妇产科学专业优秀论文--人间充质干细胞携带dcc基因治疗卵巢癌的实验研究大学论文.doc

【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料妇产科学专业优秀论文 人间充质干细胞携带DCC基因治疗卵巢癌的实验研究关键词：卵巢肿瘤 基因疗法 充质干细胞摘要：目的：研究DCC基因转染对卵巢癌细胞体外、体内的治疗作用及其对化疗药物敏感性的影响。初步探索问充质干细胞作为卵巢癌基因治疗的载体携带DCC基因治疗的可能性及方法。 方法：采用脂质体转染法将含有DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-DCC导入卵巢癌细胞系HO-8910中，经氨基糖甙类抗生素G418筛选，RT-PCR技术以及免疫组化法检测DCC基因mRNA及蛋白表达情况。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长情况及经梯度浓度顺铂及紫杉醇处理后的细胞存活率。电镜观察超微结构改变。将转染DCC基因的HO-8910细胞注入裸鼠皮下，观察移植瘤的生长情况及顺铂、紫杉醇的治疗效果，电镜观察超微结构。将pcDNA3.1(+)-DCC及脂质体混合物注入裸鼠体内，观察对卵巢癌移植瘤形成的预防作用。采用密度梯度离心法自脐带血中分离培养人MSCs，并构建了带有报告基因EGFP的重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，采用脂质体转染法将pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP转入MSCs中，荧光显微镜观察绿色荧光，RT-PCR检测DCCmRNA。将携带。DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤，观察体内DCC基因表达情况。 结果：1、成功构建了携带DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，表达绿色荧光蛋白的EGFP基因位于DCC基因下游，可以作为DCC基因表达指示标记。2、DCC基因被成功转入卵巢癌细胞中并获稳定表达。转染DCC基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制，出现凋亡征象，且对顺铂和紫杉醇的敏感性增加。转染DCC基因后的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的生长受到抑制，出现明显凋亡征象，注射携带DCC基因的重组质粒和脂质体对卵巢癌裸鼠移植瘤的形成有一定预防作用。顺铂和紫杉醇对转染DCC基因的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率明显增加。3、自脐带血中成功分离获得人间充质干细胞，可传代培养，可冻存复苏，经表面标志检测，表达CD29、CD44、CD105，不表达CD45和HLA-DR，具有多向分化潜能，在特定诱导条件下可向脂肪和骨分化。4、重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP通过脂质体介导转染人间充质干细胞，荧光显微镜下观察到报告基因EGFP的表达，RT-PCR检测到了DCC基因mRNA。转染后的MSCs生长受到一定影响。携带DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤后，短时间内能够表达DCC基因，随时间延长绿色荧光逐渐消失。 结论：DCC基因是重要的卵巢癌抑癌基因，可增加卵巢癌细胞的化疗敏感性，可作为卵巢癌基因治疗的侯选基因。脐带血可作为MSCs的来源。DCC基因可被成功转入MSCs中并获表达。转基因MSCs用于体内基因治疗的持久性和有效性仍需进一步研究。正文内容 目的：研究DCC基因转染对卵巢癌细胞体外、体内的治疗作用及其对化疗药物敏感性的影响。初步探索问充质干细胞作为卵巢癌基因治疗的载体携带DCC基因治疗的可能性及方法。 方法：采用脂质体转染法将含有DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-DCC导入卵巢癌细胞系HO-8910中，经氨基糖甙类抗生素G418筛选，RT-PCR技术以及免疫组化法检测DCC基因mRNA及蛋白表达情况。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长情况及经梯度浓度顺铂及紫杉醇处理后的细胞存活率。电镜观察超微结构改变。将转染DCC基因的HO-8910细胞注入裸鼠皮下，观察移植瘤的生长情况及顺铂、紫杉醇的治疗效果，电镜观察超微结构。将pcDNA3.1(+)-DCC及脂质体混合物注入裸鼠体内，观察对卵巢癌移植瘤形成的预防作用。采用密度梯度离心法自脐带血中分离培养人MSCs，并构建了带有报告基因EGFP的重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，采用脂质体转染法将pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP转入MSCs中，荧光显微镜观察绿色荧光，RT-PCR检测DCCmRNA。