基于在线柱切换液相色谱技术的红霉素软膏含量测定研究.pdf

中国药物警戒 第 21 卷第 2 期 2024 年 2 月 February,2024,Vol.21,No.2152DOI:10.19803/j.1672-8629.20230457 中图分类号：R927.2文献标志码：A 文章编号：1672-8629（2024）02-0152-04基金项目：国家重点研发计划（2021YFC2401100）。作者简介：宁霄，女，硕士，副主任药师，分析化学。为并列第一作者。*通信作者：曹进，男，博士，研究员，分析化学。E-mail:#为共同通信作者。红霉素是一种常见的大环内酯类抗生素，具有广谱抗菌作用1-2，临床应用广泛，属于世界卫生组织和国家基本药物3-4。红霉素制剂在前几年质量不稳定，不合格率较高，最近几年一直被列为评价抽检的重点品种5。该药物易溶于乙醇、氯仿等，极微溶于水6-7，因此软膏制剂为最常见的剂型之一，有必要对其质量控制方法进行深入研究。中华人民共和国药典（2020 年版）（简称“中国药典”）8二部中，红霉素软膏采用抗生素微生物检定法间接测定红霉素的含量，根据量-反应平行线原理9，该方法反映的是主药和有关物质基于在线柱切换液相色谱技术的红霉素软膏含量测定研究宁霄1，高广慧2，金绍明1，刘彤彤1，裴宇盛1#，曹进1*（1中国食品药品检定研究院，北京 100050；2辽宁省检验检测认证中心，辽宁 沈阳 110010）摘要：目的建立在线柱切换高效液相色谱法测定红霉素软膏中主药含量的方法，为相关制剂的质量控制提供有效手段。方法样品经 80提取后直接进样，柱切换系统下，采用C18（50 mm2.1 mm，5 m）色谱柱初步分离，2.5 min 后转入 C18（150 mm2.1 mm，5 m）柱进行分析，流速 0.2 mL min-1，柱温 35。结果红霉素在1100 gmL-1范围内线性关系良好（r=0.999 4）；平均加样回收率大于 96.9%；日内和日间精密度小于1.29%（n=6）。结论本研究改进样品提取方法，并通过在线柱切换完成目标组分的净化和富集，该方法操作简单、准确灵敏、稳定性好，可用于红霉素软膏的含量测定。关键词：红霉素软膏；在线柱切换法；高效液相色谱；快速提取；含量测定Determination of erythromycin ointment content based on on-line column switching and liquid chromatography NING Xiao1,GAO Guanghui2,JIN Shaoming1,LIU Tongtong1,PEI Yusheng1#,CAO Jin1*(1National Institutes for Food and Drug Control,Beijing 100050,China;2Liaoning Inspection,Examination&Certification Centre,Shenyang Liaoning 110010,China)Abstract:Objective To establish an on-line column switching high performance liquid chromatography method for determination of the main drugs in erythromycin ointment,and to recommend an effective means for quality control of related preparations.Methods The samples were extracted at 80 and injected directly.Under the column switching system,the samples were initially separated on a C18 chromatographic column(50 mm2.1 mm,5 m)before being transferred to a second C18 column(150 mm2.1 mm,5 m)for analysis after 2.5 min.The flow rate was 0.2 mLmin-1 and the column temperature was 35.Results The linear relationship of erythromycin was good within the range of 1100 gmL-1(r=0.999 4).The average recovery was 96.9%.Intraday and interday precision was less than 1.29%(n=6).Conclusion This study has improved the sample extraction method and completed the purification and enrichment of target components through on-line column switching.This method is simple,accurate,sensitive and stable,which can be used for content determination of erythromycin ointment.Keywords:erythromycin ointment;online column switching;high performance liquid chromatography;rapid extraction;content determination的综合抗菌活性10，而非主药含量。且微生物检定法操作繁琐耗时，重复性较差、误差较大11，国外药典现已采用高效液相色谱法（HPLC）测定其含量12。