中药白花前胡水提物对阿霉素在大鼠体内药动学及组织分布的影响.pdf

硕士学位论文中药白花前胡水提物对阿霉素在大鼠体内药动学及组织分布的 影响山西医科大学硕上学位论文摘 要本文探讨了白花前胡水提物对阿霉素在大鼠体内药动学的影响C第一部分为白花前胡水提物的制备及总香豆素含量的测定。采用合适的提取方法提取 白花前胡，水提取率是16%.采用紫外分光光度法测定白花前胡中香豆素含量，香豆素的 含量是3.04%0第二部分建立了 HPLC法测定血浆中阿霉素的方法。建立了血浆样品的预处理方法,通过色谱条件筛选，采用分析柱：DiamonsiL ODS（250mmx4.6mm,511m）；流动相：0.01moL10）,阿霉素与内标（柔红霉素）峰面积之比线性关系良好（r=0.9995）；阿霉素日内和日间精密度的RSD均小于10.0%,样品的稳定性及提取回收率均符合分析 测定的要求。第三部分研究了白花前胡水提物对阿霉素在大鼠体内药代动力学动学的影响。本研究 将40只SD大鼠随机分为Ai、A2、A3、Bi、B2 B3 Ci、C2 C3 D组，每组四只。Ai（剂 量为6g.kg/）、Bi（剂量为3g-kg）、G（剂量为L5g-kg）组用白花前胡水提物连续灌胃7天 灌胃半小时后，经尾静脉注射阿霉素8mgkg,A2（剂量为6g!0.05）。第四部分测定白花前胡水提物对阿霉素在大鼠体内组织分布的影响。建立了各个组织 样品的预处理方法，色谱条件为：流动相O.OlmoLL磷酸二氢镂缓冲溶液（冰醋酸调 pH=4）：乙月青=77：23,检测波长254nm,流速LOmLminL在此色谱条件卜，大鼠各组 织中阿霉素在020晚皿1/范围内线性关系良好。样品的稳定性及提取回收率均符合分 析测定的要求，日内精密度和日间精密度RSD均小于10%。在组织分布实验中，将32 只SD大鼠，随机分成A,B组，每组16只，A组先以6mg也f剂量连续灌胃白花前胡 I山西医科大学硕上学位论文水提物7天，并于第7天灌胃半小时后，尾静脉注射阿霉素8mg,kg。B组尾静脉静脉注 射阿霉素8mg-kg-i,并采用HPLC法分别测定两组大鼠在4个不同时间点各组织中阿霉素 的浓度。结果显示，白花前胡水提物与阿霉素联用时，使得各组织中的阿霉素浓度有所提 高，且在心、肝、肾中阿霉素浓度明显增高。关键词：白花前胡；阿霉素；药动学；高效液相色谱法II山西医科大学硕上学位论文ABSTRACTThe objective is to investigate the influences of water extracts from Peucedanum praeruptorm Dunn on the adriamycin pharmacokinetics in rats.In section one,water extracts from Peucedanum praeruptorm Dunn is prepared and the total comadin is determined.Reference to records the method of medical material extraction is adopted.The water extraction result is 16%.Adopt ultraviolet spectrophotometry to determin the contents of total comadin in Peucedanum praeruptorm Dunn.The experimental result indicates that the contents of total comadin is 3.04%.In section two,the HPLC method is used to determin adriamycin plasma concentrations.Pre-disposal method is established of blood plasm sample.The extraction method was chosen to pretreat plasma samples before HPLC analysis.The analytical column was Diamonsil ODS(4.6mmx200mm,5|im).A mobile phase of 0.01 moL L_1 ammonium dihydrogen