160410脑脊液标本的微生物学检验.ppt

2024/5/25 周六1脑脊液标本微生物学脑脊液标本微生物学检验检验2024/5/25 周六2主要内容主要内容中枢神经系统感染病常见病原微生物中枢神经系统感染病常见病原微生物 与主要临床特征与主要临床特征n n脑脊液标本的采集、运送与外观观察脑脊液标本的采集、运送与外观观察 n n脑脊液标本的细菌学检验程序脑脊液标本的细菌学检验程序n n病毒性脑炎病原学检查原则病毒性脑炎病原学检查原则2024/5/25 周六3主要内容主要内容n n化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、新生隐球菌化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、新生隐球菌性脑膜炎的病原学检查方法与临床意义性脑膜炎的病原学检查方法与临床意义n n（1 1）直接涂片检查）直接涂片检查 革兰染色、抗酸染色或革兰染色、抗酸染色或金胺金胺“O O”染色、墨汁染色染色、墨汁染色 n n（2 2）分离培养）分离培养 培养基选择、菌落性状、生培养基选择、菌落性状、生化鉴定化鉴定2024/5/25 周六4中枢神经系统感染病中枢神经系统感染病n n中枢神经系统（中枢神经系统（中枢神经系统（中枢神经系统（Central nervous systemCentral nervous systemCentral nervous systemCentral nervous system，CNSCNSCNSCNS）感染系指病原微生物侵犯感染系指病原微生物侵犯感染系指病原微生物侵犯感染系指病原微生物侵犯CNSCNSCNSCNS实质、被膜及血管等实质、被膜及血管等实质、被膜及血管等实质、被膜及血管等引起的急性或慢性炎症性（或非炎症性）疾病。引起的急性或慢性炎症性（或非炎症性）疾病。引起的急性或慢性炎症性（或非炎症性）疾病。引起的急性或慢性炎症性（或非炎症性）疾病。2024/5/25 周六5n n一般而言，微生物难以侵入中枢神经系统，一般而言，微生物难以侵入中枢神经系统，其周围不仅具有坚固的骨骼，亦存在特殊的其周围不仅具有坚固的骨骼，亦存在特殊的毛细血管循环供养。这种毛细血管微循环为毛细血管循环供养。这种毛细血管微循环为非渗漏性血管，若非局灶性炎症，抗生素也非渗漏性血管，若非局灶性炎症，抗生素也难以进入其中。难以进入其中。中枢神经系统感染病中枢神经系统感染病2024/5/25 周六6n n中枢神经系统感染较为少见，但是脑和脊髓中枢神经系统感染较为少见，但是脑和脊髓一旦受到感染则后果严重。患者即使免于死一旦受到感染则后果严重。患者即使免于死亡，也可能遗留神经性损伤。快速的鉴别诊亡，也可能遗留神经性损伤。快速的鉴别诊断与早期治疗均有助于降低本病的死亡率和断与早期治疗均有助于降低本病的死亡率和致残率。致残率。中枢神经系统感染病中枢神经系统感染病常见病原微生物常见病原微生物2024/5/25 周六7中枢神经系统感染病中枢神经系统感染病常见病原微生物常见病原微生物2024/5/25 周六8n n中枢神经系统感染除可出现与其他急性中枢神经系统感染除可出现与其他急性感染相似症状如：发热、不适、食欲不感染相似症状如：发热、不适、食欲不振、恶心、乏力外，还可出现头疼、喷振、恶心、乏力外，还可出现头疼、喷射性呕吐及颈强直症状脑膜刺激征。射性呕吐及颈强直症状脑膜刺激征。