微生物学检验重点知识总结(DOC)452.pdf

微生物学检验1 绪论绪论 1.微生物的定义与特点;微生物的分类。一、微生物的概念与特点一、微生物的概念与特点 1.微生物（microorganism）是一群个体微小，结构简单，肉眼不能直接看见，必须借助于光学显微镜或电子显微镜放大数百倍至数万倍才能观察到的微小生物的总称。2.微生物的特点 个体微小，结构简单 比表面积大，吸收多，转化快 繁殖快，代谢强 适应强，易变异 种类多，分布广 1.微生物类型 根据微生物大小、结构和组成不同分为三类型 2.病原微生物的定义病原微生物：是指能引起动物、植物或人类产生疾病的微生物。3.医学微生物学的发展简史。.微生物的发现与研究（1）列文虎克发明显微镜，最早观察到微生物；微生物学研究的创始人：巴斯德、科赫、李斯特 第一章第一章 细菌的基本性状细菌的基本性状 第一节第一节 细菌的形态与结构细菌的形态与结构 1.细菌细胞壁的结构和功能，肽聚糖结构及其化学组成；革兰阳性与革兰阴性细菌细胞壁的主要区别（一）细胞壁（一）细胞壁 化学组成与结构，革兰染色 共有组分：肽聚糖 特殊组分：G+菌、G-菌不同 革兰阳性菌细胞壁特殊组分：磷壁酸 革兰阴性菌细胞壁特殊组分：外膜 微生物学检验2 革兰阴性菌细胞壁肽聚糖:聚糖骨架、四肽侧链 2.细胞壁的功能：细胞壁的功能：（1）维持细菌固有形态和抵抗低渗作用。（2）物质交换作用。（3）屏障作用。（4）免疫作用。（5）致病作用。（6）与细菌药物敏感性有关。G+菌与菌与 G-菌细胞壁结构比较菌细胞壁结构比较 细菌细胞膜的结构与真核细胞基本相同，由磷脂和多种蛋白质组成，但不含胆固不含胆固醇醇。细菌细胞膜可形成一种特有的结构，称中介体中介体。2.细菌荚膜、鞭毛和菌毛的功能。荚膜：荚膜：功能：有抗吞噬和抵抗杀菌物质的杀菌作用，增强细菌的侵袭力，构成细菌致病力的重要因素之一。具有免疫原性。鉴别细菌和血清学分型 鞭毛鞭毛：功能：细菌的运动器官 菌毛菌毛 普通菌毛：具有黏附性，与细菌致病性有关。性菌毛：与细菌的遗传变异相关 3.芽胞结构特点、意义、与消毒灭菌的关系；细菌 L 型的形态特征、检验要点。芽芽 胞：胞：某些细菌（主要为革兰阳性杆菌）在一定条件下，细胞质浓缩脱水而形成一个折光性很强，具有多层膜状结构、通透性很低的圆形或卵圆形的小体。L 型细菌型细菌：细胞壁缺陷的细菌。常发生在作用于细胞壁的抗菌药物治疗过程中。根据细胞壁缺陷程度分：原生质体（完全失去细胞壁，见于 G+菌，仅在高渗环境中存活)原生质球（细胞壁部分缺损，见于 G-菌，在高渗或非高渗环境中均能存活）4.G+菌和 G-菌细胞壁结构的差异及其意义。第二节第二节 细菌的生理细菌的生理 细菌的生长条件,生长周期及各期的特点;IMViC 试验的组成及机制;细菌分解及合成代谢产物的种类及意义。微生物学检验3 细菌的生长繁殖细菌的生长繁殖（一）细菌生长繁殖的条件（一）细菌生长繁殖的条件 1.充足的营养物质充足的营养物质 包括：水、碳源、氮源、生长因子等。2.适宜的酸碱度适宜的酸碱度 多为 pH7.27.6。3.合适的温度合适的温度 多数病原菌为 3537。4.必要的气体环境必要的气体环境 主要是 O2和 CO2。按细菌对按细菌对 O2的需要与否，将细菌分为：的需要与否，将细菌分为：细菌生长繁殖的规律细菌生长繁殖的规律 细菌的繁殖方式：无性二分裂。无性二分裂。细菌的繁殖速度：大多数细菌 2030 分钟即可分裂一次。2.细菌的营养类型和营养机制，自氧菌与异氧菌的概念。3.细菌的生长曲线及其特点。（一）能量代谢（一）能量代谢 细菌获取能量的途径 生物氧化。生物氧化。