lncRNA_MEG8通过...促进非小细胞肺癌的肿瘤进展_林燕明.pdf

基金项目:湛江市科技计划项目(2022B01089)作者简介:林燕明，男，1986 09 生，硕士，主治医师，E-mail:mlzsac163 com收稿日期:2022 10 11lncNA MEG8 通过调控 mi-363-3p/PAX6 轴促进非小细胞肺癌的肿瘤进展林燕明，陈玉婷，林慕文，李姝君，王永存*(广东医科大学附属医院肺部肿瘤专科，湛江524000;*通讯作者，E-mail:wycdiyi163 com)摘要:目的探讨长非编码 NA 母系表达基因8(lncNA MEG8)通过调控 mi-363-3p/人类配对盒基因6(PAX6)轴促进非小细胞肺癌(NSCLC)的肿瘤进展。方法选取 116 例经确诊为 NSCLC 患者的肿瘤组织与癌旁正常组织标本，常规培养人NSCLC 细胞株 A549、H1299，采用 T-qPC 法检测组织和细胞中 lncNA MEG8、mi-363-3p 和 PAX6 mNA 的表达。将A549、H1299 细胞分别分为对照组(control 组，空白培养基处理)、pcDNA 组(转染 pcDNA)、pcDNA-MEG8 组(转染 pcDNA-MEG8)、pcDNA-MEG8+mi-NC 组(pcDNA-MEG8 与 mi-NC 共转染)、pcDNA-MEG8+mi-363-3p mimic 组(pcDNA-MEG8 与mi-363-3p mimic 共转染)。CCK-8 法检测培养 24，48，72 h 各组细胞增殖能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡;采用 Western blot 检测凋亡相关蛋白 Bax、Bcl-2、Caspase-3 和 PAX6 蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验分别验证 MEG8 和 mi-363-3p、mi-363-3p 和 PAX6 的关系。NA 结合蛋白免疫沉淀(IP)实验检测 lncNA MEG8、mi-363-3p和 PAX6 之间的结合。结果与正常组织相比，肿瘤组织中 lncNA MEG8、PAX6 mNA 高表达，mi-363-3p 呈现低表达(均 P0 05)。与 control 组和 pcDNA 组相比，pcDNA-MEG8 组培养 48，72 h A549 和 H1299 细胞增殖能力、细胞迁移率、PAX6、Bcl-2 蛋白表达显著升高(P 0 05)，细胞凋亡率和 Bax、Caspase-3 蛋白显著降低(P 0 05)。与 pcDNA-MEG8 组和pcDNA-MEG8+mi-NC 组相比，pcDNA-MEG8+mi-363-3 mimic 组培养 48，72 h A549 和 H1299 细胞增殖能力、细胞迁移率、PAX6、Bcl-2 蛋白表达显著降低(P0 05)，mi-363-3p 表达、细胞凋亡率、Bax、Caspase-3 蛋白表达显著升高(P 0 05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示，与 mi-NC+MEG8-WT 共转染组相比，mi-363-3p mimic+MEG8-WT 共转染组荧光素酶活性显著降低(P0 05);与 mi-NC+MEG8-MUT 共转染组相比，mi-363-3p mimic+MEG8-MUT 共转染组荧光素酶活性无显著差异(P0 05)。与 mi-NC+PAX6-WT 共转染组相比，mi-363-3p mimic+PAX6-WT 共转染组荧光素酶活性显著降低(P 0 05);与 mi-NC+PAX6-MUT 共转染组相比，mi-363-3p mimic+PAX6-MUT 共转染组荧光素酶活性无显著性差异(P 0 05)。IP 实验结果显示，与 IgG 处相比，lncNA MEG8 和 mi-363-3p、mi-363-3p 和 PAX6 均主要富集在 Ago2 处，IgG 处与Ago2 处的 lncNA MEG8、mi-363-3p 和 PAX6NA 相对表达水平均具有统计学差异(P 0 05)，提示 lncNA MEG8 和 mi-363-3p、mi-363-3p 和 PAX6 能靶向结合。结论过表达 lncNA MEG8 可能通过下调 mi-363-3p 并促进 PAX6 蛋白的表达，进而促进 NSCLC 的进展。