[免疫学]玉竹提取物A对STZ诱导的1型糖尿病小鼠的治疗作用及其机制探讨.pdf

硕士学位论文玉竹提取物A对STZ诱导的1型糖尿病小鼠的治疗作用及其机制探 讨 中文论著摘要玉竹提取物A对STZ诱导的1型糖尿病小鼠的治疗作 用及其机制探讨一一 刖 百1型糖尿病是一种在遗传基础上由环境因素触发的T细胞介导的慢性自身免 疫性疾病，免疫系统选择性攻击胰岛B细胞，导致B细胞的损伤以及胰岛素的绝 对缺乏。1型糖尿病发病机制还不完全清楚，一般认为1型糖尿病的发病与Thl/Th2细胞失衡有关。1型糖尿病占糖尿病患者总数的全国1型糖尿病患者总数至少100 万人。目前1型糖尿病的治疗仍以补充外源胰岛素为主，这种治疗常导致血糖控 制不稳，容易产生酮症酸中毒和低血糖，其心、脑、肾慢性并发症也给病人带来 极大痛苦，甚至威胁生命。胰岛素替代治疗并没有干预引起疾病的自身免疫过程，不能阻断免疫系统对胰岛B细胞的损伤。因此，用免疫学方法预防和治疗1型糖 尿病，可抑制胰岛B细胞的自身免疫、拯救残留的B细胞，已成为当今国内外研 究的焦点。玉竹(P oly gonatum Odoratum(Mill.)Druce)为百合科黄精属中草药，含有多糖、生物碱、菸酸、黄酮、留体皂式等。玉竹的干燥根茎具有降血糖、降血脂和抗肿 瘤等作用。我们前期研究发现玉竹提取物A具有抑制细胞免疫应答，抑制IL-2、IL-1和TNF-a产生的作用，又证实玉竹提取物A对链胭佐菌素诱导的1型糖尿 病小鼠有明显的降血糖作用，因此有必要进一步揭示其可能的作用机制。链胭佐菌素(Streptozotocin,STZ)是一链霉素菌来源的毒性物质，又包含了 一个烷基化的亚硝基部分的糖分子组成，被广泛用于糖尿病的化学诱导。STZ能 通过其本身含有的葡萄糖部分结构被胰岛6细胞上低亲和力的葡萄糖转运蛋白 GLUT2转运，特异性地作用于胰岛B细胞，引起其结构破坏。小剂量的STZ对胰 1岛B细胞没有明显的细胞毒作用，但可导致胰岛B细胞的抗原发生改变，激活巨 噬细胞，诱导T细胞浸润和自身免疫应答发生，引起对胰岛B细胞的损伤，最终导 致1型糖尿病的发生。本实验以多次小剂量STZ（multiple low dose,MLD-STZ）诱导的1型糖尿病小 鼠模型为研究对象，观察玉竹提取物A对1型糖尿病小鼠血糖、胰岛炎程度、胰岛 B细胞结构及脾上清液中细胞因子的影响情况，探讨玉竹提取物A对STZ诱导的1 型糖尿病小鼠的治疗作用及其可能的作用机制。实验材料与方法选用清洁级6周龄雄性BALB/c小鼠34只，随机抽取6只为正常对照组只注 射等体积的枸檬酸钠缓冲液，其余小鼠均采用MLD-STZ诱导1型糖尿病模型。用末梢全血快速血糖测定法检测血糖、尿糖试纸法检测尿糖，动态监测接受STZ 诱导的小鼠是否达到1型糖尿病模型鼠的标准。STZ末次注射后4周共有21只小 鼠达到成模标准，从中随机抽取一只处死取胰腺做病理学观察，将其余20只小鼠 按血糖高低均衡分为4组（玉竹提取物A2,4,8g/kg剂量组和糖尿病模型组），每组5只。玉竹提取物A 2,4,8g/kg剂量组分别按2,4,8g/kg剂量用玉竹提 取物A灌胃，糖尿病模型组和正常对照组用蒸镭水灌胃0.2ml/只，各组灌胃均为 1次/d,共4周。在用药过程中，每周检测1次血糖，共4次。四周后将各组小鼠 处死取胰腺做HE染色，光镜下观察胰岛的组织学改变；分别从显著降糖剂量组、糖尿病模型组和正常对照组随机抽取1只小鼠，取新鲜胰腺组织经固定、脱水、包埋、切片、染色，在透射电镜下观察胰岛B细胞的超微结构；各组小鼠采用酶 联免疫分析法检测脾细胞上清液中IL-4和IFN-Y水平。数据以均值土标准差（天土 s）表示，数据经t检验处理，尸0.05为差异显著。实验结果STZ末次注射后4周共有21只小鼠达到成模标准，血糖和尿糖明显增高，造 模成功率为75%。随机处死的1只成模小鼠，胰岛病理学结果显示胰岛B细胞数 量减少，并有淋巴、单核细胞浸润，提示1型糖尿病模型制备成功。用药治疗后，与糖尿病模型组比较，玉竹提取物A 4 g/kg和8g/kg剂量组血糖显著性降低，而 2g/kg剂量组血糖有下降趋势，但没有统计学意义，玉竹提取物A 4 g/kg和8g/kg 2剂量组为显著降糖剂量组。玉竹提取物A4 g/kg和8g/kg剂量组小鼠胰岛炎程度较 糖尿病模型组明显缓解，而2g/kg剂量组小鼠胰岛炎程度与糖尿病模型组相近。玉竹提取物A显著降糖剂量组小鼠胰岛B细胞超微结构受损程度与糖尿病模型组 比较明显减轻。糖尿病模型组小鼠脾细胞上清液中IFN-V水平及IFNy/IL4比值 都明显高于正常对照组；与糖尿病模型组比较，玉竹提取物A4 g/kg和8g/kg剂量 组小鼠脾细胞上清液中IFN-Y水平和IFN-Y/IL-4比值均显著性降低，而2g/kg剂 量组两者降低均没有统计学意义；各组小鼠脾细胞上清液中IL-4水平均无显著 性差异。讨论由于人体实验的局限，对1型糖尿病治疗的研究多用动物模型。采用 MLD-STZ诱导的1型糖尿病动物模型，以其对胰岛B细胞的最小毒性诱导自身反 应性T细胞参与对胰岛细胞的破坏为主要特征，与人类1型糖尿病的表现相似。