常用缓冲溶液的配制方法.pdf

1 常用缓冲溶液的配制方法常用缓冲溶液的配制方法 1.磷酸氢二钠柠檬酸缓冲液2 2柠檬酸柠檬酸钠缓冲液（0.1 mol/L）2 3甘氨酸盐酸缓冲液（0.05 mol/L）3 4邻苯二甲酸盐酸缓冲液（0.05 mol/L）3 5乙酸乙酸钠缓冲液（0.2 mol/L）3 6磷酸盐缓冲液 3 7磷酸二氢钾氢氧化钠缓冲液（0.05M）4 8巴比妥钠-盐酸缓冲液（18）4 9硼酸硼砂缓冲液（0.2M 硼酸根）5 10甘氨酸氢氧化钠缓冲液（0.05M）5 11碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M）5 12Tris盐酸缓冲液（0.05M，25）6 13硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M 硼酸根）6 14PBS 缓冲液6 15.B-R 缓冲溶液配制 7 16.常用 pH 缓冲溶液的配制和 pH 值7 2 1.磷酸氢二钠磷酸氢二钠柠檬酸缓冲液柠檬酸缓冲液 pH 0.2mol/L Na2HPO4(mL)0.1mol/L 柠檬酸(mL)pH 0.2mol/L Na2HPO4(mL)0.1mol/L 柠檬酸(mL)2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 4.8 5.0 0.40 1.24 2.18 3.17 4.11 4.94 5.70 6.44 7.10 7.71 8.28 8.82 9.35 9.86 10.30 19.60 18.76 17.82 16.83 15.89 15.06 14.30 13.56 12.90 12.29 11.72 11.18 10.65 10.14 9.70 5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 10.72 11.15 11.60 12.09 12.63 13.22 13.85 14.55 15.45 16.47 17.39 18.17 18.73 19.15 19.45 9.28 8.85 8.40 7.91 7.37 6.78 6.15 5.45 4.55 3.53 2.61 1.83 1.27 0.85 0.55 Na2HPO4分子量=14.98，0.2 mol/L 溶液为 28.40 克/升。Na2HPO42H2O 分子量=178.05，0.2 mol/L 溶液含 35.01 克/升。C4H2O7H2O 分子量=210.14，0.1 mol/L 溶液为 21.01 克/升。2柠檬酸柠檬酸柠檬酸钠缓冲液柠檬酸钠缓冲液（0.1 mol/L）pH 0.1 mol/L 柠檬酸(mL)0.1 mol/L 柠檬酸钠(mL)pH 0.1 mol/L 柠檬酸(mL)0.1 mol/L 柠檬酸钠(mL)3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 4.8 18.6 17.2 16.0 14.9 14.0 13.1 12.3 11.4 10.3 9.2 1.4 2.8 4.0 5.1 6.0 6.9 7.7 8.6 9.7 10.8 5.0 5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 8.2 7.3 6.4 5.5 4.7 3.8 2.8 2.0 1.4 11.8 12.7 13.6 14.5 15.3 16.2 17.2 18.0 18.6 柠檬酸 C6H8O7H2O：分子量 210.14，0.1 mol/L 溶液为 21.01 克/升。柠檬酸钠 Na3 C6H5O72H2O：分子量 294.12，0.1 mol/L 溶液为 29.41 克/毫升。柠檬酸柠檬酸氢氧化钠氢氧化钠-盐酸缓冲液盐酸缓冲液 pH 钠离子浓度（mol/L）柠檬酸（克）C6H8O7H2O 氢氧化钠(克)NaOH 97%盐酸(mL)HCl（浓）最终体积（升）2.2 3.1 3.3 0.20 0.20 0.20 210 210 210 84 83 83 160 116 106 10 10 10 3 4.3 5.3 5.8 6.5 0.20 0.35 0.45 0.38 210 245 285 266 83 144 186 156 45 68 105 126 10 10 10 10 3甘氨酸甘氨酸盐酸缓冲液盐酸缓冲液（0.05 mol/L）X 毫升 0.2 mol/L 甘氨酸+Y 毫升 0.2 mol/L HCI，再加水稀释至 200 毫升 pH X Y pH X Y 2.0 2.4 2.6 2.8 50 50 50 50 44.0 32.4 24.2 16.8 3.0 3.2 3.4 3.6 50 50 50 50 11.4 8.2 6.4 5.0 甘氨酸分子量=75.07，0.2 mol/L 甘氨酸溶液含 15.01 克/升。