关键词:母系表达基因 8;mi-363-3p/人类配对盒基因 6;非小细胞肺癌;细胞凋亡;细胞增殖;细胞迁移中图分类号:734 2文献标志码:A文章编号:1007 6611(2023)04 0416 09DOI:1013753/j issn1007 6611202304002LncNA MEG8 promotes tumor progression in non-small cell lung cancer by regulating mi-363-3p/PAX6 axisLIN Yanming，CHEN Yuting，LIN Muwen，LI Shujun，WANG Yongcun*(Department of Lung Cancer，Affiliated Hospital of Guang-dong Medical University，Zhanjiang 524000，China;*Corresponding author，E-mail:wycdiyi163 com)Abstract:ObjectiveTo investigate the effect of long non-coding NA maternally expressed gene 8(lncNA MEG8)on tumor pro-gression of non-small cell lung cancer(NSCLC)by regulating the mi-363-3p/human paired box gene 6(PAX6)axisMethodsTumor tissue and adjacent normal tissue specimens from 116 patients diagnosed with NSCLC were collected，and human NSCLC celllines A549 and H1299 were routinely cultured，and then T-qPC was used to detect the expression of lncNA MEG8，mi-363-3pand PAX6 mNA in tissues and cells A549 and H1299 cells were divided into control group(blank medium treatment)，pcDNA group(transfected with pcDNA)，pcDNA-MEG8 group(transfected with pcDNA-MEG8)，pcDNA-MEG8+mi-NC group(co-transfectedwith pcDNA-MEG8 and mi-NC)，and pcDNA-MEG8+mi-363-3p mimic group(co-transfected with pcDNA-MEG8 and mi-363-3pmimic)CCK-8 method was applied to detect the cell proliferation ability at 24，48，72 h;cell scratch assay was applied to detect thecell migration ability;flow cytometry was applied to detect the apoptosis;Western blot was applied to detect the expression of apoptosis-related proteins Bax，Bcl-2，Caspase-3 and PAX6 Dual-luciferase reporter assays were applied to verify the relationship betweenlncNA MEG8 and mi-363-3p，mi-363-3p and PAX6，respectively NA binding protein immunoprecipitation(IP)assay wasused to detect the binding between lncNA MEG8，mi-363-3p and PAX6esultsCompared with normal tissues，lncNA MEG8614J Shanxi Med Univ，Apr 2023，Vol 54 No 4and PAX6 mNA expression levels were increased in tumor tissues，and mi-363-3p expression was decreased(P0 05)Comparedwith control group and pcDNA group，the cell proliferation ability at 48 h and 72 h，the cell migration rate，and the protein expressionof PAX6，Bcl-2 in A549 and H1299 cells were significantly increased in pcDNA-MEG8 group(P 0 05)，while the apoptosis rate，and Bax and Caspase-3 protein levels were significantly decreased(P0 05)Compared with pcDNA-MEG8 group and pcDNA-MEG8+mi-NC group，the proliferative capacity at 48 