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5/26/2024-page 1CONTROL YOUR ENVIRONMENTVITEK新新 一一 代代1.5/26/2024-page 2l全自全自动动化的微生物分析化的微生物分析仪仪l独特独特试试卡卡设计设计l简单简单、标标准化方法准化方法l可靠可靠结结果果l完整的完整的统计统计功能功能新新 一一 代代 VITEK2.5/26/2024-page 3n简单简单的操作流程的操作流程n操作人員重复性好操作人員重复性好n不同不同实验实验室可室可获获重复性重复性高的高的结结果果n符合符合质质量保量保证证体系体系VITEK检测流程流程3.5/26/2024-page 4开机程序开机程序1、顺序打开稳压器、不间断电源、打印机、显示器电源开关2、打开VITEK主机顶上的小门，启动箱内大开关（POWER），启动大开关旁的小开关（Battery）3、启动电脑主机开关，屏幕会出现“LOGIN:”画面，这时输入：“supv”，回车（supv四字母为小写），屏幕 出现“Password”，键入“supv”，回车（supv四字母为小写，且输入的supv四个英文字母不会显示在屏幕上。）4、稍候出现主菜单，接着出现一红色警告视窗，点击红色视窗左下方的OK键将该视窗关闭。5、鼠标左键点击左上角主菜单的VITEK键，进入VITEK视窗，点击READER键，选择Status菜单，点击 PROCERSS ON6、鉴定仪状态由“NOT PROCESSING”变为“PROCESSING，NEXT READ A AT XX：XX”，表明开机成功。VITEKVITEK 开机程序开机程序4.5/26/2024-page 5关机程序关机程序1、检查卡片状态：在VITEK STATUS窗，查看A、B、C、D架的所有位置卡片的状况，确定所有卡片的鉴定实验已完成，并已打印出结果。2、终止检测程序：在VITEK STATUS视窗点击READER，选择Status，点击PROCESS OFF，留意检测仪状态由“Processing”变为“Not Processing”，表示已停止鉴定程序。切记：一定先执行PROCESS OFF程序，才可以执行关机程序！3、执行关机程序：退出到Main Menu(主菜单)，点击SYSTEM，选择“SYSTEM MAINTENANCE”，选择“STOP THE SYSTEM”，点击左下方的EXECUTE键，系统完成关机程序后，关闭电脑主机开关（白色）。4、按下列顺序关闭外围设备：1）VITEK孵育/检测箱(打开检测器顶上的小门,关闭Battery开关,关闭POWER开关)2）显示器；3)打印机；4)不间断电源（有圆圈标记的小按钮）；5)稳压器VITEKVITEK 关机程序关机程序5.5/26/2024-page 6lGNI+卡片卡片l肠肠道杆菌道杆菌l非非发发酵菌酵菌lNFC 卡片卡片l非非发发酵菌酵菌lANI 卡片卡片l梭菌属梭菌属l拟拟杆菌属杆菌属试试 卡卡 种种 类类nYBC 卡片卡片l酵母菌（酵母菌（念珠菌念珠菌）nBAC 卡片卡片l芽胞杆菌芽胞杆菌nGPI 卡片卡片l葡萄球菌葡萄球菌l链链球菌球菌l李斯特菌、棒状杆菌李斯特菌、棒状杆菌VITEK6.5/26/2024-page 7lBIO 卡片卡片l液体液体內內的的细细菌菌计计数数 VITEK其其 他他 试试 卡卡7.5/26/2024-page 8定向定向试验试验l革革兰氏染色氏染色l接触接触酶试验l氧化氧化酶试验8.5/26/2024-page 9革革兰氏染色氏染色原理原理原理原理:检查细菌菌细胞壁的渗透性胞壁的渗透性单层单层厚厚厚厚钛钛聚糖聚糖聚糖聚糖细细胞壁胞壁胞壁胞壁不不不不紧紧密外壁密外壁密外壁密外壁层层(透乙醇透乙醇透乙醇透乙醇)+薄内壁薄内壁薄内壁薄内壁层钛层钛聚糖聚糖聚糖聚糖 革革兰氏阳性氏阳性革革兰氏阴性氏阴性 9.5/26/2024-page 10-在在细细菌学里最普遍的染色方法菌学里最普遍的染色方法革革兰兰氏染色液氏染色液步步骤G()G()-染色前，所有细胞是透明的-结晶紫着色後用碘增加染料与菌体结合-乙醇从G()菌体洗脱结晶紫-用番红液复染，革兰氏阴性菌呈粉红色，革兰氏阳性菌呈兰紫色10.5/26/2024-page 11COLOR GRAM 2 革革兰氏染色氏染色剂革革兰氏阳性氏阳性 紫色紫色紫色紫色细细菌菌菌菌革革兰氏阴性氏阴性 