4邻苯二甲酸邻苯二甲酸盐酸缓冲液盐酸缓冲液（0.05 mol/L）X 毫升 0.2 mol/L 邻苯二甲酸氢钾+0.2 mol/L HCl，再加水稀释到 20 毫升 pH(20)X Y pH(20)X Y 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 5 5 5 5 5 4.070 3.960 3.295 2.642 2.022 3.2 3.4 3.6 3.8 5 5 5 5 1.470 0.990 0.597 0.263 邻苯二甲酸氢钾分子量=204.23，0.2 mol/L 邻苯二甲酸氢溶液含 40.85 克/升 5乙酸乙酸乙酸钠缓冲液乙酸钠缓冲液（0.2 mol/L）pH(18)0.2 mol/L NaAc(mL)0.3 mol/L HAc(mL)pH(18)0.2 mol/L NaAc(mL)0.3 mol/L HAc(mL)2.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 0.75 1.20 1.80 2.65 3.70 4.90 9.25 8.80 8.20 7.35 6.30 5.10 4.8 5.0 5.2 5.4 5.6 5.8 5.90 7.00 7.90 8.60 9.10 9.40 4.10 3.00 2.10 1.40 0.90 0.60 Na2Ac3H2O 分子量=136.09，0.2 mol/L 溶液为 27.22 克/升。6磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液（1）磷酸氢二钠磷酸氢二钠磷酸二氢钠缓冲液磷酸二氢钠缓冲液（0.2）pH 0.2 mol/L Na2HPO4(mL)0.3 mol/L NaH2PO4(mL)pH 0.2 mol/L Na2HPO4(mL)0.3 mol/L NaH2PO4(mL)5.8 5.9 8.0 10.0 92.0 90.0 7.0 7.1 61.0 67.0 39.0 33.0 4 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 12.3 15.0 18.5 22.5 26.5 31.5 37.5 43.5 49.5 55.0 87.7 85.0 81.5 77.5 73.5 68.5 62.5 56.5 51.0 45.0 7.2 7.3 7.4 7.5 7.6 7.7 7.8 7.9 8.0 72.0 77.0 81.0 84.0 87.0 89.5 91.5 93.0 94.7 28.0 23.0 19.0 16.0 13.0 10.5 8.5 7.0 5.3 Na2HPO42H2O 分子量=178.05，0.2 mol/L 溶液为 85.61 克/升。Na2HPO412H2O 分子量=358.22，0.2 mol/L 溶液为 71.64 克/升。Na2HPO42H2O 分子量=156.03，0.2 mol/L 溶液为 31.21 克/升。（2）磷酸氢二钠磷酸氢二钠磷酸二氢钾缓冲液磷酸二氢钾缓冲液（1/15 mol/L）pH mol/L/15Na2HPO4(mL)mol/L/15KH2PO4(mL)pH mol/L/15Na2HPO4(mL)mol/L/15KH2PO4(mL)4.92 5.29 5.91 6.24 6.47 6.64 6.81 6.98 0.10 0.50 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 9.90 9.50 9.00 8.00 7.00 6.00 5.00 4.00 7.17 7.38 7.73 8.04 8.34 8.67 8.18 7.00 8.00 9.00 9.50 9.75 9.90 10.00 3.00 2.00 1.00 0.50 0.25 0.10 0 Na2HPO42H2O 分子量=178.05，1/15M 溶液为 11.876 克/升。KH2PO4分子量=136.09，1/15M 溶液为 9.078 克/升。7磷酸二氢钾磷酸二氢钾氢氧化钠缓冲液氢氧化钠缓冲液（0.05M）X 毫升 0.2M K2PO4+Y 毫升 0.2N NaOH 加水稀释至 29 毫升 pH(20)X(mL)Y(mL)pH(20)X(mL)Y(mL)5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 5 5 5 5 5 5 0.372 0.570 0.860 1.260 1.780 2.365 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 5 5 5 5 5 5 2.963 3.500 3.950 4.280 4.520 4.680 8巴比妥钠巴比妥钠-盐酸缓冲液盐酸缓冲液（18）pH 0.04M 巴比妥钠溶液 0.2V 盐酸 pH 0.04M 巴比妥钠溶液(mL)0.2N 盐酸(mL)6.8 7.0 7.2 100 100 100 18.4 17.8 16.7 8.4 8.6 8.8 100 100 100 5.21 3.82 2.52 5 7.4 7.6 7.8 8.0 8.2 100 100 100 100 100 15.3 