中枢神经系统感染中枢神经系统感染的一般临床特征的一般临床特征 2024/5/25 周六9n n体检时，患者克氏征（体检时，患者克氏征（KernigKernig征）和布氏征征）和布氏征（BrudzinskiBrudzinski征）阳性。征）阳性。n n颅内压升高时，患者出现头疼的症状，平躺后颅内压升高时，患者出现头疼的症状，平躺后疼痛加剧。颅内压增高严重者易出现脑疝。疼痛加剧。颅内压增高严重者易出现脑疝。n n除此之外，患者亦可出现意识障碍、视乳头神除此之外，患者亦可出现意识障碍、视乳头神经水肿等临床表现。经水肿等临床表现。中枢神经系统感染中枢神经系统感染的一般临床特征的一般临床特征 2024/5/25 周六10中枢神经系统的主要感染性疾病中枢神经系统的主要感染性疾病及其常见临床特征及其常见临床特征n n脑膜炎脑膜炎n n化脓性脑膜炎化脓性脑膜炎化脓性脑膜炎化脓性脑膜炎n n结核性脑膜炎结核性脑膜炎结核性脑膜炎结核性脑膜炎n n新生隐球菌性脑膜炎新生隐球菌性脑膜炎新生隐球菌性脑膜炎新生隐球菌性脑膜炎2024/5/25 周六11化脓性脑膜炎常见临床特征化脓性脑膜炎常见临床特征及其细菌及其细菌n n化脓性脑膜炎化脓性脑膜炎化脓性脑膜炎化脓性脑膜炎本病是由各种化脓性细菌感本病是由各种化脓性细菌感本病是由各种化脓性细菌感本病是由各种化脓性细菌感染引起的脑膜炎症。软脑膜染引起的脑膜炎症。软脑膜染引起的脑膜炎症。软脑膜染引起的脑膜炎症。软脑膜和蛛网膜因细菌感染而发生和蛛网膜因细菌感染而发生和蛛网膜因细菌感染而发生和蛛网膜因细菌感染而发生化脓性改变，并使脑脊液产化脓性改变，并使脑脊液产化脓性改变，并使脑脊液产化脓性改变，并使脑脊液产生炎症性变化起病急，高热、生炎症性变化起病急，高热、生炎症性变化起病急，高热、生炎症性变化起病急，高热、畏寒、头疼、烦躁、惊厥、畏寒、头疼、烦躁、惊厥、畏寒、头疼、烦躁、惊厥、畏寒、头疼、烦躁、惊厥、喷射性呕吐、意识障碍等中喷射性呕吐、意识障碍等中喷射性呕吐、意识障碍等中喷射性呕吐、意识障碍等中毒症状。脑膜刺激征阳性。毒症状。脑膜刺激征阳性。毒症状。脑膜刺激征阳性。毒症状。脑膜刺激征阳性。n n脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌n n肺炎链球菌肺炎链球菌肺炎链球菌肺炎链球菌n n流感嗜血杆菌感流感嗜血杆菌感流感嗜血杆菌感流感嗜血杆菌感染染染染n n产单核细胞李斯产单核细胞李斯产单核细胞李斯产单核细胞李斯特菌特菌特菌特菌n nB B B B群链球菌群链球菌群链球菌群链球菌n n大肠埃希菌大肠埃希菌大肠埃希菌大肠埃希菌2024/5/25 周六12结核性脑膜炎常见临床特征结核性脑膜炎常见临床特征及其细菌及其细菌n n结核性脑膜炎结核性脑膜炎结核性脑膜炎结核性脑膜炎起病缓慢，早起病缓慢，早起病缓慢，早起病缓慢，早期有低热、盗汗、食欲不振、期有低热、盗汗、食欲不振、期有低热、盗汗、食欲不振、期有低热、盗汗、食欲不振、恶心、便秘、易激动等症状。恶心、便秘、易激动等症状。恶心、便秘、易激动等症状。恶心、便秘、易激动等症状。12121212周后病情加剧，出现典周后病情加剧，出现典周后病情加剧，出现典周后病情加剧，出现典型的脑膜刺激征。部分患者型的脑膜刺激征。部分患者型的脑膜刺激征。部分患者型的脑膜刺激征。部分患者可出现意识障碍、抽搐、瞳可出现意识障碍、抽搐、瞳可出现意识障碍、抽搐、瞳可出现意识障碍、抽搐、瞳孔改变等。若脑神经受损则孔改变等。若脑神经受损则孔改变等。若脑神经受损则孔改变等。若脑神经受损则可有眼睑下垂、面瘫等。可有眼睑下垂、面瘫等。可有眼睑下垂、面瘫等。可有眼睑下垂、面瘫等。