粉粉粉粉红红色色色色细细菌菌菌菌11.5/26/2024-page 12Color Gram 2 革革兰兰氏染色氏染色剂剂即可用即可用试剂试剂-R1=草酸草酸盐盐-结结晶紫溶液晶紫溶液-R2=稳稳定化定化卢卢哥氏哥氏-PVP液液-R3=脱色脱色剂剂-R4=番番红红液液技技术术要点要点-使用新使用新鲜鲜培养培养细细菌菌(24-48小小时时)12.5/26/2024-page 13Color Gram 2 染色染色剂剂l试剂组试剂组成成 R1=240 ml x 1 R2=240 ml x 1 R3=240 ml x 1 R4=240 ml x 1l所有所有试剂带喷试剂带喷咀咀l於於18-25C储储存存13.5/26/2024-page 14革革兰兰氏染色液氏染色液 2(Color Gram 2)-特性特性m稳稳定化的碘液定化的碘液PVP(聚聚氯氯乙乙烯烯吡咯吡咯烷酮烷酮)可以防止因碘可以防止因碘挥挥发发而而变质变质，同，同时也增也增强了媒染效果。了媒染效果。更容易分更容易分别G()及及G(-)菌菌m高高质量的量的结晶紫和番晶紫和番红，无沉淀。，无沉淀。14.5/26/2024-page 15接触接触酶试验15.5/26/2024-page 16接触接触酶试验用于分辨葡萄球菌及用于分辨葡萄球菌及用于分辨葡萄球菌及用于分辨葡萄球菌及链链球菌球菌球菌球菌葡萄球菌葡萄球菌革革兰氏阳性球菌氏阳性球菌链球菌球菌接触接触酶接触接触酶-+16.5/26/2024-page 17接触接触酶H2O2 H2O +O2接触接触酶试验传统传统方法方法方法方法:=接触接触酶+=接触接触酶+原理原理原理原理:不得用于血平板的菌落上不得用于血平板的菌落上(红血菌反血菌反应)试管法管法玻片法玻片法H2O2O2菌落菌落17.5/26/2024-page 18接触接触酶酶显显色色剂剂玻片法玻片法试管法管法18.5/26/2024-page 19ID Color Catalase 接触接触酶酶试剂试剂容容许许於平板於平板(包括血平板包括血平板)上作直接上作直接检测检测组组成成:-增稠增稠剂剂:高粘度集中所高粘度集中所产产生的气泡生的气泡,防止防止试剂扩试剂扩散散-Evans兰兰:兰色使色使结果更容易果更容易阅读-玻片法玻片法-直接在平板上直接在平板上测试测试19.5/26/2024-page 20ID COLOR CATALASE 接触接触酶试剂玻片法玻片法玻片法玻片法:将待将待检菌落乳化於一滴菌落乳化於一滴试剂中中直接平板直接平板直接平板直接平板测试测试:将一滴将一滴试剂直接滴於平板上的菌落直接滴於平板上的菌落l步步骤:或或或或即即时产生气泡生气泡(5 秒内秒内)代表阳性代表阳性结果。果。20.5/26/2024-page 21鉴鉴定用接触定用接触酶酶显显色色剂剂接触接触酶试验是是细菌菌鉴定中的一个重要反定中的一个重要反应。由於。由於传统方法的弱阳性方法的弱阳性结果，果，这个个试验没有得到充分没有得到充分应用。用。21.5/26/2024-page 22ID Color Catalase产品品规格格22.5/26/2024-page 23氧化氧化酶试验23.5/26/2024-page 24氧化氧化酶试验用于分辨用于分辨用于分辨用于分辨肠肠道杆菌及非道杆菌及非道杆菌及非道杆菌及非发酶发酶菌菌菌菌非非发酵菌酵菌革革兰氏阴性杆菌氏阴性杆菌阳道杆菌阳道杆菌氧化氧化酶氧化氧化酶-+24.5/26/2024-page 25氧化氧化酶酶试验试验-原原 理理:TMPD氧化氧化 TMPD氧氧 化化 酶(TMPD=2甲基一甲基一对对一苯撑二胺一苯撑二胺)l货号号:55922l纸片片:浸泡浸泡饱和和TMPDl储存存:2-8C於暗於暗处l有效期有效期:1年年l组成成:2x30片小瓶装片小瓶装 纸片片l货号号:70460l储存存:2-30C於暗於暗处l组成成:1个小瓶个小瓶 液体液体试剂(深紫色深紫色)(透明透明)25.5/26/2024-page 26氧化氧化酶酶试验试验2 2 个方法个方法个方法个方法:纸纸片法片法片法片法 液体液体液体液体试剂试剂 26.5/26/2024-page 27氧化氧化酶酶纸纸片法片法27.5/26/2024-page 28VITEK 方法方法 菌菌 种种接种物的混接种物的混浊浊度度鉴鉴 定定 卡卡培培 养养 条条 件件革革兰兰氏阴性杆菌氏阴性杆菌1McF1McF革革兰兰氏阴性菌氏阴性菌(GNI+)(GNI+)标记标记：氧化：氧化酶酶VitekVitek35.535.50 