毕业设计论文-瘦肉精的危害及检测方法.doc

黄河水利职业技术学院毕业论文（设计报告）黄 河 水 利 职 业 技 术 学 院毕业论文（设计）报告题目：瘦肉精的危害及检测方法学 生： 指导教师： 专 业： 生物技术及应用班 级： 生物技术及应用1101班2013 年 12 月 27日摘 要瘦肉精是一类药物，而不是某一种特定的药物，任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。瘦肉精虽然能提高猪的瘦肉率带来更多经济价值，但它是有很危险的副作用，人体食用含有瘦肉精的肉会对身体产生危害，常见的有恶心、头晕、四肢无力、手颤等中毒症状，特别对心脏病、高血压患者危害更大，长期食用则可能导致染色体基变，诱发恶性肿。因此在生猪的收购、加工、市场销售的过程中要加大检测力度，来保证人民的身体健康。目前，除传统检测项目在生猪加工过程中使用外，也加入了瘦肉精的检测，常见的检测方法有气相色谱-质谱法、高效液相色谱检测法、酶联免疫吸附法、液相色谱质谱/质谱法、胶体金检测卡法等多种途径。本文主要介绍了瘦肉精的特点、类型、发病症状、治疗方法及防范措施、检测方法等。详细综述了瘦肉精的检测方法，并结合自己在众品集团实习方面的一些经历，介绍了目前较为流行的瘦肉精检测方法及各自的优势，最后总结了瘦肉精检测方法的发展前景。关键词：瘦肉精 盐酸克伦特罗 人体危害 液相色谱 黄河水利职业技术学院毕业论文（设计报告）目 录1.引言2 1.1瘦肉精的概念2 1.2瘦肉精的类型2 1.3瘦肉精事件4 1.4瘦肉精中毒症状7 1.5瘦肉精中毒治疗办法8 1.6瘦肉精的防治措施92.传统生猪检测103.瘦肉精的检测方法10 3.1气象色谱-质谱检测法11 3.2高效液相色谱检测法11 3.3酶联免疫吸附法12 3.4液相色谱质谱/质谱法(HPLC-MS/MS)12 3.5胶体金检测卡法134.实习经历13 4.1样品处理13 4.2使用方法14 4.3注意事项145.快速检测的优点156.瘦肉精检测发展趋势17致谢19文献20I瘦肉精的危害及检测方法1.引言1.1瘦肉精的概念瘦肉精是一类药物，而不是某一种特定的药物，任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。使用瘦肉精可以促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解抑制脂肪沉积，能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，因此曾被用作牛、羊、禽、猪等畜禽的促生长剂、饲料添加剂。瘦肉精在人体内也会产生很大危害，可使人表现为面色潮红、头痛、头晕、乏力、胸闷、心悸、骨骼肌震颤、四肢麻木等一系列不良反应。一次性摄入克伦特罗的量过大，还会迅速导致心率过速，对原有心律失常的病人更易突发心脏病，严重时会出现心肌梗死。我国政府也将瘦肉精列为动物饲养中禁止添加药品以及肉类产品必检项目。1.2瘦肉精的类型瘦肉精的种类比较多，任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”,其中最常用的为盐酸克伦特罗(Clenbuterol Hydrochloride)，常见的有：盐酸克伦特罗(Clenbuterol Hydrochloride)莱克多巴胺(Ractopamine)沙丁胺醇(Salbutamol)硫酸沙丁胺醇(Salbutamol Sulfate)盐酸多巴胺(Dopamine Hydrochloride)西马特罗(Cimaterol)硫酸特布他林(Terbutaline Sulfate)苯乙醇胺A(Phenylethanolamine A)班布特罗(Bambuterol)盐酸齐帕特罗(Zilpaterol Hydrochloride)盐酸氯丙那林(Clorprenaline Hydrochloride)马布特罗(Mabuterol)西布特罗(Cimbuterol)溴布特罗(Brombuterol)酒石酸阿福特罗(Arformoterol Tartrate)富马酸福莫特罗(Formoterol Fumatrate)1.3瘦肉精事件一、双汇瘦肉精事件18道检验不检瘦肉精消费者熟悉的双汇集团旗下公司被央视315特别节目曝光。