丹参提取物中有效成分的质量控制及药动学的研究.pdf

博士学位论文丹参提取物中有效成分的质量控制及药动学研究沈阳药科大学博士学位论文中文摘要丹参提取物中有效成分的质量控制及药动学研究摘 要丹参(Radix e t Rhizoma Salviae Miltiorrhiza)为唇型科植物丹参(51以5 miltiorrhiza Bge.)的干燥根及根茎，主要药效成分包括脂溶性的丹参酮类和 水溶性的丹酚酸类。本文通过对不同来源药材中两类主要成分的含量相关性研 究，提取工艺研究，药材及提取物的主要组分及稳定性研究，探讨主要成分不同 存在状态时的相互影响，在此基础上，研究了不同极性的两类物质的双向载药脂 质微球制备工艺，并对其在单用和不同比例配伍时大鼠体内外药物动力学及相互 作用进行了研究。参照药典方法对来源于主产区的不同产地的栽培丹参及市售商品丹参进行 了鉴别及化学成分含量测定。结果表明丹参药材来源单一，薄层色谱及红外光谱 行为无明显差异，但其主要指标性成分含量差异较大；药材中脂溶性指标成分之 间存在含量相关性，水溶性指标成份之间亦存在含量相关性，而水溶性成份及脂 溶性成分之间含量无相关性。对丹参不同极性有效成份的提取工艺进行了研究。结果显示，采用超临界二 氧化碳萃取技术先提取丹参中的脂溶性成分，后对药渣进行水溶性成份提取的先 进工艺，可使药材中的有效成分得以充分利用。确定了超临界提取的最佳工艺参 数为：萃取压力为25MPa,萃取温度为50,萃取时间为2.5小时，携带剂为 为95%的乙醇；水溶性成份提取工艺为：干燥药渣加8倍量水，浸泡4小时后，煎煮两次，每次2小时，滤液加95%乙醇使醇浓度达60%,冷藏静置40小时，.滤液浓缩后上D101大孔吸附树脂吸附，5。%乙醇洗脱，滤液浓缩后冷冻干燥。通过对丹参药材、脂溶性提取物及对照品的甲醇提取物稳定性考察，表明丹 参酮U A及隐丹参酮易受温度、pH、光照的影响而发生降解。与纯品对比，药材 及提取物中的其他成分对丹参酮IIA及隐丹参酮的降解有延缓作用，弱酸环境下 其稳定性较好。通过对丹参药材、水溶性提取物、脂溶性提取物及对照品UPLC-ESI-MS色 谱及质谱行为研究，从中分离检定了 20个化合物，其中水溶性成份10个，脂溶沈阳药科大学博士学位论文中文摘要性成分7个，未知3个。对指标成分丹参酮IIA及丹酚酸B进行了不同碰撞能量 下的ESPMS裂解规律研究，指出丹参酮HA的裂解特征是正离子模式下出现碎 片m/z280、277、262、252、249；丹酚酸B的裂解特征是负离子模式下形成m/z519、321、339、295的碎片离子。分别对丹参脂溶性提取物、水溶性提取物及不同比例的两种提取物混合物中 丹参酮IIA、隐丹参酮及丹酚酸B的大鼠体外血浆及肝匀浆降解动力学进行了研 究。结果表明，.0.2mg/ml的脂溶性提取物中丹参酮HA及隐丹参酮在血浆中随 血浆浓度升高，降解速率减小；60mg/ml的水溶性提取物中丹酚酸B在不同浓度 血浆中降解速率没有明显变化；在肝匀浆中三个化合物均随肝匀浆浓度上升降解 速率增大。水溶性提取物与脂溶性提取物按不同比例(20：1,10：1,5：1)混 合后在20%血浆及20%肝匀浆中，丹参酮IIA的降解速率与混合前比较明显降低；隐丹参酮及丹酚酸B的降解速率与混合前比较，在20%血浆中略有上升，在20%肝匀浆中均显著下降。两种提取物混合后，在血浆和肝匀浆液中的确发生了代谢 性药物的相互作用。,研究了丹参双相载药脂质微球注射液的处方、工艺及制剂的理化性质。结果 显示，丹参双向载药脂质微球注射液呈现棕褐色，粒径分布在200nm左右，电位在-2040mv之间，灭菌前后外观形态，粒径以及电位值均无明显变化，水溶性成份主要分布于水相当中，脂溶性成份主要分布于油相当中。分别采用静脉及口服给药方式，对丹参脂溶性提取物、水溶性提取物及两种 提取物混合物中丹参酮IIA、丹酚酸B的大鼠体内药物动力学进行了研究，建立 了血浆中丹参酮HA和丹酚酸B同时测定的UPLC/MS-MS分析方法。结果表明，静脉注射混合提取物乳剂比相应等剂量脂溶性提取物乳剂和水溶性提取物溶液 剂的丹参酮U A和丹酚酸B的AUC显著提高214倍，低剂量组和中剂量组提 高至2倍，高剂量组分别提高至约14倍和5倍(pvo.01)；血浆清除率(CLt)显著 降低(pvO.Ol),达峰浓度(Co-o83h)显著升高(pvO.Ol)。口服给高剂量和中剂量的混合 提取物混悬液比相应等剂量脂溶性提取物混悬液和水溶性提取物溶液剂所测得 丹参酮HA和丹酚酸B的AUC显著性提高(pV0.05)；高剂量和低剂量组测得 丹参酮IIA和丹酚酸B的总血浆清除率CLt显著降低(pCO.Ol)。两种提取物 混合后，在大鼠体内发生了代谢性药物的相互作用。