将携带。DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤，观察体内DCC基因表达情况。 结果：1、成功构建了携带DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，表达绿色荧光蛋白的EGFP基因位于DCC基因下游，可以作为DCC基因表达指示标记。2、DCC基因被成功转入卵巢癌细胞中并获稳定表达。转染DCC基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制，出现凋亡征象，且对顺铂和紫杉醇的敏感性增加。转染DCC基因后的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的生长受到抑制，出现明显凋亡征象，注射携带DCC基因的重组质粒和脂质体对卵巢癌裸鼠移植瘤的形成有一定预防作用。顺铂和紫杉醇对转染DCC基因的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率明显增加。3、自脐带血中成功分离获得人间充质干细胞，可传代培养，可冻存复苏，经表面标志检测，表达CD29、CD44、CD105，不表达CD45和HLA-DR，具有多向分化潜能，在特定诱导条件下可向脂肪和骨分化。4、重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP通过脂质体介导转染人间充质干细胞，荧光显微镜下观察到报告基因EGFP的表达，RT-PCR检测到了DCC基因mRNA。转染后的MSCs生长受到一定影响。携带DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤后，短时间内能够表达DCC基因，随时间延长绿色荧光逐渐消失。 结论：DCC基因是重要的卵巢癌抑癌基因，可增加卵巢癌细胞的化疗敏感性，可作为卵巢癌基因治疗的侯选基因。脐带血可作为MSCs的来源。DCC基因可被成功转入MSCs中并获表达。转基因MSCs用于体内基因治疗的持久性和有效性仍需进一步研究。目的：研究DCC基因转染对卵巢癌细胞体外、体内的治疗作用及其对化疗药物敏感性的影响。初步探索问充质干细胞作为卵巢癌基因治疗的载体携带DCC基因治疗的可能性及方法。 方法：采用脂质体转染法将含有DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-DCC导入卵巢癌细胞系HO-8910中，经氨基糖甙类抗生素G418筛选，RT-PCR技术以及免疫组化法检测DCC基因mRNA及蛋白表达情况。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长情况及经梯度浓度顺铂及紫杉醇处理后的细胞存活率。电镜观察超微结构改变。将转染DCC基因的HO-8910细胞注入裸鼠皮下，观察移植瘤的生长情况及顺铂、紫杉醇的治疗效果，电镜观察超微结构。将pcDNA3.1(+)-DCC及脂质体混合物注入裸鼠体内，观察对卵巢癌移植瘤形成的预防作用。采用密度梯度离心法自脐带血中分离培养人MSCs，并构建了带有报告基因EGFP的重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，采用脂质体转染法将pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP转入MSCs中，荧光显微镜观察绿色荧光，RT-PCR检测DCCmRNA。将携带。DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤，观察体内DCC基因表达情况。 结果：1、成功构建了携带DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，表达绿色荧光蛋白的EGFP基因位于DCC基因下游，可以作为DCC基因表达指示标记。2、DCC基因被成功转入卵巢癌细胞中并获稳定表达。转染DCC基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制，出现凋亡征象，且对顺铂和紫杉醇的敏感性增加。转染DCC基因后的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的生长受到抑制，出现明显凋亡征象，注射携带DCC基因的重组质粒和脂质体对卵巢癌裸鼠移植瘤的形成有一定预防作用。顺铂和紫杉醇对转染DCC基因的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率明显增加。3、自脐带血中成功分离获得人间充质干细胞，可传代培养，可冻存复苏，经表面标志检测，表达CD29、CD44、CD105，不表达CD45和HLA-DR，具有多向分化潜能，在特定诱导条件下可向脂肪和骨分化。4、重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP通过脂质体介导转染人间充质干细胞，荧光显微镜下观察到报告基因EGFP的表达，RT-PCR检测到了DCC基因mRNA。