n n结核分枝杆菌结核分枝杆菌结核分枝杆菌结核分枝杆菌2024/5/25 周六13新生隐球菌性脑膜炎新生隐球菌性脑膜炎常见临床特征及其细菌常见临床特征及其细菌n n新生隐球菌性脑膜炎新生隐球菌性脑膜炎新生隐球菌性脑膜炎新生隐球菌性脑膜炎亚急性起病，亚急性起病，亚急性起病，亚急性起病，病初可表现为轻度间歇性头痛，此病初可表现为轻度间歇性头痛，此病初可表现为轻度间歇性头痛，此病初可表现为轻度间歇性头痛，此后头痛逐渐呈爆裂样剧痛、常伴有后头痛逐渐呈爆裂样剧痛、常伴有后头痛逐渐呈爆裂样剧痛、常伴有后头痛逐渐呈爆裂样剧痛、常伴有恶心、喷射性呕吐、多数患者有发恶心、喷射性呕吐、多数患者有发恶心、喷射性呕吐、多数患者有发恶心、喷射性呕吐、多数患者有发热、精神异常。热、精神异常。热、精神异常。热、精神异常。1/31/31/31/3患者有意识障碍，患者有意识障碍，患者有意识障碍，患者有意识障碍，表现为嗜睡、瞻望、昏迷等。脑膜表现为嗜睡、瞻望、昏迷等。脑膜表现为嗜睡、瞻望、昏迷等。脑膜表现为嗜睡、瞻望、昏迷等。脑膜刺激征明显，常有多颅神经受损的刺激征明显，常有多颅神经受损的刺激征明显，常有多颅神经受损的刺激征明显，常有多颅神经受损的表现，以视神经受累最多。少数患表现，以视神经受累最多。少数患表现，以视神经受累最多。少数患表现，以视神经受累最多。少数患者有脑疝形成最后死亡。者有脑疝形成最后死亡。者有脑疝形成最后死亡。者有脑疝形成最后死亡。n n新生隐球菌新生隐球菌新生隐球菌新生隐球菌2024/5/25 周六14病毒性脑炎常见临床特征病毒性脑炎常见临床特征及其病毒及其病毒n n病毒性脑炎病毒性脑炎病毒性脑炎病毒性脑炎 急性发病，可有上呼吸道感染如头痛、急性发病，可有上呼吸道感染如头痛、急性发病，可有上呼吸道感染如头痛、急性发病，可有上呼吸道感染如头痛、乏力、肌痛等前驱症状。记忆力下降、计算力及乏力、肌痛等前驱症状。记忆力下降、计算力及乏力、肌痛等前驱症状。记忆力下降、计算力及乏力、肌痛等前驱症状。记忆力下降、计算力及定向力下降等智力减退症状。淡漠、易激动、缄定向力下降等智力减退症状。淡漠、易激动、缄定向力下降等智力减退症状。淡漠、易激动、缄定向力下降等智力减退症状。淡漠、易激动、缄默等精神症状。嗜睡、昏睡、甚至昏迷等意识障默等精神症状。嗜睡、昏睡、甚至昏迷等意识障默等精神症状。嗜睡、昏睡、甚至昏迷等意识障默等精神症状。嗜睡、昏睡、甚至昏迷等意识障碍。偏瘫、抽搐、震颤等神经系统局灶症状或体碍。偏瘫、抽搐、震颤等神经系统局灶症状或体碍。偏瘫、抽搐、震颤等神经系统局灶症状或体碍。偏瘫、抽搐、震颤等神经系统局灶症状或体征。征。征。征。n n单纯疱疹病毒、乙型脑炎病毒、柯萨奇病单纯疱疹病毒、乙型脑炎病毒、柯萨奇病毒、埃可病毒肠道病毒毒、埃可病毒肠道病毒7070、71 71 腮腺炎病毒、腮腺炎病毒、狂犬病病、毒麻疹病毒、风疹病毒、淋巴狂犬病病、毒麻疹病毒、风疹病毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒、朊粒细胞性脉络丛脑膜炎病毒、朊粒2024/5/25 周六15慢病毒性脑炎和脑病慢病毒性脑炎和脑病常见临床特征及其病毒常见临床特征及其病毒n n亚急性硬化性全脑炎亚急性硬化性全脑炎亚急性硬化性全脑炎亚急性硬化性全脑炎较为罕见，多见于儿童及少较为罕见，多见于儿童及少较为罕见，多见于儿童及少较为罕见，多见于儿童及少年的神经系统疾病。发病隐匿，根据病程演变及年的神经系统疾病。发病隐匿，根据病程演变及年的神经系统疾病。