2沈阳药科大学博士学位论文中文摘要关键词：丹参;脂溶性提取物；水溶性提取物；提取工艺;质量控制;UPLC-ESI-MS；药物动力学；相互作用3沈阳药科大学博士学位论文Abst ra ctSt udies on t he Qua lit y a nd Pha rma cokinet ics of t he Act ive Component s in Ext ra ct s of Salvia miltinorrhizaAbst ra ctRadix Salvia Miltiorrhizae is the drie d root of Salvia miltiorrhiza Bge.The main pharmacological active ingre die nts are the hydrosoluble compone nts salvianolic acids and liposoluble compone nts dite rpe noid tanshinone s.In this study,the corre lativity of conte nt from diffe re nt source s,e xtraction te chnology,the main compone nts and the stability of crude drug and e xtracts we re inve stigate d to re ve al the inte ractions be twe e n the k e y compone nts in diffe re nt conditions.On the basis upon,formulation te chnology of bidire ctional drug-loade d lipid microsphe re of the two diffe re nt polar compone nts was studie d.Also,the pharmacok ine tics in rats afte r administration of single and mixe d compone nts in diffe re nt ratios and compone nts inte ractions we re studie d.According to Chine se Pharmacopoe ia,cultivate d and conune ricall available Salvia Miltiorrhizae from diffe re nt habitats we re ide ntifie d and assaye d.It was found that the source of Salvia Miltiorrhizae was single and the re was no significant diffe re nce in thin-laye r chromatography(TLC)as we ll as infrare d spe ctrum.Howe ve r,diffe re nce s in conte nts of main inde x compone nts we re of significance.It was also found that the conte nt of dite rpe noid tanshinone s e xiste d a corre lativity,as we ll as salvianolic acids.But the re was no corre lativity of conte nt be twe e n tanshinone s and salvianolic acids.:.zExtraction te chnology of active ingre die nts with diffe re nt polarity in Salvia Miltiorrhizae was inve stigate d.The re sult showe d that the active ingre die nts could be fully e xtracte d afte r supe rcritical carbon dioxide e xtraction of dite rpe noid tanshinone s from Salvia Miltiorrhizae crude drug,the n e xtracting alvianolic acids from the he rb re sidue.The optimum condition of supe rcritical e xtraction was as follows:e xtracting pre ssure:25Mpa,e xtracting te mpe rature:50,e xtracting time:2.5h and e thanol was adde d as a cosolve nt.The e xtraction proce ss of salvianolic acids was discribe d be low.4沈阳药科大学博士学位论文Abst ra ctSoak ing dry he