转染后的MSCs生长受到一定影响。携带DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤后，短时间内能够表达DCC基因，随时间延长绿色荧光逐渐消失。 结论：DCC基因是重要的卵巢癌抑癌基因，可增加卵巢癌细胞的化疗敏感性，可作为卵巢癌基因治疗的侯选基因。脐带血可作为MSCs的来源。DCC基因可被成功转入MSCs中并获表达。转基因MSCs用于体内基因治疗的持久性和有效性仍需进一步研究。目的：研究DCC基因转染对卵巢癌细胞体外、体内的治疗作用及其对化疗药物敏感性的影响。初步探索问充质干细胞作为卵巢癌基因治疗的载体携带DCC基因治疗的可能性及方法。 方法：采用脂质体转染法将含有DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-DCC导入卵巢癌细胞系HO-8910中，经氨基糖甙类抗生素G418筛选，RT-PCR技术以及免疫组化法检测DCC基因mRNA及蛋白表达情况。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长情况及经梯度浓度顺铂及紫杉醇处理后的细胞存活率。电镜观察超微结构改变。将转染DCC基因的HO-8910细胞注入裸鼠皮下，观察移植瘤的生长情况及顺铂、紫杉醇的治疗效果，电镜观察超微结构。将pcDNA3.1(+)-DCC及脂质体混合物注入裸鼠体内，观察对卵巢癌移植瘤形成的预防作用。采用密度梯度离心法自脐带血中分离培养人MSCs，并构建了带有报告基因EGFP的重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，采用脂质体转染法将pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP转入MSCs中，荧光显微镜观察绿色荧光，RT-PCR检测DCCmRNA。将携带。DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤，观察体内DCC基因表达情况。 结果：1、成功构建了携带DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，表达绿色荧光蛋白的EGFP基因位于DCC基因下游，可以作为DCC基因表达指示标记。2、DCC基因被成功转入卵巢癌细胞中并获稳定表达。转染DCC基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制，出现凋亡征象，且对顺铂和紫杉醇的敏感性增加。转染DCC基因后的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的生长受到抑制，出现明显凋亡征象，注射携带DCC基因的重组质粒和脂质体对卵巢癌裸鼠移植瘤的形成有一定预防作用。顺铂和紫杉醇对转染DCC基因的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率明显增加。3、自脐带血中成功分离获得人间充质干细胞，可传代培养，可冻存复苏，经表面标志检测，表达CD29、CD44、CD105，不表达CD45和HLA-DR，具有多向分化潜能，在特定诱导条件下可向脂肪和骨分化。4、重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP通过脂质体介导转染人间充质干细胞，荧光显微镜下观察到报告基因EGFP的表达，RT-PCR检测到了DCC基因mRNA。转染后的MSCs生长受到一定影响。携带DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤后，短时间内能够表达DCC基因，随时间延长绿色荧光逐渐消失。 结论：DCC基因是重要的卵巢癌抑癌基因，可增加卵巢癌细胞的化疗敏感性，可作为卵巢癌基因治疗的侯选基因。脐带血可作为MSCs的来源。DCC基因可被成功转入MSCs中并获表达。转基因MSCs用于体内基因治疗的持久性和有效性仍需进一步研究。目的：研究DCC基因转染对卵巢癌细胞体外、体内的治疗作用及其对化疗药物敏感性的影响。初步探索问充质干细胞作为卵巢癌基因治疗的载体携带DCC基因治疗的可能性及方法。 方法：采用脂质体转染法将含有DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-DCC导入卵巢癌细胞系HO-8910中，经氨基糖甙类抗生素G418筛选，RT-PCR技术以及免疫组化法检测DCC基因mRNA及蛋白表达情况。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长情况及经梯度浓度顺铂及紫杉醇处理后的细胞存活率。电镜观察超微结构改变。将转染DCC基因的HO-8910细胞注入裸鼠皮下，观察移植瘤的生长情况及顺铂、紫杉醇的治疗效果，电镜观察超微结构。将pcDNA3.1(+)-DCC及脂质体混合物注入裸鼠体内，观察对卵巢癌移植瘤形成的预防作用。采用密度梯度离心法自脐带血中分离培养人MSCs，并构建了带有报告基因EGFP的重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，采用脂质体转染法将pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP转入MSCs中，荧光显微镜观察绿色荧光，RT-PCR检测DCCmRNA。