目前国际上多采用此法建立1型糖尿病模型。本实验采用MLD-STZ诱导1型糖尿病小鼠模型，用来观察玉竹提取物A对 其的治疗作用。结果显示，与糖尿病模型组比较，玉竹提取物A4 g/kg和8g/kg剂 量组血糖显著性降低，而2g/kg剂量组血糖下降没有统计学意义，提示玉竹提取 物A对STZ诱导的1型糖尿病小鼠有降糖作用，且有剂量依赖性。胰岛病理学结果显示，糖尿病模型组小鼠胰岛B细胞数量减少，胰岛内可见 大量炎细胞浸润；与之相比，玉竹提取物A4 g/kg和8g/kg剂量组小鼠胰岛炎细胞 浸润减少，完整的胰岛B细胞增多。同时，电镜观察结果显示，糖尿病模型组小 鼠胰岛B细胞出现核固缩、核膜破裂、内浆网扩张、分泌颗粒减少并出现空泡样 变等异常变化；玉竹提取物A显著降糖剂量组小鼠胰岛B细胞的胞核、核膜、内 浆网等受损程度较糖尿病模型组明显减轻，分泌颗粒增多。提示玉竹提取物A治 疗可以缓解1型糖尿病小鼠的胰岛炎、使胰岛8细胞的破坏减轻。初始Th(T-helper)细胞的TCR与抗原结合后，可在不同微环境影响下分化成 Thl或Th2效应细胞。Thl细胞分泌IL-2、IFN-Y和TNF-6；Th2细胞分泌IL-4、IL-5、IL-6和IL-10。IFN-Y/IL-4的比值常用以代表Th细胞的极化倾向。在正常情况下，Thl/Th2细胞处于相互抑制和相互调节的平衡状态。如果这种平衡被打破，机体处 3于Thl强势或Th2强势的极化（漂移）状态，则可能产生各种病理反应。国内外 大量的实验研究表明，1型糖尿病的发病机制主要是由于Thl/Th2细胞亚群的平衡 被破坏，即是由Thl/Th2细胞比值失衡所引起的。Thl细胞是主要效应细胞，可直 接或间接破坏胰岛P细胞，而Th2细胞对Thl细胞的功能有抑制作用，可以减缓Thl 细胞对胰岛B细胞的破坏作用。有研究发现，使用IFN-Y单克隆抗体或给予IL4可 预防NOD鼠发生糖尿病。另外用IFN-Y单克隆抗体可预防MLD-STZ诱导的 C57BL/KsJ鼠发生高血糖和胰岛炎。本实验结果显示，糖尿病模型组小鼠脾细胞分泌的IFN-Y水平及IFN-V/IL-4 比值都明显高于正常对照组，表现出明显的Thl极化倾向，这与国内外许多研究结 果相一致。与糖尿病模型组相比，玉竹提取物A4 g/kg和8g/kg剂量组小鼠脾细胞分 泌的IFN-Y水平显著性降低，IL-4没有明显变化，IFN-Y/IL-4比值显著性降低，即显著抑制了糖尿病小鼠脾细胞的Thl极化程度，而2g/kg剂量组的抑制作用没有 统计学意义，说明此抑制作用有剂量依赖性。因此，可以认为玉竹提取物A主要 是通过下调TM细胞的极化程度，降低IFN-Y的分泌量，抑制Thl细胞的免疫功能，减轻或阻止自身免疫应答，减少对胰岛B细胞的破坏。这也与我们前期研究发现 玉竹提取物A具有抑制IL-2、IL-1和TNF-Q细胞因子产生的作用相关。以上结果说明玉竹提取物A能显著抑制STZ诱导的1型糖尿病小鼠细胞免疫功 能，降低其自身免疫功能对胰岛6细胞的破坏，减轻胰岛炎的程度，发挥降低血 糖作用。结论1、玉竹提取物A能显著降低STZ诱导的1型糖尿病小鼠的血糖，其降糖效果有 剂量依赖性；玉竹提取物A治疗还可以缓解1型糖尿病小鼠的胰岛炎、使胰岛B细 胞的破坏减轻。2、玉竹提取物A的作用机制可能是显著抑制STZ诱导的1型糖尿病小鼠Thl 细胞的极化程度，降低IFN-Y的分泌量，下调细胞免疫功能，减少对胰岛8细胞 的破坏，减轻胰岛炎的程度，发挥降低血糖作用。关键词玉竹提取物A；链胭佐菌素；1型糖尿病；血糖；Y干扰素4英文论著摘要Thera peutic effect a nd mecha nisms study o n strepto zo to cin induced ty pe 1 dia betes in mice By Extra ct A fro m Polygonatum odoratumPrefa ceTy pe 1 diabetes mellitus(T1DM)is a T-cell dependent immune-mediated disease in which the insulin-producing pancreatic beta cells are destroy ed and insulin is absent.Genetic and environmental factors act together to precipitate the disease.It has been reported that the imbalance between Thl cells and Th2 cells is intimately involved in the development of T1DM,although the precise mechanisms that lead to this destruction have not y et been elucidated.T1DM accounts for 5-10%of all