目前已有文献报道采用 HPLC 测定红霉素软膏的含量13，但均采用传统的处理方法，即使用石油醚溶解后，再用磷酸缓冲盐溶液多次萃取，操作繁杂耗时；并且由于红霉素为末端吸收，在 215 nm 检测波长下灵敏度较低，而软膏中红霉素含量仅为1%，为满足定量分析要求，通常采取大剂量取样。大量辅料（液状石蜡、羊毛脂、黄凡士林）的引入和反复提取，在导致回收率不理想的同时，也需要分析人员使用并暴露于大量生物危害溶剂。柱切换液相色谱因具有试剂用量最小化、分析过程自动化等优势14-15，越来越多地应用于化学分析领域16-17。为了对红霉素软膏的质量控制提供更有效手段，本研究在优化样品提取方法的基础上，中国药物警戒 第 21 卷第 2 期 2024 年 2 月 February,2024,Vol.21,No.2153基于在线柱切换色谱技术，建立自动基质净化和选择性痕量富集方法。该方法在经济便捷、绿色环保的同时，获得更好的灵敏度和回收率，能够准确测定红霉素软膏中的主药含量。1 仪器与材料1.1 仪器半微柱高效液相色谱仪 Nanospace系统（大曹三耀公司，型号：SI-2)；万分之一天平（瑞士 METTLER TOLEDO 公司，型号：ML204/02）；离心机（日本Kokusan Corporation 公司，型号：Centrifuge H-501FR）；超纯水机（美国 MILLIPORE 公司，型号：Milli-Q UltrapUre Ion-Ex-TM）；超声波仪（西班牙 FUNGILAB 公司，型号：UE03SFD/AVANT）。1.2 材料乙腈（国药集团化学试剂有限公司，色谱纯）；磷酸氢二铵、磷酸（北京百灵威科技有限公司，色谱纯）；石油醚，沸程 80120（北京百灵威科技有限公司，分析纯）；水为 Milli-Q 制备的超纯水。红霉素标准品（中国药品生物制品检定所，批号：130307-202218）。10 批红霉素软膏样品（北京、广州药店市售，编号为110）。2 方法2.1 色谱条件采用 CAPCELL PAK C18 MGII（50 mm2.1 mm，5 m）色谱柱初步分离，2.5 min 后，捕集目标馏分转入CAPCELL PAK C18 MGII（150 mm2.1 mm，5 m）柱进行分析。一维分离流动相为25 mmol L-1磷酸氢二铵（磷酸调节pH至8.2）（A）/乙腈（B）=65/35。二维分析流动相为25 mmol L-1磷酸氢二铵（磷酸调节pH至8.2）（A）乙腈（B）梯度洗脱，洗脱程序：02.5 min，35%B，2.512 min，35%65%B；1213 min，65%80%B；1318 min,，80%B；1818.1 min，80%35%B。流速 0.2 mL min-1，柱温 35，进样量100 L，检测波长 215 nm。2.2 溶液的制备2.2.1 对照品溶液 取红霉素对照品50 mg，精密称定后，用磷酸缓冲液（50 mmol L-1磷酸氢二铵，磷酸调pH=7.0）/甲醇=15/1溶液制成质量浓度为 5 mgmL-1的对照品储备液。分别精密量取适量对照品储备液，用一维流动相（25 mmolL-1磷酸氢二铵，磷酸调pH=8.2/乙腈=65/35）稀释成 100、80、50、25、5、1gmL-1系列浓度的对照品溶液，摇匀，备用。2.2.2 供试品溶液 自建热水直接提取法（方法1）：取红霉素软膏 0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入 100 mL 超纯水后，称定并记录重量，水浴加热至80，振荡混匀后，150 W 功率超声5 min，再次称定补足缺失重量。离心（5 000 rmin-1）5 min，取下层清液用微孔滤膜（0.22 m）滤过，待进样分析。传统石油醚提取法（方法 2）：取红霉素软膏 0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入 80 mL 石油醚，震荡使红霉素软膏充分分散后，转移至分液漏斗，加入20 mL 石油醚清洗锥形瓶一并转移至分液漏斗。加入磷酸盐缓冲液（25 mmolL-1磷酸氢二铵，磷酸调pH=8.2），分 4 次提取后，定容至 100 mL，摇匀后用微孔滤膜（0.22 m）滤过，待进样分析。2.3 阀切换02.5 min 阀 A 状态下进样 100 L 进行样品在线净化及富集，2.515 min 阀 B 状态下对样品进行梯度洗脱并检测。3 结果3.1 线性关系考察取 2.2.1 项下系列浓度对照品溶液，分别精密量取 100 L，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积。以浓度（X，gmL-1）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，拟合标准曲线。红霉素回归方程为Y=57 566X+74 499，r=0.999 8。结果表明，红霉素在1100 gmL-1内线性关系良好。3.2 检测限与定量限取 2.2.1项下1 gmL-1对照品溶液，按 2、4、8 倍体积逐级稀释，按 2.1项下色谱条件进样分析，测定峰面积并记录信噪比（S/N）。本实验分别以 S/N 为10 和 3 时的溶液浓度确定定量限（LOQ）和检出限（LOD）。LOQ 和 LOD 分别为 0.32 gmL-1和0.097 gmL-1，折算进样量 100 L，得到本方法检测红霉素的定量限为 32 ng，检出限为 9.7 ng。3.3 稳定性试验供试品溶液（样品1、5、10）室温放置，分别于0、1、2、4、6、8、10、12 h 测定，3 份样品红霉素峰面积 RSD 分别为 0.9%、0.6%和 1.1%。结果表明，样品溶液在 12 h 内基本稳定。3.4 重复性试验分别取3种红霉素软膏（样品1、5、10），精密称取0.5 g，各 6 份，按 2.2.2 项下方法一制备供试品溶液，按 2.1项下色谱条件进行测定。