h and 72 h，the cell migration rate，PAX6 and Bcl-2 protein expression levels inA549 and H1299 cells were significantly decreased in pcDNA-MEG8+mi-363-3 mimic group(P 0 05)，while the expression ofmi-363-3p，the apoptosis rate，Bax and Caspase-3 protein expression levels were significantly increased(P 0 05)The results ofdouble luciferase reporter gene experiment showed that the luciferase activity in mi-363-3p mimic+MEG8-WT co-transfection groupwas significantly lower than that in mi-NC+MEG8-WT co-transfection group(P 0 05)Compared with mi-NC+MEG8-MUT co-transfection group，the luciferase activity had no significant difference in mi-363-3p mimic+MEG8-MUT co-transfection group(P 005)Compared with mi-NC+PAX6-WT co-transfection group，the luciferase activity in mi-363-3p mimic+PAX6-WT co-transfectiongroup was significantly decreased(P 0 05);compared with mi-NC+PAX6-MUT co-transfection group，the luciferase activity inmi-363-3p mimic+PAX6-MUT co-transfection group had no significant difference(P0 05)The results of IP experiment showedthat compared with IgG，lncNA MEG8 and mi-363-3p，mi-363-3p and PAX6 were mainly enriched at Ago2，and the relativeexpression levels of lncNA MEG8，mi-363-3p and PAX6 were significantly different at Ago2 and IgG(P 0 05)，indicating thatthere was target relationships between lncNA MEG8 and mi-363-3p，mi-363-3p and PAX6ConclusionOverexpression oflncNA MEG8 may promote the progression of NSCLC by down-regulating mi-363-3p and promoting the expression of PAX6 proteinKey words:maternally expressed gene 8;mi-363-3p/human paired box gene 6;non-small cell lung cancer;cell apoptosis;cell proliferation;cell migration非 小 细 胞 肺 癌(non-small-cell lung cancer，NSCLC)是肺癌中的常见肿瘤类型，占肺癌患者的85%1。NSCLC 的早期临床症状不明显，患者较难察觉，确诊时多为中晚期，严重影响了肿瘤治疗效果和患者的生命健康2。lncNA 是一种长度超过200 nt，但蛋白质编码能力缺失的 NA 分子，其能作为癌基因或者抑癌基因，与肿瘤细胞增殖、生长、凋亡、代谢密切相关，在肿瘤的发生发展中发挥重要作用3。lncNA MEG8 作为一种 lncNA，在多种肿瘤细胞或组织中异常表达，如结肠癌、胃癌、肝癌、肺癌等4，5。研究发现，NSCLC 患者中 lncNA MEG8表达水平提高6，但其与 mi-363-3p/PAX6 轴的具体关系尚未明确。mi-363-3p 作为一种微小 NA，在多种恶性肿瘤如胆囊癌、胃癌和胶质瘤等中参与了肿瘤细胞的分化和存活等生物学过程7，8。PAX6是胚胎形成期的重要转录因子，在胰腺癌、胃癌中呈现高表达，提示其可能参与了肿瘤的形成9。但lncNA MEG8 能否通过调控 mi-363-3p/PAX6 轴促进 NSCLC 的肿瘤进展，目前尚未明确。