diabetes,affects over 1 million people in china.Current treament of T1DM focus on restraining the endocrine disease with insulin,which easily cause possible acute complications including a small but significant risk of death from ketoacidosis and hy pogly cemia,and its chronic complications of heart,brain,or kindey can bring huge distress to the patients or even threaten their life.Insulin replacement therapy has no effect on the autoimmnue process that undrelines it.To halt autoimmune reaction and prevent further 8-cells loss in T1DM by immunotherapy has been a research focal point now.P oly gonatum Odoratum(Mill.)Druce is a Chinese herbal medicine which belongs to lily familiy and P oly gonatum,including poly saccharides,natural base,niacinamide,flavone,steroid saponin and so on.The dried root-stem of P oly gonatum odoratum has antitumor,hy polipidemic activity,hy pogly cemic activity,etc.Our previous research demonstrated that extract A from P oly gonatum odoratum(EA-P AOA)could inhibit cy tokine secretion of IL-2,IL-1 and TNF-Q and significantly decreased the blood glucose levels of T1DM induced by streptozotocin(STZ)in mice.Therefore,it is necessary to explore its possible mechanisms.5STZ is a toxin derived from Streptomy ces consisting of a glucose molecule with an alky lating agent.STZ is widely used to induce diabetes in experimental animals by causing the selective destruction of pancreatic 6-cells that secret insulin.Acute B-cell toxicity is not observed with administration of low dose STZ,but the antigenic character of B-cells can be altered,and then macrophages and T cells which are associated with destruction of pancreatic P-cells infiltrate the islets and ultimately lead to the onset of T1DM.The present investigation was undertaken to study the therapeutic effect and mechanisms of EA-P AOA on ty pe 1 diabetes mellitus induced by multiple low dose STZ(MLD-STZ)in mice by detecting fasting blood glucose,the severity of insulitis,the structure of B-cells and cy tokine IL-4 and IFN-Y production of splenic cell.Ma teria ls a nd metho dsThirty four BALB/c mice(male,6 weeks)were used,six of them were randomly