检定菌管理规程.doc

检定菌管理规程1 目的：规范药品微生物学检定用菌的管理，确保检定菌正确发放、使用，销毁。2 范围：适用于检验用菌种的管理，包括菌种的申购、保存、传代、使用及销毁。3 职责：检定菌保管、使用人员及各有关部门对本规程的实施负责。4 参考文献：4.1 药品生产质量管理规范（2010年修订）4.2 中国药典（2015年版四部）5 定义：5.1 检定菌：是指微生物测定和其它检查用的标准菌种。5.2 标准菌株：来自认可的国内或国外菌种保藏机构。5.3 标准贮备菌株：标准菌株经过复活并在适宜的培养基中生长后，分装于菌种冻存管，采用低温冷冻干燥、液态贮存、超低温冷冻（低于-30）等方法保存。5.4 工作菌株：采用标准贮备菌株制备转种或实验用的菌株。6 规程6.1 检定菌的申购：检定菌由质量管理部根据使用情况（包括临时检验需要），列出计划，相关领导审批。6.2 由采购部向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌（标准菌种），或直接向省（市）药检所购买传代用菌种，购买时，需询问与确定菌种的代数，以便传代时控制代数。6.3 标准菌株的接收6.3.1 对新购进的标准菌株应仔细核对菌种标签、包装完整性及随菌种附有的说明书。6.3.2 包装破损的应彻底进行消毒、灭菌处理，使其不得污染其它物品。6.3.3 符合要求的，应点清数量，同时将检定菌的所有信息，填写检定菌接收、使用、销毁记录。6.4 检定菌的保存6.4.1 购买的标准菌株直接存放于2-8冰箱保存。6.4.2 工作菌种的保存：工作用菌种采用斜面低温保存法。将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至28冰箱中保存。此法仅用于工作用菌种的短期保存，菌种保存人员应定期检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，应经灭活处理后销毁。6.4.3 标准贮备菌株的保存：采用甘油冷冻管保藏法。6.4.4 菌种保存应贴菌种标签。6.5 标准贮备菌株的制备（复苏、保藏）6.5.1 菌珠的复苏6.5.1.1 将标准菌株冻干管从冰箱中取出，放至室温后使用。6.5.1.2 菌珠在打开前仔细核对标签上的内容，注意一株菌株使用一套用具，严防交叉污染。6.5.1.3 应参照标准菌株复苏说明书进行菌种复苏。用适宜的方法打开标准菌株的安瓿瓶。6.5.1.4 取少量适宜的液体培养基加至菌种管内，轻轻振摇使冻干菌块溶解。6.5.1.5 随即吸出管内菌液，接种划线到琼脂培养基上或接种到液体培养基中，在规定的温度和时间下培养，使菌种得以复苏。6.5.2 标准贮备菌株的保藏 6.5.2.1 将复苏后的培养物转种至液体培养基内，在适宜的温度和时间下进行培养。6.5.2.2 取培养好的菌悬液与甘油1:1比例进行混合，振摇均匀，用冻存管进行分装，按工作需要每种菌种分装成若干支。6.5.2.3 置冰箱超低温冷冻（低于-30）保存，作为标准贮备菌株。6.5.2.4 在冷冻管外贴上检定菌标签并及时在检定菌接收、使用、销毁记录上登记。6.6 工作菌株的制备6.6.1 甘油冻存管标准贮备菌株制备工作菌株从冰箱取出冻存管标准贮备菌株移入生物安全柜内，在室温放置20分钟后，将冻存管内的菌液接入适宜的液体培养基或琼脂培养基上，在规定的温度和时间下进行培养，作为工作菌株。6.6.2 工作菌株的传代从冰箱中取出传代用斜面工作菌株，用无菌接种环挑取适量培养物接种至适宜的液体培养基或琼脂培养基上，在规定的温度和时间下进行培养，作为下一代工作菌株。6.6.3 所有新制备的菌种管外均应贴上标签，并及时填写检定菌传代记录书。6.7 检定菌的编号6.7.1 从中国食品药品检定研究院购买的CMCC系列冻干粉标准菌株为0代菌株，其菌种编号为标准菌株标签上编号，如0代金黄色葡萄球菌标准菌种编号为“26003-4a”。6.7.2 将上述0代标准菌株转种至适宜的培养基上为复苏，复苏得到的菌种为第1代菌种。其编号为：0代标准菌株编号+复苏日期，如“26003-4a-170520”表示由第0代编号为“26003-4a”的金黄色葡萄球菌标准菌株，于2017.05.20复苏得到的第1代菌种。6.7.3 第1代复苏后的菌种转种至液体培养基制成第2代菌种为标准贮备菌株，用甘油冻存管保存。其编号为：第1代复苏后的菌株编号+G流水号（分装支数）。如 “26003-4a-170520-G1”表示由编号为“26003-4a-170520”的第1代菌种传代分装的第1只金黄色葡萄球菌甘油冻存管标准贮备菌株。6.7.4 从第2代标准贮备菌株转种至琼脂培养基上制成第3代工作菌株，其编号为：标准贮备菌株+A流水号（传代支数）；从第2代标准贮备菌株转种至液体培养基上制成第3代工作菌株，其编号为：标准贮备菌株+B流水号（传代支数）。6.7.5 可挑选斜面工作菌种长势较好的一只，在其菌种编号前特殊标记，作为传代用斜面工作菌种制备下一代工作菌种；第4代；第5代工作菌种的编号规则均遵循6.7.4编号规则。6.8 检定菌的传代、使用6.8.1 每株菌种应建立检定菌使用及传代记录，斜面菌种应根据其特性决定传代时间间隔。6.8.2 传代时（使用时）须核对编号，传代次数，传代日期，所用培养基。6.8.3 控制传代次数，根据菌种特性和实际保存情况规定最多传代次数，所用菌株传代次数不得超过5代。6.9 检定菌的销毁6.9.1 检定菌使用后或超过贮存期的应进行销毁。6.9.2 需销毁的检定菌应放入灭菌锅中121灭菌30分钟灭菌处理后，再进行清洗和其他处理。