DB13∕T 5709-2023 基于酚酸类成分的蒲公英质量评价技术规程(河北省).pdf

ICS 65.020.01 CCS B 05 13 河北省地方标准 DB 13/T 57092023 基于酚酸类成分的蒲公英质量评价 技术规程 2023-05-06 发布 2023-06-06 实施 河北省市场监督管理局 发 布 DB 13/T 57092023 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由唐山市市场监督管理局提出。本文件起草单位：河北省农林科学院滨海农业研究所、中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、河北桃晟堂农业科技开发有限公司、唐山拓普生物科技有限公司。本文件主要起草人：吴 哲、李赵嘉、孟 然、冯薇、丁冯洁、王淼、毛立娟、杨文娇、鲁雪林、王秀萍、张立娟、翟俐朋。DB 13/T 57092023 1 基于酚酸类成分的蒲公英质量评价 技术规程 1 范围 本文件规定了基于酚酸类成分的蒲公英质量评价技术的样本处理、供试品溶液制备、酚酸类成分含量测定、质量等级评定等。本文件适用于基于酚酸类成分的蒲公英质量评价技术。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 8855 新鲜水果和蔬菜的取样方法 中华人民共和国药典（一部、四部）3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。4 样本处理 样本采集 按GB/T 8855采集一定量的蒲公英地上茎叶部分，备用。样本处理 蒲公英洗净、除杂，60 烘干，干蒲公英含水量13%，含水量按中华人民共和国药典通则0832第二法测定；粉碎并通过6号筛，筛下物制成蒲公英干粉样本，移至干燥器中，备用。5 供试品溶液的制备 按附录A制备供试品溶液。6 酚酸类成分含量的测定 按附录A分别测定菊苣酸（Cichoric acid,C22H18O12）、咖啡酸（Caffeic acid,C9H8O4）、绿原酸（Chlorogenic acid,C16H18O9）和单咖啡酰酒石酸（Caftaric acid,C13H12O9）的含量。7 蒲公英质量评价 酚酸类成分含量分级 按蒲公英酚酸类成分含量，对照表1划分各成分含量的级别。DB 13/T 57092023 2 表1 蒲公英酚酸类成分含量（%）分级标准 酚酸类成分 含量级别 1 2 3 4 5 单咖啡酰酒石酸 0.400 0.3990.300 0.2990.200 0.1990.100 0.100 绿原酸 0.250 0.2490.150 0.1490.085 0.0840.030 0.030 咖啡酸 0.045 0.0440.035 0.0340.025 0.0240.015 0.015 菊苣酸 0.750 0.7490.650 0.6490.500 0.4990.300 0.300 蒲公英质量指数 按公式（1）计算蒲公英质量指数。1004 5iGQI.（1）式中：QI蒲公英质量指数；Gi蒲公英酚酸类成分含量级别；4蒲公英酚酸类成分指标总数量；5蒲公英质量级数值。蒲公英质量等级评定 以蒲公英质量指数（QI）为分级标准，将蒲公英质量划分为5个等级。见表2。表2 质量指数分级标准 质量指数 分级 025 1 25.045 2 45.060 3 60.075 4 75.0100 5 DB 13/T 57092023 3 A A 附录A （规范性）蒲公英酚酸类成分含量的测定 A.1 范围 适用于蒲公英茎叶部分的单咖啡酰酒石酸（Caftaric acid,C13H12O9）、绿原酸（Chlorogenic acid,C16H18O9）、咖啡酸（Caffeic acid,C9H8O4）和菊苣酸（Cichoric acid,C22H18O12）等酚酸类成分的含量测定。A.2 原理 试样中的酚酸类成分经甲醇溶液酸性纤维素酶辅助超声提取过滤后，高效液相色谱分离，用紫外检测器测定，外标法定量。A.3 试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T 6682中一级水的规定。