selected as normal control group that received citrate buffer alone,the rest mice received intraperitoneal injections of STZ(4 0mg/kg body weight,daily)for 5 consecutive day s.Those of fasting blood glucose level 11.4 mmol/l and urine glucose above+-H-for two weeks were considered as successful ty pe 1 diabetic models.There were 21 successful models,one of them was randomly sacrificed and the pancrea was removed and stained with haematoxy lin-eosin,others were equally allocated into 4 groups(n=5 in each group)according to fasting blood glucose level:EA-P AOA 2,4,8g/kg group and diabetes control group.The mice in EA-P AOA 2,4,8g/kg group were given EA-P AOA by intragastric administration at dose of 2,4,8 g/kg respectively once a day for 4 weeks,while the mice in normal control group and diabetes control group were given distilled water 0.2 ml by intragastric administration once a day for 4 weeks.During administration fasting blood glucose levels were measured once a week on blood samples taken from the tail tip using a blood glucose meter.Four weeks later,mice were sacrificed and the pancreas were removed and stained with haematoxy lin-eosin.One mouse of the significant down-regulation blood glucose dose group,diabetes control group and normal control group was randomly sacrificed separately and the pancreas tissue was removed to observe the ultrastructure of pancreatic B-cells by transmission electron microscope.IL-4 and IFN-Y production 6of splenic cell were assay ed by enzy me-linked immunosorbent assay(ELISA).Data were presented as mean standard errors of the means(SEM).Statistical significance of difference was analy zed by Student9 s t test.A value of P-12 3 4Ek次注射后周.正常时照组黠尿棋模勺组图1,MLdSTZ诱导的1型糖尿病小鼠空腹血糖动态变化注：结果以造模成功小鼠空腹血糖均数士标准差（SD）表示。与正常对照组比 较，代表尸V0.001。3、胰岛病理学改变随机抽取的1只小鼠胰腺病理学结果显示，胰岛B细胞有变性、坏死，胰岛 B细胞数量减少，并有淋巴、单核细胞浸润，证实造模的确成功。（结果略）二、治疗前后空腹血缜的变化除正常对照组外，其他各组小鼠用药前空腹血糖水平均无显著性差异（尸 0.05）o用药治疗后，与糖尿病模型组比较，玉竹提取物A4g/kg和8g/kg剂量组血 糖显著性降低（尸V0.050.001）,为显著降糖剂量组；而2g/kg剂量组血糖下降 没有统计学意义（尸0.05），见表1和图2。表1,各组小鼠治疗前后空腹血糖的变化（灭s）inmo i/1组别例数用药前 一用药后一周二周三周四周EA-RAOA 2g/kg 组517.82.616.62.115.92.115.0 2.014.21.8EA-PAOA4g/kg 组517.63.415.72.313.92J*12.51.811.81.7*,EA-RAOA 8g/kg 组518.02.014.3 L3.12.51.5*11.31.4”10.0 1.6.