本研究以NSCLC 患者癌组织及 NSCLC 细胞株 A549 和 H1299细胞 为 研 究 对 象，探 讨 lncNA MEG8 基 因 对NSCLC 肿瘤进展的影响及其具体机制。1材料与方法1 1资料本研究共收集 2020 年 1 月至 2022 年 1 月在本院确诊为 NSCLC 的 116 例患者的肿瘤组织及癌旁正常组织样本作为研究对象。且入选患者在术前未接受过任何形式的放疗、化疗等抗肿瘤靶向治疗。1 2实验细胞与主要试剂人 NSCLC 细胞株 A549、H1299，均购自中国科学院上海细胞库。胎牛血清、PMI1640 培养基(含青霉素与链霉素)、胰蛋白酶、PBS、Trizol 试剂购自Sigma 公司(美国);CCK-8 试剂盒购自武汉默沙克生物科技有限公司;BCA 蛋白定量试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司;mi-NC、mi-363-3p mimic、pcDNA31、pcDNA3 1-MEG8 购自美国 Thermo Fisher公司;IPA 裂解液购自德国 Merck 公司;Bax、Bcl-2、Caspase-3 和 PAX6 一抗及其相应二抗购自英国Abcam公司;细胞凋亡试剂盒购自上海联科生物科技有限公司;NA 结合蛋白免疫沉淀(NA immu-noprecipitation，IP)试剂盒购自上海创赛科技有限公司。1 3细胞培养将 A549、H1299 细胞培养在含10%胎牛血清的PMI1640 培养基中，在 37、5%CO2的细胞培养箱环境中培养。每 2 d 更换一次新鲜培养基，待细胞融合至 80%左右进行传代，传代 3 次后取对数生长期细胞用于实验。1 4细胞分组与转染将处于对数生长期的 A549、H1299 细胞分别分为对照组(control 组)、pcDNA 组(转染 pcDNA3 1)、714山西医科大学学报，2023 年 4 月，第 54 卷 第 4 期pcDNA-MEG8 组(转染 pcDNA3 1-MEG8)、pcDNA-MEG8+mi-NC 组(pcDNA3 1-MEG8 和 mi-NC 共转染)、pcDNA-MEG8+mi-363-3p mimic 组(pc-DNA3 1-MEG8 和 mi-363-3p mimic 共转染)。按上述对各组细胞进行转染或处理，转染 24 h 后用于后续实验。1 5T-qPC 法检测 NSCLC 患者肿瘤组织中lncNA MEG8、mi-363-3p 和 PAX6 mNA 的表达取相应标本加入 Trizol 试剂提取组织总 NA，将 NA 反转录为 cDNA。以 GAPDH、U6 为内参进行 PC 扩增反应。引物序列设计如下:lncNAMEG8 上游引物 5 ATCTCCAGCCTTGACTCTGA-CAC 3，下游引物 5 GAGGACGATGTACCAGGG-TGCAGAGTG 3;mi-363-3p 上游引物5 GGAT-TGCACGGTATCCA 3，下游引物 5 TTTGGCAC-TAGCACATT 3;GAPDH 上游引物 5 GCACCGT-CAAGGCTGAGAAC 3，下 游 引 物 5 TGGT-GAAGACGCCAGTGGA 3;U6 上游引物 5 GCT-TCGGCAGCACA 3，下 游 引 物 5 AACGCT-TCACGAATTTGCGT 3。PC 扩增反应条件按试剂盒说明书进行操作，反应体系为 10 l，反应条件为:95 预变性30 s，95 变性5 s，60 退火30 s，共循环 40 次。应用 2 Ct方法计算 lncNA MEG8、mi-363-3p 的相对表达。1 6T-qPC 法检测 A549、H1299 细胞中 lncNAMEG8、mi-363-3p 的表达Trizol 试剂提取 1 5 中各组细胞的 NA。经反转录试剂盒反转录为 cDNA，按 1 6 操作，进行 PC扩增反应。引物序列和计算方法与 1 6 同。1 7CCK-8 法检测细胞增殖能力将 A549、H1299 细胞按 1 5 中分组与相应转染后，以密度1 104个/孔接种于96 孔板中，每组设置5 个复孔。待细胞培养 24，48，72 h 后，加入 10 lCCK-8 试剂，在细胞培养箱中继续孵育 4 h 后，用酶标仪检测各组细胞在450 nm 下的吸光度值(OD450)。1 8细胞划痕实验检测细胞迁移能力将 1 5 中处理过的对数生长期细胞以密度 5 105个/孔接种到6 孔板中，待细胞融合至90%时，用无菌 100 l 移液器在细胞板上进行划痕。用 PBS洗涤细胞后用无血清培养基进行培养24 h。在光镜下观察并记录 0，24 h 时细胞的迁移距离，并计算迁移率。迁移率=(0 h 的划痕距离 24 h 的划痕距离)/0 h 的划痕距离。1 9流式细胞术检测各组细胞凋亡将 1 5 中转染后的细胞收集起来，用预冷的PBS 洗涤，以转速 1 200 r/min 离心 10 min。弃去上清液，用 500 l 结合缓冲液重悬细胞。加入 5 lAnnexin、PI 染液，室温避光孵育 15 min。在流式细胞仪上检测细胞凋亡率。