梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程.doc

(完整word)梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程
梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程
1 检验申请
单独检验项目申请：TPPA；组合项目申请：RPR+TPPA，临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理
2。1 标本采集
2。1。1 常规静脉采血约2 ml,不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。
2。1。2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.8 下列标本为不合格标本
2。1。8。1 标本量不足。
2。1。8。2 严重溶血、严重浑浊的标本。
2。1.8。3 无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.8。4 其他如标识涂改、标本试管破裂等.
2。2 标本保存
2。2.1 标本保存时间：立即测定或放置2～8℃冰箱内。
2.2。2 已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。
3、方法原理
凝集法。将梅毒的精制菌体成分包被在人工载体明胶离子上。这种致敏离子和样品中的梅毒螺旋体抗体进反应发生凝集,产生粒子凝集反应，由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体抗体，并且可用来测定抗体效价。
4、试剂及其他用品准备
溶解液8ml/瓶×1，血清稀释液60ml/瓶×1，致敏粒子（冷冻干燥） 0。6ml/瓶×5，未致敏粒子 (冷冻干燥) 0.6ml/瓶×5，阳性对照血清 (液状） 0.6ml/瓶×5。
5 质控品与室内质控规则
5。1 质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。
5。2　质控品测定：在每一批标本中测定阴性和阳性对照各一次。
5。3 质控规则：阴性和阳性对照符合即可。
5.4 如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。
6操作步骤
6。1将血清稀释液滴入微量反应板第1孔中,共计4滴(100ul)，从第2孔至最后一孔各滴入1滴(25ul）.
6.2吸取样品25ul至第1孔中。然后以2n 的方式从第1孔稀释至最后一孔.
　6。3用试剂盒中提供的滴管在第3孔中滴入1滴(25ul）未致敏粒子，从第4孔至最后一孔滴入1滴（25ul）致敏粒子。
　6。4用平板混合器以不会导致微量反应板内容物溅出的强度混合30秒钟，加盖后于室温（15-30℃）下静置，2小时后,观察结果.另外，即使静置至次日也不会影响其判定结果。
孔 号
1 2 3 4 5 6
血清稀释液（ul）

样本血清(ul)
100 25 25 25 25 25
}→ ｝→ ｝→ ｝→ ｝→弃取
25 25 25 25 25 25
血清稀释倍数
1∶5 1∶10 1∶20 1∶40 1∶80 1∶160
未致敏粒子
25
致敏粒子
　 25 25 　 25
最终稀释度
　　　 1∶40 1∶80 1∶160 1∶320
7 结果判断
7。1。反应图像的判定：
　　粒子成纽扣状聚集，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形　　（—)
粒子形成小环状，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形　　　（±)
粒子环明显变大,其外周边缘不均匀且杂乱地凝集在周围　（＋）
产生均一的凝集，凝集粒子在底部整体上呈膜状廷展　　　（++)
7.2.判定基准
阳性：未致敏粒子（最终稀释倍数1：40)的反应图象判定为（-）,
致敏离子（最终稀释倍数1：80）的反应图象判定为（+)时，最终判定为阳性，显示出反应图象为(+）时的最终稀释倍数作为抗体效价。
阴性：无论未致敏粒子呈现何种反应图象，只要致敏粒子的反应图象　显示为（-）时，最终判定即为阴性。
保留：未致敏粒子（最终稀释倍数1：40）的反应图象判定为（-）且致敏粒子（最终稀释倍数1：80）的反应图象为（±）时，最终判定为保留。保留结果此次报告以阴性报告，并可要求病人复查或定期之后来复查且在报告单备注栏中注明建议隔一段时间复查。
8。注意事项
8。1。样品中如果存在红细胞等其他有形成分,会给反应带来不便，所以应在离心除去之后再进行检查。血清样品即使钝化也不会影响检查结果.
8.2。致敏粒子以及未致敏粒子在使用之前均应该混合均匀后再使用。
8。3。微量反应板中的内容物充分混合后再静置。
8。4.反应静置过程中，一定要对微量反应板加盖并禁止振摇。
8.5。本试剂用来测定样品中的梅毒（TP)抗体效价，而不是直接用来测定梅毒TP。在判定为抗体阳性的情况下,请结其他的检查结果以及临床症状来进行综合判断。
8。6梅毒TP感染初期,有可能不产生抗体，或虽然产生抗体但数量很少的情况。如果已被怀疑为感染时，即使本试剂的判定结果为阴性,也要经过一段时间再进行检查并与其他的检查(使用梅毒脂质抗原进行检查,FTA—ABS试验等)结果和临床症状结全起来加以综合判断。
9 结果审核以及分析与相关项目的联系
9。1 由资深专业人员负责检验结果的审核.
9.2 认真审核每一个测定结果，审核者对发出报告结果的准确性和可靠性负责,并在报告单的审核者处签名。
9.3 相关项目：如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因.
10 有关引用程序与文件
10。1　检验结果审核程序。
10。2　标本送检和接收程序.
11 参考文献
11.1 陆永绥，张伟民主编。 临床检验管理与技术规程。 杭州:浙江大学出版社, 2004.
11。2 梅毒螺旋体抗体TPPA测定测定试剂说明书.

编写
制定日期
审核
审核日期：
核准
执行日期
李永臣
2010-09-15
李永臣
2011-07-01
章林华
2011-07-01