精尿病模型组517.7 3.017.22.018.0X917.7Z516.8 2.0正常对照组66.6 0.35.7 0.66.5 036.30.56.0 0.3注：结果以各组小鼠用药前及用药过程中空腹血糖均数士标准差（SD）表示。与糖尿病模型组比较，表示尸V0.05,“叱”表示PV0.01,表示尸V0.001 o172。r-正巧R旗组13-一4 a 地小强性型组16 b Y二二二一-_ _ EA-P AOA 8g k匕沟14 2、y -EA-P AOA 4 g kgfli物 12 卜 _，尸，*EA-P AOA 24 kg组 13-*工 8-4-Z-Q _I_1_ _i_!-0 12 3 4治行周数图2,各组小鼠治疗前后空腹血糖的变化注：结果以各组小鼠用药前及用药过程中空腹血糖均数土标准差(SD)表示.与糖尿病模型组比较，表示尸V0.05,表示尸V0.0L“*”表示PV 0.001 o三、胰岛病理组织学改变治疗4周后胰腺病理观察结果显示：正常对照组小鼠的胰岛为圆形、椭圆形 或条索状细胞团，细胞团大小不一，界限清楚，无界膜，B细胞数量较多.胞质 丰富，嗜酸性，核圆形，见图3。糖尿病模型组小鼠胰岛B细胞数量减少，纤维 组织增生、玻璃样变性，胰岛可见以淋巴细胞、单核细胞为主的炎细胞浸润，胰 岛B细胞空泡变性、坏死、消失，使胰岛呈空虚状态，见图4。玉竹提取物A4g/kg 和8g/kg剂量组小鼠胰岛可见少量炎细胞浸润现象，完整的胰岛B细胞数量增多，见图5和图6。玉竹提取物A2g/kg剂量组小鼠胰岛病理改变与糖尿病模型组小鼠 相近，见图7。18图3,正常对照组小鼠的胰岛(400X)图4,糖尿病模型组小鼠的胰岛(40OX)图5,EAPAOA4g/kg剂量组小鼠的胰岛(400X)19图6,EAPAQA8g/kg剂量组小鼠的胰岛(400X)图7,EAPAOA2g/kg剂量组小鼠的胰岛(400X)四、胰岛B细胞超微结构的变化治疗4周后，在透射电镜下将胰腺组织放大8000倍后观察胰岛P细胞的超微结 构，结果显示，糖尿病模型组小鼠胰岛B细胞内部出现核固缩、胞核核膜扩张破 裂，胞浆中有大量内浆网扩张，线粒体含量增多，分泌颗粒数量减少，分布紊乱，且发生空泡样变等异常变化，见图8。正常对照组小鼠胰岛B细胞内部，细胞核正 常，胞核核膜完整无扩张变化，胞浆中内浆网无扩张，线粒体无增多，分泌颗粒 较多，无异常空泡样变化，见图9。玉竹提取物A显著降糖剂量组(取自8kg剂量 组)小鼠胰岛B细胞超微结构受损程度较糖尿病模型组明显减轻，B细胞内部细 胞核基本正常，胞核核膜完整无扩张，胞浆中内浆网轻微扩张，线粒体轻微增多，分泌颗粒数量增多，见图10。20图8,糖尿病模型组小鼠胰岛B细胞的超微结构(8000X)图9,正常对照组小鼠胰岛8细胞的超微结构(8000X)图10,EA-P AOA显著降糖剂量组(取自8g/kg剂量组)小鼠胰岛B 细胞的超微结构(8000 X)21五、牌细胞上清液中IL4和IFNY水平的变化与正常对照组比较，糖尿病模型组小鼠脾细胞上清液中IFNY水平显著性升 高（PV0.001”与糖尿病模型组比较，玉竹提取物A 4g/kg和8g/kg剂量组小鼠 脾细胞上清液中IFN-Y水平均显著性降低（PV0.010.001）,而2g/kg剂量组小 鼠脾细胞上清液中IFN-Y水平降低没有统计学意义（尸0.05）：各组小鼠脾细胞 上清液中IL-4水平均无显著性差异（尸0.05）,见图11。与正常对照组比较，糖尿病模型组小鼠脾细胞上清液中IFN-Y/IL-4比值显著 性升高（PV0.001）；与糖尿病模型组比较，玉竹提取物A 4g/kg和8g/kg剂量组 小鼠脾细胞上清液中IFNy/ILY比值均显著性降低（PV0.050.01）,而2g/kg 剂量组小鼠脾细胞上清液中IFNY/ILY比值降低没有统计学意义（P0.05）,见 图细史因,于浓度二三日匚120100806040200正常照组隔尿病根室用 EA-P AOA SE 询用O EA-P AOA 4 g kgiH EA-P AOA 2g kgr3图11,各组小鼠脾细胞上清液中ILT和IFN-V水平注：结果分别以各组小鼠用药4周后脾细胞上清液中IL-4和IFN-Y水平均数土标准差（SD）表示。与糖尿病模型组比较，表示P0.01.“*”表示P IL-6和IL-10o IFN-Y/IL-4的比值常用以代表Th细胞的极化倾向口引。在正 常情况下，Thl/Th2细胞处于相互抑制和相互调节的平衡状态。如果这种平衡被打 破，机体处于Thl强势或Th2强势的极化(漂移)状态，则可能产生各种病理反 应。国内外大量的实验研究表明5*76,1型糖尿病的发病机制主要是由于Thi/Th2 细胞亚群的平衡被破坏，即是由Thl/Th2细胞比值失衡所引起的。TM细胞是主要 效应细胞，可直接或间接破坏胰岛P细胞，而Th2细胞对Thl细胞的功能有抑制作 用，可以减缓Thl细胞对胰岛0细胞的破坏作用。