A.3.1 甲醇：色谱纯。A.3.2 50%甲醇溶液：取甲醇和水按体积比1:1（V/V）比例配制。A.3.3 磷酸：色谱纯。A.3.4 0.2%磷酸水溶液：取2 mL磷酸（以纯磷酸体积计算）置于1 L的定量瓶中，用水定容。A.3.5 酸性纤维素酶：酶活性4000 U/g。A.3.6 0.1%酸性纤维素酶水溶液：称取酸性纤维素酶0.20 g（精确至0.01 g），加水200 mL定容并同时用盐酸溶液将pH值调为4.0，摇匀。A.3.7 微孔滤膜：0.45 m有机溶剂膜。A.3.8 标准品：见表A.1。表A.1 标准品 序号 中文名 英文名 CAS号 纯度 1 单咖啡酰酒石酸 Caftaric acid 67879-58-7 98%2 绿原酸 Chlorogenic acid 327-97-9 98%3 咖啡酸 Caffeic acid 331-39-5 98%4 菊苣酸 Cichoric acid 6537-80-0 98%A.3.9 标准溶液配制 A.3.9.1 标准储备溶液 称取表A.1中一定量（精确至0.1 mg）的各标准品，用50%甲醇溶液分别溶解，逐一配制成1 mg/mL的各标准品储备液，避光4 临时保存，现用现配。A.3.9.2 标准工作液 取一定体积的各标准品储备液，根据检测需要，用50%甲醇溶液分别梯度稀释至少5个工作浓度，避光4 临时保存，现配现用。A.4 仪器和设备 A.4.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器。A.4.2 超声波仪：超声波功率100 W400 W。A.4.3 分析天平：感量0.01 g、0.1 mg。DB 13/T 57092023 4 A.4.4 离心机：转速4000 rpm/min。A.4.5 水浴震荡器。A.5 测定 A.5.1 供试品溶液的制备 称取0.75 g（精确至0.01 g）的蒲公英干粉试样，放入50 mL具塞离心试管中，加入0.1%酸性纤维素酶水溶液15 mL，60 震荡水浴30 min。再加入15 mL甲醇并置于超声波仪中超声提取30 min，水温 66。用50%甲醇溶液补足散失部分。将试样的提取液离心4000 rpm，离心时间10 min，取上清液用0.45 m滤膜过滤，滤液为供试品溶液，供高效液相色谱仪测定。A.5.2 色谱参考条件 a)色谱柱：C18色谱柱，长 250 mm，内径 4.6 mm，粒径 5 m（或相当）；b)检测波长：327 nm；c)流动相：甲醇+0.2%的磷酸水溶液，按体积比 35:65（V/V）；d)流速：1 mL/min；e)柱温：35；f)进样体积：5 L。A.5.3 上机测定 取供试品溶液和各标准工作溶液分别进样，得到色谱峰面积响应值，在线性范围内，用外标法作多点校准，测定的试样浓度应在标准曲线范围内。以保留时间定性，峰面积定量。标准品溶液和供试品溶液色谱图见图A.1和A.2。A.6 平行试验 按以上步骤对同一试样进行平行测定。A.7 定量结果计算 按公式A.1分别计算单咖啡酰酒石酸、绿原酸、咖啡酸和菊苣酸等4种酚酸类成分含量。10000C VWm.（A.1）式中：W试样中某个被测成分的质量分数，单位为百分含量（%）；C试液色谱峰对应的某个被测成分浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；V提取溶剂总体积，单位为毫升（mL）；m试样干重，单位为克（g）；10000单位转换系数。测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。A.8 精密度 在再现性条件下的两次独立测定结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的15%。A.9 定量限 试样中单咖啡酰酒石酸、绿原酸、咖啡酸和菊苣酸等4种酚酸类成分定量限均为0.01 mg/g。A.10 HPLC 参考色谱图 四种标准品溶液的HPLC色谱图参见图A.1。供试品溶液中4种成分依次出峰顺序为单咖啡酰酒石酸、绿原酸、咖啡酸和菊苣酸，参见图A.2。DB 13/T 57092023 5 图 A.1 四个标准品的 HPLC 色谱图 图 A.2 蒲公英试样的 HPLC 色谱图