发病隐匿，根据病程演变及年的神经系统疾病。发病隐匿，根据病程演变及临床特征分为如下四期：行为精神障碍期；运动临床特征分为如下四期：行为精神障碍期；运动临床特征分为如下四期：行为精神障碍期；运动临床特征分为如下四期：行为精神障碍期；运动障碍期；昏迷角弓反张期；大脑皮质功能丧失期障碍期；昏迷角弓反张期；大脑皮质功能丧失期障碍期；昏迷角弓反张期；大脑皮质功能丧失期障碍期；昏迷角弓反张期；大脑皮质功能丧失期n n进行性风疹性全脑炎进行性风疹性全脑炎进行性风疹性全脑炎进行性风疹性全脑炎早期表现为学习成绩下降，早期表现为学习成绩下降，早期表现为学习成绩下降，早期表现为学习成绩下降，反应迟钝，成痴呆状。小脑共济失调。患者无头反应迟钝，成痴呆状。小脑共济失调。患者无头反应迟钝，成痴呆状。小脑共济失调。患者无头反应迟钝，成痴呆状。小脑共济失调。患者无头痛、发热、颈强直等感染的表现。痛、发热、颈强直等感染的表现。痛、发热、颈强直等感染的表现。痛、发热、颈强直等感染的表现。2024/5/25 周六16中枢神经系统感染病中枢神经系统感染病n n可传播性海绵样脑病可传播性海绵样脑病可传播性海绵样脑病可传播性海绵样脑病朊病毒朊病毒朊病毒朊病毒疾病，是人和动物共患的一疾病，是人和动物共患的一疾病，是人和动物共患的一疾病，是人和动物共患的一类遗传性类遗传性类遗传性类遗传性、传染性和散发性传染性和散发性传染性和散发性传染性和散发性的中央神经系统退行性脑病，的中央神经系统退行性脑病，的中央神经系统退行性脑病，的中央神经系统退行性脑病，最终可以导致患者死亡，最终可以导致患者死亡，最终可以导致患者死亡，最终可以导致患者死亡，它它它它能在人和动物中进行传染能在人和动物中进行传染能在人和动物中进行传染能在人和动物中进行传染 n n克克克克-雅病雅病雅病雅病潜伏期长，最初临潜伏期长，最初临潜伏期长，最初临潜伏期长，最初临床症状表现在精神和感觉方床症状表现在精神和感觉方床症状表现在精神和感觉方床症状表现在精神和感觉方面，继而出现共济失调，进面，继而出现共济失调，进面，继而出现共济失调，进面，继而出现共济失调，进一步发展为肌肉痉挛并伴有一步发展为肌肉痉挛并伴有一步发展为肌肉痉挛并伴有一步发展为肌肉痉挛并伴有痴呆，最终导致死亡。发病痴呆，最终导致死亡。发病痴呆，最终导致死亡。发病痴呆，最终导致死亡。发病年龄多在年龄多在年龄多在年龄多在50505050岁以上。岁以上。岁以上。岁以上。2024/5/25 周六17中枢神经系统感染病中枢神经系统感染病n n可传播性海绵样脑病可传播性海绵样脑病可传播性海绵样脑病可传播性海绵样脑病n n库鲁病库鲁病库鲁病库鲁病起病隐匿，以小脑起病隐匿，以小脑起病隐匿，以小脑起病隐匿，以小脑受损为主。表现为下肢颤受损为主。表现为下肢颤受损为主。表现为下肢颤受损为主。表现为下肢颤抖，行走困难，共济失调抖，行走困难，共济失调抖，行走困难，共济失调抖，行走困难，共济失调等。依病程发展分为三个等。依病程发展分为三个等。依病程发展分为三个等。依病程发展分为三个阶段即可行动期、静坐期阶段即可行动期、静坐期阶段即可行动期、静坐期阶段即可行动期、静坐期和终期。和终期。和终期。和终期。2024/5/25 周六18中枢神经系统感染病中枢神经系统感染病一般实验室检查一般实验室检查n n诊断中枢神经系统感染的一般实验室检查诊断中枢神经系统感染的一般实验室检查包括包括外周血常规检查外周血常规检查和和脑脊液检查脑脊液检查。其中。其中最重要的就是通过腰穿术采集脑脊液标本最重要的就是通过腰穿术采集脑脊液标本进行的脑脊液检查。