有研究发现，使用IFNY单克隆 抗体口刀或给予IL-4口8一力可预防nod鼠发生糖尿病。另外用IFNY单克隆抗体可预 防MLD-STZ诱导的C57BL/KsJ鼠发生高血糖和胰岛炎因。本实验结果显示，糖尿病模型组小鼠脾细胞分泌的IFN-y水平及IFN/IL-4 比值都明显高于正常对照组，表现出明显的Thl极化倾向，这与国内外许多研究结 果1,14 76相一致。与糖尿病模型组相比，玉竹提取物A4 g/kg和8g/kg剂量组小鼠脾 细胞分泌的IFN-Y水平显著性降低，IL-4没有明显变化，IFN-Y/IL-4比值显著性 降低，即显著抑制了糖尿病小鼠脾细胞的Thl极化程度，而2g/kg剂量组的抑制作 用没有统计学意义，说明此抑制作用有剂量依赖性。因此，可以认为玉竹提取物 A主要是通过下调Thl细胞的极化程度，降低IFN-Y的分泌量，抑制Thl细胞的免 疫功能，减轻或阻止自身免疫应答，减少对胰岛B细胞的破坏。这也与我们前期 研究发现取21玉竹提取物a具有抑制IL-2、IL-1和TNF-。细胞因子产生的作用相 关。以上结果说明玉竹提取物A能显著抑制STZ诱导的1型糖尿病小鼠的细胞免疫 功能，降低其自身免疫功能对胰岛8细胞的破坏，减轻胰岛炎的程度，发挥降低 血糖作用。结论1、玉竹提取物A能显著降低STZ诱导的1型糖尿病小鼠的血糖，其降糖效果有 剂量依赖性；玉竹提取物A治疗还可以缓解1型糖尿病小鼠的胰岛炎、使胰岛B细 胞的破坏减轻。242、玉竹提取物A的作用机制可能是显著抑制STZ诱导的1型糖尿病小鼠Thl 细胞的极化程度，降低IFN-Y的分泌量，下调细胞免疫功能，减少对胰岛6细胞 的破坏，减轻胰岛炎的程度，发挥降低血糖作用。25本研究创新性的自我评价我们的前期研究发现玉竹提取物A具有抑制细胞免疫应答，抑制IL-2、IL-1 和TNF-Q产生的作用，又证实玉竹提取物A对链腺佐菌素诱导的1型糖尿病小鼠 有明显的降血糖作用，因此有必要进一步揭示其可能的作用机制。本实验首次通 过观察1型糖尿病小鼠胰岛炎程度是否减轻、胰岛8细胞结构是否改善以及脾上 清液细胞因子的变化，从玉竹提取物A干涉1型糖尿病小鼠的免疫过程拯救残留 的B细胞角度来研究其对链胭佐菌素诱导的1型糖尿病小鼠的治疗作用，这将为 研究玉竹提取物A治疗1型糖尿病提供重要的理论依据和实验数据，可为1型 糖尿病的治疗或辅助治疗提供新的选择药物，也将促进中药免疫治疗1型糖尿病 的研究和发展。26参考文献12345678910111213141516Rabinovitch A.Immunoregulatory and cy tokine imbalances in pathogenesis of IDDM.Diabetes,1994,4 3(5):613-621.The Diabetes Control and Complications Trial Research Group:The effect of intensive treatment of diabetes on the development and progression of long-term complications in insulin-dependent diabetes mellitus.New Engl J Med,1993,329(14):977-986.江苏新医学院.中药大词典(上册)M.1985.551李尘远，潘兴瑜，张明策.玉竹提取物B抗肿瘤机制的初步研究.中国免疫学杂志，2003(19):253-254P reston AM.Modification of streptozotocin-induced diabetes by protective agents.Nutr Res,1985,5:4 35-4 4 6.Rabinovitch A.An update in cy tokines in the pathogenesis of insulin-dependent diabetes mellitus.Diabetes Metab Rev,1998,14(2):129-151.Herold KC,Vezy s V,Gage A,et al.P revention of autoimmune diabetes by treatment with anti-LFA-1 and anti-ICAM-1 monoclonal antibodies.Cell Immunol,1994,157(2):4 89-500.Herold KC,Vezy s V,Sun Q,et al.Regulation of cy tokine production during development of autoimmune diabetes induced with multiple low doses of streptozotocin.J Immunol,1996,156(9):3521-3527.Herold KC,Bloch TN,Vezy s V,et al.Diabetes induced with