1 10Western blot 检测各组细胞 PAX6 蛋白和凋亡相关蛋白的表达在 1 5 中的各组细胞中加入 IPA 裂解液提取细胞总蛋白。使用 BCA 蛋白定量试剂盒进行蛋白定量。上样后进行 SDS-PAGE 凝胶电泳，PVDF 转膜，脱脂奶粉封闭 1 h。加入 PAX6(1 1 000)、Bax(1 1 000)、Bcl-2(1 1 000)和 Caspase-3(1 1 000)一抗孵育过夜(4)，次日加入相应二抗(1 5 000)继续室温孵育2 h 后，加入 ECL 试剂进行显色，观察蛋白质条带，使用 Image LabTM软件分析目标蛋白的灰度值。1 11双荧光素酶基因报告实验验证靶向关系使用 TargetScan 数据库进行 lncNA MEG8 和mi-363-3p、mi-363-3p 和 PAX6 之间的结合位点预测。构建 lncNA MEG8 野生型质粒(MEG8-WT)和突变型质粒(MEG8-MUT)，将 A549 细胞以密度1 105个/ml 接种在 24 孔板中。用 Lipofectamine2000 将 MEG8-WT 和 MEG8-MUT 分别与 mi-NC 或mi-363-3p mimic 共转染于 A549 细胞中。48 h 后，应用荧光测定仪检测荧光素酶活性。同理，构建 PAX6 野生型质粒(PAX6-WT)和突变型质粒(PAX6-MUT)，将 PAX6-WT 和 PAX6-MUT分别与 mi-NC 或 mi-363-3p mimic 共转染于 A549细胞中。48 h 后，应用荧光测定仪检测荧光素酶活性。1 12IP 实验检测 lncNA MEG8、mi-363-3p 和PAX6 之间的结合根据 IP 试剂盒说明书进行操作，进行 IP 实验。收集对数生长期的 A549 细胞，经 PBS 清洗后加入 IPA 裂解液重悬细胞，制备细胞裂解液。用5 g抗 Ago2 抗体或 IgG 阴性对照抗体孵育磁珠。然后取细胞裂解液与相应抗体包被的磁珠共孵育，获得 NA 蛋白复合物沉淀，并用蛋白酶 K 缓冲液重悬沉淀;最后使用 Trizol 试剂提取共沉淀复合物的 NA，应用 qT-PC 法检测 lncNA MEG8、mi-363-3p 和 PAX6 的表达水平。1 13数据统计学分析本实验数据采用 Graphpad Prism 7 0 进行统计814J Shanxi Med Univ，Apr 2023，Vol 54 No 4分析，并用均值 标准差(?x s)来表示。两组间数据比较采用 t 检验方法，多组间数据差异比较采用单因素方差分析方法，组间两两比较采用 LSD-t 检验。P 0 05 表示数据间的差异具有统计学意义。2结果2 1NSCLC 患者肿瘤组织中 lncNA MEG8、mi-363-3p 和 PAX6 mNA 的表达与正常组织相比，肿瘤组织中 lncNA MEG8、PAX6 mNA 表达显著提高(P 0 05)，mi-363-3p表达显著下降(P 0 05，见表 1)。2 2lncNA MEG8 抑制 A549 和 H1299 细胞中mi-363-3p 的表达与 control 组和 pcDNA 组相比，pcDNA-MEG8 组细胞中 lncNA MEG8 表达显著提高(P 0 05)，mi-363-3p 表达显著降低(P 0 05)。与 pcDNA-MEG8 组合 pcDNA-MEG8+mi-NC 组相比，pcDNA-MEG8+mi-363-3 mimic 组细胞中 lncNA MEG8表达变化无显著性差异(P 0 05)，mi-363-3p 表达显著升高(P 0 05，见表 2)。表1NSCLC 患者肿瘤与正常组织中 lncNA MEG8、mi-363-3p、PAX6 mNA 的水平(?x s，n=116)Table 1Levels of lncNA MEG8，mi-363-3p，PAX6mNA in NSCLC tissues and normal tissues(?x s，n=116)组别lncNA MEG8mi-363-3pPAX6 mNA正常组织102 008103 010101 007肿瘤组织176 006*030 013*162 004*与正常组织比较，*P 005表 2lncNA MEG8 抑制 A549 和 H1299 细胞中 mi-363-3p 表达(?x s，n=6)Table 2LncNA MEG8 inhibits the expression of mi-363-3p in A549 and H1299 cells in each group(?x s，n=6)组别A549 细胞H1299 细胞lncNA MEG8mi-363-3plncNA MEG8mi-363-3pcontrol 组1 00 0 001 00 0 001 00 0 001 00 0 00pcDNA 组1 04 0 061 03 0 081 02 0 081 03 0 07pcDNA-MEG8 组1 78 0 08*#0 36 0 04*#1 82 0 11*#0 31 0 04*#pcDNA-MEG8+mi-NC 组1 75 0 100 38 0 021 