rb re sidue in 8 volume s of wate r for 4 hours,the n de cocting twice for 2 hours e ach time,95%e thanol was adde d to filtrate until the conce ntration of e thanol was 60%.Afte r storage in cold for 40 hours,conce ntrate d filtrate was e lute d on a column of D101 macroporoxis re sin by 50%e thanol.The e luate was finally fre e ze-drie d.By studying the stability of Salvia Miltiorrhizae crude drug,liposoluble e xtracts and the standard me thanol solution,it indicate d that tanshinone IIA and cryptotanshinone we re vulne rable to te mpe rature,pH and light and prone to de grade.Compare d with pure substance s,othe r compone nts in crude drug and e xtracts could de lay the de gradation of tanshinone IIA and cryptotanshinone.In addition,tanshinone IIA and cryptotanshinone we re more stable unde r we ak acid condition.According to the UPLC-ESI-MS chromatographic and mass spe ctral be haviors of Salvia Miltiorrhizae crude drug,salvianolic acids,dite rpe noid tanshinone s and re fe re nce substance s,20 compounds have be e n se parate d and ide ntifie d including 10 wate rsoluble compone nts,7 liposoluble compone nts,and 3 unk nown compone nts.Base d on the re se arch of ESI-MS fragme ntation pathways of tanshinone IIA and salvianolic acid B at diffe re nt collision e ne rgy,fragme nts of tanshinone IIA at m/z280,277,262,252 and 249 in the positive ion mode we re obtaine d.With re spe ct to salvianolic acid B,fragme nts at m/z519,321,339 and 295 in the ne gative ion mode we re forme d.The in vitro de gradation k ine tics in rat plasma and live r homoge nate of tanshinone II A,cryptotanshinone in dite rpe noid tanshinone s,salvianolic acid B in salvianolic acids and mixe d e xtract in the diffe re nt proportion we re inve stigate d.The re sult indicate d that with the incre asing of plasma conce ntration,the de gradation rate of 0.5mg/ml tanshinone IIA and cryptotanshinone in plasma was was de cre ase d;the de gradation rate of salvianolic acid B in 2.97mg/ml salvianolic acids in diffe re nt conce ntration of plasma had no obvious change;the de gradation rate s of the thre e compounds in live r homoge nate was high with the