phosphate and methyl cyanide(77:23,Ph4)was run at a rate of 1.0 ml/min and the sample size is 20|iL,column temperature at room temperature.The calibration curve was linear within the range of 0.015610.0 ig-mL_1 for adriamycin and the detection limit was 3.Ing(S/N10),both of the intra-day and inter-day precision were less than 10.0%.The stability and recovery rate consistent with analysis requirement.In section three，water extracts from Peucedanum praeruptorm Dunn impact on adriamycin pharmacokinetics in rat is studied.The rats were divided into Ai A2、A3、Bi B2、B3、Ci C2、C3、D groups randomly,four rats in each group.The high performance liquid chromatography(HPLC)method measuring adriamycine concentration in Plasma was used to measure and comparethe pharmacokinetic parameters among the groups.The phannaeokinetics parameters were calculatedas followed:Compare group A with the group that inject adriamycin singlely,water extracts from Peucedanum praeruptorm Dunn make the AUC of adriamycin accrete notablely,and velocity of adriamycin eliminat from central compartment to perimeter compartment step down.,also，the rate of elimination constant decrease and the other parameters is similar to adriamycin.Parameters of the other groups is similar to adriamycin,there is no statistical significance.In section four,water extracts from Peucedanum praeruptorm Dunn impact on adriamycin disposition in rat is studied.Use the same HPLC condition,the calibration curve was linear within the range of 0.1 2011g mLfor adriamycin.The stability and recovery rate consistent with analysis requirement,both of the intra-day and inter-day precision were less than 10.0%.In the experiment,the 32 rats were divided intoA,B groups randomly?16 rats in each group.The high performance liquid chromatography(HPLC)method was used to measure adriamycine in山西医科大学硕上学位论文concentration in Plasma,the result show that when water