0 C C葡萄球菌葡萄球菌0.5 McF0.5 McF革革兰兰氏阳性菌氏阳性菌(GPI)(GPI)标记标记：接触：接触酶酶、凝固、凝固酶VitekVitek35.535.50 0 C C链链球菌球菌0.5 McF0.5 McF革革兰兰氏阳性菌氏阳性菌(GPI)(GPI)标记标记：溶血溶血VitekVitek35.535.50 0 C C酵母菌酵母菌2 McF2 McF(YBC)(YBC)注：注：48h48h培养培养其它培养箱其它培养箱30 30 0 0C C，24-48h24-48h非非发发酵杆菌酵杆菌1 McF1 McF非非发发酵菌酵菌(NFC)(NFC)VitekVitek35.535.50 0 C C厌厌氧菌氧菌3 McF3 McF厌厌氧菌氧菌(ANI)(ANI)其它培养箱其它培养箱37370 0 C C，24-48h24-48h芽芽孢孢杆菌杆菌0.5 McF0.5 McF芽芽孢孢杆菌杆菌(BAC)(BAC)注：注：55550 0 C C培养培养VitekVitek：35.535.50 0 C C其它培养箱其它培养箱：55550 0 C C24 h24 h28.5/26/2024-page 29样本操作步本操作步骤及注意部分及注意部分 选取取纯菌落菌落 选取取纯的菌落，若不的菌落，若不纯需二次分需二次分纯 不可用含抑制不可用含抑制剂的培养基，取菌落的培养基，取菌落时不要取到培养基不要取到培养基 培养培养时间不要太不要太长，以免菌落老化，以免菌落老化，18hr至至24hr 用用0.45%盐水稀水稀释 盐水用完后水用完后2-8C冷藏冷藏 盐水不可重复水不可重复杀菌超菌超过二次以上（二次以上（121 C，15分分钟）盐水及工具最好每隔二至三日水及工具最好每隔二至三日杀菌一次菌一次 比比浊测浓度度 试管保持透明度管保持透明度从冷藏取出从冷藏取出试卡，要先放在室温一段卡，要先放在室温一段 活菌活菌浓度准确，尽量度准确，尽量缩短活菌停留在短活菌停留在盐水的水的时间时间，直到温度平衡才将包装拆开，直到温度平衡才将包装拆开填号填号码时要清晰，不要填出界限要清晰，不要填出界限 充填充填 吸管要弄吸管要弄紧 吸管接触吸管接触样品部分尽量不要触及其他品部分尽量不要触及其他东西，防止西，防止污染染 查看看样本是否已本是否已经充填充填 封口封口 封口后，封口后，查看各个小池内是否有气泡看各个小池内是否有气泡 检查所有要填在所有要填在试卡上的卡上的资料是否完整料是否完整 放入培养箱放入培养箱/读数箱内数箱内放入前，放入前，查看培养看培养/读数箱是否正在工作之中数箱是否正在工作之中 将将试卡放入最快被卡放入最快被读数的架子内数的架子内 箱箱门不要开启太久，以免箱内之温度降低不要开启太久，以免箱内之温度降低培养箱后的培养箱后的风扇及下面之隔扇及下面之隔尘网需网需经常清理以防影响其散温效果，使常清理以防影响其散温效果，使读数箱温度数箱温度过高高29.5/26/2024-page 30革革兰兰氏阴性杆菌氏阴性杆菌鉴定定革革兰兰氏阴性杆菌氏阴性杆菌氧化氧化酶酶+非非发酵菌酵菌鉴NFC革革兰氏阴性杆菌氏阴性杆菌鉴定定GNI+氧化氧化酶酶-GNI+鉴定卡定卡鉴定不了定不了 30.5/26/2024-page 31GNI+卡卡预期期应用用 l革革兰氏阴性杆菌氏阴性杆菌鉴定定(肠杆菌科杆菌科Enterobacteriaceae)l非非发酵革酵革兰氏阴性杆菌氏阴性杆菌鉴定定 氧化氧化酶阳性阳性(假假单胞菌属胞菌属Pseudomonas)l发酵革酵革兰氏阴性杆菌氏阴性杆菌鉴定定 氧化氧化酶阳性阳性(弧菌科弧菌科Vibrionaceae)31.5/26/2024-page 32GNI+试剂卡卡说明明资料分析料分析l GNI+卡放入卡放入读数器数器/孵育器后，在孵育器后，在212小小时可可产生最后生最后鉴定定报告。告。l在在报告上提供每一生化反告上提供每一生化反应结果，并列出二个最果，并列出二个最有可能的有可能的鉴定定结果以及与之相果以及与之相应的的标准化百分概准化百分概率。率。l在某些情况下系在某些情况下系统不能正常地作出最后不能正常地作出最后鉴定，定，这时在在报告上会打印出一条解告上会打印出一条解释或或说明明这一情况的一情况的信息。信息。32.5/26/2024-page 33l在在GNI+卡中每一小卡中每一小时就就测得一次得一次读数并数并储存在存在VITEK计算机中直到最后算机中直到最后报告告产生。