将携带。DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤，观察体内DCC基因表达情况。 结果：1、成功构建了携带DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，表达绿色荧光蛋白的EGFP基因位于DCC基因下游，可以作为DCC基因表达指示标记。2、DCC基因被成功转入卵巢癌细胞中并获稳定表达。转染DCC基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制，出现凋亡征象，且对顺铂和紫杉醇的敏感性增加。转染DCC基因后的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的生长受到抑制，出现明显凋亡征象，注射携带DCC基因的重组质粒和脂质体对卵巢癌裸鼠移植瘤的形成有一定预防作用。顺铂和紫杉醇对转染DCC基因的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率明显增加。3、自脐带血中成功分离获得人间充质干细胞，可传代培养，可冻存复苏，经表面标志检测，表达CD29、CD44、CD105，不表达CD45和HLA-DR，具有多向分化潜能，在特定诱导条件下可向脂肪和骨分化。4、重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP通过脂质体介导转染人间充质干细胞，荧光显微镜下观察到报告基因EGFP的表达，RT-PCR检测到了DCC基因mRNA。转染后的MSCs生长受到一定影响。携带DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤后，短时间内能够表达DCC基因，随时间延长绿色荧光逐渐消失。 结论：DCC基因是重要的卵巢癌抑癌基因，可增加卵巢癌细胞的化疗敏感性，可作为卵巢癌基因治疗的侯选基因。脐带血可作为MSCs的来源。DCC基因可被成功转入MSCs中并获表达。转基因MSCs用于体内基因治疗的持久性和有效性仍需进一步研究。目的：研究DCC基因转染对卵巢癌细胞体外、体内的治疗作用及其对化疗药物敏感性的影响。初步探索问充质干细胞作为卵巢癌基因治疗的载体携带DCC基因治疗的可能性及方法。 方法：采用脂质体转染法将含有DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-DCC导入卵巢癌细胞系HO-8910中，经氨基糖甙类抗生素G418筛选，RT-PCR技术以及免疫组化法检测DCC基因mRNA及蛋白表达情况。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长情况及经梯度浓度顺铂及紫杉醇处理后的细胞存活率。电镜观察超微结构改变。将转染DCC基因的HO-8910细胞注入裸鼠皮下，观察移植瘤的生长情况及顺铂、紫杉醇的治疗效果，电镜观察超微结构。将pcDNA3.1(+)-DCC及脂质体混合物注入裸鼠体内，观察对卵巢癌移植瘤形成的预防作用。采用密度梯度离心法自脐带血中分离培养人MSCs，并构建了带有报告基因EGFP的重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，采用脂质体转染法将pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP转入MSCs中，荧光显微镜观察绿色荧光，RT-PCR检测DCCmRNA。将携带。DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤，观察体内DCC基因表达情况。 结果：1、成功构建了携带DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，表达绿色荧光蛋白的EGFP基因位于DCC基因下游，可以作为DCC基因表达指示标记。2、DCC基因被成功转入卵巢癌细胞中并获稳定表达。转染DCC基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制，出现凋亡征象，且对顺铂和紫杉醇的敏感性增加。转染DCC基因后的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的生长受到抑制，出现明显凋亡征象，注射携带DCC基因的重组质粒和脂质体对卵巢癌裸鼠移植瘤的形成有一定预防作用。顺铂和紫杉醇对转染DCC基因的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率明显增加。3、自脐带血中成功分离获得人间充质干细胞，可传代培养，可冻存复苏，经表面标志检测，表达CD29、CD44、CD105，不表达CD45和HLA-DR，具有多向分化潜能，在特定诱导条件下可向脂肪和骨分化。