incre asing conce ntration of live r homoge nate.Afte r mixing di te rpe noid tanshinone s and salvianolic acids in diffe re nt ratio(20:1,10:1,5:1),the de gradation rate of tanshinone IIA was obviously lowe re d.The de gradation rate of cryptotanshinone and salvianolic acid B was slightly incre ase d in 20%plasma and de cre ase d significantly in 20%live r homoge nate.In summary,inte raction of drugs me tabolism in plasma and live r homoge nate沈阳药科大学博士学位论文Abst ra ctoccurre d.Formulation,proce ss and physicoche mical prope rtie s of bidire ctional Salvia Miltiorrhizae lipid microsphe re inje ction we re studie d.It showe d that the color of bidire ctional drug-loade d lipid microsphe re inje ction of Salvia Miltiorrhizae was dark brown.The particle size of the inje ctionwas about 200nm with-pote ntial-20-40mv.The appe arance,particle size and-pote ntial had no significant changebe fore and afte r ste rilization.Salvianolic acids mainly distribute d in wate r phase and dite rpe noid tanshinone s mainly distribute d in oil phase.By intrave nous and oral administration,rats pharmacok ine tics of tanshinone IIA and salvianolic acid B from dite rpe noid tanshinone s,salvianolic acids and mixe d e xtracts we re studie d.A UPLC/MS-MS me thods of simultane ously de te rmining tanshinone IIA and salvianolic acid B in plasma was e stablishe d.Compare d mixe d e xtracte d e mulsions with tanshinone s e mulsions and salvianolic acids e mulsions isodose,AUC of tanshinone IIA and salvianolic acid B was obviously incre ase d by 2-14 time s,whe re the AUC of low dosage group and middle dosage group incre ase d to 2 time s and the AUC of high dose group was incre ase d to about 14 time s and 5 time s re spe ctive ly(P0.01).Furthe rmore,plasma cle arance(CLt)de cre ase d significantly(p0,01)and the pe ak conce ntration(Co.o83h)significant incre ase d(p0.01).Compare d oral high dose and middle dose mixe d e xtracts with tanshinone s suspe nsion and salvianolic acids suspe nsion isodose,AUC of tanshinone IIA and salvianolic acid B significant incre ase d(p0.05),total plasma cle arance(CLt)of tanshinone IIA and salvianolic acid B in high dose