生。l每一孔的百分每一孔的百分变化化值与其相与其相应的的阈值相比相比较，等于高于，等于高于阈值为阳性反阳性反应(+)。反之，低于。反之，低于阈值，则为阴性反阴性反应(-)。到下一次。到下一次读数后百分数后百分变化化值再一次再一次进行行计算，并与算，并与阈值相比相比较。l对于脱于脱羧酶孔孔试验结果必果必须将将测定孔定孔变化百分率减去阴化百分率减去阴性性对照孔照孔变化百分率后才能确定。如果待化百分率后才能确定。如果待测菌是一个不菌是一个不发酵葡萄的革酵葡萄的革兰氏阴性杆菌，乳糖反氏阴性杆菌，乳糖反应孔要与两个孔要与两个临界界值相比相比较，较低低值用于确定用于确定1%乳糖反乳糖反应(LAC)，较高高值用于确定用于确定10%乳糖反乳糖反应(TLA)。氧化氧化酶反反应作作为一个独立一个独立试验孔。孔。GNI+试剂卡卡说明明阳性阳性/阴性反阴性反应确定确定 33.5/26/2024-page 34l确定确定细菌最后菌最后鉴定可能在定可能在28h后（葡萄糖后（葡萄糖发酵菌）酵菌）或或412h后（葡萄糖不后（葡萄糖不发酵菌）作出。不管怎酵菌）作出。不管怎样，如果葡萄糖孔在如果葡萄糖孔在8h后后变为阳性，均即可作出阳性，均即可作出鉴定。定。GNI+试剂卡卡说明明确定确定细菌菌鉴定定34.5/26/2024-page 35GNI+试剂卡卡说明明确定确定细菌菌鉴定定l有些葡萄糖有些葡萄糖发酵菌要在酵菌要在6h后才能作出后才能作出鉴定。定。这些些菌是：嗜水气菌是：嗜水气单胞、豚鼠气胞、豚鼠气单胞、胞、维罗纳气气单胞胞温和生物温和生物变种、克种、克吕沃沃尔氏菌属、美人氏菌属、美人鱼发光杆光杆菌、痢疾志菌、痢疾志贺氏菌、解藻氏菌、解藻朊酸弧菌、河流弧菌、酸弧菌、河流弧菌、创伤弧菌、小弧菌、小肠结肠炎耶炎耶尔森氏菌、弗氏耶森氏菌、弗氏耶尔森森氏菌、克氏耶氏菌、克氏耶尔森氏菌和中森氏菌和中间耶耶尔森氏菌。森氏菌。35.5/26/2024-page 36l有些葡萄糖非有些葡萄糖非发酵菌要在酵菌要在12h后才能作出后才能作出鉴定。定。这些菌是：推些菌是：推测为鲁氏氏/琼氏不氏不动杆菌、木糖氧化杆菌、木糖氧化产碱杆菌木糖氧化碱杆菌木糖氧化亚种、支气管炎博德氏菌、鼻疽种、支气管炎博德氏菌、鼻疽伯克霍伯克霍尔德氏菌、假鼻疽伯克霍德氏菌、假鼻疽伯克霍尔德氏菌、德氏菌、产吲哚黄杆菌（黄杆菌（吲哚+）/泡囊短波泡囊短波单胞菌（胞菌（吲哚）、）、脑膜膜脓毒性金黄杆菌（毒性金黄杆菌（吲哚+）、气味黄杆菌、非）、气味黄杆菌、非发酵革酵革兰氏阴性杆菌（不分解糖的和分解糖的）、氏阴性杆菌（不分解糖的和分解糖的）、人人苍白杆菌、白杆菌、门多多萨假假单胞菌、施氏假胞菌、施氏假单胞菌、胞菌、多食鞘氨醇杆菌和解藻多食鞘氨醇杆菌和解藻朊酸弧菌（注意：有些解酸弧菌（注意：有些解藻藻朊酸弧菌的菌株在酸弧菌的菌株在GNI+卡中不卡中不发酵葡萄糖）。酵葡萄糖）。GNI+试剂卡卡说明明确定确定细菌菌鉴定定36.5/26/2024-page 37GNI+试剂卡卡说明明确定确定细菌菌鉴定定l一旦首一旦首选细菌通菌通过相似相似筛选，标准化百分概率需准化百分概率需经检查是否大于或等于是否大于或等于90%，如果小于，如果小于90%，卡片，卡片应继续培养培养和和鉴定。定。l只有当首只有当首选细菌既通菌既通过相似相似值筛选，也通，也通过了了标准百分准百分概率的概率的检查，最后，最后鉴定定报告才可能告才可能产生。生。l如果首如果首选菌相似菌相似绝对值仍小于相似仍小于相似筛选值，则在在报告告单上会出上会出现“unidentified organism”（不能不能鉴定的定的细菌）菌）。当首。当首选菌的菌的绝对相似相似值通通过筛选，首，首选和次和次选菌菌名菌菌名以及相以及相应的的标准化概率就会打印出来。准化概率就会打印出来。37.5/26/2024-page 38GNI+试剂卡卡说明明特殊信息特殊信息 几种典型的特殊信息可能会出几种典型的特殊信息可能会出现在在GNI+卡的卡的最后最后鉴定定报告告单上。上。这些特殊信息解些特殊信息解释为什么什么鉴定不成功，或定不成功，或阐述合格述合格鉴定的定的标准。准。38.5/26/2024-page 39GNI+试剂卡卡说明明特殊信息特殊信息 由信息代替一个由信息代替一个鉴定定结果，包括下面二条：果，包括下面二条：1 Non-viable organism（没有活的（没有活的细菌）菌）。在在GNI+卡中全部卡中全部生化生化试验是阴性。