4、重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP通过脂质体介导转染人间充质干细胞，荧光显微镜下观察到报告基因EGFP的表达，RT-PCR检测到了DCC基因mRNA。转染后的MSCs生长受到一定影响。携带DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤后，短时间内能够表达DCC基因，随时间延长绿色荧光逐渐消失。 结论：DCC基因是重要的卵巢癌抑癌基因，可增加卵巢癌细胞的化疗敏感性，可作为卵巢癌基因治疗的侯选基因。脐带血可作为MSCs的来源。DCC基因可被成功转入MSCs中并获表达。转基因MSCs用于体内基因治疗的持久性和有效性仍需进一步研究。目的：研究DCC基因转染对卵巢癌细胞体外、体内的治疗作用及其对化疗药物敏感性的影响。初步探索问充质干细胞作为卵巢癌基因治疗的载体携带DCC基因治疗的可能性及方法。 方法：采用脂质体转染法将含有DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-DCC导入卵巢癌细胞系HO-8910中，经氨基糖甙类抗生素G418筛选，RT-PCR技术以及免疫组化法检测DCC基因mRNA及蛋白表达情况。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长情况及经梯度浓度顺铂及紫杉醇处理后的细胞存活率。电镜观察超微结构改变。将转染DCC基因的HO-8910细胞注入裸鼠皮下，观察移植瘤的生长情况及顺铂、紫杉醇的治疗效果，电镜观察超微结构。将pcDNA3.1(+)-DCC及脂质体混合物注入裸鼠体内，观察对卵巢癌移植瘤形成的预防作用。采用密度梯度离心法自脐带血中分离培养人MSCs，并构建了带有报告基因EGFP的重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，采用脂质体转染法将pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP转入MSCs中，荧光显微镜观察绿色荧光，RT-PCR检测DCCmRNA。将携带。DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤，观察体内DCC基因表达情况。 结果：1、成功构建了携带DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，表达绿色荧光蛋白的EGFP基因位于DCC基因下游，可以作为DCC基因表达指示标记。2、DCC基因被成功转入卵巢癌细胞中并获稳定表达。转染DCC基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制，出现凋亡征象，且对顺铂和紫杉醇的敏感性增加。转染DCC基因后的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的生长受到抑制，出现明显凋亡征象，注射携带DCC基因的重组质粒和脂质体对卵巢癌裸鼠移植瘤的形成有一定预防作用。顺铂和紫杉醇对转染DCC基因的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率明显增加。3、自脐带血中成功分离获得人间充质干细胞，可传代培养，可冻存复苏，经表面标志检测，表达CD29、CD44、CD105，不表达CD45和HLA-DR，具有多向分化潜能，在特定诱导条件下可向脂肪和骨分化。4、重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP通过脂质体介导转染人间充质干细胞，荧光显微镜下观察到报告基因EGFP的表达，RT-PCR检测到了DCC基因mRNA。转染后的MSCs生长受到一定影响。携带DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤后，短时间内能够表达DCC基因，随时间延长绿色荧光逐渐消失。 结论：DCC基因是重要的卵巢癌抑癌基因，可增加卵巢癌细胞的化疗敏感性，可作为卵巢癌基因治疗的侯选基因。脐带血可作为MSCs的来源。DCC基因可被成功转入MSCs中并获表达。转基因MSCs用于体内基因治疗的持久性和有效性仍需进一步研究。目的：研究DCC基因转染对卵巢癌细胞体外、体内的治疗作用及其对化疗药物敏感性的影响。初步探索问充质干细胞作为卵巢癌基因治疗的载体携带DCC基因治疗的可能性及方法。 方法：采用脂质体转染法将含有DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-DCC导入卵巢癌细胞系HO-8910中，经氨基糖甙类抗生素G418筛选，RT-PCR技术以及免疫组化法检测DCC基因mRNA及蛋白表达情况。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长情况及经梯度浓度顺铂及紫杉醇处理后的细胞存活率。电镜观察超微结构改变。将转染DCC基因的HO-8910细胞注入裸鼠皮下，观察移植瘤的生长情况及顺铂、紫杉醇的治疗效果，电镜观察超微结构。将pcDNA3.1(+)-DCC及脂质体混合物注入裸鼠体内，观察对卵巢癌移植瘤形成的预防作用。