extracts from Peucedanum praeruptorm Dunn and adriamycin used together,adriamycine concentration in Plasma raises)especially the heart,liver and kidney.Key words:water extracts from Peucedanum praeruptorm Dunn;adriamycin;pharmacokinetics;high performance liquid chromatographyIV山西医科大学硕士学位论文-XI-1刖 百化学治疗(化疗)是目前临床用于恶性肿瘤的主要治疗方案之一，而肿瘤多药耐药性(Multidrug resistance,MDR)是化学治疗失败的最为主要的原因。据美国癌症协会估计，90%以上肿瘤患者死于不同程度的耐药川。肿瘤多药耐药(MDR)指肿瘤细胞对一种抗肿瘤 药物出现耐药的同时，对其他结构各异、作用机制不同的抗肿瘤药物亦产生交叉耐药现象，自Biedler等发现多药耐药现象以来，已进行了许多探索肿瘤细胞多药耐药的机制研究，同时有效逆转肿瘤MDR也已成为肿瘤究领域的热点，并且在寻找选择性的MDR逆转剂 方面取得了一些进展，而中药低毒、高效的独特优势特点也越来受到国内外学者的广泛关 注【I。阿霉素(Adriamycin,ADM)是广泛用于临床的慈环类抗肿瘤药物,可抑制RNA和DNA 的合成，对RNA的抑制作用最强，抗瘤谱较广，为治疗实体肿瘤最有效的药物之一，属 细胞周期非特异性药物，对各种生长周期的肿瘤细胞都有杀灭作用。主要适用于急性白血 病，对急性淋巴细胞白血病及粒细胞白血病均有效。对恶性淋巴瘤的治疗，它可作为交替 使用的首先药物。乳腺癌、肉瘤、肺癌、膀肤癌等其他各种癌症都有一定疗效，多与其他 药物联合应用回。研究证实阿霉素是P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的底物，能产生多 药耐药性，从而影响其使用疗效口L P-gp位于细胞膜，作用类似于外排泵，可通过将抗 肿瘤药物从细胞中外排而使细胞内药物浓度降低，从而降低药效口幻。中药白花前胡为伞形科植物白花前胡(/右段勿倒加praerupterumDunri)的干燥根、具有宣 散风热、止咳化痰的功效，具有宣散风热、降气化痰等功效。临床多用于风热感冒、咳 嗽痰多、痰热喘满、咯痰黄稠等症，其主要有效成份是白花前胡丙素3。最新研究表明 白花前胡丙素有抑制P-gP的功能口叫具有一定的逆转肿瘤多药耐药作用，因此，在阿霉 素使用过程中联合白花前胡可能会对其药动学参数产生变化，进而影响到药物疗效。目前，白花前胡对阿霉素药动学作用的研究尚未见报道，为此，本课题应用HPLC法 研究白花前胡水提物对阿霉素在大鼠体内的药物动力学的影响，对进一步阐明两者药物相 互作用以及合理用药提供依据。1山西医科大学硕士学位论文第一章白花前胡水提物的制备及总香豆素含量的测定1试剂与药品中药白花前胡（山西康益福莱药业有限公司，批号20080513）离心机（型号YXJ-2,常州市华普达教学仪器有限公司）电热恒温水浴锅（DZKW-D-2,北京永光明医疗仪器厂）旋涡混合仪（型号WH-2,上海沪西分析仪器厂）超声清洗机（型号JY92-11,宁波新芝生物科技股份有限公司）752型紫外光栅分光光度计（山东高密彩虹分析仪器有限公司）RE-52AA型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）香豆素（批号080605,沈阳市试剂三厂）2实验方法及结果2.1 水提物的制备及结果将白花前胡的干燥根粉碎并称重100g,用3倍量的蒸储水浸泡4h,加热至沸腾，回流 2h,过滤并浓缩至1mL相当于3g的药材口刀，白花前胡的水提取率为16%。2.2 香豆素含量的测定口8-2。2.2.1 对照品的选择现代研究表明白花前胡所含的主要有效成份为香豆素类。因此，本研究所用对照品 系香豆素，经紫外扫描光谱数据与文献报道一致。2.2.2 最大吸收波长的选择取对照品水溶液、白花前胡水提取液分别在波长400200nm范围内进行光谱扫描,结果均在322nm处有最大吸收峰，光谱图形亦基本相同，故实验中选择在最大吸收波长 322nm处测其吸收值。