low doses of streptozotocin is mediated by V beta 8.2+T-cells.Diabetes,1995,4 4(3):354-359.Kolb H.Mouse models of insulin dependent diabetes:low-dose streptozocin-induced diabetes and nonobese diabetic(NOD)mice.Diabetes Metab Rev,1987,3(3):751-778.Maksimovic-Ivanic D,Trajkovic V,Miljkovic DJ,et al.Down-regulation of multiple low dose streptozotocin-induced diabetes by my cophenolate mofetil.Clin Exp Immunol,2002,129(2):214-223.Mosmann TR,Cherwinski H,Bond MW,et al.Two ty pes of murine helper T cell clone.I.Definition according to profiles of ly mphokine activities and secreted proteins.J Immunol,1986,136:234 8-2357.Suarez-P inzon WL,Rabinovitch A.Approaches to ty pe 1 diabetes prevention by intervention in cy tokine immunoregulatory circuits.Int J Exp Diabetes Res,2001,2(1):3-17.Trembleau S.Interleukin 12 administration induces T helper ty pe 1 cells and accelerates autoimmune diabetes in NOD mice.J Exp Med,1995,181(2):817-821.Shimada A,Rohane H Fathman G,et al.P athogenic and protective roles of CD4 5RBlowCD+cells correlate with cy tosine imbalances in the spontaneously autoimmune diabetic mouse.Diabetes,1996,4 5:71-78.Abel M,Krokowski M.P athophy siology of immune-mediated(ty pe 1)diabetes mellitus:27potential for immunotherapy.BioDrugs,2001,15(5):291301.17 Debray-Sachs M,Camaud C,Boitard H,et al.P revention of diabetes in NOD mice treated with antibody to murine IFN-gamma.J Autoimmun,1991,4(2):237-24 8.18 Rapoport MJ,Jaramillo A,lipris D,et al.Interrukin 4 reverse T cell proliferative unresponsiveness and prevents the onset of diabetes in nonobese diabetic mice.J EXP Med,1993,178(1):87-99.19 Cameron MJ,Arreaza GA,Zucker H et al.IL-4 prevents insulitis and insulin-dependent diabetes mellitus in nonobese diabetic mice by potentiation of regulatory T helper-2 cell function.J Immunol,1997,159:4 686-4 692.20 潘兴瑜，吴学敏，付晶京，等.玉竹提取物A对小鼠脾淋巴细胞转化和IL-2产生的影响.美国中华医药杂志，2000,6(2):27-2821 潘兴瑜，吴学敏，李宏伟，等.玉竹提取物对小鼠巨噬细胞IL-1和TNF-a产生的影响.美国中华医药杂志，2000,6(3):1-228综 述.1型糖尿病免疫学治疗的研究进展1型糖尿病是以胰岛P细胞选择性被破坏，胰岛素分泌不足，引起血糖增高 为特征的一种代谢性疾病。目前，其发病机制仍不十分清楚，研究证明可能与以 下因素有关：胸腺阴性选择不足增加了外周血中P细胞特异性T细胞前体的几 率口】；外周免疫耐受缺陷也是促进p细胞特异的CD4+和CD8+T细胞扩张和分 化的重要因素小叫 总之，可能