3 种红霉素软膏平均含量和 RSD 结果为样品1：9.69 mg g-1，1.24%；样品中国药物警戒 第 21 卷第 2 期 2024 年 2 月 February,2024,Vol.21,No.21545：9.51 mg g-1，0.75%；样品10：9.78 mg g-1，0.98%。结果表明该方法重现性良好。3.5 精密度试验在一天内不同的时间按拟定方法对与“重复性”相同批号的样品进行测定，平行测定 6 次，记录各色谱峰的峰面积，计算日内精密度。按照上述步骤，连续测定 3 d，每份样品平行测定 3 次，记录各色谱峰的峰面积，计算日间精密度。计算结果，日内和日间 RSD分别为1.18%和1.29%，表明建立的方法精密度良好。3.6 回收率试验取红霉素软膏样品1 约 0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，平行称取 9 份，平均分成 3 组，每组分别精密加入对照品储备溶液 1 mL，按 2.2.2 项下方法1 制备供试溶液并进行分析测定，计算加样回收率，结果表明该方法准确度良好（表 1）。方法测定结果准确度更高，且具有较好的稳定性。同时，直接使用热水提取，方法更加简便，省去石油醚方法中分液漏斗多次萃取分离时间，提高工作效率，而且不使用有机溶剂，更加经济环保。以样品1为例，采用方法1 制备的供试品溶液进行检测。图1A 和 1B 分别为应用柱切换法前后的色谱图，图1A中在 1.55 min 出现大量杂质峰，且红霉素峰前后杂质峰较多，红霉素峰型较差；图1B 为采用柱切换后的测定结果，可见样品中的大量杂质在前处理柱中被冲出，既保护分析柱，又使红霉素获得了更加尖锐的峰型。4 讨论4.1 定容方式的选择使用热水在提取完成后进行分离时，由于温度降低，凡士林由油状凝结为固体，并附着在容器壁上，如果直接移取水溶液，会发生红霉素无法收集完全的问题。如果再进行多次提取，会使提取过程变得繁琐，不符合简化提取方法的初衷。因此，仿照 中国药典一部中药材的提取方法，使用称重方法进行定容，弥补热水在前处理过程中的挥发损失。实验结果证明，3 水平的加样回收率结果均高于 96.9%。4.2 提取条件的选择准确称取红霉素软膏 0.5 g，按 2.2.2 项下方法1进行提取，固定条件为：水浴加热至80，超声波功率150 W，超声时间 5 min。以回收率为指标对单因素条件进行考察：水浴加热至 40、60、70、80、90，超声功率为 90、150、200、300 W，超声时间为 5、10、15 min。每组平行操作 3 次。由图 2A可知，随着水浴温度的增加，红霉素提取回收率先升高再降低，在80时达到最大 97.8%。分析原因为，温度的升高加速了红霉素从软膏基质中释放，但 80后继续升高温度可能导致大环内酯类表1 红霉素软膏中红霉素的加样回收率试验结果（n=3）Table 1 Recovery results for erythromycin in erythromycin ointment组别样品中含量/mg对照品加入量/mg测定量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%15.062.407.1896.297.41.385.032.407.3598.95.062.407.2597.125.053.858.6296.997.20.805.053.858.7298.15.003.858.5496.635.064.819.5096.396.90.994.994.819.4496.35.054.819.6598.0表 2 不同方法测定10 批红霉素软膏中红霉素结果对比（n=3）Table 2 Comparison of results of determination of erythromycin in 10 batches of erythromycin ointment by different methods（n=3）样品编号测定值/mgg-1回收率/%RSD/%方法一方法二药典法方法一方法二药典法方法一方法二药典法19.719.379.7098.192.899.40.611.131.3329.709.449.8398.291.894.90.811.222.3939.689.479.3796.791.693.70.731.321.4549.909.569.3397.690.396.00.641.511.2659.829.239.4998.893.997.20.261.031.8169.929.209.8298.090.399.10.991.631.5977.707.407.7396.394.698.30.911.311.9989.809.249.3898.592.293.40.511.331.3499.879.359.9796.894.797.40.391.432.48109.779.459.7498.290.798.40.831.211.65均值97.792.396.80.671.311.733.7 实际样品测定对市售10 批红霉素软膏样品进行含量测定及方法比对，选取 1 倍加标水平分别用药典方法与本文 2.2.2 项下的 2 种提取方法进行检测和加标回收试验，对比回收率及精密度（表 2）。结果可见，本研究建立的热水直接提取法结合在线柱切换液相色谱法的回收率和精密度均优于另外 2 种方法，说明该中国药物警戒 第 21 卷第 2 期 2024 年 2 月 February,2024,Vol.21,No.2155结构开环，反而使提取率下降。因此，确定水浴温度升至 80。图 2B 和 C 可见，超声功率和时间分别为150 W 和 5 min 时，提取回收率最佳，继续增加，未见明显改善，因此确定温度 80、超声功率150 W、时间 5 min为最终条件。