对照品水溶液的吸收光谱扫描图示于图1-1,白花前胡水提物的吸 收光谱扫描重叠图示于图1-2O2.2.3 标准曲线的制备精密称取对照品25mg置100mL量瓶中，加蒸偏水使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。精密吸取对照品溶液0.005,0.01,0.015,0.02,0.025mL分别置50mL 量瓶中，加蒸储水稀释至刻度，摇匀，以空白溶剂为参比，照分光光度法，在322nm处 测定吸收值，以浓度X为横坐标，吸收度Y为纵坐标做标准曲线，求得标准曲线的回归 方程 Y=30.1X+0.0367（r=0.997,n=3）。浓度 X 在 0.0250.125席1111/1 范围内与吸收度 Y 呈良好的线性关系。2山西医科大学硕士学位论文220.00300.00波长(r un)380.00 400.00图香豆素紫外扫描图220.00380.00300.00波长(nm)400.00图1-2白花前胡水提物紫外扫描图2.2.4 白花前胡中总香豆素含量的测定及结果精密称取干燥粉碎后的生药材适量，置旋转蒸发仪中，加蒸镭水浸泡4h,加热至沸 腾，回流2h,过滤并浓缩至干燥。再按标准曲线项下操作，由回归方程求出相应的浓度,此类白花前胡中香豆素的含量是3.04%。3讨论本实验综合文献及实验的具体情况，按上述提取条件，用水提取白花前胡，经研碎、浸泡、回流、过滤浓缩等步骤，称量得提取率为16虬本实验综合药典与文献，选322nm 为吸收波长，香豆素为对照品，采用紫外分光光度法测得白花前胡中香豆素的含量为 3.04%,此方法可靠准确。3山西医科大学硕士学位论文第二章测定血浆中阿霉素的高效液相色谱法的建立本研究建立了 HPLC法测定大鼠血浆及组织匀浆中阿霉素浓度的方法，根据有关文献 关于生物样品的分析方法验证的相关规定，就方法的稳定性、线性范围、精密度、准确度 和回收率进行了全面考察。1实验材料1.1实验仪器高效液相色谱仪（安捷伦1200）,检测仪（安捷伦可变波长紫外检测仪）离心机（型号YXJ-2,常州市华普达教学仪器有限公司）电热恒温水浴锅（DZKW-D-2,北京永光明医疗仪器厂）旋涡混合仪（型号WH-2,上海沪西分析仪器厂）超声清洗机（型号JY92Tl,宁波新芝生物科技股份有限公司）TGL-16G高速冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂）微量移液器（上海求精生化试剂仪器有限公司）12药品与试剂阿霉素（深圳万乐药业有限公司，批号：O812E1）柔红霉素（深圳万乐药业有限公司，批号：0812F1）甲醇（色谱纯，天津四友精细化学品有限公司）乙月青（色谱纯，天津四友精细化学品有限公司）白花前胡（山西康益福莱药业有限公司，批号20080513）。肝素（天津市生物化学制药厂）其余试剂均是分析纯1.3实验动物SD大鼠，雌雄各半，体重190220g,山西医科大学实验动物中心提供。2血浆中阿霉素测定方法的建立R13鉴于生物样品药物浓度低、干扰大等特点，进行色谱分析前多需经过预处理，即利用 液-液萃取或液-固萃取等方式，对样品进行分离、纯化、富集、溶剂重组等。由于步骤多,各份样品间的操作很难平行一致，而在操作过程中各份样品中待测药物的损失也不同，导 致药物的绝对回收率出现较大差异。若采用内标法，使内标物伴随预处理及测定全过程,只要内标选择适当，各份样品中药物与内标的回收率会有良好的相关性，同一浓度各样品 间的色谱响应值之比会相对恒定，所以采用内标法既可提高测定的准确度与精密度，亦可 简化操作过程，提高分析速度。2.1 阿霉素血浆生物样品的预处理方法2.1/I蛋白质沉淀剂的选择血浆中含有大量的蛋白质，它们能结合药物，且容易对色谱柱造成污染，因此对于某 4山西医科大学硕士学位论文些药物的测定，必须先将与蛋白结合的药物游离之后再作进一步处理。使蛋白质产生沉淀 的方法很多，沉淀血样中的蛋白质，一般是往样品中加入一定量的与水互溶的有机溶剂,使蛋白质表面失去水化层，而相互聚集产生沉淀析出，再经离心除去蛋白、萃取等步骤,最后进柱分析。常用的蛋白质沉淀溶剂有氯彷、甲醇、乙晴、高氯酸等。而阿霉素在甲醇、氯仿中的溶解性好，并且阿霉素结构中既有酸性结构又有碱性结构，所以运用由氯仿、甲 醇、缓冲盐溶液组成的混合溶液来作为萃取阿霉素的溶剂。