80 0 120 33 0 04pcDNA-MEG8+mi-363-3p mimic 组1 77 0 070 86 0 061 78 0 080 81 0 05与 control 组比较，*P0 05;与 pcDNA 组比较，#P0 05;与 pcDNA-MEG8 组比较，P0 05;与 pcDNA-MEG8+mi-NC 组比较，P0 052 3lncNA MEG8 和 mi-363-3p 对 A549 和H1299 细胞增殖能力的影响control 组、pcDNA 组、pcDNA-MEG8 组、pcDNA-MEG8+mi-NC 组和 pcDNA-MEG8+mi-363-3pmimic 组间细胞的24 h OD450值差异没有统计学意义(P005)。与 control 组和 pcDNA 组相比，pcDNA-MEG8 组 48 h 和 72 h 细胞增殖能力显著升高(P 0 05);与 pcDNA-MEG8 组和 pcDNA-MEG8+mi-NC 组比较，pcDNA-MEG8+mi-363-3 mimic 组48 h和 72 h 细胞的增殖能力显著降低(P 0 05，见表3，4)。2 4lncNA MEG8、mi-363-3p 对 A549 和 H1299细胞迁移率的影响与 control 组和 pcDNA 组相比，pcDNA-MEG8 组A549 和 H1299 细胞迁移率显著上升(P 0 05)，与pcDNA-MEG8 组和 pcDNA-MEG8+mi-NC 组比较，pcDNA-MEG8+mi-363-3p mimic 组 A549 和 H1299细胞迁移率显著下降(P 0 05，见图 1)。表 3lncNA MEG8 促进 A549 细胞增殖(?x s，n=6)Table 3LncNA MEG8 promotes the proliferation of A549 cells(?x s，n=6)组别OD450值0 h24 h48 h72 hcontrol 组0 12 0 020 25 0 030 53 0 050 77 0 09pcDNA 组0 13 0 020 26 0 020 52 0 070 75 0 06pcDNA-MEG8 组0 10 0 010 23 0 020 77 0 03*#1 05 0 05*#pcDNA-MEG8+mi-NC 组0 11 0 020 23 0 040 76 0 021 03 0 04pcDNA-MEG8+mi-363-3p mimic 组0 09 0 010 25 0 020 56 0 040 82 0 06与同时间 control 组比较，*P0 05;与同时间 pcDNA 组比较，#P0 05;与同时间 pcDNA-MEG8 组比较，P 0 05;与同时间 pcDNA-MEG8+mi-NC 组比较，P0 05914山西医科大学学报，2023 年 4 月，第 54 卷 第 4 期表 4lncNA MEG8 促进 H1299 细胞增殖(?x s，n=6)Table 4LncNA MEG8 promotes the proliferation of H1299 cells(?x s，n=6)组别OD450值0 h24 h48 h72 hcontrol 组0 14 0 020 30 0 030 59 0 060 83 0 09pcDNA 组0 16 0 010 29 0 020 58 0 060 81 0 08pcDNA-MEG8 组0 13 0 020 28 0 020 80 0 08*#1 12 0 09*#pcDNA-MEG8+mi-NC 组0 13 0 010 31 0 030 82 0 071 10 0 09pcDNA-MEG8+mi-363-3p mimic 组0 15 0 020 32 0 020 50 0 050 79 0 08与同时间 control 组比较，*P0 05;与同时间 pcDNA 组比较，#P0 05;与同时间 pcDNA-MEG8 组比较，P 0 05;与同时间 pcDNA-MEG8+mi-NC 组比较，P0 05与 control 组比较，*P0 05;与 pcDNA 组比较，#P 0 05;与 pcDNA-MEG8 组比较，P 0 05;与 pcDNA-MEG8+mi-NC 组比较，P0 05图 1划痕实验检测 lncNA MEG8 对 A549 和 H1299 细胞的迁移能力的影响(n=6，200)Figure 1Effect of lnc NA MEG8 on the migration ability of A549 and H1299 cells by scratch test(n=6，200)024J Shanxi Med Univ，Apr 2023，Vol 54 No 425lnc NA MEG8 对 A549 和 H1299 细胞凋亡率的影响与 control 组和 pcDNA 组相比，pcDNA-MEG8 组A549 和 H1299 细胞凋亡率显著降低(P 0 05);与pcDNA-MEG8 组和 pcDNA-MEG8+mi-NC 组比较，pcDNA-MEG8+mi-363-3 mimic 组 A549 和 H1299细胞凋亡率显著升高(P 0 05，见表 5 与图 2)。