UPLC法分析比较栀子和水栀子中主要成分的含量.pdf

esera品种品质中药与临床Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica 2023;14(5)UPLC法分析比较子和水子中主要成分的含量蔡晓洋，刘聪，李敏摘要】目的：分析测定并比较子和水子中主要成分（子苷、西红花苷-1和西红花-2）的含量。方法：采用WatersACQUITYUPLCBEHC18色谱柱（2.1mmX50mm，1.7 m），流动相乙睛-水，梯度洗脱，检测波长2 40，440nm，流速0.3mLmin，柱温30 C，进样量2 L。结果：子苷在10.1 16 1.6 gmL内呈良好线性（r=0.9996），西红花菩-1在2.0 4 32.6 4ugmL内呈良好线性（r=0.9998），西红花苔-2 在0.6 56 2 5 10.5ugmL内呈良好线性（r=0.9996）；各成分的平均回收率均大于95%。水子在子苷含量和西红花苷-1、西红花苷-2 总含量上均高于子。结论：该方法简便、快速、准确、重复性好，可用于子和水子中主要成分的检测；水子在药用价值上具有良好的开发前景。关键词】子；水子；UPLC；子苷；西红花苷-1；西红花苷-2中图分类号 R282文献标识码 A文章编号 16 7 4-92 6 X(2023)05-002-04Determination and comparison of contents of main components in Gardenia Fructus and Gardenia GrandifleFructus by UPLC/CAI Xiao-yang,LIU Cong,LI Min/(School of Pharmacy,State Key Laboratory of Southwestern ChinMedicine Resources,Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 611137,Sichuan)Abstract)Objective:To determine and compare the main constituent(geniposide,crocin-1 and crocin-2)contents ofGardenia Fructus and Gardenia Grandiflora Fructus by UPLC.Method:The samples were separated at 30 C on a WatersACQUITY UPLC BEH C18 column(2.1 mmx50 mm,1.7 m)and eluted with acetonitrile and water in gradient.The flowrate was 0.3 mL-min and the detection wavelength were set at 240 nm and 440 nm.The injection volume was 2 L.Result:The calibration curve of geniposide was linear within the range from 10.1 to 161.6 gmL(r-0.9996).The calibration curve ofcrocin-1 was linear within the range from 2.04 to 32.64 gmL-(r=0.9998).The calibration curve of crocin-2 was linear withinthe range from 0.656 25 to 10.5 gmL(r=0.9996).The average recoveries were all over 95%.the total content of geniposideand crocin-1,crocin-2 in Gardeniae Grandiflora Fructus were higher than that in Gardeniae Fructus.Conclusion:The method issimple,rapid,accurate,reproducible and used in the analysis of main components in Gardeniae Fructus and Gardeniae GrandifloraFructus.Gardeniae Grandiflora Fructus has a good prospect of development as medicine.Key words Gardeniae Fructus;Gardeniae Grandiflora Fructus;UPLC;geniposide;crocin-1;crocin-2子为茜草科植物子（GardeniajasminoidesEllis）的干燥成熟果实，具有泻火除烦、清热利尿、?血解毒的功效。研究表明，子中含量较高的主要是环烯醚类和西红花苷类成分，其代表成分是子苷和西红花苷-1、西红花苷-2。其中子苷具有保肝利胆、降血糖、抗氧化、抗肿瘤等作用，西红花苷-1、西红花苷-2 成分具有抗动脉粥样硬化、抗血栓、抗炎等作用，这二者均为子中最主要的基金项目 四川省科技计划项目（No.18ZYF0970作者单位 成都中医药大学药学院西南特色中药资源国家重点实验室，四川成都6 11137作者简介 蔡晓洋（1990-），男，博士在读，研究方向为中药品种、质量与资源研究Tel:18302823285Email:通讯作者 李敏（196 2-），女，博士生导师，从事中药资源、品种及质量评价研究和GAP研究Email:收稿日期 2 0 2 3-0 3-15有效成分2-5 水子为茜草科植物水子（Gjasminoides EllisvargrandifloraNakai）的成熟果实，是子的变种，自古以来多不作药用，主要用于工业上的染料和色素6.7。