可按如下步是阴性。可按如下步骤从卡第三孔中（从卡第三孔中（#3）吸出）吸出样本本转种在血液种在血液琼脂平皿脂平皿检查细菌的活性。菌的活性。a)异丙酵或异丙酵或70%酒清消毒卡片复盖膜酒清消毒卡片复盖膜,并使其自然干燥。并使其自然干燥。b)用无菌加用无菌加样头安装在加安装在加样器上器上,或或Im1无菌注射器，穿无菌注射器，穿过 膜吸出膜吸出0.1-0.2ml样品。品。c）样品加于血品加于血琼脂上划脂上划线，置，置35-37 24小小时培养。培养。39.5/26/2024-page 40GNI+试剂卡卡说明明特殊信息特殊信息2 Unidentified Organism（不不能能鉴定定的的细菌菌）：在在GNI+卡卡中中试验结果果不不能能充充分分相相似似数数据据库中中任任何何一一个个种种或或属属，因因此此不不能能得得到到最最后后鉴定定结果果。在在以以下下几几种种情情况况能能产生生这一一信息：信息：a)太太多多的的阳阳性性结果果。通通常常出出现在在接接种种物物是是混混合合菌菌株株或或 在在试验孔孔中中有有气气泡泡。可可从从卡卡片片第第3孔孔吸吸出出样品品于于5%绵羊羊血血液液琼脂平皿或其他合适的培养基。脂平皿或其他合适的培养基。b)太太少少阳阳性性结果果。这常常常常由由于于所所配配制制菌菌悬液液浓度度低低于于接接种种所所要要求求的的浓度度（不不在在VITEK比比浊计的的适适当当色色区区内内）或或由由于于培培养养物物过于于陈旧旧菌菌龄超超过24小小时而而使使降降低低或或失失去去代代谢活活力。力。c)待待检菌是罕菌是罕见特殊生物型或种，不包括在特殊生物型或种，不包括在现有数据有数据库中。中。40.5/26/2024-page 41GNI+试剂卡卡说明明限定信息限定信息lGood Confidence,Marginal Separation（好好的的可可信信性性但但难于于区区分分）:生生化化反反应结果果同同时相相似似于于数数据据库中中两两个个菌菌，并并且且产生生可可接接受受的的绝对相相似似值。但但二二者者间难于于区区分分，要要外外加加一一些些试验进一一步步确确定定其其最后最后鉴定（技定（技术手册手册GNI+表表4）lQuestionable 可可疑疑的的生生物物型型(Biopattern):GNI+卡卡的的生生化化试验结果果不不典典型型，勉勉强相相似似于于数数据据库中中两两个个种种或或属属。分分离离鉴定定结果果可可能能是是GNI+鉴定定报告告上未列出的第三种菌（上未列出的第三种菌（taxon)。41.5/26/2024-page 42GNI+试剂卡卡说明明限定信息限定信息lSerology Confirmation Required(需要用血清需要用血清学方法学方法证实)。生化生化鉴定定结果需要血清学方法确果需要血清学方法确认。当。当GNI+卡卡鉴定定报告的首告的首选菌（或次菌（或次选菌概率百分菌概率百分值大于大于10%）是下列）是下列细菌菌时，在最，在最终报告中会出告中会出现这一信息：一信息：亚利桑那沙利桑那沙门氏菌（氏菌（Salmonella aerizonae）沙沙门氏菌某种（氏菌某种（Salmonella species）伤寒沙寒沙门氏菌（氏菌（Salmonella typhi）痢疾志痢疾志贺氏菌（氏菌（Shigella dysensteriae）宋内氏痢疾杆菌（宋内氏痢疾杆菌（Shigella sonnei）志志贺氏菌属某种氏菌属某种(Shigella species)霍乱弧菌霍乱弧菌(Vibrio cholerae)42.5/26/2024-page 43GNI+试剂卡卡说明明限定信息限定信息lConfirm with 6.5%NaCl(6.5%NaCl证实试验)。当当GNI+卡中最后卡中最后鉴定定报告首告首选菌是河流弧菌（或菌是河流弧菌（或次次选菌菌标准化百分概率大于准化百分概率大于10%时）报告上会出告上会出现这条信息。某些气条信息。某些气单胞菌属的菌种会被胞菌属的菌种会被误鉴定定为河流弧菌肯定的河流弧菌肯定的鉴别试验是用是用6.5%NaCl生生长，河流弧菌河流弧菌6.5%NaCl生生长阳性，而气阳性，而气单胞菌胞菌6.5%NaCl生生长阴性。阴性。43.5/26/2024-page 44GNI+试剂卡卡说明明补充信息充信息l在技在技术手册手册GNI+卡片卡片资料的表料的表4中，列出了出中，列出了出现Good Confidence,Marginal Separation信息信息该部部分中需要分中需要进行外加行外加试验的名称和相的名称和相应的的结果（表果（表中的数字中的数字为各菌种各菌种该生化生化试验的阳性百分率）。