正确的腰穿术对脑膜进行的脑脊液检查。正确的腰穿术对脑膜炎患者无任何危险，但若是怀疑患者脑脓炎患者无任何危险，但若是怀疑患者脑脓肿或颅内压增高，则应避免腰椎穿刺。肿或颅内压增高，则应避免腰椎穿刺。2024/5/25 周六19中枢神经系统感染病中枢神经系统感染病一般实验室检查一般实验室检查n n血常规血常规 白细胞计数白细胞计数明显增高：化脓性感染，且以中性粒细胞为明显增高：化脓性感染，且以中性粒细胞为主，可出现核左移主，可出现核左移正常或略微增高：病毒或结核分枝杆菌感染正常或略微增高：病毒或结核分枝杆菌感染2024/5/25 周六20中枢神经系统感染病中枢神经系统感染病实验室检查实验室检查n n脑脊液脑脊液一般性状检查一般性状检查细胞计数检查细胞计数检查化学检查化学检查病原生物学检查病原生物学检查2024/5/25 周六21中枢神经系统感染病中枢神经系统感染病一般实验室检查一般实验室检查n n脑脊液常规检测项目包括：脑脊液常规检测项目包括：脑脊液的外脑脊液的外观检查（颜色、透明度、薄膜及凝块）；观检查（颜色、透明度、薄膜及凝块）；脑脊液有形成分检查；脑脊液有形成分检查；脑脊液细菌直脑脊液细菌直接涂片检查；接涂片检查；脑脊液蛋白定性；脑脊液蛋白定性；脑脊脑脊液蛋白定量；液蛋白定量；脑脊液葡萄糖定量（需同脑脊液葡萄糖定量（需同时比较脑脊液和血清中的葡萄糖水平）；时比较脑脊液和血清中的葡萄糖水平）；脑脊液氯化物测定脑脊液氯化物测定 2024/5/25 周六22不同病原体所致中枢神经系统感染不同病原体所致中枢神经系统感染的早期脑脊液标本检查结果的早期脑脊液标本检查结果2024/5/25 周六23中枢神经系统感染病中枢神经系统感染病其他其他检查检查n n影像学技术如计算机扫描分析（影像学技术如计算机扫描分析（CTCT）、核）、核磁共振成像（磁共振成像（MRIMRI）已成为对中枢神经系统）已成为对中枢神经系统感染患者进行急性评估的重要手段之一，感染患者进行急性评估的重要手段之一，如果怀疑患者存在占位性脓肿或有导致颅如果怀疑患者存在占位性脓肿或有导致颅内压升高的病因，则应先进行内压升高的病因，则应先进行CTCT或或MRIMRI检查。检查。2024/5/25 周六24中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检查真菌学检查n n（一）（一）标本采集标本采集n n 采用腰椎穿刺术无菌采集脑脊液标本。用采用腰椎穿刺术无菌采集脑脊液标本。用碘伏进行局部皮肤消毒，在第三、四腰椎碘伏进行局部皮肤消毒，在第三、四腰椎或第四、五腰椎间隙插入带有管芯针的空或第四、五腰椎间隙插入带有管芯针的空针，进针至蛛网膜间隙，拔去管芯针，收针，进针至蛛网膜间隙，拔去管芯针，收集脑脊液集脑脊液5ml5ml10ml10ml，分装于，分装于3 3支无菌小瓶支无菌小瓶中立即送检。取第中立即送检。取第2 2支或最混浊的支或最混浊的1 1支做微支做微生物学检查，做脑脊液培养时应同时采集生物学检查，做脑脊液培养时应同时采集病人血液标本进行血培养。病人血液标本进行血培养。