钠溶液
　　硫代硫酸钠(Na2S2O3·5H2O）　　　　 50g
　　蒸馏水　　　　　　　　　　　　　　加至100mL
碘溶液
　　碘片　　　　　　　　　　　　　　　20g
　　碘化钾　　　　　　　　　　　　　　25g
　　蒸馏水加至　　　　　　　　　　　　100mL
　　将碘化钾充分溶解于是少量的蒸馏水中,加入碘片，振摇玻瓶至碘片全部溶解,再加入蒸馏水至规　　定量。贮于棕色玻瓶内,紧塞瓶盖备用。
煌绿水溶液
　　煌绿　　　　　0.5g
　　蒸馏水　　　　100mL
　　存放暗处,不少于1d，使其自然灭菌.
牛胆盐溶液
　　干燥的牛胆盐　10g
　　蒸馏水　　　　100mL
　　煮沸溶解,121℃高压灭菌20min。　　　
制备：
　　基础液　　　　　　900mL
　　硫代硫酸钠溶液　　100mL
　　碘液　　　　　　　20mL
　　煌绿溶液　　　　　2mL
　　牛胆盐溶液　　　　50mL
　　临用前，按上列顺序，以无菌操作依次加入于基础液中,每加入一种成分，均应摇匀后再加入另一种成分.分装于灭菌瓶中,每瓶100mL.

40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC)
成分:
　　蛋白胨　　　　5g
　　乳糖　　　　　4g
　　亚硒酸氢钠　　4g
　　磷酸氢二钠　　5。5g
　　磷酸二氢钾　　4.58
　　L-胱氨酸　　　0.01g
　　蒸馏水　　　　1000mL
1%L—胱氨酸－氢氧化钠溶液的配法:称取L－胱氨酸0.1g(或DL－胱氨酸0。2g)，加1mol/L氢氧化钠1。5mL，使溶解，再加入蒸馏水8.5mL即成。
制法：将除亚硒酸氢钠和L－胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸馏水中，加热煮沸,俟冷备用。另将亚硒酸氢钠溶解于100mL蒸馏水中，加热煮沸，候冷，以无菌操作与上液混合。再加入1％L－胱氨酸－氢氧化钠溶液1mL.分装于灭菌瓶中，每瓶100mL,pH应为7.0±0.1。
41 GN增菌液
成分：
　　胰蛋白胨　　　20g
　　葡萄糖　　　　1g
　　甘露醇　　　　2g
　　柠檬酸钠　　　5g
　　去氧胆酸钠　　0.5g
　　磷酸氢二钾　　4g
　　磷酸二氢钾　　1.5g
　　氯化钠　　　　5g
　　蒸馏水　　　　1000mL
　　pH7.0
制法:按上述成分配好，加热使溶解，校正pH。分装每瓶225mL，115℃高压灭菌15min。
42 肠道菌增菌肉汤
成分：
　　蛋白胨1　　　　　 10g
　　葡萄糖　　　　　　5g
　　牛胆盐　　　　　　20g
　　磷酸氢二钠　　　　8g
　　磷酸二氢钾　　　　2g
　　煌绿　　　　　　　0.015g
　　蒸馏水　　　　　　1000mL
　　pH7。2
制法：按上述成分配好,加热使溶解，校正pH.分装每瓶30mL，115℃高压灭菌15min。
43 亚硫酸铋琼脂（BS）
成分：
　　蛋白胨　　　　10g
　　牛肉膏　　　　5g
　　葡萄糖　　　　5g
　　硫酸亚铁　　　0。3g
　　磷酸氢二钠　　4g
　　煌绿　　　　　0。025g
　　柠檬酸铋铵　　2g
　　亚硫酸钠　　　6g
　　琼脂　　　　　18～20g
　　蒸馏水　　　　1000mL
　　pH7。5
制法：
　　1　将前面5种成分溶解于300mL蒸馏水中.
　　2　将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50mL蒸馏水溶解。
　　3　将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解，冷至80℃
　　4　将以上三液合并，补充蒸馏水至1000mL，校正pH，加0。5％煌绿水溶液5mL，摇匀。冷至50~55℃，倾注平皿.
注：此培养基不需高压灭菌。制备过程不宜过分加热.以免降低其选择性。应在临用前一天制备，贮存于室温暗处.超过48h不宜使用.
44 DHL琼脂
成分：
　　蛋白胨　　　　　 20g
　　牛肉膏　　　　　 3g
　　乳糖　　　　　　 10g
　　蔗糖　　　　　　 10g
　　去氧胆酸钠　　　 1g
　　硫代硫酸钠　　　 2.3g
　　柠檬酸钠　　　　 1g
　　柠檬酸铁铵　　　 1g
　　中性红　　　　　 0.03g
　　琼脂　　　　　　 18~20g
　　蒸馏水　　　　　 1000mL
　　pH7。3
制法:将除中性红和琼脂以外的成分溶解于400mL蒸馏水中，校正pH。　再将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解，两液合并，并加入0。5%中性红水溶液6mL，待冷至50～55℃，倾注平板。
45 HE琼脂
成分：
　　脙胨　　　　　12g
　　牛肉膏　　　　3g
　　乳糖　　　　　12g
　　蔗糖　　　　　12g
　　水杨素　　　　2g
　　胆盐　　　　　20g
　　氯化钠　　　　5g
　　琼脂　　　　　18～20g
　　蒸馏水　　　　　　　　　　　1000mL
　　0.4％溴麝香草酚蓝溶液　　　　16mL
　　Andrade指示剂　　　　　　　 20mL
　　甲液　　　　　　　　　　　　20mL
　　乙液　　　　　　　　　　　　20mL
　　pH7.5
制法：将前面七种成分溶解于400mL蒸馏水内作为基础液；将琼脂加入于600mL蒸馏水内，加热溶解。加入 甲液和乙液于基础液内，校正pH。再加入指示剂，并与琼脂液合并,待冷至50～55℃,倾注平板。　　
注:①此培养基不可高压灭菌。
　　②甲液的配制
　　硫代硫酸钠　　　　　　　　　 34g
　　柠檬酸铁铵　　　　　　　　　 4g
　　蒸馏水　　　　　　　　　　　 100mL
　　②乙液的配制
　　去氧胆酸钠　　　　　　　　　 10g
　　蒸馏水　　　　　　　　　　　 100mL
　　②Andrade指示剂
　　酸性复红　　　　　　　　　　 0。5g
　　1mol/L氢氧化钠溶液　　　　　 16mL
　　蒸馏水　　　　　　　　　　　 100mL
　　将复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液。数小时后如复红褪色不全，再加氢氧化钠溶液1～2mL.
46 SS琼脂
基础培养基：
　　牛肉膏　　　　　　　　　　　5g
　　眎胨　　　　　　　　　　　　5g
　　三号胆盐