央视报道，双汇宣称“十八道检验、十八个放心”，但猪肉不检测“瘦肉精”。添加“瘦肉精”养殖的有毒生猪，顺利卖到双汇集团旗下公司。据央视每周质量报告的315特别节目“健美猪”真相报道，养猪场采用违禁动物药品“瘦肉精”饲养，有毒猪肉流向了双汇。济源双汇食品有限公司是河南双汇集团下属的分公司，以生猪屠宰加工为主，有自己的连锁店和加盟店，“十八道检验、十八个放心”的字样随处可见，但却不包括“瘦肉精”检测。济源双汇食品有限公司采购部业务主管承认，他们厂的确在收购添加“瘦肉精”养殖的所谓“加精”猪，而且收购价格比普通猪还要贵一些。这种猪停喂“瘦肉精”一周后，送到他们厂里卖的时候就不容易被查出来。二、雨润事件“雨润”午餐肉：2009年安徽省质监局曾经通报，阜阳“雨润”、合肥“腊味思”各有一批次午餐肉和腊肉检出含有禁用物质“瘦肉精”。每日经济新闻从安徽省质监局获悉，雨润集团已将问题午餐肉全部召回并销毁，而合肥“腊味思”的该批次产品也未流向市场。根据安徽省质监局通报，合肥市腊味思食品有限公司2009年1月19日生产的腊肉、阜阳雨润肉类加工有限公司2009年3月16日生产的午餐肉经抽查发现含有“克伦特罗”（瘦肉精）。据安徽媒体报道，当地工商执法人员于21日上午对上述2个批次产品展开市场清查，但并没有发现合肥市腊味思公司的产品。而标注为阜阳生产的“雨润”肉制品很少。执法人员只在一家中小超市内发现一款阜阳生产的“雨润”火腿肠，但没有看到午餐肉制品。“该批次产品的总量只有100盒左右，今天已全部召回并销毁。”南京雨润集团相关负责人昨天向每日经济新闻表示，午餐肉是雨润为数不多的高温产品之一，只在安徽附近销售，由阜阳雨润肉类加工有限公司加工生产，产量小，一年销售额大约只有10万元左右。每日经济新闻记者从沪上零售市场看到，上海所售的“雨润”火腿肠等产品几乎都产自江苏南京，并没有阜阳产的“雨润”午餐肉。多家超市也表示从来没有采购过合肥“腊味思”这一产品。不过，为了安全起见，部分超市已开始对“雨润”品牌旗下的其他产品进行清查，并要求供应商提供各批次产品的质检合格报。三、山东瘦肉精羊河北198只瘦肉精羊已全部扑杀中新社石家庄4月11日电（记者牛琳)河北省畜牧局11日透露，由山东流入河北的198只“瘦肉精羊”已全部扑杀，并进行无害化处理。2011年4月1日，由山东省庆云县运往河北省青县宰杀点待宰杀的198只绵羊，被河北省畜牧局现场抽检出“瘦肉精”成分。2日，该省兽药监察所对查获的疑似“瘦肉精羊”进行二次检验，抽取48份尿样，经检测全部为“瘦肉精”阳性，这批待宰羊随后由当地农业部门异地封存圈养。据介绍，在河北省畜牧兽医局和沧州市农牧局工作人员的监督下，青县组织有关部门对该批肉羊全部扑杀，并进行无害化处理。2011年3月31日晚，河北省食品整治办接到举报称，山东省一批“瘦肉精羊”运至沧州青县戴庄子村尹中路屠宰点，拟于当日晚间或次日晨屠宰。1日凌晨，河北省食品整治办工作人员与当地有关部门会合，共同对尹中路屠宰点进行突击检查。经查，现场共有待宰羊198只，系畜主山东庆云县渤海路西石官堂村刘玉国于3月31日下午从山东运来，准备在此宰杀。四、河北瘦肉精羊河北省昌黎县人民法院29日宣判一起“瘦肉精”案件，昌黎县龙家店镇西刁坨村38岁的农妇韩立荣违反中国食品卫生管理法规，明知“瘦肉精”是有毒、有害的非食品原料且国家明令禁止给家畜喂食，仍故意给其饲养的育肥羊投喂，结果被追究刑事责任。法院以生产、销售有毒、有害食品罪判处韩立荣有期徒刑5年，并处罚金人民币7万元。昌黎县人民法院经审理查明：被告人韩立荣于2009年开始饲养肉用育肥羊。因给育肥羊喂食含有“盐酸克仑特罗”（俗称“瘦肉精”）的饲料，其丈夫于2009年受到昌黎县畜牧发展局处罚。