4.3 色谱柱的选择本研究分别尝试 2 款不同柱型的 C18分析色谱柱，分别为CAPCELL PAK C18 MGII（150 mm2.0 mm，5 m）和 CAPCELL PAK C18 MGII（250 mm4.6 mm，5 m），以15 gmL-1标准溶液作为测试液，在相同实验条件下，进样 50 L，二者的 S/N 分别为 262和 81（图 3），可见，前者 2.0 mm 内径的色谱柱可以得到更低的检出限，确定为分析柱。4.4 流动相的选择和梯度条件优化本实验参考了 中国药典 方法，尝试使用磷酸缓冲盐（50 mmolL-1磷酸氢二钾，磷酸调 pH=8.2）（A）乙腈（B）等度条件洗脱，结果发现磷酸氢二钾浓度降低至 25 mmolL-1时主药峰形更加尖锐，但此时样品中杂质峰因分离度不理想，可能干扰主峰的定量，最终在磷酸缓冲盐（25 mmolL-1磷酸氢二铵，磷酸调 pH=8.2（A）乙腈（B）梯度洗脱条件下，得到良好峰形和分离度，以样品1为例，红霉素峰与前后杂质峰的分离度分别为1.72 和 2.41（图 2B）。5 小结红霉素软膏临床应用广泛，其主成分含量作为质量控制的重要内容，应进行严格有效监管。近年来红霉素相关药物代谢动力学研究越来越多采用三重四级杆液质联用（HPLC-MS/MS）检测方法，基于红霉素软膏样品基质较为简单、与药典方法的兼容性以及服务监管的普适性等情况，本研究应用在线柱切换系统，建立准确测定红霉素软膏中主药含量的 HPLC 方法，使用热水直接提取即可实现回收率高于 96%。在研究过程中同时使用 HPLC-MSMS 方法进行了比对，结果一致性良好。该方法操作简单便捷、专属性强、灵敏度高、适用性好、经济环保，为加强红霉素软膏制剂的质量控制能力提供了有效手段。参考文献1 BENCE S,MARIA BS,DAVID K,et al.Erythromycin-loaded polymericmicelles:In situ gel development,in vitro and ex vivo ocular investigationsJ.European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics,2022,180(11):81-90.2 ZAFAR A,IMAM SS,YASIR M,et al.Preparation of NLCs-based topical erythromycin gel:in vitro characterization and antibacterial assessmentJ.Gels,2022,116(8):1-18.3 HAODI F,MEI T,ZIMING H,et al.Simultaneous determination of erythromycin and its transformation products in treated erythromycin fermentation residue and amended soilJ.Chemosphere,2023,313(2):137414.4 PRASHU J,SONY J,MEGHA C,et al.Electrocatalytic behaviour of self-assembled Cu-chitosan/f-MWCNT on glassy carbon electrode for detection of erythromycin in various samplesJ.Sensing and Bio-Sensing Research,2023,41:100568.5 ZHANG P.Quality analysis and research of erythromycin preparations based on provincial sampling of essential medicines in 2019J.Strait Pharmaceutical Journal(海峡药学),2021,33(3):84-86.6 SIYUAN Y,JINFENG X.Preparation of temperature-responsive PMMA-based microspheres encapsulating erythromycin in situ by emulsion photopolymerizationJ.Journal of Drug Delivery Science and Technology,2023,81(3):104256.7 ALIASGHARLOU N,SANA FA,KHOSHBAKHT S,et al.Fabrication and characterization of boric acid-crosslinked ethyl cellulose and polyvinyl alcohol films as potential drug release systems for topical drug deliveryJ.Turk J Chem,2020,44(6):1723-1732.8 Chinese Pharmacopoeia Commission.Pharmacopoeia of the People s 图1 采用柱切换法切换前（A）和切换后（B）测定市售样品色谱图Figure 1 Chromatograms of commercial samples determined before(A)and after(B)by column switching methodMAUMAUMinutes0123456702550751000123456t/min7100 75 50 25 0MAUab图 3 不同色谱柱对同一红霉素标准溶液的分析结果比对（a.2.0 mm i.d.150 mm色谱柱；b.4.6 mm i.d.250 mm色谱柱）Figure 3 Comparison of analysis results of the same erythromycin standard