13.4 11.47 9.39 7.21 9.0 9.2 9.4 9.6 100 100 100 100 100 1.65 1.13 0.70 0.35 巴比妥钠盐分子量=206.18;0.04M 溶液为 8.25 克/升 9硼酸硼酸硼砂缓冲液硼砂缓冲液（0.2M 硼酸根硼酸根）pH 0.05M 硼砂(mL)0.2M 硼砂(mL)pH 0.05M 硼砂(mL)0.2M 硼酸(mL)7.4 7.6 7.8 8.0 1.0 1.5 2.0 3.0 9.0 8.5 8.0 7.0 8.2 8.4 8.7 9.0 3.5 4.5 6.0 8.0 6.5 5.5 4.0 2.0 硼砂 Na2B4O7H2O,分子量=381.43;0.05M 溶液（=0.2M 硼酸根）含 19.07 克/升。硼酸 H2BO3,分子量=61.84,0.2M 溶液为 12.37 克/升。硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。10甘氨酸甘氨酸氢氧化钠缓冲液氢氧化钠缓冲液（0.05M）X 毫升 0.2M 甘氨酸+Y 毫升 0.2NnaOH 加水稀释至 200 毫升 pH X Y pH X Y 8.6 8.8 9.0 9.2 9.4 50 50 50 50 50 4.0 6.0 8.8 12.0 16.8 9.6 9.8 10.0 10.4 10.6 50 50 50 50 50 22.4 27.2 32.0 38.6 45.5 甘氨酸分子量=75.07;0.2M 溶液含 15.01 克/升。11碳酸钠碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液碳酸氢钠缓冲液（0.1M）Ca2+、Mg2+存在时不得使用 pH 20 37 0.1MNa2CO3(mL)0.1MN2HCO3(mL)9.16 9.40 9.51 9.78 9.90 10.14 10.28 10.53 10.83 8.77 9.12 9.40 9.50 9.72 9.90 10.08 10.28 10.57 1 2 3 4 5 6 7 8 9 9 8 7 6 5 4 3 2 1 Na2CO210H2O 分子量=286.2;0.1M 溶液为 28.62 克/升。N2HCO3分子量=84.0;0.1M 溶液为 8.40 克/升。6 12Tris盐酸缓冲液盐酸缓冲液（0.05M，25）50 毫升 0.1M 三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与 X 毫升 0.1N 盐酸混匀后，加水稀释至 100 毫升。pH X(mL)pH X(mL)7.10 7.20 7.30 7.40 7.50 7.60 7.70 7.80 7.90 8.00 45.7 44.7 43.4 42.0 40.3 38.5 36.6 34.5 32.0 29.2 8.10 8.20 8.30 8.40 8.50 8.60 8.70 8.80 8.90 26.2 22.9 19.9 17.2 14.7 12.4 10.3 8.5 7.0 三羟甲基氨基甲烷（Tris）分子量=121.14;CAS77-86-1 分子式:C4H11NO3 化学名称:(Tris(hydroxy methyl)amino methane 外 观(Appearance):白 色 结 晶 体 含 量(Count):99%min 熔 点(MP):168-171 0.1M 溶液为 12.114 克/升。Tris 溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。13硼砂硼砂-氢氧化钠缓冲液氢氧化钠缓冲液（0.05M 硼酸根硼酸根）X 毫升 0.05M 硼砂+Y 毫升 0.2NNaOH 加水稀释至 200 毫升 pH X Y pH X Y 9.3 9.4 9.6 50 50 50 6.0 11.0 23.0 9.8 10.0 10.1 50 50 50 34.0 43.0 46.0 硼砂 Na2B4O710H2O,分子量=381.43;0.05M 溶液为 19.07 克/升。14PBS 缓冲液缓冲液 PBS:Phosphate Buffered Saline：含 0.05%吐温-20 的 pH7.4 的磷酸盐缓冲液(简称为 PBS-T)配制方法为:称取磷酸二氢钾(KH2PO4),磷酸氢二钠(Na2HPO412H2O),氯化钠(NaCl),氯化钾(KCl),吐温-20,加水 PBS 1L配方 pH7.4:磷酸二氢钾(KH2PO4):0.27g,磷酸氢二钠(Na2HPO4):1.42g,氯化钠(NaCl):8g,氯化钾(KCl)0.2g,加去离子水约 800mL 充分搅拌溶解,然后加入浓盐酸调 pH 至 7.4,最后定容到 1L高温高压灭菌后室温保存 PBS 缓冲液(pH7.27.4):NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 10mmol/L,KH2PO4 2mmol/L PBS 