的阳性百分率）。44.5/26/2024-page 45GNI+试剂卡卡说明明补充信息充信息l出出现下列信息需参下列信息需参阅技技术手册，按照手册提供的手册，按照手册提供的补充充试验将它将它们区分开：区分开：Enterobacter cloacae(motility+)/asburiae(motility-)Klebsiella Pneumoniae(indole-)/osytoca(indole+)Proteus vulgaris(indole+)/penneri(indole-)Chryseobacterium indologenes(indole+)/Brevundimonas vesicularis(indole-)45.5/26/2024-page 46GNI+试剂卡卡说明明补充信息充信息lGNI+鉴定定报告中偶告中偶尔会出会出现如下的如下的带有有编号的注号的注释（共（共18项）：）：Note 1 Aeromonas hydrophila/caviae 出出现这些信息些信息时，请参参阅技技术手册手册46.5/26/2024-page 47如何如何处理理GNI鉴定定报告中的告中的“Unidentified Organism”l什么情况下系什么情况下系统会打印出会打印出“unidentified organism”l造成造成“unidentified organism”的原因的原因 l细菌分菌分类原理原理 l表表现形式和形式和处理方式理方式 lGNI卡所能卡所能鉴定的主要属种双岐定的主要属种双岐检索表索表 lGNI卡双岐卡双岐检索表使用方法：索表使用方法：47.5/26/2024-page 48什么情况下系什么情况下系统会打印出会打印出“unidentified organism”lVITEK系系统分分类原理是采用数原理是采用数值分分类法，其法，其“相相似性似性”，即当待，即当待检细菌在菌在鉴定卡上的反定卡上的反应结果所果所得出和生物数得出和生物数码与数据与数据库内内现存已知的存已知的资料无一料无一相似的相似的时候，系候，系统就会打印出就会打印出“unidentified organism”。48.5/26/2024-page 49造成造成“unidentified organism”的原因的原因 l 待待检细菌不是菌不是单一菌株。一菌株。l反反应卡生化小孔有气泡卡生化小孔有气泡严重干重干扰比色。比色。l菌液菌液浓度太淡或菌令太老。度太淡或菌令太老。l菌菌悬液不均匀。液不均匀。l可能某些生化反可能某些生化反应孔的孔的阈值过高或高或过低。低。l 某某些些菌菌株株在在现有有的的30项生生化化试验用用数数值分分类不不能能成功。成功。l罕罕见生物新种或不典型菌株，数据生物新种或不典型菌株，数据库缺乏缺乏资料料 49.5/26/2024-page 50细菌分菌分类原理原理 l目目前前广广泛泛采采用用的的细菌菌分分类方方法法有有二二种种，即即传统分分类法法和和数数值分分类法。法。l传统分分类法法是是按按生生物物的的共共性性和和特特性性进行行分分门别类。该法法的的基基本本原原理理是是将将生生物物的的基基本本性性质分分为主主要要的的和和次次要要的的，然然后后按按主主次次顺序序一一级一一级地地分分下下去去直直到到最最小小区区分分。双双岐岐检索索图表表就就是是根根据据这一一原原理理制制成成的的。由由于于采采用用偏偏重重性性鉴定定原原则，因因此此在在传统分分类时所所需需的的生生化化试验相相对较少少，但各但各项试验的的鉴别力力强。l数数值分分类法法以以“等等重重要要原原则”为理理论基基础，认为细菌菌的的基基本本特特征征要要同同等等对待待，全全面面分分析析，不不分分主主次次地地做做总体体比比较，进而而判判断断各各种种间的的亲远程程度度。应用用数数值分分类时为了了充充分分反反映映出出细菌菌的的基基本本特特征征，要要研研究究多多方方面面的的生生物物学学性性质。一一般般需需选择100200项生生理理生生化化指指标，逐逐一一进行行比比较才有分才有分类学意学意义。50.5/26/2024-page 51细菌分菌分类原理原理lVITEK系系统采用数采用数值分分类原理，原理，选用用30项生化生化试验，所以在某些情况下不能得到分，所以在某些情况下不能得到分类结果是可以果是可以理解的。在排除一切操作因素以外，在原有生化理解的。