2 6lnc NA MEG8 对 A549 和 H1299 细胞中PAX6 蛋白与凋亡相关蛋白表达的影响与 control 组和 pcDNA 组相比，pcDNA-MEG8 组细胞中 PAX6、Bcl-2 蛋白表达显著升高(P 0 05);Bax 和 Caspase-3 蛋白表达水平显著降低(P 0 05)。与 pcDNA-MEG8 组和 pcDNA-MEG8+mi-NC 组比较，pcDNA-MEG8+mi-363-3p mimic 组细胞中 PAX6、表 5lnc NA MEG8 抑制 A549 细胞、H1299 细胞凋亡(?x s，n=6)Table 5LncNA MEG8 inhibits apoptosis of A549 cellsand H1299 cells(?x s，n=6)组别细胞凋亡率(%)A549 细胞H1299 细胞control 组1255 1121438 133pcDNA 组1240 1041506 128pcDNA-MEG8 组714 060*#745 054*#pcDNA-MEG8+mi-NC 组745 080767 071pcDNA-MEG8+mi-363-3p mimic 组1021 1251189 110与 control 组比较，*P 0 05;与 pcDNA 组比较，#P 0 05;与 pcDNA-MEG8 组比较，P005;与 pcDNA-MEG8+mi-NC 组比较，P005Bcl-2 蛋 白 表 达 显 著 降 低(P 0 05);Bax 和Caspase-3 蛋白表达水平显著升高(P 0 05，见表6，7 和图 3)。图 2流式细胞术检测 lncNA MEG8 对 A549 和 H1299 细胞凋亡的影响Figure 2Effect of lncNA MEG8 on cell apoptosis of A549 and H1299 cells by flow cytometry表 6lnc NA MEG8 对 A549 细胞中 PAX6、Bax、Bcl-2 和 Caspase-3 蛋白表达的影响(?x s，n=6)Table 6Effect of lnc NA MEG8 on the expression of PAX6，Bax，Bcl-2 and Caspase-3 proteins in A549 cells of each group(?x s，n=6)组别PAX6BaxBcl-2Caspase-3control 组0 54 0 040 46 0 050 58 0 060 62 0 05pcDNA 组0 52 0 050 45 0 060 55 0 040 63 0 03pcDNA-MEG8 组0 87 0 09*#0 22 0 03*#0 78 0 03*#0 34 0 03*#pcDNA-MEG8+mi-NC 组0 86 0 080 23 0 020 76 0 020 35 0 03pcDNA-MEG8+mi-363-3p mimic 组0 62 0 050 42 0 050 61 0 060 57 0 05与 control 组比较，*P0 05;与 pcDNA 组比较，#P0 05;与 pcDNA-MEG8 组比较，P0 05;与 pcDNA-MEG8+mi-NC 组比较，P0 05124山西医科大学学报，2023 年 4 月，第 54 卷 第 4 期表 7lncNA MEG8 对 H1299 细胞中 PAX6、Bax、Bcl-2 和 Caspase-3 蛋白表达的影响(?x s，n=6)Table 7Effect of lncNA MEG8 on the expression of PAX6，Bax，Bcl-2 and Caspase-3 proteins in H1299 cells(?x s，n=6)组别PAX6BaxBcl-2Caspase-3control 组0 48 0 050 53 0 050 52 0 050 67 0 07pcDNA 组0 49 0 050 55 0 060 49 0 040 69 0 07pcDNA-MEG8 组0 82 0 09*#0 25 0 02*#0 75 0 07*#0 38 0 04*#pcDNA-MEG8+mi-NC 组0 84 0 080 22 0 020 73 0 060 40 0 04pcDNA-MEG8+mi-363-3p mimic 组0 59 0 060 48 0 050 58 0 060 61 0 06与 control 组比较，*P0 05;与 pcDNA 组比较，#P0 05;与 pcDNA-MEG8 组比较，P0 05;与 pcDNA-MEG8+mi-NC 组比较，P0 051 5 分别为:control 组，pcDNA 组，pcDNA-MEG8 组，pcDNA-MEG8+mi-NC 组，pcDNA-MEG8+mi-363-3p mimic组 A549 细胞;6 10 分别为:control 组，pcDNA 组，pcD