group and low dose group de cre ase d significantly(p0.01).In conclude,the re e xiste d inte raction of drugs in me tabolism in rats afte r mixing of the two e xtracts.Key words:Salvia miltiorrhiza Bge.;Tanshinone s;Salvianolic acids;Extraction te chnology;Quality control;Pharmacok ine tics;UPLC-ESI-MS;Inte raction6沈阳药科大学博士学位论文第一章前言第一章 前 言丹参(Radix e t Rhizoma Salviae Mitiorrhizae)是我国传统医药中最常 用药物之一，为唇型科植物丹参(Salvia MitiorrhizaB ge.)的干燥根及根茎，作为活血化瘀药有悠久的临床应用历史，具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦的 功效口】。作为采用现代方法研究较多的主要传统中药之一，1997年，复方丹参滴 丸成为第一个向美国FDA以治疗药身份申报的品种，意味着丹参将成为首例用国 际标准进行评价的传统中药，使丹参的研究又形成了一个新的热潮。近年来，科 学工作者对其生物学、化学、药理学及临床应用等方面进行了较全面的研究和讨 论。通过对其生物学特性、种植资源及栽培条件的研究实现了我国历史上首个通 过国家认证的中药GAP基地品种之一。化学成分研究表明丹参含有多种成分，已阐明的化学结构总数约100余种，主要为脂溶性的丹参二菇醍类及水溶性的丹 酚酸类【3.习，现代药理学的研究表明，丹参具有多方面的药理作用，如具有增加冠 脉流量，降低心肌兴奋性和传导性，对心肌缺血性损伤产生保护作用，还具有改善 微循环、抗血小板聚集和血栓形成，降低血液黏度的作用，以及抗菌消炎作用，抗 氧化作用，改善肾功能，改善学习记忆作用以及对脑组织缺血/再灌注损伤的保护 作用刀。其中有效成分的药理作用主要表现在，丹参酮类化合物以改善血液循 环、抗菌、抗炎、抗肿瘤和心血管疾病预防和保护为主，丹酚酸类化合物则以抗 血小板聚集、抗血栓形成、抗氧化及细胞保护作用突出。临床应用方面，以丹 参单味药及与丹参组成复方用于临床的制剂可达20余种，主要应用于心血管系统 疾病、呼吸系统疾病、肝肾疾病、皮肤病等方面囹。1.丹参应用历史及考证丹参在我国的应用已有2000多年的历史，始载于神农本草经，列为上品，以后历代本草均有记载口”名医别录载：丹参“生桐柏山谷及太山，仅近道 处处有。图经本草载：丹参“今陕西河东州郡及随州皆有之，二月生苗，高 一尺许，茎方有棱，青色。叶相对，如薄荷而有毛。三月至九月开花成穗，红紫 色，似苏花。根赤色，大者如指，长尺余，一苗数根”。李时珍日：“处处山中有 之，一枝五叶，叶如野苏而尖，青色皱皮。小花成穗如蛾形，中有细子。其根皮 丹而肉紫”。根据以上历代本草对丹参的形态描述，与现在市场所用丹参完全符7沈阳药科大学博士学位论文第一章前言合，推测历代本草所用丹参均为正品丹参。丹参的性味功能历代本草记载较详，神农本草经载：气味苦微无毒，治心腹邪气，肠鸣幽幽如走水，寒热积聚，破微消瑕，止烦满益气。名医别录载：丹参专入血分，其功在于活血行血，内之达脏腑而化瘀滞，外之利关节而通脉络1本草纲目日：“丹参活血、通心包络、治疝痛清代本草逢原记载“丹参治心腹邪气，皆瘀血内滞而化 为水之候。根据以上历代本草对丹参的功能描述，古代丹参主要用作活血化淤药。2.丹参的种质资源及生物学特性正品丹参来源于唇形科鼠尾草属植物丹参(的24a miltiorhiza Bge.)的干 燥根及根茎。随着野生资源的减少，70年代中期药材丹参已经供不应求，目前发 现鼠尾草属Salvia共有40多个种(含变种、变型)的根及其根茎可作丹参使用，有近30个种进行过化学成分含量研究，其中脂溶性成分含量高的有甘西鼠尾草、三叶鼠尾草、毛地黄鼠尾草、橙色鼠尾草、云南鼠尾草、南丹参、栗色鼠尾草、黄花鼠尾草、红根草、皖鄂丹参等，水溶性酚酸类成分含量较高的有甘西鼠尾草、褐毛甘西鼠尾草、黄花鼠尾草、南丹参、戟叶鼠尾草、浙皖丹参、皖鄂丹参口 不同种质基因型决定着品种性状。优良品种是生产优质中药材的前提，加强新品 种培育和品种选优,对推行中药材规范化(GAP)生产有着重要意义。张兴国等从 生态型出发,研究大叶型、小叶型和野生型三种类种种质资源特性，建立了丹参 品种资源分型研究的性状和生产力特性指标体系，结果显示小叶型丹参为川丹参 的优质高产新品种口门。田伟等采用随机区组设计，运用统计学方法对12种丹参种 质资源的生物学性状和产量进行了比较，筛选出“山东-3”、“山东-8”、“山东-9”3个优良种质资源。调查及分析结果显示这3个种质资源表现出较好的生物 学性状，产量分别比对照提高50.31%,33.96%,28.30%16J,高山林等采用秋 水仙碱诱导出丹参四倍体，选出的10个品系均表现出典型的多倍体性状，药材(根)质量均较大幅度提高。