采用密度梯度离心法自脐带血中分离培养人MSCs，并构建了带有报告基因EGFP的重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，采用脂质体转染法将pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP转入MSCs中，荧光显微镜观察绿色荧光，RT-PCR检测DCCmRNA。将携带。DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤，观察体内DCC基因表达情况。 结果：1、成功构建了携带DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，表达绿色荧光蛋白的EGFP基因位于DCC基因下游，可以作为DCC基因表达指示标记。2、DCC基因被成功转入卵巢癌细胞中并获稳定表达。转染DCC基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制，出现凋亡征象，且对顺铂和紫杉醇的敏感性增加。转染DCC基因后的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的生长受到抑制，出现明显凋亡征象，注射携带DCC基因的重组质粒和脂质体对卵巢癌裸鼠移植瘤的形成有一定预防作用。顺铂和紫杉醇对转染DCC基因的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率明显增加。3、自脐带血中成功分离获得人间充质干细胞，可传代培养，可冻存复苏，经表面标志检测，表达CD29、CD44、CD105，不表达CD45和HLA-DR，具有多向分化潜能，在特定诱导条件下可向脂肪和骨分化。4、重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP通过脂质体介导转染人间充质干细胞，荧光显微镜下观察到报告基因EGFP的表达，RT-PCR检测到了DCC基因mRNA。转染后的MSCs生长受到一定影响。携带DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤后，短时间内能够表达DCC基因，随时间延长绿色荧光逐渐消失。 结论：DCC基因是重要的卵巢癌抑癌基因，可增加卵巢癌细胞的化疗敏感性，可作为卵巢癌基因治疗的侯选基因。脐带血可作为MSCs的来源。DCC基因可被成功转入MSCs中并获表达。转基因MSCs用于体内基因治疗的持久性和有效性仍需进一步研究。目的：研究DCC基因转染对卵巢癌细胞体外、体内的治疗作用及其对化疗药物敏感性的影响。初步探索问充质干细胞作为卵巢癌基因治疗的载体携带DCC基因治疗的可能性及方法。 方法：采用脂质体转染法将含有DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-DCC导入卵巢癌细胞系HO-8910中，经氨基糖甙类抗生素G418筛选，RT-PCR技术以及免疫组化法检测DCC基因mRNA及蛋白表达情况。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长情况及经梯度浓度顺铂及紫杉醇处理后的细胞存活率。电镜观察超微结构改变。将转染DCC基因的HO-8910细胞注入裸鼠皮下，观察移植瘤的生长情况及顺铂、紫杉醇的治疗效果，电镜观察超微结构。将pcDNA3.1(+)-DCC及脂质体混合物注入裸鼠体内，观察对卵巢癌移植瘤形成的预防作用。采用密度梯度离心法自脐带血中分离培养人MSCs，并构建了带有报告基因EGFP的重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，采用脂质体转染法将pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP转入MSCs中，荧光显微镜观察绿色荧光，RT-PCR检测DCCmRNA。将携带。DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤，观察体内DCC基因表达情况。 结果：1、成功构建了携带DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，表达绿色荧光蛋白的EGFP基因位于DCC基因下游，可以作为DCC基因表达指示标记。2、DCC基因被成功转入卵巢癌细胞中并获稳定表达。转染DCC基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制，出现凋亡征象，且对顺铂和紫杉醇的敏感性增加。转染DCC基因后的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的生长受到抑制，出现明显凋亡征象，注射携带DCC基因的重组质粒和脂质体对卵巢癌裸鼠移植瘤的形成有一定预防作用。顺铂和紫杉醇对转染DCC基因的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率明显增加。3、自脐带血中成功分离获得人间充质干细胞，可传代培养，可冻存复苏，经表面标志检测，表达CD29、CD44、CD105，不表达CD45和HLA-DR，具有多向分化潜能，在特定诱导条件下可向脂肪和骨分化。