2.1.2血浆生物样品的预处理方法从大鼠眼眶后静脉中取血，加入预先经肝素处理过的1.5mL离心管中，SOOOr min-1 离心lOmin,精密取血清100|iL置于1.5mL离心管中，加入400jiL（氯仿：甲醇=4：1）混 合溶液和100|iL0.2moL/L/1磷酸二氢镂溶液（pH=9）,摇匀，漩涡混悬4min后，离心 lOminCBOOOr min-1）,取氯仿层300四1；6-9,置50水浴上蒸干，残渣用501iL的流动相溶 解，漩涡混悬3min,再以3000r-min-1离心5min,精密吸取20|iL进样。3色谱条件的选择3.1 测定波长的选择由药典及有关文献报道显示阿霉素的检测测波长是254nm,经紫外扫描验证，如图2-1所示3.2 流动相的选择选用以甲醇、乙月青与水配成一系列不同比例的混合溶剂作为流动相，测定结果见表2-1 o表27流动相比例的选择流动相组成及比例样品保留时间（金）内源性物质干扰情况乙晴：水二40：601.4干扰严重乙月青：水=70：302.1干扰严重乙月青：缓冲溶液=80：204.1无干扰，有拖尾乙情：缓冲溶液二77：235.3无干扰，峰型好结果表明，当流动相比例为OOlmoLL-i磷酸二氢镂缓冲溶液（冰醋酸调pH=4）：乙晴=77：5山西医科大学硕士学位论文23时，样品与内标分离度、出峰时间和灵敏度能够满足定量分析的要求。故选用作为流 动相O.OlmoLI/i磷酸二氢镂缓冲溶液(冰醋酸调pH=4)：乙月青=77：23的比例。3.3 流动相酸碱度的选择考察了流动相为0.01moL-L-i磷酸二氢镂缓冲溶液(冰醋酸调pH=4)：乙睛=77：23时不 同pH下的色谱图，结果见表2-2。表2-2流动相酸碱度的选择流动相pH值样品保留时间保)出峰情况2.01.3min峰拖尾4.05.3min峰型好7.02.1 min峰严重拖尾结果表明，当流动相pH B3 Ch C2、C3、D组，每组四只。Ah Bl、Cl组用白花前胡水提物（剂量为6gkg-i）连续灌胃 七天，灌胃半小时后，经尾静脉注射阿霉素8mg!C2、C3与D组之间的主要药动学参数不存在显著性差异(PvO.05),Ai组与D 组的Kio,AUC,CL之间存在显著性差异(PV0.05),其他参数(0,Vc,K12,K21,t囹阳)之 间没有显著性差异(P0.05)。表3-1白花前胡水提物(6g-kg)灌胃7天+阿霉素)与单一阿霉素组药动学参数比较#p0.05P(h-)0.960.051.230.250.110,05Vc(L)0.640.150.660.090.870.05t%(a)(h)0.070.030.0980.0170.080.05tA(P)(h1)0.760.230.580.110.350.05K2i(h-)1.700.592.970.860.060.05Kio(h)6.111.562.990.210.030.05AUC ghmL1)2.160.164.350.420.0030.05#CL(Lhl)3.7U0.301.970.400.0040.05P(h)0.960.050.880.230.510.05Vc(L)0.640.150.7H0.050.490.05伙(h1)0.070.030.0630.0030.580.05t囹彷(h)0.760.230.730.220.470,05K2i(h-)1.700.592.230.540.380.05Kio(h-1)6.111.564.130.340.110.05Ki2(h-i)3.921.714.60.960.560.05AUC ghmL1)2.160.162.60.320.080.05CL(Lh)3.7U0.302.800.200.120.05表3-3（白花前胡水提物（1.5gkg）灌胃7天+阿霉素）与单一阿霉素组药动学参数比较GroupControlTestPa（h）10.83.5313.1 2.440.0940.05P(h)0.960.050.800.110.410.05Vc(L)0.640.150.710.120.540.05仅（）0.070.030.0530.0120.160.05t%(P)(h)0.760.230.830.100.660,05K2i(h/)1.700.592.290.440.090.05Kio(h-1)6.111.564.931.490.210.05Ki2(h)3.921.716.701.650.130.05AUC(|ighmL-1)2.160.162.840.0750.640.05CL(Lh)3.7U0.303.601.660.900.0516山西医科大学硕士学位论文表3-4（白花前胡水提物（6g-kg）灌胃3天+阿霉素）与单一阿霉素组药动学参数比较GroupControlTestPa(h1)10.83.5315.01il