昌黎县畜牧发展局在处罚的同时告知被告人韩立荣，含有“盐酸克仑特罗”的药品不能喂羊。2011年，韩立荣饲养了220只育肥羊，被告人韩立荣从一商贩手中购买了两千多片含有“盐酸克仑特罗”成分的药片，并在明知此药片含有“盐酸克仑特罗”成分且畜牧部门不准给饲养的家畜喂食的情况下，仍继续给其饲养的育肥羊喂食。2011年3月22日，被告人韩立荣被昌黎县畜牧发展局执法人员查获，有关人员当日当场对其中六头育肥羊的尿样进行抽样，结果呈阳性。其中两份尿样送交秦皇岛市出入境检验检疫局检验检疫技术中心检验，确认被告人韩立荣饲养的育肥羊尿液含“盐酸克仑特罗”成分。被告人韩立荣当庭供述,220只羊一个月后售出，得款7万元。昌黎县人民法院认为，公诉机关指控被告人韩立荣犯罪的事实清楚，提供的证据充分，故对其指控的罪名成立。被告人韩立荣违反中国食品卫生管理法规，明知“盐酸克仑特罗”药片是有毒、有害的非食品原料，且国家明令禁止给家畜喂食的前提下，仍故意给其饲养的育肥羊投喂该药品，其行为已构成生产、销售有毒、有害食品罪。依据中华人民共和国刑法和最高人民法院、最高人民检察院关于办理非法生产、销售、使用禁止在饮料和动物饮用水中使用的药品等刑事案件具体应用法律若干问题的解释的相关规定，昌黎县人民法院作出上述一审判决。1.4瘦肉精中毒症状在畜牧业生产中，由于经济利益的驱使以及检测方法、手段还不完善，一些非法生产者将其作为一种生长促进剂添加到动物饲料中。在猪等肉用牲畜中投喂克伦特罗，即使是屠宰前七天停药，肝、肺中仍可检出较高浓度的克伦特罗。由于克伦特罗分解温度较高，一般烹调的方法（100）无法破坏其生物活性，即使是油炸（260）也只能使其活性损失一部分。人在食用超过盐酸克伦特罗残留限量的肉后会出现急性中毒症状，表现为面色潮红、头痛、头晕、乏力、胸闷、心悸、骨骼肌震颤、四肢麻木等一系列不良反应。一次性摄入克伦特罗的量过大，还会迅速导致心率过速，对原有心律失常的病人更易突发心脏病，严重时会出现心肌梗死。同时，由于激活了Na+-K+-ATP酶，促使钾离子进入细胞内引起血钾降低，从而导致心律失常。克伦特罗通过增加肌糖原的分解，引起血液中乳酸、丙酮酸的升高，并可出现酮体，容易引起糖尿病人代谢紊乱，导致酮症酸中毒或乳酸中毒。通过对大鼠毒理试验结果的研究，使用2000g/kgd的高剂量克伦特罗，可极大地降低体内牛磺酸的贮备，使骨骼肌收缩增加，并且破坏快缩肌纤维和慢缩肌纤维的融合现象，因此可引发肌肉震颤，四肢和面部肌肉痉挛，出现行走不稳、无法握物等症状。尽管反复使用会产生耐受性，对支气管扩张作用减弱及持续时间缩短。但是对于原有心律失常、高血压、青光眼、糖尿病、甲状腺功能亢进、前列腺肥大等疾病的患者，上述症状更易发生，甚至危及生命。虽然盐酸克伦特罗残留的毒作用为轻度的，但长期食用含有瘦肉精的猪肉和内脏会引起人体心血管系统和神经系统的疾病。临床表现为：1急性中毒有心悸，面颈、四肢肌肉颤动，有手抖甚至不能站立，头晕，乏力，原有心律失常的患者更容易发生反应，心动过速，室性早搏，心电图示S-T段压低与T波倒置。2原有交感神经功能亢进的患者，如有高血压、冠心病、甲状腺功能亢进者上述症状更易发生。3与糖皮质激素合用可引起低血钾，从而导致心律失常。4反复使用会产生耐受性，对支气管扩张作用减弱及持续时间缩短。虽然克伦特罗残留的毒作用为轻度的，但美国FDA研究表明，应用拟交感神经药者或对前药过敏者，对克伦特罗的反应要比正常健康个体更为严重。FDA担心非法应用克伦特罗可导致此药的生产工人患病或死亡。FDA指出，职业性吸入克伦 特罗对心血管的影响，可能要比经食品摄食的危害性更大，但有待于进一步的证实。1.5瘦肉精中毒治疗办法1.在食用含有瘦肉精的肉类及肉类产品后感到不适时应当立即到医院就诊，并保留食物到质检中心检验是否瘦肉精中毒。2立即洗胃、输液，促使毒物排出。2在心电图监测及电解质测定下，使用保护心脏药物如6-二磷酸果糖(FDP)及1-受体阻滞剂倍他乐克。4.喝水稀释其含量，停止使用该种肉类。