细菌能量代谢的主要类型：（二）分解代谢（二）分解代谢 检测细菌糖分解产物的常用试验：糖发酵试验、甲基红试验、VP 试验等。检测细菌蛋白质和氨基酸分解产物的常用试验：吲哚（靛基质）试验、硫化氢试验、苯丙氨酸脱氨酶试验等。其他检测细菌分解产物的常用试验：尿素分解试验、枸橼酸盐利用试验等。第三节第三节 细菌与环境细菌与环境 微生物学检验4 1 正常菌群的概念和生理功能；条件致病菌的概念 2.正常菌群的生理功能；条件致病菌的概念 3.消毒、灭菌、无菌、无菌操作等概念；高温消毒灭菌法及其应用。二、细菌的控制二、细菌的控制（一）基本概念：消毒（一）基本概念：消毒 杀死物体或介质中病原微生物的方法。灭菌杀死物体或介质中病原微生物的方法。灭菌 杀灭物体或介质中所杀灭物体或介质中所有微生物的方法有微生物的方法。无菌。无菌 无活菌存在的状态。无菌操作无活菌存在的状态。无菌操作 防止微生物进入机体或物体的操防止微生物进入机体或物体的操作技术。防腐作技术。防腐 防止或抑制细菌生长繁殖的方法。防止或抑制细菌生长繁殖的方法。4.常用物理和化学消毒灭菌方法及其应用；噬菌体与宿主的相互关系。第二章第二章 真菌的基本性状真菌的基本性状 真菌的概念 微生物学检验5 真菌的分类真菌孢子与细菌芽胞的区别 第三章第三章 病毒的基本性状病毒的基本性状 病毒的大小 病毒的结构 病毒的增殖 病毒的复制周期 第四章第四章 微生物与感染微生物与感染 细菌致病三大因素 细菌内外毒素的区别 毒血症、菌血症、败血症、脓毒血症的概念 全身感染的类型 第二篇第二篇 微生物检验的基本技术微生物检验的基本技术 第五章第五章 细菌的检验技术细菌的检验技术 第一节第一节 细菌形态检验技术细菌形态检验技术 细菌染色的一般程序 染色标本检查的一般程序染色标本检查的一般程序 革兰氏染色法、抗酸染色法的原理、方法。2.革兰染色法【方法】第二节第二节 细菌的接种与培养技术细菌的接种与培养技术 调配溶化调 Ph过滤澄清分装灭菌检定保存 细菌在各种培养基上的生长现象及观察要点。培养基的概念 培养基的分类 第三节第三节 细菌的生化鉴定技术细菌的生化鉴定技术 糖(醇,苷)类发酵试验、O/F 试验、MR 试验、VP 试验的原理、操作、结果判定要点及其应用；I 试验、C 试验、氧化酶、触酶、血浆凝固酶氢氧化钾拉丝试验及 KIA 和 TSI 的试验原理、操作要领、观察结果要点及其应用。一、碳水化合物的代谢试验一、碳水化合物的代谢试验 1、糖（醇、苷）类发酵试验糖（醇、苷）类发酵试验 原理：多糖单糖丙酮酸酸性产物(或产气)pH 呈酸性变色(或出现气泡 2、O/F 试验试验 微生物学检验6 原理：根据细菌在分解葡萄糖的代谢过程中对氧分子需求的不同，将细菌分为氧化、发酵和产碱型三类 3、甲基红试验、甲基红试验 原理：细菌发酵葡萄糖，产生丙酮酸，进一步分解生成大量混合酸，使培养 pH 下降至 4.4以下，加入甲基红后，呈现红色反应。为甲基红试验阳性。4、V-P 试验试验 原理：细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中，乙酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰与胍基化合物结合，生成红色化合物，是为 V-P 试验阳性。5、-半乳糖苷酶试验（半乳糖苷酶试验（ONPG）原理：有的细菌可产生-半乳糖苷酶，能分解邻硝基酚-D 半乳糖苷(ONPG)而生成黄色的邻硝基苯酚，该试验也称为 ONPG 试验。6、七叶苷水解试验、七叶苷水解试验 原理：某些细菌能分解七叶苷产生葡萄糖与七叶素，七叶素与培养基中的 Fe2+结合后，形成黑色的化合物，使培养基变黑。