solution on different chromatographic columns(a.2.0 mm i.d.150 mm column;b.4.6 mm i.d.250 mm column)MAU图 2 提取条件对红霉素提取率的影响Figure 2 Effect of extraction conditions on the extraction rate of erythromycin02040608010005101520C02040608010020406080100A0204060801002040608010002040608010080140200260320B水浴温度/超声功率/W超声时间/min回收率/%回收率/%回收率/%（下转第180页）t/mint/min中国药物警戒 第 21 卷第 2 期 2024 年 2 月 February,2024,Vol.21,No.2180Medicine(云南中医中药杂志),2022,43(9):70-73.61 XIAO CH,WANG YH,LIU ML,et al.The protective effect of propofol on lipopolysaccharide-induced acute kidney injury in mice and the effect of Nrf2/HO-1/NLRP3 pathwayJ.Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Nephrology(中国中西医结合肾病杂志),2022,23(7):624-627,661.62 DING R,WANG KL,SHEN MD,et al.Mechanism of n-butanol position of vinegar-processed Phytolacca acinosa on reducing hepatorenal toxicityJ.Chinese Traditional and Herbal Drugs(中草药),2023,54(3):798-807.63 WANG SS,LU H,RONG J,et al.Pathological study on tissue injury of oxytropis kansuensis bunge in SD ratsJ.Chinese Journal of Veterinary Science(中国兽医学报),2013,33(2):246-249.64 JIA X,FU ZZ,RU QG,et al.Study on anti-inflammation,analgesia and nephrotoxicity of different doses of asarum decoctionJ.Information on Traditional Chinese Medicine(中医药信息),2022,39(11):55-59.65 ZHANG PP,WU Q,GE XX,et al.Research progress in toxic components and toxic mechanism of Dioscorea bulbifera L.J.Modern Chinese Medicine(现代中医药),2023,43(2):8-12.66 WEN XY,ZHOU PF,WEI XJ,et al.Toxic chemical components and detoxification methods of traditional Chinese medicineJ.Journal of Traditional Chinese Veterinary Medicine(中兽医医药杂志),2023,42(2):34-38.67 WEI JP,GAO SJ,WANG JR,et al.Metabonomic study of radix tripterygii wilfordii processed with raphani semen to reduce nephrotoxicity based on LC-MS/MSJ.Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica(中药药理与临床),2022,38(4):126-131.68 HE TM,ZHANG JY,LIU L,et al.Research advances of mylabris-induced hepatorenal toxicity in recent yearsJ.Chinese Journal of Modern Applied Pharmacy(中国现代应用药学),2022,39(24):3310-3315.69 HUANG KE,LI XB.Analysis of the properties of traditional Chinese medicine with nephrotoxicity J.Traditional Chinese Drug Research and Clinical Pharmacology(中药新药与临床药理),1996,7(3):49-50.70 CHEN B.The kidney toxicity Chinese medicine property of a medicine and the relation of effective composition to the analysis report of kidney toxicity Chinese medicine document datumJ.Proceeding of Clinical Medicine(临床医药实践杂志),2008,17(S5):975-976.71 DANG LM,YIN AW,LIU SS,et al.Related research between nephrotoxicity and four properties,five tastes and channel tropismJ.Guangdong Chemical Industry(广东化工),2017,44(15):65-67.