1.6瘦肉精的防治措施1.加强舆论宣传 加强舆论宣传进一步加强舆论宣传，通过各种媒体宣传“瘦肉精”对人类的危害，认清“瘦肉精”的本质。加强生产者的职业道德教育，同时提高消费者识别、抵制能力。大力宣传畜产品安全生产的意义和要求，强化畜产品卫生安全意识，增强生产者的产品标准意识、食品质量安全意识：及时通报查处“瘦肉精”案例，以震慑不法分子，对于打击不力的连续发生“瘦肉精”中毒的地区予以曝光，停运、停销违规地区的生猪，确保畜产品安全。2.加大经费投入以扩大检测范围就目前情况来看，“瘦肉精”监测大多集中在大城市，而在偏远的地区，设施落后，经费不足无法开展“瘦肉精”检测工作，导致出现“瘦肉精”检测空白区。因此国家应加大必要的经费投入，保证更好地开展“瘦肉精”检测工作。加强对养猪企业的日常监督和生猪出栏前的“瘦肉精”残留检测，在当前生猪尿样检测的基础上扩大监测覆盖面，增加抽检频率，切实加强对生猪源头的检查监督。 3.消费者购买猪肉时要拣带些肥膘(1-2cm)的肉，颜色不要太鲜红，猪内脏因瘦肉精残留量多不宜食用。各地政府及动物检疫局要始终保持高度警惕，防止死灰复燃，防止流散在社会个人手中的“瘦肉精”产生新的危害。公安部将发动全国公安机关特别是基层派出所会同有关部门立足辖区，主动摸排，信息共享，关口前移，力争对食品安全等违法犯罪线索早发现、早检测、早查处，减少危害。同时也希望广大群众积极举报，一旦发现此类犯罪活动，公安机关将依法严肃查处、严惩不贷。国务院副总理、国务院食品安全委员会主任李克强表示，要以坚决的态度、过硬的举措、更大的力度，持续深入整治食品非法添加行为，切实解决影响食品安全的突出问题，要以食品安全法为准绳，重典治乱，加大惩处力度，切实改变违法成本低的问题，让不法分子付出高昂代价，真正起到震慑作用。中国卫生部下发通知，要求卫生系统做好严厉打击食品非法添加行为，切实加强食品添加剂监管，高度重视对非法添加行为造成食品安全事故的责任调查。2.传统生猪检测在瘦肉精事件发生以前，肉制品企业对所收购的生猪进行检验时只进行猪的疫病、体重、以及形态进行检查。口蹄疫、猪瘟、高致病性猪蓝耳病、炭疽、猪丹毒、猪肺疫、猪副伤寒、猪型链球菌病、猪支原体肺炎、副猪嗜血杆菌病、丝虫病、猪囊尾蚴病、旋毛虫病。入场（厂、点）时，只要具备有效的动物检疫合格证明，无规定的传染病和寄生虫病，需要进行实验室疫病检测的，检测结果合格，只要履行规程规定的检疫程序，检疫结果符合规定的都可以进入屠宰生产。3.瘦肉精的检测方法瘦肉精的检测方法很多，因此，大家一直都在关注瘦肉精的检测方法。 但是由于瘦肉精的种类增长速度快，现在的一些常检测方法不能有效的检测出来。所以，检测方法的完善在这方面就起到了至关重要的作用。最早的检测方法比较复杂，灵敏性底不能有效的达到检测目的。以下是几种比较常见的检测方法：3.1气象色谱-质谱检测法 气相色谱-质谱法(GC-MS)法优点是把色谱高效快速的分离效果和质谱高灵敏度的定性分析有机合起来，能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，而且具更高的检测极限。Fente C. A等用GC-MS法检测牛毛中CLB的残留，最低检测限为5ng/g；Pteer Batioens应用气相色谱串联质谱法(GC-MS-MS)对牛、羊、猪组织中的CLB含量进行检测，最低检测限为2g/g；刘琪等用GC-MS法(EI离子源）检测猪尿中的CLB,检测限为0.5g/mL；VanRhijin等用三甲基硅基或2-二甲基硅基吗啉衍生物检测尿提取物中的CLB,衍生物用电脉冲方式或化学离子化方式扫描，会产生更高的灵敏度。另外,GC-MS法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低。因此，中国将GC-MS法定为检测CLB的确证性方法(NY/T4682001)。3.2高效液相色谱检测法 HPLC适合测定热不稳定和强极性的-激动剂及其代谢产物，而且,HPLC可以与柱前提取、纯化及柱后荧光衍生化反应和质谱(MS)等系统联用，容易实现分析过程的自动化。