2024/5/25 周六25n n腰椎穿刺法腰椎穿刺法穿刺后先作压力测定穿刺后先作压力测定穿刺后先作压力测定穿刺后先作压力测定u脑脊液采集后分别收集脑脊液采集后分别收集于于3 3个无菌小瓶或无菌试个无菌小瓶或无菌试管中，每瓶管中，每瓶12ml12mlu标本采集后床边接种或标本采集后床边接种或立即送检，存放时间不得立即送检，存放时间不得超过超过1 1小时小时2024/5/25 周六26脑脊液脑脊液n n压力（包括初压和终压测定）压力（包括初压和终压测定）：成人成人成人成人0.69-1.97kPa0.69-1.97kPa，儿童儿童儿童儿童0.69-1.96kPa0.69-1.96kPa，婴儿婴儿婴儿婴儿0.29-0.78kPa0.29-0.78kPan n颜色：无色水样颜色：无色水样n n透明度：透明清晰；透明度：透明清晰；n n凝块或薄膜形成：无；凝块或薄膜形成：无；n n酸碱度（酸碱度（pH）：）：7.357.40；n n相对密度：相对密度：1.0051.009 2024/5/25 周六27脑脊液脑脊液n n颜色颜色颜色颜色：n n红色：脑出血，蛛网膜下腔出血，出血性脑膜炎红色：脑出血，蛛网膜下腔出血，出血性脑膜炎红色：脑出血，蛛网膜下腔出血，出血性脑膜炎红色：脑出血，蛛网膜下腔出血，出血性脑膜炎等。如为穿刺创伤出血，最初数滴为红色，以后等。如为穿刺创伤出血，最初数滴为红色，以后等。如为穿刺创伤出血，最初数滴为红色，以后等。如为穿刺创伤出血，最初数滴为红色，以后逐渐变清。逐渐变清。逐渐变清。逐渐变清。黄色：陈旧性出血，重症黄疸或胡萝蔔素血症等。黄色：陈旧性出血，重症黄疸或胡萝蔔素血症等。黄色：陈旧性出血，重症黄疸或胡萝蔔素血症等。黄色：陈旧性出血，重症黄疸或胡萝蔔素血症等。当当当当CSFCSFCSFCSF中蛋白含量中蛋白含量中蛋白含量中蛋白含量50mg/dl50mg/dl50mg/dl50mg/dl时，其外观亦呈淡黄时，其外观亦呈淡黄时，其外观亦呈淡黄时，其外观亦呈淡黄色。色。色。色。白色：化脓性脑膜炎为米汤样，结核性脑膜炎或真白色：化脓性脑膜炎为米汤样，结核性脑膜炎或真白色：化脓性脑膜炎为米汤样，结核性脑膜炎或真白色：化脓性脑膜炎为米汤样，结核性脑膜炎或真菌性脑膜炎为毛玻璃样外观。菌性脑膜炎为毛玻璃样外观。菌性脑膜炎为毛玻璃样外观。菌性脑膜炎为毛玻璃样外观。褐色或黑色：中枢神经系统黑色素细胞瘤。褐色或黑色：中枢神经系统黑色素细胞瘤。褐色或黑色：中枢神经系统黑色素细胞瘤。褐色或黑色：中枢神经系统黑色素细胞瘤。n n。2024/5/25 周六28脑脊液脑脊液n n凝块或薄膜形成：结核性脑膜炎常有薄膜形成，化脓性脑膜炎则易出现凝块。n n酸碱度（pH）：增高：代谢性或呼吸性碱中毒降低：代谢性或呼吸性酸中毒，脑缺血，缺氧等。n n相对密度：增高：脑炎、脑膜炎、脑出血、脑寄生虫病、脊髓肿瘤等。n n透明度透明度：浑浊：细菌性脑膜炎，真菌性脑膜炎。：浑浊：细菌性脑膜炎，真菌性脑膜炎。2024/5/25 周六29脑脊液脑脊液n n(1)(1)(1)(1)无红细胞。无红细胞。无红细胞。无红细胞。n n(2)(2)白细胞极少，白细胞极少，n n成人：（成人：（0 08 8）10106 6/L/L，n n儿童：（儿童：（1 11515）10106 6/L/L，主要为单个核细胞，淋巴细主要为单个核细胞，淋巴细胞与单核细胞之比为胞与单核细胞之比为7:3.7:3.标本采集后应在1h内进行细胞计数。标本放置过久，细胞可能凝集成团或被破坏，影响计数结果。标本必须混匀后方可进行检查，否则会影响计数结果。2024/5/25 周六30脑脊液脑脊液n n蛋白定量：蛋白定量：0.20.20.45g/L0.45g/L；n n葡萄糖：葡萄糖：2.52.54.5mmol/L4.5mmol/L，n n脑脊液血浆葡萄糖比率脑脊液血浆葡萄糖比率0.30.30.90.9；n n氯化物：氯化物：120120130mmol/L130mmol/L。