但研究发现，水子在化学成分上与子极为相似8，且有药理研究表明，水子与子一样具有利胆抗炎作用，且利胆作用较子更强9。而在栽培上，水子结果率更高、果实长而大，产量远高于子。因此，水子应有较好的药用开发前景。近年来，国内针对子与水子的对比研究主要集中在药理、鉴别、子苷的含量方面9-12 ，而关于子苷和西红花苷-1、西红花苷-2 等多个成分和主要成分的含量对比研究鲜见报道。本研究首次采用UPLC法对子和水子中的主要成分进行含量测定和分析对比，为充分开发利用水子的药用价值提供科学依据。8中药与临床Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica 2023;14(5)1材料美国Waters ACQUITYUPLCH-Class System（包括四元高压泵系统、自动进样器、柱温箱、TUV检测器、Empower色谱工作站）；BP-12ls精密电子天平（浙江精密仪器有限公司）；KQ-500DB数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。乙为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯；子苷对照品（批号130 42 8，纯度98%）购自四川省维克奇生物科技有限公司；西红花苷-1对照品（11158 8-2 0 12 0 2）、西红花苷-2 对照品（11158 9-2 0 130 4）均购自中国食品药品检定研究院。子、水子果实共收集15批（见表4），分别经成都中医药大学李敏教授鉴定为茜草科植物子（Gardenia jasminoidesEllis）和水子(Gjasminoides Ellis vargrandigflora Nakai）的成熟果实，所有样品经统一的方法加工并干燥。2方法与结果2.1色谱条件Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1X50mm，1.7 m)，流动相乙腈（A）一水（B）；梯度洗脱：0 5min（5%2 0%A），5 10 m i n(20%30%A），10 15m i n（30%5%A）；检测波长2 40 nm(05min)，440 n m(5 15mi n)；流速0.3mLminl；柱温30 C；进样量2 L。2.2对照品溶液的制备分别精密称定子苷、西红花苷-1、西红花苷-2适量，加甲醇溶解，制成子苷（16 1.6 gmL）、西红花苷-1（32.6 4gmL）、西红花苷-2（10.5ug.mLl)的混合对照品溶液。2.3供试品溶液的制备取各样品粉末（过4号筛）约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加人50%甲醇50 mL，称定质量，超声40 min，放冷，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，0.2 2 m滤膜滤过，取滤液即得。2.4线性关系考察将混合对照品溶液分别稀释2,4,8,16 倍，制成不同质量浓度的系列溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，分别以对照品浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，得相应的回归方程，结果见表1。表1线性关系考察结果线性范围/成分回归方程相关系数gmL-1子苷Y=11800X-184000.999610.1161.6西红花苷-1Y=36900X-108000.999 82.0432.64西红花苷-2Y=53400X-83200.99960.6562510.52.5精密度试验取同一供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样6 次，计算得到子苷、西红花苷-1和西红花苷-2 的色谱峰面积的RSD分别为0.2 0%，0.36%，0.65%，表明仪器精密度良好。2.6稳定性试验取子和水子样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别于0、2、4、8、16、2 4h按“2.1”项下色谱条件测定各指标成分含量，以峰面积值为指标考察方法中的样品稳定性，子样品中子苷、西红花苷-1、西红花苷-2 的RSD分别为0.22%、0.6 4%、1.0 7%，水子样品的子苷、西红花苷-1、西红花苷-2 的RSD分别为0.35%、0.59%、0.76%，表明供试品溶液在2 4h内稳定。2.7重复性试验分别取同一批次的子和水子样品各6 份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，并按“2.1”项下色谱条件测定，计算得到子样品中子苷、西红花苷-1和西红花苷-2 的色谱峰面积的RSD分别为0.45%，0.57%，0.96%，水子分别为0.52%，0.49%，0.7 8%，表明该方法重复性良好。2.8加样回收试验分别取已测定的子和水子样品粉末各6 份（每份0.0 5g），精密称定，每份加人相同量的子苷、西红花苷-1和西红花苷-2 对照品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，计算回收率，结果见表2，表3，表明该方法准确可靠。