黄士新等(1995)应用紫外检测器，在=243nm,色谱柱：shimpackCLC-ODS1506.0mn,流速：1mL/min,柱温：室温30的条件下检测猪肝脏和猪肉中的CLB残留，最低检测限可达2g/g。国外有人应用HPLC (二极管阵列检测器）测定动物性食品中CLB残留，测得最低检测限为1.26ng/g,回收率达98.9%。中国已将HPLC法作为检测CLB残留的半确证性方法，最低检测限范围为115g/g,其优点是专属性好、选择性强、检测精确度较高，而且假阳性率低；缺点是样品处理时间长，检测过程烦琐、难于操作，需贵重仪器，在实际应用中受到一定的限制。3.3酶联免疫吸附法利用免疫学抗原抗体特异性结合和酶的高效催化作用，通过化学方法将植物辣根过氧化物酶(HRP)与克伦特罗(CL)结合，形成酶偶联克伦特罗。将固相载体上已包被的抗体（羊抗兔IgG抗体）与特异性的抗克伦特罗抗体结合，然后加入待测克伦特罗和酶偶联克伦特罗，它们竞争性与克伦特罗抗体结合，洗涤后加底物，根据有色物的变化计量待测克伦特罗量。若待测克伦特罗多，则被结合的酶偶联克伦特罗少，有色物量就少。用目测法或比色法测定样品中的克伦特罗含量，比色的最佳波长为450 nm,参比波长应大于600 nm。3.4液相色谱质谱/质谱法(HPLC-MS/MS)参见SN/T 19242007 进出口动物源食品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林残留量的检测方法。本标准适用于动物源性食品肌肉和内脏中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林残留量的检测。试样中的药物残留采用pH5.2的乙酸铵缓冲液提取，同时加入-盐酸葡萄糖醛甙酶-芳基硫酯酶进行酶解后，提取液经C18和SCX双SPE柱净化，液相色谱质谱进行测定内标法定量。3.5胶体金检测卡法此法速度快，适合于基层单位作初步筛选检测。用BSA偶联的克伦特罗分子于胶体会颗粒结合后，包被在醋酸纤维素膜上；在硝酸纤维素膜上将克伦特罗抗体和BSA抗体分别包被在检测区和质控区。加入样品后，样本中的克伦特罗分子与克伦特罗一BSA一胶体金偶联物一起层析泳动到检测区竞争与克伦特罗抗体结合，剩余的克伦特罗一BSA胶体金继续泳动到质控区与抗体结合。当样品中的克伦特罗浓度超过定量后，胶体金偶联物就不能与克伦特罗抗体结合，只有质控区出现紫红色线条，检测区不出现线条；相反则质控区和检测区都出现线条。4.实习经历下面我将详细介绍在我实习期间所进行的测试方法：我所在的众品公司所进行的瘦肉精检测方法主要以快速检测卡为主，如果检测卡呈阳性再以仪器检测进行确认，检测尿液、组织和饲料样本中莱克多巴胺的残留量。宰前按批次进行抽查，当原料猪数量低于十头时逐头进行检测，当数量大于十头时抽检其百分之十进行检测，宰后检测采用随机抽查检测方法和宰前一致，其中瘦肉精的检验采用快速试剂卡检测，所用快速检测卡为北京库尔生物技术有限公司所产的莱克多巴胺、沙丁胺醇、克伦特罗检测试剂卡。4.1样品处理1、 用干燥、洁净的离心管或适当容器采集50ml左右尿液。如果不立即检测，尿样在2-8冷藏可保存24小时，要注意避免腐败造成失效或污染。出现阳性结果时应按法定程序分瓶封装样品用于确证法检测。2、将瘦肉或内脏样本剪碎，装入1.5ml离心管中，盖紧管盖。放入沸水浴中加热5分钟以上使有液汁浸出，取出离心管放至室温。3、如果不立即检测，尿样在2-8冷藏可保存24小时，要注意避免腐败造成失效或污染。4.2使用方法1、测试前将未开封的检测卡恢复至室温。2、从铝箔袋中取出检测卡（在一小时内使用）。 3、将检测卡平放于台面，用塑料吸管垂直滴加1滴无气泡的样本渗出液(约20-30ul)于加样孔，30秒后再加入展开液2-3滴(约60-80ul)。4、反应10min后，展开区出现紫色条带为阴性结果，无条带者为阳性结果。