（收稿日期：2023-06-05 编辑：徐璐雨）Republic of China，Volume （中华人民共和国药典二部）M.Beijing:China Medical Science Press,2020:19.9 ZHANG ZT.Antibiotic drug testing（抗生素药品检验）M.Beijing:China Medical Science Press,1991:1-2.10 XIN J，LI W.Analysis of related substances in erythromycin estolate tabletsJ.Chin J Pharm Anal（药物分析杂志）,2017,37(12):2231-2237.11 ZHONG HT，XIAO J，WANG LP.Analysis of uncertainty in determination of erythromycin estolate by microbiological assayJ.Strait Pharmaceutical Journal(海峡药学),2022,34(4):107-111.12 The United States Pharmacopeial Convention.U.S.Pharmacopeia 43/National Formulary 38M.Baltimore:United Book Press,2020.13 LIU L,ZHOU XS.Determination of erythromycin ointment by HPLCJ.Journal of North Pharmacy(北方药学),2019,16(5):2-3.14 MARTN-ORTIZ A,RUIZ-MATUTE AI,SANZ ML,et al.Separation of di-and trisaccharide mixtures by comprehensive two-dimensional liquid chromatography.Application to prebiotic oligosaccharidesJ.Analytica Chimica Acta,2019,1060(7):125-132.15 ZHU XY.Research and application progress of two-dimentional liquid chromatography on quality control for traditional Chinese Herbal MedicinesJ.Chinese Journal of Pharmacovigilance(中国药物警戒),2020,17(9):643-646.16 JONAS CC,ISRAEL DS,CAROLINE FG,et al.Recent advances in column switching high-performance liquid chromatography for bioanalysisJ.Sustainable Chemistry and Pharmacy,2021,21(6):100431.17 ARMENTA S,GARRIGUES S,ESTEVE-TURRILLAS FA,et al.Green extraction techniques in green analytical chemistryJ.TrAC Trends Anal Chem,2019,116(7):248-253.（收稿日期：2023-07-17 编辑：朱蓓）（上接第155页）（上接第166页）4 JI S,PAN S,CAMBRIA E,et al.A survey on knowledge graphs:representation,acquisition,and applicationsJ.IEEE Transactions on Neural Networks and Learning Systems,2021,33(2):494514.5 SINGHAL A.Introducing the knowledge graph:things,not strings EB/OL.(2012-05-16)2023-10-01.https：/goo- FAN YY,LI ZM.Research and application progress of chinese medical knowledge graphJ.Journal of Frontiers of Computer Science and Technology(计算机科学与探索),2022,1(10):2219-2233.7 DONG WB,SUN SL,YIN MZ.Research and development of medical knowledge graph reasoningJ.Journal of Frontiers of Computer Science and Technology(计算机科学与探索),2022,16(6):1193-1213.8 PENG QQ,WANG D.Medical text classification model based on deep learningJ.Electronic Design Engineering(电子设计工程),2023,31(5):51-54,60.9 XU L,LI DW,ZHANG HQ,et al.Medical text classification based on neural networkJ.Computer Engineering&Science(计算机工程与