在排除一切操作因素以外，在原有生化特征的基特征的基础上，根据上，根据传统分分类原原则选择主要生化主要生化特征特征进行行传统分分类是可行的。是可行的。51.5/26/2024-page 52造成造成“unidentified organism”的的表表现形式和形式和处理方式理方式 l鉴定定卡卡生生化化反反应模模式式呈呈现太太多多的的阳阳性性反反应或或不不规则的的反反应模模式式。这种种情情况况常常常常由由于于待待检菌菌株株不不纯或有或有严重气泡而造成。重气泡而造成。l从第三孔生从第三孔生长对照中吸出菌照中吸出菌悬液接种于血液接种于血琼脂平脂平皿上，分区划皿上，分区划线分离出分离出单个菌落后，待第二天再个菌落后，待第二天再作作鉴定。当气泡不定。当气泡不严重重时，但菌株是，但菌株是单一的情况一的情况下可采用目下可采用目测的方法判断反的方法判断反应结果，然后根据果，然后根据Technical Bulletins中生化中生化鉴定表得出最后定表得出最后鉴定定结果。果。52.5/26/2024-page 53造成造成“unidentified organism”的的表表现形式和形式和处理方式理方式l鉴定卡内定卡内30项生化反生化反应呈呈现太少的阳性太少的阳性结果。果。l菌菌悬液太淡或菌令太老是造成液太淡或菌令太老是造成这种状况的基本原种状况的基本原因。遇此情况，首先从生因。遇此情况，首先从生长对照孔吸出菌照孔吸出菌悬液分液分离在血离在血琼脂或中国脂或中国兰培养基上，培养基上，3516-24小小时再再配制合适菌配制合适菌悬液重作液重作鉴定。定。对葡萄糖氧化的或不葡萄糖氧化的或不分解的分解的G阴性杆菌阴性杆菌应配制配制2个麦氏个麦氏单位菌位菌悬液。液。53.5/26/2024-page 54造成造成“unidentified organism”的的表表现形式和形式和处理方式理方式l菌菌悬液不均匀，常液不均匀，常发生于待生于待检菌菌为不易乳化的粗不易乳化的粗糙型糙型细菌。菌。对于于这种种类型型细菌可配制菌可配制3个麦氏个麦氏单位位菌菌悬液，然后低速离心液，然后低速离心1-2分分钟1000转/分，然后分，然后取上清液比取上清液比浊调节到所需的到所需的浓度。度。54.5/26/2024-page 55造成造成“unidentified organism”的的表表现形式和形式和处理方式理方式l待待检菌菌落形菌菌落形态特殊，涂片染色反特殊，涂片染色反应不定，在保不定，在保证菌株菌株单一，操作合格的前提下一，操作合格的前提下应考考虑是一种新是一种新的生物型或一种不典型菌株，取新的生物型或一种不典型菌株，取新鲜分离菌落，分离菌落，常常规手段加做必要生化手段加做必要生化试验用用传统分分类法作出分法作出分类。55.5/26/2024-page 56造成造成“unidentified organism”的的表表现形式和形式和处理方式理方式l某些菌株反某些菌株反应模式非常典型的同某一分模式非常典型的同某一分类单位相位相似，但是，系似，但是，系统仍会在仍会在报告中打出告中打出“unidentified organism”。遇此情况可不必增加遇此情况可不必增加任何生化任何生化试验，用，用传统分分类法，参照双岐法，参照双岐检索表索表作出分作出分类。56.5/26/2024-page 57造成造成“unidentified organism”的的表表现形式和形式和处理方式理方式l当同一种重复多次由于相同的某几当同一种重复多次由于相同的某几项生化反生化反应不不符而符而导致致“unidentified organism”应考考虑这几几项生化生化试验的的值是否偏高或偏低是否偏高或偏低现象。象。应立即打印立即打印出出raw和和rpcts资料料进行分析并提供行分析并提供给厂家作厂家作为改改阈值的依据。的依据。57.5/26/2024-page 58GNI卡所能卡所能鉴定的主要属种双岐定的主要属种双岐检索表索表 l表表I.氧氧化化酶-，葡葡萄萄糖糖发酵酵的的革革兰氏氏阴阴性性杆杆菌菌双双岐岐检索表。索表。此表主要用于此表主要用于肠杆菌科的杆菌科的细菌。菌。l表表II.氧氧化化酶+，葡葡萄萄糖糖发酵酵的的革革兰氏氏阴阴性性杆杆菌菌双双岐岐检索表。索表。此表主要用于弧菌科各属此表主要用于弧菌科各属细菌菌鉴定。定。l表表III.氧氧化化酶+或或-，葡葡萄萄糖糖氧氧化化或或不不分分解解革革兰氏氏阴阴性杆菌双岐性杆菌双岐检索表。索表。