二、蛋白质和氨基酸的代谢二、蛋白质和氨基酸的代谢 2、硫化氢试验、硫化氢试验 原理：细菌产生酶，分解含硫氨基酸生成硫化氢，硫化氢与培养基中的亚铁盐或铅盐结合生成黑色化合物。3、尿素酶试验尿素酶试验 原理：细菌产生脲酶，水解尿素生成氨和二氧化碳，培养基呈碱性反应 4、苯丙氨酸脱氨酶试验苯丙氨酸脱氨酶试验 原理：细菌产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱氨形成苯丙酮酸，苯丙酮酸与三氯化铁作用，形成绿色化合物 三、碳源利用试验三、碳源利用试验 枸橼酸盐利用试验枸橼酸盐利用试验 原理：有的细菌能利用培养基中的枸橼酸盐作为唯一的碳源，细菌在生长过程中分解枸橼酸盐产生碳酸盐，使培养基呈碱性反应 四、酶类试验四、酶类试验 1、氧化酶（细胞色素氧化酶）试验氧化酶（细胞色素氧化酶）试验 原理：某些细菌具有氧化酶（细胞色素氧化酶），能将二甲基对苯二胺或四甲基对苯二胺氧化生成红色的醌类化合物 2、触酶试验触酶试验 原理：细菌产生的触酶（过氧化氢酶）能催化过氧化氢放出初生态氧，继而形成氧分子出现气泡。3、凝固酶试验（试管法）凝固酶试验（试管法）原理：金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆中的纤维蛋白原转变为不溶性的纤维蛋白。4、凝固酶试验（玻片法）凝固酶试验（玻片法）原理：金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆中的纤维蛋白原转变为不溶性的纤维蛋白 5、硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验 原理：某些细菌能还原培养基中的硝酸盐为亚硝酸盐，亚硝酸盐与醋酸作用，生成亚硝酸，亚硝酸与试剂中的对氨基苯磺酸作用生成重氮磺酸，再与-萘胺结合，生成 N-萘胺偶氮苯磺酸(红色化合物 微生物学检验7 第六章第六章 真菌检验技术真菌检验技术 真菌感染性疾病的微生物学检查原则 第七章第七章 病毒检验技术病毒检验技术 病毒标本的采集和运送注意事项；第八章第八章 细菌对抗菌药物敏感试验细菌对抗菌药物敏感试验 药物敏感试验的基本概念、常用方法 抗菌药物敏感试验方法 纸片扩散法 稀释法 E-test 法 需氧菌及兼性厌氧菌的药物敏感试验（K-B 法和稀释法的原理、方法、结果判断及正确发报告）。第三篇第三篇 常见微生物鉴定技术常见微生物鉴定技术 第十章第十章 需氧和兼性厌氧球菌需氧和兼性厌氧球菌 葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、淋病奈瑟菌的主要形态特征、培养特性、分类依据及分类；病原性球菌标本采集种类、检验鉴定程序、鉴定要点、检验鉴定依据及报告要点。第十一章第十一章 革兰阴性需氧和兼性厌氧杆菌革兰阴性需氧和兼性厌氧杆菌 第一节肠杆菌科第一节肠杆菌科 概述概述 肠杆菌科细菌肠杆菌科细菌：1.G-杆菌，多数有鞭毛、菌毛 2.发酵葡萄糖，兼性厌氧 3.氧化酶阴性 4.还原硝酸盐为亚硝酸盐 5.触酶（）肠道选择性培养基肠道选择性培养基：麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂、SS 琼脂等 肠杆菌科抗原肠杆菌科抗原：O 抗原（菌体抗原），K 抗原（荚膜抗原），H 抗原（鞭毛抗原）等 肠杆菌科鉴定依据：肠杆菌科鉴定依据：1.革兰染色 2.