2024/5/25 周六31中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检查真菌学检查n n（一）（一）标本采集标本采集n n标本采集后应在常温下立即送检，培养脑标本采集后应在常温下立即送检，培养脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌等苛养菌时，膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌等苛养菌时，应将标本置于应将标本置于3535保温送检。用于常规细保温送检。用于常规细菌检测的脑脊液量应为菌检测的脑脊液量应为1ml1ml或大于或大于1ml1ml；用；用于检测抗酸菌的脑脊液量应为于检测抗酸菌的脑脊液量应为5ml5ml或大于或大于5ml5ml。2024/5/25 周六32中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检查真菌学检查n n正常脑脊液无菌、外观清亮。有时可见血正常脑脊液无菌、外观清亮。有时可见血性脑脊液，可能是因穿刺过程中小血窦受性脑脊液，可能是因穿刺过程中小血窦受损所致，可通过连续收集三管标本，并计损所致，可通过连续收集三管标本，并计数其中的红细胞，以区分数其中的红细胞，以区分“穿刺性出血穿刺性出血（traumatic taptraumatic tap）”与病理性出血。若脑与病理性出血。若脑脊液第脊液第1 1管为红色，第管为红色，第2 2、3 3管红色逐渐变淡，管红色逐渐变淡，红细胞计数依次减少，离心沉淀后上清液红细胞计数依次减少，离心沉淀后上清液透明为穿刺性出血。若脑脊液透明为穿刺性出血。若脑脊液3 3管均呈红色，管均呈红色，红细胞计数无明显差别，离心沉淀后上清红细胞计数无明显差别，离心沉淀后上清液呈淡红色或黄色，则为病理性出血。液呈淡红色或黄色，则为病理性出血。2024/5/25 周六33中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检查真菌学检查2024/5/25 周六34中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检验方法真菌学检验方法n n1 1直接涂片检查直接涂片检查n n（1 1）革兰染色）革兰染色 脑脊液混浊或呈脓性者可直脑脊液混浊或呈脓性者可直接涂片，无色透明的脑脊液接涂片，无色透明的脑脊液3000r/min3000r/min离心离心10min10min15min15min，取沉淀物涂片，革兰染色镜，取沉淀物涂片，革兰染色镜检。流行性脑脊髓膜炎患者可取皮肤瘀点渗检。流行性脑脊髓膜炎患者可取皮肤瘀点渗出液涂片检查。若为革兰阴性双球菌，肾形出液涂片检查。若为革兰阴性双球菌，肾形或咖啡豆样，凹面相对，位于白细胞内外，或咖啡豆样，凹面相对，位于白细胞内外，则提示则提示脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌感染；感染；2024/5/25 周六35中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检验方法真菌学检验方法n n1 1直接涂片检查直接涂片检查n n若为革兰阳性双球菌，矛头状，宽端相若为革兰阳性双球菌，矛头状，宽端相对，尖端相背，菌体周围有明显荚膜，对，尖端相背，菌体周围有明显荚膜，则提示则提示肺炎链球菌肺炎链球菌感染；若为革兰阴性、感染；若为革兰阴性、多形态，短小球杆状或丝状，可同时做多形态，短小球杆状或丝状，可同时做荚膜肿胀试验，进行快速鉴定荚膜肿胀试验，进行快速鉴定,则提示则提示流流感嗜血杆菌感嗜血杆菌感染；若为革兰阳性短小杆感染；若为革兰阳性短小杆菌，菌，V V字形或成双排列，出现于大量单核字形或成双排列，出现于大量单核细胞之间，则提示细胞之间，则提示产单核细胞李斯特菌产单核细胞李斯特菌感染。