4、重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP通过脂质体介导转染人间充质干细胞，荧光显微镜下观察到报告基因EGFP的表达，RT-PCR检测到了DCC基因mRNA。转染后的MSCs生长受到一定影响。携带DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤后，短时间内能够表达DCC基因，随时间延长绿色荧光逐渐消失。 结论：DCC基因是重要的卵巢癌抑癌基因，可增加卵巢癌细胞的化疗敏感性，可作为卵巢癌基因治疗的侯选基因。脐带血可作为MSCs的来源。DCC基因可被成功转入MSCs中并获表达。转基因MSCs用于体内基因治疗的持久性和有效性仍需进一步研究。目的：研究DCC基因转染对卵巢癌细胞体外、体内的治疗作用及其对化疗药物敏感性的影响。初步探索问充质干细胞作为卵巢癌基因治疗的载体携带DCC基因治疗的可能性及方法。 方法：采用脂质体转染法将含有DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-DCC导入卵巢癌细胞系HO-8910中，经氨基糖甙类抗生素G418筛选，RT-PCR技术以及免疫组化法检测DCC基因mRNA及蛋白表达情况。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长情况及经梯度浓度顺铂及紫杉醇处理后的细胞存活率。电镜观察超微结构改变。将转染DCC基因的HO-8910细胞注入裸鼠皮下，观察移植瘤的生长情况及顺铂、紫杉醇的治疗效果，电镜观察超微结构。将pcDNA3.1(+)-DCC及脂质体混合物注入裸鼠体内，观察对卵巢癌移植瘤形成的预防作用。采用密度梯度离心法自脐带血中分离培养人MSCs，并构建了带有报告基因EGFP的重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，采用脂质体转染法将pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP转入MSCs中，荧光显微镜观察绿色荧光，RT-PCR检测DCCmRNA。将携带。DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤，观察体内DCC基因表达情况。 结果：1、成功构建了携带DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，表达绿色荧光蛋白的EGFP基因位于DCC基因下游，可以作为DCC基因表达指示标记。2、DCC基因被成功转入卵巢癌细胞中并获稳定表达。转染DCC基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制，出现凋亡征象，且对顺铂和紫杉醇的敏感性增加。转染DCC基因后的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的生长受到抑制，出现明显凋亡征象，注射携带DCC基因的重组质粒和脂质体对卵巢癌裸鼠移植瘤的形成有一定预防作用。顺铂和紫杉醇对转染DCC基因的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率明显增加。3、自脐带血中成功分离获得人间充质干细胞，可传代培养，可冻存复苏，经表面标志检测，表达CD29、CD44、CD105，不表达CD45和HLA-DR，具有多向分化潜能，在特定诱导条件下可向脂肪和骨分化。4、重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP通过脂质体介导转染人间充质干细胞，荧光显微镜下观察到报告基因EGFP的表达，RT-PCR检测到了DCC基因mRNA。转染后的MSCs生长受到一定影响。携带DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤后，短时间内能够表达DCC基因，随时间延长绿色荧光逐渐消失。 结论：DCC基因是重要的卵巢癌抑癌基因，可增加卵巢癌细胞的化疗敏感性，可作为卵巢癌基因治疗的侯选基因。脐带血可作为MSCs的来源。DCC基因可被成功转入MSCs中并获表达。转基因MSCs用于体内基因治疗的持久性和有效性仍需进一步研究。目的：研究DCC基因转染对卵巢癌细胞体外、体内的治疗作用及其对化疗药物敏感性的影响。初步探索问充质干细胞作为卵巢癌基因治疗的载体携带DCC基因治疗的可能性及方法。 方法：采用脂质体转染法将含有DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-DCC导入卵巢癌细胞系HO-8910中，经氨基糖甙类抗生素G418筛选，RT-PCR技术以及免疫组化法检测DCC基因mRNA及蛋白表达情况。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长情况及经梯度浓度顺铂及紫杉醇处理后的细胞存活率。电镜观察超微结构改变。将转染DCC基因的HO-8910细胞注入裸鼠皮下，观察移植瘤的生长情况及顺铂、紫杉醇的治疗效果，电镜观察超微结构。将pcDNA3.1(+)-DCC及脂质体混合物注入裸鼠体内，观察对卵巢癌移植瘤形成的预防作用。