触媒、氧化酶、硝酸盐还原 3.KIA、MIU、IMViC,其他生化反应 4.血清玻片凝集（鉴定到种、型或血清型）IMViCIMViC 试验：试验：吲哚（I）、甲基红（M）、VP（V）、枸橼酸盐利用（C）四种试验，常用于鉴定肠道杆菌。二、埃希菌属二、埃希菌属 形态染色：形态染色：1.短杆菌 2.革兰染色阴性 3.有鞭毛 4.有菌毛 培养特性培养特性 ：符合肠杆菌特点 EMB紫黑色有金属光泽乳糖发酵菌落 S-S桃红色乳糖发酵菌落 微生物学检验8 生化反应：生化反应：IMViC（+-）大肠杆菌大肠杆菌 KIAKIA：A A A A 血清型表示法：血清型表示法：O：K：H ETECETEC 肠毒素：肠毒素：耐热肠毒素（ST）不耐热肠毒素（LT），65oC30min 被破坏 引起腹泻的大肠埃希菌：引起腹泻的大肠埃希菌：肠产毒性大肠埃希菌 ETEC 肠致病性大肠埃希菌 EPEC 肠侵袭性大肠埃希菌 EIEC 肠出血性大肠埃希菌 EHEC 肠凝聚性大肠埃希菌 EAEC EIECEIEC 毒力测定试验：毒力测定试验：豚鼠眼结膜试验 卫生学标准：卫生学标准：每 ml 饮水中细菌总数100 个，每 1000ml 水中大肠杆菌菌群数3 个，每100 ml 瓶装汽水、果汁中，大肠杆菌菌群数5 个。三、沙门菌属三、沙门菌属 对人类有致病性：对人类有致病性：肠热症；食物中毒；败血症 形态染色：形态染色：G-杆菌；周身鞭毛 培养和生化反应：培养和生化反应：不分解乳糖分解葡萄糖；分解蛋白质，产生 H2S 伤寒沙门菌菌落特征（伤寒沙门菌菌落特征（EMBEMB、MACMAC）：）：无色透明菌落 伤寒沙门菌菌落特征（伤寒沙门菌菌落特征（SSSS）：）：无色透明或半透明，中心黑色菌落 伤寒沙门菌伤寒沙门菌 KIAKIA：K A 标本采取：标本采取：第 1-2W，血、骨髓；第 2-3W，粪便、尿；全程取骨髓 肥达反应肥达反应:用已知伤寒沙门菌 O、H 和甲型副伤寒沙门菌和乙型副伤寒沙门菌 H 抗原与病人血清做定量凝集试验，用以辅助诊断肠热症。TO1：80，TH1：160；PA、PB 均1：80才有意义。动态观察：双份血清抗体四倍升高有诊断意义 四、志贺菌属四、志贺菌属 形态染色：形态染色：符合肠杆菌特征，有菌毛，无鞭毛，无动力是本菌与其它肠道致病菌主要区别点 培养特性：培养特性：肠道鉴别培养基上的无色透明、乳糖不发酵菌落 抗原分类：抗原分类：根据 O 抗原分 4 群，40 余型，我国常见 B 群 微生物学检验9 A 群痢疾志贺菌 B 群福氏志贺菌 C 群鲍氏志贺菌 D 群宋氏志贺菌 培养和生化反应：培养和生化反应：不分解乳糖分解葡萄糖 菌落特征（菌落特征（EMBEMB、MACMAC）：）：无色透明菌落 KIAKIA：K A MIUMIU：外毒素：外毒素：A 群（、型）产生志贺毒素（ST）有 3 种生物活性 1.肠毒素：类似 ETEC 毒素、霍乱肠毒素作用水样泻 2.细胞毒性：对人肝细胞、肠黏膜细胞有毒性，引起变性坏死 3.神经毒性：损伤动物神经系统（麻痹、死亡）快速诊断：快速诊断：荧光菌球试验；协同凝集试验 六、变形杆菌属六、变形杆菌属 形态染色：形态染色：有周鞭毛 培养特性：培养特性：扩散生长，有迁徙生长现象。在培养基中（含 5琼脂）加入 0.1石炭酸则形成单个菌落；肠道选择性培养基上形成无色透明菌落 变形杆菌变形杆菌 KIAKIA：K A+MIUMIU：+/-+八、耶尔森菌属八、耶尔森菌属 历史：历史：三次世界性大流行，是我国重点监控的自然疫源性传染病。