5、结果解释阳性（+）：仅质控区（C）出现一条紫红色条带。在测试区（T）内无紫红色条带出现。阳性结果表明：尿液中的盐酸克伦特罗浓度在阈值（3g/ml）以上。阴性（-）：两条紫红色条带出现。一条位于测试区（T）内，另一条位于质控区（C）内。阴性结果表明：尿液中的盐酸克伦特罗浓度在阈值（3g/ml）以下。无效：质控区（C）未出现紫红色条带，提示测试失败或试纸已失效。注意：测试区（T）内的紫红色条带可显现出颜色深浅的现象。但是，在规定的观察时间内，不论该色带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应判定为阴性结果。4.3注意事项1、检测卡在室温20-25下一次性使用。2、脂肪会导致假阳性结果，取样时弃去肉眼可见的脂肪部分。3、检测时避免阳光直射。4、出现阳性结果，应用本卡复查并作阳性对照实验。必要时送实验室进一步定量。5、附带的瘦肉精阳性对照液为5g/ml。6、储存及有效期：2-10冷藏储存，有效期为12个月。5.快速检测的优点 与传统的检测相比，传统的瘦肉精检测，大都在实验室中，需要在现场提取检测样品然后在实验室里面利用仪器进行化验分析用，使用不方便且成本极高，工作效率低下，还要专业仪器操作人员。目前检测瘦肉精的方法有以下几种，胶体金快检卡是最快速简单的一种方法，适用于多种流通领域和各种实验室。 各种检测方法的对比： 检测方法费用步骤检出限时间特点 液质联用/气质联用很高复杂高，尿液、肉类大约0.5ppb(g/kg)，饲料10ppb长一般由检测机构实 施，作为确证方法 高效液相色谱法高复杂高，尿液、肉类大约0.5ppb(g/kg)长一般由检测机构实施，作为确证方法 酶联免疫试剂盒便宜较复杂高，尿液0.1ppb (g/kg肉类0.3-0.5ppb，饲料5ppb较长用于大量筛查 胶体金快检卡便宜简单略低，尿液约3ppb；肉类1ppb；饲料5-10ppb短用于大量筛查，但 需要确证方法 6.瘦肉精检测发展趋势根据目前国内外检测CLB各种方法的进展情况以及CLB滥用及残留的严峻性，建立一种克服上述各种检铡方法缺点的简便、快速、精确、准确、可实现现场检测的测定CLB技术势在必行。滴金免疫技术(DIGFA)和生物传感器技术(Biosensor，BS)是两种快速、高教的残留物分析技术如能研究、开发运用到检测生物样品中CLB的残留可能会产生理想的效果和大的飞跃。1、滴金免疫技术(DIGFA)DIGFA的关键技术是抗CLB单克隆抗体的制备、胶体金的制备、胶体金标记的单克隆抗体的制备、免疫渗滤装置(如，硝酸纤维抗体包被膜)的制备。后三种关键技术已比较成熟，最关键的是制备出特异性强、纯度高的抗CLB的单克隆抗体。目前，DlGFA已成功地运用于早孕诊断、弓形虫病诊断、血吸虫病诊断等，灵敏度及准确度均很理想。如果研制成检测CLB的滴金免疫试纸条或滴金免疫测试盒可实现CLB的高效现场检测。所以运用D1GFA技术将是一种较理想、很有发展前景及研究价值的检测CLB技术。2、生物传感器技术(BS)生物传感器技术也是。迈向21世纪的医学检验技术”之一。生物传感器是近30年来发展起来的一项新型、高效的分析技术。所谓生物传感器即由生物活性物质作为敏感元件，即生物识别系统(感受器)，再配上适当的换能器及输出显示装置所构成的分析工具。其原理为分子识别部分与被识别物质相接触，可发生化学变化、热变化、光变化以及直接诱导电信号，而后利用电学测量方法进行检测和控制及显示输出。生物传感器的种类包括离子选择电极传感器、气敏电极传感器、酶免疫传感器、压电晶体传感器等，可测定离子、气体、底物、酶、抗生素、维生素等物质。最早研制成功的是l967年updike等研制的葡萄糖传感器，它是一种酶传感器。原理是将肛n葡萄糖氧化酶(GOD)固定在聚丙烯酰胺凝胶固定化膜上，以氧电极作为换能器，将此骥固定在氧电极上D一葡萄糖在GOD的作用下消耗氧生成葡萄糖内酯和水，在此过程中产生化学变化，用氧电极将此化学变化转化为电信号并显示输出葡萄糖的含量。