其中61 2-22品系为最优品系，不仅丹参酮含量比 对照种高79%，而且药材产量也比对照高71.1%口7“%温春秀等对55份不同 来源的丹参材料,采用扩增片段长度多态性(AFLP)标记,对丹参种质资源在DNA 水平上进行遗传多样性研究，结果显示不同产地的丹参个体遗传丰富，遗传特性 不一致，即使同一产地的丹参也表现出丰富的遗传变异性，说明丹参的人工选择 程度很低“9】。舒志明等采用田间试验与室内分析相结合的方法，对8个不同来源 8沈阳药科大学博士学位论文第一章前言的丹参种质生物学性状、产量性状及药效成分含量进行研究和比较评价.结果表 明8个丹参种质在株高、冠幅、茎、叶、花冠颜色，以及根部性状方面均存在明 显差异,南丹参和商洛丹参最适宜在陕西商洛地区推广种植，三叶丹参是一个高 抗根结线虫病的种源，可以作为抗病育种材料利用2。3.丹参的化学成分研究丹参化学成分的研究从20世纪30年代开始，至今已有70余年的历史，已 .阐明的化学结构总数已超过100余种区26,6。,从日本的中尾万三首先发现的丹参 酮开始，人们注意力较多地集中在丹参的脂溶性成分的研究上.19341988的50 余年时间已分离并鉴定的结构有41个化合物31，分析这些化合物的过程，可以 看出，最初分离并获得鉴定的化合物都是一些含量高、易析晶和结构稳定的化合 物，主要有丹参酮I、丹参酮HA和隐丹参酮，这三个化合物是丹参中含量最高 也是最具代表性的主要成分，1969年日本人就对其进行了全合成】，丹参药材 中丹参酮IIA含量相对较高，约为817).9%,因而丹参酮IIA曾经一直作为丹参 有效成分的质量控制指标，在中国药典中也以丹参酮为丹参药材和丹参注射液的 定性定量控制标准口】。丹参水溶性成份的研究从20世纪70年代开始，原儿茶醛 最初被认为是丹参水溶性有效成分的代表成分，在药材和制备工艺的研究中也多 以原儿茶醛为质量控制指标，但原儿茶醛在丹参药材中含量较低，约为 0.0077).()27%。20世纪80年代后，人们又发现了丹参水溶性成分丹酚酸类成分，丹参素是最早发现的此类成分，认为是各种丹酚酸的基本组成部分，丹酚酸多数 是由丹参素和其他有机酸结合而成。如丹酚酸B是由三分子丹参素和一分子咖 啡酸结合而成，由于其含量较高，可达210%,因此丹酚酸B成为丹参水溶性 成分中最主要的指标活性成分应用在丹参药材和丹参注射液的定性定量控制标 准中16 23-24。3.1 丹参照溶性化学成分丹参脂溶性化学成分主要为二菇酿类化合物，大都呈现鲜艳的颜色，所呈现 的颜色主要由结构中的生色团或共轲链体系的长短不同而造成，一般为橙、红、棕、紫等色。3.1.1 丹参二豺醍类成分的分类及鉴定丹参二菇醍类化合物的分类依据其结构中母核的的结构分为两大类，一类为9沈阳药科大学博士学位论文第一章前言母核是1,2.邻蔡晶并味喃环所形成的丹参酮类化合物，一类是1,4-对笨醍并 吠喃环所形成的丹参新醍类化合物。目前，从丹参及代谢物种中已分得40余个 二菇类化合物，其中，具有邻醍类结构化合物30余个125-26,对醍结构的化合物 10余个。主要化合物结构如下：Tanshinone IIA Danshinone IIB Me thyltanshinoate Hydroxytanshinone IIATanshindiol A Tanshindiol B Tanshindiol C 3-hydroxytanshinone IIAPnxwaqinone A Prze waqinone C Tanshinalde hyde Tanshinol BFig.1-1 Tanshinone II s：naphthof 1,2-bfiiran-4,5-dione analogue with a lipo-ring A1,2-dihydrocryptotanshinone2,3-dihydrocryptotanshinone17-hydroxycryptotanshinone10沈阳药科大学博士学位论文第一章前言Fig.1-2 Cryptotanshinone s:2,3-dihyronaphthol,2-b furan-4,5-dione analogue with a lipo-ring A1,2-dihydrotanshinone ItanshinquinonetanshinquinoneFig.1-3 Tanshinone I s:naphtho 1,2-bfuran-4,5-dione or 2,3-Sal AA RosSal M58-59)O丹酚酸A、B在低于10,ol/L浓度时可依浓度 增加钠钾、钠钙、钙镁ATP酶活性，而且体内给予丹酚酸A对钠钾ATP酶的基因 表达也有一定影响；丹酚酸A、B等对大鼠晶状体内醛糖醛糖还原酶活性的体外 实验证明丹酚酸对大鼠晶状体内醛糖醛糖还原酶活性有明显的抑制作用且与体 内实验结果一致；另外，丹酚酸还表现为可抑制缺血脑组织中一氧化氮(N 0)含量和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性；应用分子生物学的方法研究表明丹 酚酸对即刻早期癌基因的表达产生诱导作用，这一作用可能对改善学习记忆功能 有益必，阿。