形态染色：形态染色：G球杆菌，两极浓染 培养特性：培养特性：普通培养基，生长缓慢，24-48h，R 型“破草帽”状菌落 菌落特征（菌落特征（EMBEMB、MACMAC）：）：无色透明菌落 甲类烈性传染病：甲类烈性传染病：鼠疫（黑死病）常见临床类型：常见临床类型：腺鼠疫、败血型鼠疫、肺鼠疫 标本采集：标本采集：临床标本（淋巴结穿刺液、血液或痰标本）；非临床标本（尸检取病变组织，鼠标本应严格消毒体表，再进行采集）第二节第二节 弧菌科弧菌科 一群菌体短小、弯曲成弧形或直杆状的革兰阴性细菌；具有一端单一鞭毛、运动迅速；弧菌科细菌广泛分布于自然界，以水中最为多见 微生物学检验10 弧菌属弧菌属（一）霍乱弧菌（一）霍乱弧菌 霍乱弧菌的疫源地：霍乱弧菌的疫源地：印度恒河三角洲（O1 群，古典生物型）；印尼苏拉威西岛（O1 群，埃托生物型）；孟加拉湾（O139 群）已发生七次世界性的霍乱大流行已发生七次世界性的霍乱大流行：均由霍乱弧菌的 O1 群引起，前六次为霍乱弧菌的古典生物型，第七次为埃尔托生物型 形态：形态：新从患者标本中分离出的细菌革兰染色阴性，弧形或逗点状；在患者“米泔水”样便中，可呈头尾相接的“鱼群”样排列；菌体一端有鞭毛，悬滴观察时呈“穿梭”样运动 培养特性：培养特性：营养要求不高，故用 Ph8.4-9.2 碱性培养基；分离（选择）能在无盐培养基中生长（区别其它弧菌）；在 pH8.5 的碱性胨水中经 3546h 增菌后可在液体表面大量繁殖形成菌膜 抵抗力：抵抗力：较弱；水源性传播，水性爆发；怕酸，正常胃酸 4min 霍乱肠毒素（霍乱肠毒素（CTCT）：）：最强烈的致泻毒素 吐泻期：吐泻期：剧烈吐泻、米泔样 免疫力：免疫力：病人愈后可获得牢固免疫 O1O1 群霍乱弧菌的群霍乱弧菌的 O O 抗原：抗原：由 A、B、C 三种抗原因子组成；通过不同组合可形成三个型别：由 AB 组成小川型、AC 组成稻叶型、ABC 组成彦岛型 常用的选择性培养基：常用的选择性培养基：1.硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖(TCBS)琼脂平板：霍乱弧菌发酵蔗糖产酸，菌落呈黄色 2.4 号琼脂、庆大霉素琼脂：生长并将培养基中的碲离子还原成元素碲,形成灰褐色菌落中心 3.能在无盐培养基上生长 古典生物型和埃尔托生物型的区别试验：古典生物型和埃尔托生物型的区别试验：羊红细胞溶血；鸡红细胞凝集；V-P 试验；多粘菌素 B 敏感试验；组噬菌体裂解；组噬菌体裂解 标本采集和运送：标本采集和运送：在发病早期，尽量在使用抗菌药物之前采集标本；取患者“米泔水”样便，亦可采取呕吐物或尸体肠内容物，或采取肛门拭子；标本应避免接触消毒液；采取的标本最好就地接种碱性胨水增菌；不能及时接种者可用棉签挑取标本或将肛门拭子直接插入卡布运送培养基中 动力和制动试验：动力和制动试验：直接取“米泔水”样便，制成悬滴(或压滴)标本后，在暗视野或相差显微生物学检验11 微镜下直接观察呈穿梭样运动的细菌；同法重新制备另一标本涂片，在悬液中加入 1 滴不含防腐剂的霍乱多价诊断血清(效价1：64)，可见最初呈穿梭状运动的细菌停止运动并发生凝集，则为制动试验阳性 快速诊断：快速诊断：将标本接种于含有霍乱弧菌荧光抗体的碱性蛋白胨水中，经 3746h，如有霍乱弧菌，在荧光显微镜下可见发荧光的菌球。