表2 子样品的3种成分回收率实验(n=6)样品中加人对测得量平均回成分含量/照品量回收率/%RSD/%/mg收率/%mg/mg子苷1.2018 1.20652.359995.99%96.601.251.18271.20652.338895.82%1.2233 1.20652.411498.48%1.17321.2065 2.321395.16%1.21371.20652.380196.67%1.18751.20652.363397.45%西红花苷-10.4817 0.48150.9779103.05%101.951.650.47410.4815 0.9658102.13%0.49030.4815 0.9842102.58%Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica2023;14(5)中药与临床0.47020.48150.9573101.16%0.48650.48150.9861103.76%0.47600.48150.952799.01%西红花苷-20.05980.06050.1217102.31%102.181.190.05890.06050.1196100.41%0.06090.06050.1235103.52%0.05840.06050.1201102.02%0.06040.0605 0.1230103.48%0.05910.06050.1204101.34%表3水子样品的3种成分回收率实验(n=6)样品中加人对测得量/回收率平均回成分含量/照品量/RSD/%mg/%收率/%mgmg子3.56923.55526.964895.5196.861.763.59773.55527.098298.463.65453.55527.047695.443.58343.55526.966895.173.55503.55527.024697.593.49813.55527.018499.02西红花苷-10.60240.58141.174898.4597.291.620.60720.58141.170296.840.61680.58141.182297.250.60480.58141.160695.600.60000.58141.179899.720.59040.58141.147895.87西红花苷-20.04020.03640.075095.7196.041.140.04050.03640.075696.480.04110.03640.076898.020.04030.03640.075295.820.04000.03640.074695.0512A3123456789101112t/min12B30123456789101112t/min12C30123456789101112t/min0.03940.03640.074095.16图1UPLC色谱图A.混合对照品；B.水子；C.子；1.子苷；2.西红花苷-1；3.西红花苷-22.9样品测定取所收集的15批样品，分别称取粉末约0.1g，精密称定，按“2.3”项下方法操作，制备样品供试品溶液，每个批号3份，按“2.1”项下色谱条件进行测定，并计算样品中3种成分的含量，以均值作为最终结果，结果见表4。测定结果显示，子与水子中子苷的含量分别在2.36%5.98%，6.14%7.8 1%，均高于药典规定的1.8%，西红花苷-1和西红花苷-2 的总含量分别在0.84%1.47%，1.2 8%1.49%。水子的子苷含量与西红花苷-1、西红花苷-2 总含量普遍比子高，其中子苷含量最高可达3倍。（责任编辑：胡慧玲）10.Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medicaa 2023;14(5)中药与临床表4样品的成分测定结果(n=3)含量（%)编号来源西红花西红花西红花子苷苷-1、2-1-2总含量Z-1江西宜春枪子2.380.960.121.08Z-2江西吉安子4.391.110.131.24Z-3四川巴中枪子5.980.770.110.88Z-4江西抚州子5.210.900.141.04Z-5江西吉安子3.790.840.140.98Z-6江西樟树子2.361.090.141.23Z-7江西武宁子2.461.120.111.23Z-8湖南衡阳栀子2.570.670.170.84Z-9湖南浏阳子4.261.140.121.26Z-10湖南汨罗子3.011.360.111.47S-1江西南昌水子7.811.270.091.36S-2浙江湖州水子7.161.310.101.41S-3江西九江水子6.851.380.111.49S-4浙江湖州水子7.111.200.081.28S-5江西抚州水子6.141.280.101.383讨论通过对乙腈-水、乙腈-0.1%甲酸水、甲醇-水等多个洗脱系统进行比较，结果表明乙腈-水可很好的将3个成分分离。在样品处理中考察了不同浓度的甲醇和乙醇等多种提取溶媒，同时考察了不同时间的超声提取，最终确定了色谱条件和样品制备方法。本研究采用UPLC方法同时进行子苷、西红花苷-1和西红花苷-2 含量测定，与传统HPLC方法相比，明显缩短了出峰时间，仅为HPLC时间的1/31/4，且还具有检测效率高、灵敏度高、精密度好、重现性强、进样体积小、溶剂消耗少等优势。本方法快速、简便、准确，可用于子药材和水子的多指标、多成分检测和质量控制。子与水子的含量测定结果表明：水子在子苷含量和西红花苷-1、西红花苷-2 总含量上均高于子，这与HPLC法和薄层层析-紫外分光光度法分析比较子与水子中含量差异的研究结果是一致的7 8.。因此，水子在主要化学成分含量上确实高于子，从此观点来看，若要进行药用资源开发，尚需进一步结合药理和临床疗效方面的对比研究。参考文献1国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部S.北京：中国医药科技出版社,2 0 2 0:2 48.2 颜升,董艳凯,陈健,等.中药子的研究现状.安徽农业科学,2 0 13,41(18):7 7 59-7 7 6 0.3付小梅，吴建华,刘婧，等.关于2 0 10 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