.400.120.05P(h)0.960.050.8H0.070.400.05Vc(L)0.640.150.620.020.960.05伙（）0.070.030.0520.0030.230.05t%(p)(h-1)0.760.230.860.0680.390.05K2i(h-1)1.700.592.330.340.270.05Kio(h)6.1U1.564.500.0920.590.05Ki2（h）3.921.716.920.420.0530.05AUC(gghmL1)2.160.162.840.070.640.05CL(Lh)3.7U0.302.790.130.980.05表3-5（白花前胡水提物（3g-kg i）灌胃3天+阿霉素）与单一阿霉素组药动学参数比较GroupControlTestPa(h1)10.83.5312.910.600.370.05P（h）0.960.050.8H0.0670.380.05Vc(L)0.640.150.620.0210.810.05如a)(h-1)0.070.030.0520.0030.320.05(h1)0.760.230.860.0680.610.05K21(h1)1.700.592.330.340.140.05Kio(h-)6.1U1.564.500.0920.0640.05Ki2（h）3.921.716.920.420.290.05AUCCgghmL1)2.160.162.840.0750.760.05CL(Lh)3.710.302.790.130.440.0517山西医科大学硕士学位论文表3-6（白花前胡水提物（L5gkg）灌胃3天+阿霉素）与单一阿霉素组药动学参数比较GroupControlTestPa(h”)10.83.5312.452.10.560.05P（h）0.960.050.680.270.340.05Vc(L)0.640.150.540.080.0820.05a(h)0.070.030.0580.010.120.05t%(p)(M)0.760.231.140.430.430.05K2i(h-1)1.700.591.950.820.640.05Kio(h-)6.1U1.564.390.630.440.05K2(h】)3.921.716.720.980.390,05AUC(|xghmL-1)2.160.162.690.060.760,05CL(Lh-i)3.7H0.302.960.090.440.05表3-7（白花前胡水提物（6gkg）灌胃1天+阿霉素）与单一阿霉素组药动学参数比较GroupControlTestPa(h1)10.83.5311.051.340.880.05P(h-)0.960.051.000.410.900.05Vc(L)0.640.150.730.150.0820.05位(a)(h/)0.070.030.0600.0080.430.05仅(h-1)0.760.230.820.140.230.05K2i(h)1.700.592.310.610.810.05Ko(h/)6.1U1.564.851.520.0840.05K2（h）3.921.715.38L030.150.05AUCCgghmL1)2.160.162.630.110.350.05CL(Lh-i)3.710.303.010.140.630.0518山西医科大学硕士学位论文表3-8白花前胡水提物(3g-kg)灌胃1天+阿霉素与单一阿霉素组药动学参数比较GroupControlTestPa(h)10.83.5312.261.730.560,05P(h-1)0.960.050.840.080.340.05Vc(L)0.640.150.760.120.320.05t4a)(h-1)0.070.030.0550.010.120.05t 哪)(h-1)0.760.230.830.070.430,05K21W)1.700.591.990.240.640.05KioCh-1)6.1H1.565.160.480.440.05Ki2(h)3.921.715.901.140.390.05AUC(gg h mL)2.160.162.070.380.760.05CL(Lh-i)3.7H0.303.940.700.440.05表3-9白花前胡水提物(L5g-kg-i)灌胃1天+阿霉素与单一阿霉素组药动学参数比较GroupControlTestPa(h-i)10.83.5312.971.240.250.05P(h-1)0.960.050.880.120.670.05Vc(L)0.640.150.670.010.750.05t%(a)(h/)0.070.030.0550.0040.340.05t 