本法适用于做大量标本的初筛 SPASPA 协同凝集试验：协同凝集试验：以霍乱弧菌 IgG 型抗体与 SPA 阳性葡萄球菌结合作为试剂，与米泔水样便或增菌液作玻片凝集，立即出现明显凝集者（）为阳性 粘丝试验：粘丝试验：将 0.5去氧胆酸钠水溶液于霍乱弧菌混匀制成浓厚菌液，1min 内悬液由混变清，并变得粘稠，以接种环挑取时可以拉出丝来（二）副溶血性弧菌（二）副溶血性弧菌 具有嗜盐性具有嗜盐性 形态：形态：革兰阴性杆菌，有鞭毛（极单毛）培养特性：培养特性：在无盐培养基上不能生长，最适合生长的氯化钠浓度为 3.5%，超过 8%不能生长 TCBSTCBS 琼脂平板琼脂平板:蔗糖不发酵而呈蓝绿色菌落 第三节第三节 非发酵革兰阴性杆菌非发酵革兰阴性杆菌 非发酵革兰阴性杆菌：非发酵革兰阴性杆菌：一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌 一、一、假单胞菌属假单胞菌属 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌 所致疾病：所致疾病：条件致病菌；医院感染的重要病原菌；大面积烧伤创面感染的重要病原菌 生物学特性：生物学特性：革兰阴性，长短不一，单鞭毛，氧化酶阳性 生长温度：生长温度：2542 分离培养与鉴定：分离培养与鉴定：1.血平板上毛玻璃样，金属光泽，生姜味 2.可产生多种色素：荧光素与绿脓素 血琼脂平板：血琼脂平板：透明溶血环 O/FO/F 试验：试验：氧化型 第四节第四节 其他革兰阴性苛氧菌其他革兰阴性苛氧菌 一、嗜血杆菌属一、嗜血杆菌属 流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌 所致疾病：所致疾病：原发化脓性感染及继发性感染，包括脑膜炎、鼻咽炎、关节炎、心包炎、鼻窦微生物学检验12 炎及中耳炎等 生物学特性：生物学特性：革兰阴性短小球杆菌 分离培养：分离培养：需要 X、V 因子；营养要求高，血琼脂平板培养基，巧克力琼脂培养基 菌落特征：菌落特征：巧克力琼脂培养基,小、无色透明菌落 卫星现象：卫星现象：当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌一起培养时，靠近葡萄球菌菌落的流感嗜血杆菌菌落较大，远离葡萄球菌菌落的流感嗜血杆菌菌落较小 四、布鲁菌属四、布鲁菌属 传染源：传染源：病兽，以羊、牛、猪多见 传播途径：传播途径：病兽的组织、尿、乳液等通过人体的皮肤、呼吸道、消化道进入人体 易感人群：易感人群：发病以青壮年为主，从事兽医、皮毛加工、屠宰的工人发病率较高 临床表现：临床表现：长期发热、多汗；关节疼痛及全身乏力、疼痛 微生物特性：微生物特性：革兰阴性短小球杆菌 培养特性：培养特性：需氧菌，营养要求较高；生长缓慢（57 天）第十二章第十二章 革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌 革兰阳性无芽胞杆菌革兰阳性无芽胞杆菌 白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌 形态与染色形态与染色:G+细长微弯的杆菌；一端或两端膨大呈棒状；常排列呈 V、L、X 等文字形；异染颗粒形态上的鉴别特征 培养特性：培养特性：营养要求高，吕氏血清斜面或鸡蛋斜面 亚碲酸钾亚碲酸钾 BAPBAP：选择鉴别培养基，黑色菌落鉴别依据 毒力试验：毒力试验：1.体外法：琼脂平板毒力试验（Elek 平板毒力测定）；SPA 协同凝集试验；对流电泳 2.体内法：用豚鼠作毒素-抗毒素中和试验 第二节第二节 革兰阳性需氧芽胞杆菌属革兰阳性需氧芽胞杆菌属 炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌 临床意义：临床意义：炭疽是人兽共患的急性传染病，皮肤炭疽、肠炭疽、肺炭疽等 炭疽毒素：炭疽毒素：保护性抗原、致死因子、水肿因子 传染源：传染源：患病食草动物及其制品或被污染物 传播途径：传播途径：1.