缓冲液一般作为溶剂,起溶解保护试剂的作用,具体试剂一般也有不同的比例配方,在针对性上就有了更好的效果 1x PBS 缓冲液就是使用 0.1M（磷酸根浓度）的 PBS 配置,可直接使用,2x PBS 就是 2 倍浓度,使CCH2OHHOCH2HOCH2NH2 7 用时稀释一倍使用 0.01M 的 PBS 一般不用来配置缓冲液,用于其它用处 pH 7.6 7.4 7.2 7.0 H2O NaCl Na2HPO4 NaH2PO4 1000 8.5 2.2 0.1 1000 8.5 2.2 0.2 1000 8.5 2.2 0.3 100ml 8.5g 2.2g 0.4g 15.B-R 缓冲溶液配制缓冲溶液配制 Britton-Robinson Buffer Solution(伯瑞坦-罗比森缓冲溶液)在100 ml三酸混合液(磷酸乙酸硼酸,浓度均为0.04 mol/L)中,加入表中指定体积的0.2 mol/LNaOH,即得表中相应 PH 值的缓冲溶液 pH NaOH(ml)pH NaOH(ml)pH NaOH(ml)1.81 0.00 5.33 37.5 9.62 75.0 1.89 2.5 5.72 40.0 9.91 77.5 1.98 5.0 6.09 42.5 10.38 80.0 2.09 7.5 6.37 45.0 10.88 82.5 2.21 10.0 6.59 47.5 11.2 85.0 2.36 12.5 6.8 50.0 11.4 87.5 2.56 15.0 7.00 52.5 11.58 90.0 2.87 17.5 7.24 55.0 11.7 92.5 3.29 20.0 7.54 57.5 11.82 95.0 3.78 22.5 7.96 60.0 11.92 97.5 4.10 25.0 8.36 62.5 4.35 27.5 8.69 65.0 4.56 30.0 8.95 67.5 4.78 32.5 9.15 70.0 5.02 35.0 9.37 72.5 16.常用常用 pH 缓冲溶液的配制和缓冲溶液的配制和 pH 值值 序号序号 溶液名称溶液名称 配制方法配制方法 pH 值值 1 氯化钾-盐酸 13.0 ml 0.2 mol/L HCl 与 25.0 ml 0.2 mol/L KCl 混合均匀后，加水稀释至 100 ml 1.7 2 氨基乙酸-盐酸 在 500 ml 水中溶解氨基乙酸 150 g，加 480 ml 浓盐酸，再加水稀释至 1L 2.3 3 一氯乙酸-氢氧化钠 在 200 ml 水中溶解 2 g 一氯乙酸后，加 40 g NaOH，溶解完全后再加水稀释至 1 L 2.8 4 邻苯二甲酸氢钾-盐酸 把 25.0 ml 0.2 mol/L 的邻苯二甲酸氢钾溶液与 6.0 ml 0.1 mol/L HCl 混合均匀，加水稀释至 100 ml 3.6 8 序号序号 溶液名称溶液名称 配制方法配制方法 pH 值值 5 邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠 把25.0 ml 0.2 mol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与17.5 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml 4.8 6 六亚甲基四胺-盐酸 在200 ml水中溶解六亚甲基四胺40 g，加浓HCl 10 ml，再加水稀释至 1 L 5.4 7 磷酸二氢钾-氢氧化钠 把 25.0 ml 0.2 mol/L 的磷酸二氢钾与 23.6 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml 6.8 8 硼酸-氯化钾-氢氧化钠 把 25.0 ml 0.2 mol/L 的硼酸-氯化钾与 4.0 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml 8.0 9 氯化铵-氨水 把 0.1 mol/L 氯化铵与 0.1 mol/L 氨水以 2：1 比例混合均匀 9.1 10 硼酸-氯化钾-氢氧化钠 把 25.0 ml 0.2 mol/L 的硼酸-氯化钾与 43.9 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml 10.0 11 氨基乙酸-氯化钠-氢氧化钠 把 49.0 ml 0.1 mol/L 氨基乙酸-氯化钠与 51.0 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀 11.6 12 磷酸氢二钠-氢氧化钠 把 50.0 ml 0.05 mol/L Na2HPO4与 26.9 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml 12.0 13 氯化钾-氢氧化钠 把 25.0 ml 0.2 mol/L KCl 与 66.0 ml 0.2 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml 13.0