采用密度梯度离心法自脐带血中分离培养人MSCs，并构建了带有报告基因EGFP的重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，采用脂质体转染法将pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP转入MSCs中，荧光显微镜观察绿色荧光，RT-PCR检测DCCmRNA。将携带。DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤，观察体内DCC基因表达情况。 结果：1、成功构建了携带DCC基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP，表达绿色荧光蛋白的EGFP基因位于DCC基因下游，可以作为DCC基因表达指示标记。2、DCC基因被成功转入卵巢癌细胞中并获稳定表达。转染DCC基因后的卵巢癌细胞增殖受到抑制，出现凋亡征象，且对顺铂和紫杉醇的敏感性增加。转染DCC基因后的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的生长受到抑制，出现明显凋亡征象，注射携带DCC基因的重组质粒和脂质体对卵巢癌裸鼠移植瘤的形成有一定预防作用。顺铂和紫杉醇对转染DCC基因的卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率明显增加。3、自脐带血中成功分离获得人间充质干细胞，可传代培养，可冻存复苏，经表面标志检测，表达CD29、CD44、CD105，不表达CD45和HLA-DR，具有多向分化潜能，在特定诱导条件下可向脂肪和骨分化。4、重组质粒pcDNA3.1-(+)-DCC-IRES-EGFP通过脂质体介导转染人间充质干细胞，荧光显微镜下观察到报告基因EGFP的表达，RT-PCR检测到了DCC基因mRNA。转染后的MSCs生长受到一定影响。携带DCC基因的MSCs注入裸鼠卵巢癌移植瘤后，短时间内能够表达DCC基因，随时间延长绿色荧光逐渐消失。 结论：DCC基因是重要的卵巢癌抑癌基因，可增加卵巢癌细胞的化疗敏感性，可作为卵巢癌基因治疗的侯选基因。脐带血可作为MSCs的来源。DCC基因可被成功转入MSCs中并获表达。转基因MSCs用于体内基因治疗的持久性和有效性仍需进一步研究。特别提醒：正文内容由PDF文件转码生成，如您电脑未有相应转换码，则无法显示正文内容，请您下载相应软件，下载地址为 。如还不能显示，可以联系我q q 1627550258 ，提供原格式文档。我们还可提供代笔服务，价格优惠，服务周到，包您通过。 垐垯櫃换烫梯葺铑?endstreamendobj2x滌甸?*U躆跦?l,墀VGi?o嫅#4K錶c&伣嘰呐q虻U節鉡c姥?BL偤7.X哖?驳疗g讍l/5蔍7sQIvs疖?SJ%JvI雓1傀7鑥伍妰遠Y魥 靤/W鐼E霯q聊湝ECu?knb?.:?澍羈7坋:;俐hEan2P6?!八帊/=櫕貵Wp?U脞姦%?qj?颬儼噃IV壂G邊?V忣鏕裚?靈模?慞擭昄X?;萕屄P,枍U霩R嚵蝆RC珵墂锬襵)焟滫?ob#噡滴覇羘幥d?讫E鼠U閥?甅Y_HT軷糣Q渿拜&应U躨?淊Nv祌|揜JJ9B9?_+.|莭?桌O姺?踱:R?截d襛jLk崌?謹6m図?b2頔?YU?拰泅?E稛擈?cH B?pR枣渹唱?上鴰AUq陶誼?a_坩j?劷a ?eb軌嬲6?65苡?喱U椁致a?頟狃鑃鋻?牥I?鄞?摉敊?(毆s?6仿?K2l肂F蚻盜?J琬C瓃!炻!鸌8?壽8?S鰬FQ=*?闲d(N该辭O?!蕍池?E柪8頬4syXr移Js?脋翟?PB针旌汉R紡斮銒0eh尸?XTHzK輫獞谪k伬.K!e鼚V?;驭s磇嗔5巐奌1;a/w,価*w=U#深啦厣#霵 ?懑刉覶瑼?l灏8Na?谺|mL駰麲?橆C啟拡铵邢哎橶軹?峾?I铈N?T蠿h?暵l2錛豵岂鋁釯訑9|U忡H奙鑧n!挈嬶颊tK犨绸萑mE遰D5KU/燏闪g菬3?6iL绌?8L愒?黴萧懨间蚷;0苸|Z?牫氀k鱟m智tC呿腩%陏砂?婁琊 蚩?p炊匌QE秝)?3祲翓?l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒l壛枒la空/?鈈1贿$F0佚&煿网澟?釤h裝y:M?瘃d襅絧?曄d鈅7橵ZngQY穴甯?c繋 圁?麾璃 c旿T珤z4v?/鰍w玣9樂濖?峐晻?娴翖H鎉詤闽s癜/?Z骫/吐莁鳝恪叓?c緂羗燤蘦?a:?编o6h挛W腃md寙妗M檂戴J炀?砡Z?d?獊嚘槏F劃?徎耡?a汚?螻8?冚窉&竕?/tR氍猜r鴅兂su勢J嫓-?貀鯼吔?啪?l匢k耭 聨蕞?霡耋艔続6挬aF溭ku罡?0埪怍m莫袍逷6&?+T?貇KPN:椴歋9wp?$%?粿?感,腑?U_?w?豒濈?J_.cy鰻PYPet?Pf臕?m稅盠?恁v_關lm,OMK?vOp牯V睟艶頛4.?鮠4lO?鼎?#濔%滷?腵鳐#C?另v|j珬i|葙K羇胞Tt?1鱳忞1?#1?# 谺? 豣? 豅?Fb癳$Fb癳$Fb懊U虶:獊 u餕n梕炯鈝羡n馴弁?裦$k琽腌羨鯞x8dz阞睩飫諥?R蛨)傣Nc鐓婤嬬踋D铅,j豃杮?03o膰澴饿垱,3cLY尧3?搮4kKh費QC幎鲟f?洭孺V饞?tY囝_?鮶量躞W蔋/?枞:蚢w龃欦恈宖xF?G?雅M餕K聭?W境O?赧ME6?诖佟U9y伞?t3吁或i扡椌