郊)(20.760.230.780.100.920.05K2i(h-1)1.700.592.450.390.210,05Ko(h/)6.1H1.564.710.590.070.05Ki2(h)3.921.716.701.140.070.05AUC ghmL*1)2.160.162.560.360.210.05CL(Lh)3.7H0.303.160.430.550.0519山西医科大学硕士学位论文6讨论白花前胡水提物对阿霉素在大鼠体内药动学的影响：从血药浓度一时间曲线及各项药 动学参数分析:白花前胡水提物和阿霉素联用组与单一使用阿霉素组比较，结果显示低 剂量与中剂量的白花前胡水提物对阿霉素的各项药动学参数影响不大，没有统计学意义 而高剂量的白花前胡水提物随着给药天数的增加，对阿霉素的影响逐渐明显，有统计学意 义，结果显示当大鼠以白花前胡水提物大剂量给药达到7天时，白花前胡水提物使得阿霉 素的AUC显著增加，阿霉素从中央室向周边室消除(Kio)的速率减慢,且消除速度常数(CL)减少，其他药动学参数与阿霉素组类似。20山西医科大学硕士学位论文第四章白花前胡水提物对阿霉素在大鼠体内的组织分布的影响1实验材料L1实验仪器TGL-16G高速冷冻离心机上海安亭科学仪器厂。TU-1901型双光束紫外可见分光光度计北京普析通用仪器有限责任公司。高效液相色谱仪（安捷伦1200）,检测仪（安捷伦可变波长紫外检测仪）离心机（型号YXJ-2,常州市华普达教学仪器有限公司）电热恒温水浴锅（DZKW-D-2,北京永光明医疗仪器厂）旋涡混合仪（型号WH-2,上海沪西分析仪器厂）超声清洗机（型号JY92-11,宁波新芝生物科技股份有限公司）TGL-16G高速冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂）微量移液器（上海求精生化试剂仪器有限公司）1.2 药品与试剂阿霉素（深圳万乐药业有限公司，批号：0812E1）柔红霉素（深圳万乐药业有限公司，批号：0812F1）甲醇（色谱纯，天津四友精细化学品有限公司）乙月青（色谱纯，天津四友精细化学品有限公司）中药白花前胡（山西康益福莱药业有限公司，批号20080513）。肝素（天津市生物化学制药厂）其余试剂均是分析纯1.3 实验动物SD大鼠，雌雄各半，体重190220g,山西医科大学实验动物中心提供。2样品采集由281受试大鼠分别于给药一定时间后，取血后断头处死，立即解剖采集脑、心、肾、脾、肝、肺6种组织。血液离心后，移取血浆至塑料试管中；组织用生理盐水冲净表面残留血 液及内容物后，称重，制备匀浆，且各组织的采集及匀浆过程均于04C条件下进行操 作。3生物样品中阿霉素测定方法的建立悭293.1 组织样品预处理方法取一定量组织，吸湿后称重，取0.1g置于1.5mL离心管中，按1:2加入生理盐水，在冰浴条件下匀浆器匀浆，使其分散成组织匀浆，精密吸取20（HiL,加入5ml离心管中,加入200匹内标溶液，加入200皿 甲醇，800匹（氯仿：甲醇=4:1）混合溶液和 200|iL0.2mOLI磷酸二氢镂溶液（PH=9）,摇匀，漩涡混悬4min后，再离心 lOminCBOOOrmin-o取氯仿层，置50水浴上蒸干，残渣用50 L的流动相溶解，漩涡 21山西医科大学硕士学位论文混悬3min后，SOOOr-min1离心5min后，取20p,L进样。3.2 色谱条件分析柱：DiamonsiLODS（250mm10)o表4-1各个组织样品的标准曲线组织回归方程R心y=1.023x-0.064R=0.970月干y=0.847x-0.02R=0.999肾y=0.588x+0.15R=0.993脑产0.631x+0.002R=0.990肺y=0.994x-0.0075R=0.995脾y=0.281x-0.004R=0.9983.3.3 稳定性实验将一定量阿霉素标准品加入空白组织中，配置成终浓度为Wg,mL的样品，按照“组 织生物样品的预处理项下操作后于-4、-20、室温放置，分别于0、8、24、72h取出 测其浓度，每一浓度5样本分析，并以阿霉素与内表峰面积比考察样品的稳定性，其稳定 性如表4-2o3.3.4 精密度试验将阿霉素质控工作液加入空白组织匀浆中，分别配制成低、中、高3个浓度(0.1、1.0、10.0NgmL-i)的质控样品，按组织样品处理方法操作后进样分析，每个浓度同日内连续测定 5次，连续3日内重复3次，并以当天的标准曲线标定样品的浓度，其精密度如表4-3。