4.丹参及其有效成分的药理作用现代药理学的研究表明，丹参具有多方面的药理作用，如具有增加冠脉流量，降低心肌兴奋性和传导性，对心肌缺血性损伤产生保护作用，还具有改善微循环、抗血小板聚集和血栓形成，降低血液黏度的作用，以及抗菌消炎作用，抗氧化作用,改善肾功能，改善学习记忆作用以及对脑组织缺血/再灌注损伤的保护作用仰。丹 参中脂溶性成分及水溶性成分均为丹参的有效成分群，两类成分的药理活性有相 似之处，又有明显的区别，前者具抗菌，内分泌调节作用，而后者则以抗氧化、抗凝血及细胞保护活性更为突出，对具体化合物而言，其药理作用的特点及强度 又有明显的差异。正是这些作用的多样性，使得丹参具有广泛的适应症，也促进 了科研工作者对其进行更广泛更深入的研究。4.1 丹参脂溶性化学成分的药理作用4.1.1抗菌活性 隐丹参酮和二氢丹参酮I对多数革兰氏阳性菌有较强的抑制 作用，而对革兰氏阴性菌作用较弱。作用机制是其可在细菌代谢过程中产生超氧 化自由基，从而使细菌DNA等成分破坏而导致细菌死亡。4.1.2心血管系统作用 丹参酮I、丹参酮HA、隐丹参酮、二氢丹参酮、丹参 新酿，丹参酮IIA磺酸盐均可增加冠状动脉流量162封，.另外，丹参酮类化合物可 抑制低密度脂蛋白的氧化，改善脂质代谢，保护内皮细胞，防止心肌缺血等，具 有抗动脉粥样硬化、缩小心肌梗死面积、降低心肌耗氧量等心血管疾病的良好的 防治作用侬。4.1.3抗免疫、抗变态及抗炎作用 丹参酮I、隐丹参酮、二氢丹参酮可明显 19沈阳药科大学博士学位论文第一章前言抑制白细胞介素T2（IL-12）及干扰素（IFN-g）的生成；丹参酮H A对炎性介质 IL-lb,IL-6,TNF-a具有很强的抑制作用6 丹参酮I在抑制具免疫调节活性作 用中起重要作用的磷脂酶（PLA?）具有一定作用7可；丹参酮I、丹参酮HA、隐丹 参酮及二氢丹参酮通过络氨酸磷酸化干扰IgE受体介入，二氢丹参酮及隐丹参酮 现实有较强的抑制活性，IC.分别为16、36 MM,结果暗示二氢吠喃环可能为活性 基团71-72；4.1.4抗肝纤维化活性 丹参酮I通过诱导肝星状细胞的调亡而发挥抗肝纤维 化作用6】，.丹参酮nA可降低CCL和D-半乳糖胺小鼠肝损伤血清ALT、AST和肝 组织匀浆丙二醛含量，其对肝脏的保护作用是通过清除氧自由基，发挥抗氧化、减 轻脂质过氧化损伤的作用74-7叫4.1.5抗肿瘤活性 丹参酮类化合物具有很强的细胞毒活性，有些化合物对人体肿瘤细胞株如KB细胞、He La细胞、（301。-205细胞及加一2细胞的细胞毒活性浓 度低于而且当丹参酮在A环中有羟基取代或含有烯醇基以及具有邻醍结 构的化合物其细胞毒活性增加，当C环具有对位酶或C环为内酯结构以及无D环的 化合物则无细胞毒活性76列。另外，丹参酮可以通过对肿瘤细胞的分化诱导而使 肿瘤细胞逆转，在人的肝癌细胞株SMMC-7721体外培养过程中加入d 5mg/ml丹参 酮IIA,4天后通过流失细胞术检测，观察到丹参酮HA能诱导癌细胞株分化WE。丹参酮的抗肿瘤活性还表现在其可促进肿瘤细胞调亡，丹参酮IIA对白血球细胞 株的诱导调亡是通过激活半胱天冬酶-3的活性而实现的Bowl。4.1.6其他作用.丹参酮类化合物还具有抗真菌陷入 抗血小板聚集图及神经保 护作用叼，隐丹参酮、二氢丹参酮可通过抑制胆碱酯酶活性而减轻认知障碍阳】，丹参酮IIA可选择性抑制老鼠和人的细胞色素P4501A2,从而改变其他药物的药动 学和毒理学活性.8刀。4.2丹参水溶性化学成分的药理作用4.2.1抗氧化活性 丹酚酸的抗氧化活性主要包括抗脂质过氧化及自由基清除 作用。总丹酚酸抗氧化作用极为明显，能抗Fe?/半胱氨酸诱导的肝微粒体脂质过 氧化、清除黄噂吟-黄喋吟氧化酶体系产生的超氧阴离子、清除F/+/H2O2体系 产生的羟自由基，这些化合物中尤以丹酚酸B活性较强体8-。构效关系研究表明与 芳香环相连的饱和燃及酚羟基具有较强的自由基清除作用】。20沈阳药科大学博士学位论文第一章前言4.2.2抗凝血及抗血栓活性 丹酚酸类化合物可抑制血栓形成，降低血浆内皮 素及血栓素B2的水平，丹酚酸B具有很强的抗凝血作用，迷迭香酸则表现为中等 强度的抗血栓作用侬刀力4.2.3对肝、肾、心脏及脑的保护作用 丹酚酸B能抑制转化生长因子-B 1(TGF-B1)的肝星状细胞(HSC)胞内信号转导及其受体蛋白的表达，从而拮抗 TGF-B1的促HSC活化，并能抑制活化肝贮脂细胞(FSC)增殖，抑制FSC生成细胞 外基质而减少胶原纤维在肝内的沉积，对肝纤维化有一定的治疗作用师-95。丹酚 酸B对肾衰的抑制作用主要是通过其对NO释放通路的抑制及再灌注而实现四夕久 丹酚酸B及其镁盐对心脏的保护作用表现在通过对大动脉血管内皮的舒张和对血 管紧张素酶的抑制作用降低高血压小鼠的血压98阳，动物实验研究显示丹酚酸B 能减轻缺血再灌注损伤模型动物的心肌缺血程度，减小心肌梗死范围，对抗氧自 由基对心肌细胞的毒害作用，保护心肌细胞口-皿)。丹酚酸类