国外已有用生物传感器技术检测CLB残留的资料报道，如PlzzarieIlo Andrea应用分子印迹聚合膜(MIP)作为分子识别系统，选择固相基质复合电报(SBMCE)作为换能器，微分脉冲电压电流表(DPV)作为输出显示装置检测牛肝脏中CLB残留，结果此方法特异性强，与其他同类物质交叉反应低，缺点是反应时间较长，灵敏度还有待于提高”】。酶标免疫传感技术是酶标免疫技术与光电分析技术相结合而产生的一种电化学免疫分析技术，是利用生物传感器进行免疫测定的一种实验手段。其特点是利用酶的化学放大作用，通过测定抗原或抗体标记酶作为示踪酶，将酶与底物反应的化学变化用换能器转化为电信号，从而输出待测物质的含量。目前酶免疫传感器的灵敏度最高可达0.01gg，而且可在几分钟之内完成检测全过程，比EUSA法更灵敏、更简便和快速，而且可用于各种抗原物质的测定，尤其对体液中的药物和激素的检测更为适用。所以，如果研制成功测定CLB残留的酶免疫传感器，则可使CLB的监测及检测工作变得简单、高效。所以研制和开发测定CLB残留的生物传感器是完成CLB残留监控规划的一项理想的方案。综上所述由于已经禁止在动物生产中应用CLB，所以在许多国家并没有确定动物性产品中CLB的最大残留限量(MRL)。荷兰规定牛、马肝脏中CLB的MRL值为0.5 gg，英国规定可食性组织中MRL值为0.1g/g，有人建议应定为0.08gg。上述四种检测CLB的方法中，HPLC，GCMs、CE的最低检测限都在0.5gg以上，而且检测过程烦琐、检测时间长，需贵重仪器、难于操作，不能实现现场检测；EIA法最低检测限可达O.05g/g灵敏度和精确度都符合标准，但假阳性率高而且也不能实现现场检测。如果研制成功检测CLB残留的D1GFA试纸条和酶免疫传感器，则可克服上述方法的缺点，并且从定性和定量两个方面实现CLB残留的现场监测。所以，研制高效、方便、迅速的DIGFA试纸条和酶免疫传感器是检测CLB残留的较为理想的方法和途径，值得探人探讨和开发。致谢 在本论文设计过程中，感谢胡老师给了我锻炼的机会。从选题指导到细节修改，胡老师都给予了我认真的指导，提出了很多宝贵的意见与建议；在论文的写作工程中，胡老师经常询问论文进程，并为我解答疑问。因此，我的论文里不仅凝聚着自己对知识的总结，还包含着胡老师的认真负责、兢兢业业求真态度。胡老师治学态度严谨、对待工作精益求精；他视野开阔，思维敏锐，给了我深深的启迪。同时胡老师还在思想、生活上给予我启发，在此向胡老师致以崇高的敬意和诚挚的谢意。感谢黄河水院环境与化学工程系的老师们，特别是胡晓冰老师、王振伟老师、陈希良老师、王恺老师武琳琳老师以及其他对我帮助过的任课老师。他们一丝不苟的作风，严谨求实的态度，一直是我工作、学习的榜样；他们循循善诱的教导和不拘一格的思路，不仅授我以知识，而且教我做人，给予我无尽的启迪。对我专业思维及专业技能的教育培养，以及在学业上的细心指导，为我工作和继续学习打下了良好的基础。在此，向诸位老师致以我最崇高的敬意和最真诚的谢意！感谢陪我一起愉快度过三年大学生活的生物技术及应用1101班的各位同学们，正是由于你们对我的学习、生活和工作的关心、帮助和支持，我才能克服一个一个的困难和疑惑，直至本文的顺利完成。是你们给予我不少的帮助。三年来我们真心相待，和睦共处，不是兄弟姐妹胜似兄弟姐妹！正是一路上有你们，我的求学生涯才不会感到孤独，马上就要各奔前程了，希望你们有好的前途。感谢我的爸爸妈妈，辛辛苦苦的把我培养这么大，对于父母的养育之情无法用言语表达。在以后的生活中我会更加的关心体贴我的爸爸妈妈，成为一个让你们值得骄傲的孩子！感谢所有授我专业的老师，课堂上传授给了我们各种专业知识，正是有了这些知识的学习，我才能写出现在的总结。感恩之余，诚恳地请各位老师对我的论文多加批评指正，使我及时完善论文的不足之处。 谨以此致谢，最后，我要向百忙之中抽时间对本文进行审阅的各位老师表示衷心的感谢。文献 1.邱建琴.