接触皮肤炭疽 2.食用肠炭疽 3.吸入肺炭疽 形态染色形态染色:致病菌中最大的 G+杆菌；两端平切、竹节状；有毒株可有明显荚膜 微生物学检验13 芽胞：芽胞：1.椭圆形，小于菌体，位于菌体中央 2.多在有氧条件下形成，2530，在培养基中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中，都易形成芽胞 3.在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞，尸体严禁解剖 培养特性：培养特性：1.普通培养基上卷发状菌落 2.BAP：1215h 不溶血，1824h 轻微溶血 3.肉汤：絮状沉淀生长 4.明胶：371824h 表面液化成漏斗状，由于细菌沿穿刺线向四周扩散形成倒松树状。5.NaHCO3BAP：有毒株-黏液型菌落，挑取时呈粘丝状(鉴别要点)无毒株粗糙型菌落 抗原构造：抗原构造：1.菌体多糖抗原：与毒力无关，耐热、耐腐败，长时间煮沸仍能与特异性抗体发生环状沉淀反应（Ascoli 热沉淀反应），特异性不高，可作追溯性诊断 2.荚膜多肽抗原：荚膜肿胀试验，对本菌鉴定有意义 标本的采集与处理标本的采集与处理:死于败血症的动物，严禁宰杀和解剖，可消毒皮肤后割取耳朵、舌尖采集少量血液 串珠试验串珠试验:炭疽芽胞杆菌在每毫升含有 0.05-0.5U 青霉素的培养基中，可发生形态变异，形成大而均匀的圆球状并相连如串珠状 第十三章第十三章 分枝杆菌属分枝杆菌属 分枝杆菌是一类细长略带弯曲的杆菌，含有分枝菌酸，有分枝生长的趋势而得名。具有抗酸性，故又称抗酸杆菌。结核分枝杆菌结核分枝杆菌 所致疾病：所致疾病：通过呼吸道、消化道和损伤的皮肤等多途径感染机体，引起多种脏器的结核病，其中以肺结核为多见 致病物质：致病物质：荚膜、脂质和蛋白质等菌体成分 免疫性：免疫性：有菌免疫或称传染性免疫，细胞免疫在抗感染免疫中起重要作用 微生物特性：微生物特性：1.分枝状，略带弯曲的抗酸杆菌，抗酸性染色法染色后结核分枝杆菌呈红色，背景呈蓝色 2.专性需氧，营养要求较高，最适生长温度为 35，生长缓慢,25w 才出现肉眼可见的如菜花样粗糙型菌落。微生物学检验14 结核菌素试验：结核菌素试验：纯蛋白衍生物(PPD)，注入皮内后如受试者已感染结核，则结核菌素与致敏淋巴细胞特异性结合，形成迟发型超敏反应性炎症 机体抗结核免疫特点：机体抗结核免疫特点：传染、免疫、超敏反应共存 第十四章第十四章 厌氧性细菌厌氧性细菌 破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、肉毒梭菌的形态特征、培养特性；厌氧性细菌的检验鉴定要点和报告方式。第十五章第十五章 螺旋体、支原体、衣原体、立克次体螺旋体、支原体、衣原体、立克次体 第一节第一节 螺旋体螺旋体 螺旋体：螺旋体：是一种细长、柔软、螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物 钩端螺旋体钩端螺旋体 所致疾病：所致疾病：钩端螺旋体病 传染源与储存宿主传染源与储存宿主:自然疫源性疾病，鼠类和猪为主要储存宿主 传播途径：传播途径：间接接触传播（接触被含菌尿液污染的水源）、血液传播、垂直传播 生物学特性：生物学特性：1.螺旋一端或两端呈钩状 2.有两根周浆鞭毛，运动活泼 3.G-，但不易着色，镀银染色成棕褐色 梅毒螺旋体梅毒螺旋体 所致疾病：所致疾病：梅毒 1.先天性：母体通过胎盘传给胎儿 2.