3.3.5 回收率试验取大鼠空白组织匀浆IOOrL置冰浴的带塞尖底试管中，分别加入一定浓度的阿霉素 标准溶液，配成0.1、1.0、10.0慝皿口三个浓度，各取五份，除不加内标外，按“组织生 物样品的预处理”操作，测得样品回收率如表4-4。23山西医科大学硕士学位论文表4-2各个组织样品的稳定性组织（IpigmL）条件RSD(%)-42.60心-203.10室温2.30-42.70月干-203.70室温2.10-42.30肾-204.10室温2.20-43.40肺-203.30室温2.80-42.60脾-203.90室温2.40-44.60脑-205.30室温3.3024山西医科大学硕士学位论文表4-3各组织样品的精密度组织浓度(VgmL/)日内精密度RSD(%)N=5日间精密度RSD(%)N=30.104.316.84心1.001.942.1510.04.183.900.103.288.12肝1.001.261.6010.01.481.400.108.267.51肾1.004.324.6010.02.342.650.109.5710.0肺1.003.156.1810.01.291.520.103.162.32脑1.002.303.1710.01.512.230.102.781.91月卑1.003.104.6210.01.672.4925山西医科大学硕士学位论文表4-4组织样品回收率组织浓度提取回收率()0.1075.5心1.0076.110.083.40.1083.3月干1.0086.310.088.40.1082.6肾1.0081.810.079.60.1076.1肺1.0073.410.078.30.1074.5脾1.0077.110.079.00.160.5脑1.067.31075.14白花前胡水提物对阿霉素在大鼠体内组织分布的影响研究例也4.1 给药方式及给药剂量本试验采用大鼠尾静脉注射与灌胃给药，单次灌胃白花钱胡水体物的量为高剂量6g kg-1,阿霉素尾静脉的剂量为Smg-kg-1 o4.2 给药方案32只SD大鼠，体重200g左右，随机分成两组，每组16只。阿霉素组连续灌胃七 天生理盐水，白花前胡水体物+阿霉素组按6g剂量连续灌胃白花前胡水提物七天，第 七天灌胃半小时后，经尾筋脉注射阿霉素8mg白屋，于给药后0.5h、2h、4h、6h分别用 驱血法处死各组大鼠中的4只，切除心、肝、肾、肺、脾、脑，按“组织生物样品的预处 26山西医科大学硕士学位论文理”的方法操作进样。4.2 组织样品测定取上述采集的组织样品，按“组织生物样品的预处理的方法操作进样测定。4.3 测定结果各时间点测定各个组织中阿霉素的浓度，结果见表4-5,图4-24-7。表4-5不同组织在不同时间点的阿霉素浓度(RgOlg-i)组织时间(h)0.5246心空白组1.130.190.450.050.850.180.740.26实验组2.220.440.500.200.940.280.780.13月干空白组1.280.440.490.120.450.090.350.14实验组1.470.460.530.230.480.130.400.12脾空白组1.070.160.360.070.570.140.320.17实验组1.260.420.400.020.500.130.380.13月市空白组0.960.390.360.140.54i0.060.220.08实验组1.000.220.480.140.460.170.270.06肾空白组1.640.161.560.181.000.230.960.10实验组2.650.641.610.111.100.260.990.17脑空白组0.860.140.300.070.19i0.030.160.03实验组0.970.410.390.060.260.090.200.042 1 8 6 4 2 0L 又 一jce.g ft a忸 谈脑中阿霉素的浓度图4-2大鼠静注27山西医科大学硕士学位论文Smg-kg1阿霉素后脑中药物浓度比较脾中阿霉素的浓度864218642011 11 11 11(一，W.3 图4-3大鼠静注8mg阿霉素后脾中药物浓度比较肝脏中阿霉素的浓度5 2 5 1 5 02.L S(一jmODZL)翻修图4-4大鼠静注Smg kg-1阿霉素后肝脏中药物浓度比较28山西医科大