左晓磊 畜产品中莱克多巴胺残留的快速检测期刊论文-畜牧兽医科技信息 J2010(5)2.李前勇.王忠翊.张德志.王庆华 犬实验性瘦肉精中毒的临床病理学观察-上海畜牧兽医通讯J2009(4)3.刘维红 动物产品中盐酸克伦特罗残留危害及检测方法-安徽农学通报 J2009(23)4.张群.刘烨 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of taxation in the United States can be traced to the time when the colonists were heavily taxed by Great Britain on everything from tea to legal and business documents that were required by the Stamp Tax. The colonists disdain for this taxation without representation (so-called because the colonies had no voice in the establishment of the taxes) gave rise to revolts such as the Boston Tea Party. However, even after the Revolutionary War and the adoption of the U.S. Constitution, the main source of revenue for the newly created states was money received from customs and excise taxes on items such as carriages, sugar, whiskey, and snuff. Income tax first appeared in the United States in 1862, during the Civil War. At that time only about one percent of the population was required to pay the tax. A flat-rate income tax was imposed in 1867. The income tax was repealed in its entirety in 1872. Income tax was a rallying point for the Populist party in 1892, and had enough support two years later that Congress passed the Income Tax Act of 1894. The tax at that time was two percent on individual incomes in excess of $4,000, which meant that it reached only the wealthiest members of the population. The Supreme Court struck down the tax, holding that it violated the constitutional requirement that direct taxes be apportioned among the states by population (pollock v. farmers loan & trust, 158 U.S. 601, 15 S. Ct. 912, 39 L. Ed. 1108 1895). After many years of debate and compromise, the sixteenth amendme