此表主要用于非此表主要用于非发酵的革酵的革兰氏阴性杆菌的氏阴性杆菌的鉴定定58.5/26/2024-page 59GNI卡双岐卡双岐检索表使用方法：索表使用方法：l首首先先从从反反应模模式式中中OXI（氧氧化化酶），OFG及及GLU（葡葡萄萄糖糖O/F），三三孔孔反反应确确定定应查哪哪一一双双岐岐检索表。索表。l根根据据原原有有生生化化反反应表表中中找找出出检索索表表中中箭箭头标出出的的生生化化反反应，并并按按照照符符合合的的路路线继续往往下下查阅直直到到分离最小区分分离最小区分单位。位。l遇到同遇到同时用二用二项生化反生化反应来来鉴别的地方，如有一的地方，如有一项不符合，可不符合，可暂以一以一项为依据再往下依据再往下进行。行。l多多处不能相符的不能相符的细菌菌应查阅“raw”资料并用常料并用常规法重复法重复该试验后再作决定，避免后再作决定，避免计算机算机读数数错误。59.5/26/2024-page 60GNI GNI 卡卡接种方法接种方法培养基培养基=TSA+5%羊血羊血MacConkey琼脂脂-EMB 1.8ml Vitek 溶液溶液 1、比比浊：1 MacF(仪器器兰色范色范围内内)2、接种、接种GNI+鉴定卡定卡 3、记录：氧化：氧化酶试验（涂黑小（涂黑小圆圈）圈）Vitek 培养箱培养箱在在2-8h内出内出结果果(非非发酵革酵革兰氏氏阴性菌阴性菌4-12h)60.5/26/2024-page 61GNI GNI 及及 GNS GNS 卡的操作步卡的操作步骤 样本本 样本作划本作划线培养分培养分纯 培养培养时间18-24hr，不要超不要超过，以防老化，以防老化 分分纯菌落菌落 革革兰氏染色氏染色实验确定是革确定是革兰氏阴性菌氏阴性菌 氧化氧化酶试验 稀稀释比比浊 菌落放入菌落放入1.8ml盐水内均匀，水内均匀，调浓度度1McFarland(蓝色色)最好用最好用电子比子比浊仪量度量度 鉴定定试验 药敏敏试验 从菌液抽取从菌液抽取50 l放入使放入使馆内内 如氧化如氧化酶试验阳性，将卡片上阳性，将卡片上圆圈涂黑圈涂黑 加入加入1.8ml盐水均匀水均匀 氧化氧化酶试验阴性，阴性，则不用涂黑不用涂黑 卡片如卡片如GNI卡片一卡片一样涂黑涂黑 充填充填 封口封口 放入培养箱放入培养箱/读数箱内数箱内 放入最快被放入最快被读数的架子上数的架子上 GNI及及GNS要放在同一个架子上要放在同一个架子上61.5/26/2024-page 62l接种前：接种前：如果如果测定菌定菌类似非似非发酵杆菌酵杆菌(即生即生长缓慢，通常慢，通常氧化氧化酶阳性成极小菌落或需要阳性成极小菌落或需要48h才能得到可用菌落才能得到可用菌落的的话则接种量接种量应增加至增加至2McF。l接种后：接种后：在接种和培养之在接种和培养之间的的时间不要超不要超过20分分钟。GNI GNI 卡注意事卡注意事项62.5/26/2024-page 63l 非非发酵革酵革兰氏阴性芽氏阴性芽孢杆菌不能杆菌不能产生足生足够的阳性的阳性结果果(未定位杆菌未定位杆菌)。其。其鉴定可用非定可用非发酵菌酵菌鉴卡卡（NFC）或用不或用不发酵葡萄糖的革酵葡萄糖的革兰氏阴性杆菌所用氏阴性杆菌所用的其它常的其它常规的生化的生化测定。定。l对于不能于不能鉴定的菌，可定的菌，可查阅技技术手册中的双歧手册中的双歧检索索表表GNI GNI 卡卡结果解果解释63.5/26/2024-page 64NFC卡卡预期期应用用 l鉴定非定非发酵革酵革兰氏阴性杆菌氏阴性杆菌 根据根据对某些化学底物作某些化学底物作为唯一碳源的的同化作用唯一碳源的的同化作用l对GNI鉴定卡的主要定卡的主要补充充测定定 可可鉴定定没没有有合合适适鉴定定卡卡的的菌菌或或用用GNI+鉴定定卡卡鉴定定不不了了的的菌菌l专门用于工用于工业微生物的新微生物的新产品品 包括包括环境菌株的数据境菌株的数据库 不只适用于不只适用于临床床 有有补充充实验资料料(SRF)64.5/26/2024-page 65NFC NFC 卡卡接种方法接种方法培养基培养基=TSA+5%羊血羊血1.8ml Vitek 溶液溶液 1、比比浊：1 MacF(仪兰色范色范围内内)2、接种、接种NFC鉴定卡定卡 Vitek 培养箱培养箱在在6-8h内出内出结果果 革革兰氏阴性氏阴性/氧化氧化酶阳性的杆菌阳性的杆菌 65.5/26/2024-page 66革革兰兰氏阳性氏阳性菌（非芽菌（非芽孢杆菌）杆菌）鉴定定GPIGPIl革革兰氏阳性球菌氏阳性球菌 接触接触酶阳性：葡萄