获得性：性传播 获得性梅毒临床分期：分为三期获得性梅毒临床分期：分为三期 1.期（初期）梅毒：感染后 3 周左右局部出现无痛性硬下疳，感染性极强。2.期梅毒：发生于硬下疳出现后 28 周，全身皮肤、粘膜常有梅毒疹，全身淋巴结肿大 3.期（晚期）梅毒：发生感染 2 年后，病变可波及全身组织和器官；基本损害为慢性肉芽肿；病损内螺旋体少但破坏性大 生物学特性：生物学特性：G-，但不易着色，镀银染色呈棕褐色；对青霉素、四环素、红霉素等抗生素敏感 微生物学检查：微生物学检查：标本：、期梅毒取下疳渗出液、梅毒疹渗液或淋巴结穿刺液；先天性梅毒取脐血 第二节第二节 支原体支原体 支原体：支原体：是一类没有细胞壁，形态上呈多样性，可通过细菌滤器，能在无生命培养基中生长的最小的原核细胞型微生物；因其生长后能形成分枝长丝，故命名为支原体；G-，但不微生物学检验15 易着色，Giemsa 染色呈淡紫色；油煎蛋样的菌落 所致疾病：所致疾病：支原体肺炎 冷凝集实验冷凝集实验:肺炎支原体感染后，患者血清中出现冷凝集素，能在 0-4 条件下凝集人红细胞（37时却无此效应）。此凝集实验为非特异性的，是肺炎支原体感染的辅助诊断试验 衣原体：衣原体：是一类专性活细胞内寄生、具有独特发育周期、且能通过细菌滤器的、介于立克次体与病毒之间的原核细胞型微生物 首先成功分离鉴定出沙眼衣原体：首先成功分离鉴定出沙眼衣原体：我国学者汤飞凡于 1956 年 能引起人类疾病的衣原体：能引起人类疾病的衣原体：主要有沙眼衣原体和肺炎衣原体 立克次体：立克次体：是一类专性活细胞内寄生的 G-原核细胞型微生物，是引起斑疹伤寒、恙虫病、Q 热等传染病的病原体；与节肢动物关系密切，大多是人畜共患病的病原体 Weil-FelixWeil-Felix 反应（外斐反应）：反应（外斐反应）：大部分立克次体与普通变形杆菌某些菌株（X19、Xk、X2）的菌体抗原有共同的抗原成分，故可用这些变形杆菌的菌体抗原与不同稀释度的患者血清做凝集反应，诊断立克次体病。第十六章第十六章 常见真菌常见真菌 1.真菌的概念、生物学性状；真菌感染性疾病的微生物学检查原则；皮肤癣真菌、白假丝酵母菌、新生隐球菌的形态特征及微生物学检验。2.真菌感染性疾病的微生物学检查原则；皮肤癣真菌、白假丝酵母菌、新生隐球菌的形态特征及微生物学检验。第十七章第十七章 常见病毒常见病毒 第一节第一节 呼吸道病毒呼吸道病毒 1.正粘病毒(流感病毒)的结构、型别、抗原变异与流行的关系；微生物学检验。2.正粘病毒(流感病毒)的型别、抗原变异与流行的关系。第二节第二节 肝炎病毒肝炎病毒 1.HAV、HBV、HCV、HDV、HEV 五型肝炎病毒的生物学特性，微生物学检验。2.乙肝五项的结果分析及临床意义 第三节第三节 逆转录病毒逆转录病毒 1.HIV 的生物学特性、致病性、免疫性与防治原则。HIV 的微生物学检验。2.HIV 的生物学特性。第四节第四节 其他病毒其他病毒 1.流行性乙型脑炎病毒、出血热病毒、狂犬病毒、疱疹病毒、人乳头瘤病毒的生物学特性及致病性。以上病毒的微生物学检验。2.流行性乙型脑炎病毒、出血热病毒、狂犬病毒、疱疹病毒、人乳头瘤病毒的生物学特性及致病性。第五节第五节 肠道病毒肠道病毒 1.肠道病毒的共性，种类。2.脊髓灰质炎病毒的生物学特性，致病性与微生物学检验。第十八章第十八章 临床常见标本的细菌学检验临床常见标本的细菌学检验 1.临床常见标本采集及运送、检验程序、报告方式、血液标本的细菌学检验、痰液标本的微生物学检验16 细菌学检验、脑脊液标本的细菌学检验。2.粪便标本的细菌学检验、尿液标本的细菌学检验、脓标本的细菌学检验。