感染。2024/5/25 周六36中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检验方法真菌学检验方法n涂片染色显微镜检查意义涂片染色显微镜检查意义n标本直接涂片、干燥、固定后染色，或经标本直接涂片、干燥、固定后染色，或经离心浓缩集菌，涂片染色，置光学显微镜离心浓缩集菌，涂片染色，置光学显微镜下观察细菌的形态、染色性、排列与特殊下观察细菌的形态、染色性、排列与特殊结构；结果对病原学诊断具有一定意义，结构；结果对病原学诊断具有一定意义，尤其是无菌体液的直接镜检更具有诊断价尤其是无菌体液的直接镜检更具有诊断价值。值。2024/5/25 周六37脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌2024/5/25 周六38 肺炎链球菌（革兰染色）肺炎链球菌（革兰染色）肺炎链球菌（革兰染色）肺炎链球菌（革兰染色）无乳链球菌无乳链球菌（革兰染色）（革兰染色）（革兰染色）（革兰染色）2024/5/25 周六39流感嗜血杆菌脑脊液涂片流感嗜血杆菌脑脊液涂片流感嗜血杆菌脑脊液涂片流感嗜血杆菌脑脊液涂片（革兰染色）（革兰染色）（革兰染色）（革兰染色）产单核细胞李斯特菌产单核细胞李斯特菌（革兰染色）（革兰染色）（革兰染色）（革兰染色）2024/5/25 周六40中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检验方法真菌学检验方法n n1 1直接涂片检查直接涂片检查n n根据细菌形态和染色特性可初步提示感染根据细菌形态和染色特性可初步提示感染细菌的种类。细菌的种类。80%80%左右未经治疗的急性细菌左右未经治疗的急性细菌性脑膜炎患者，脑脊液革兰染色可观察到性脑膜炎患者，脑脊液革兰染色可观察到细菌。若患者检查前已接受过抗生素治疗，细菌。若患者检查前已接受过抗生素治疗，则观察到细菌的比例下降为则观察到细菌的比例下降为60%60%。2024/5/25 周六41中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检验方法真菌学检验方法n n1 1直接涂片检查直接涂片检查n n（2 2）抗酸染色或金胺）抗酸染色或金胺“O O”染色染色 n n脑脊液标本脑脊液标本4000r/min4000r/min离心离心30min30min，取沉淀，取沉淀物涂片，抗酸染色或金胺物涂片，抗酸染色或金胺“0 0”荧光染色镜荧光染色镜检。镜检时应仔细检查整个涂片或观察至检。镜检时应仔细检查整个涂片或观察至少少100100个视野。若油镜检查，在蓝色背景下个视野。若油镜检查，在蓝色背景下找到红色杆菌或荧光显微镜检查，在黑色找到红色杆菌或荧光显微镜检查，在黑色背景中找到亮黄色菌体，可报告背景中找到亮黄色菌体，可报告“找到抗找到抗酸杆菌酸杆菌”。2024/5/25 周六42中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检验方法真菌学检验方法n n（2 2）抗酸染色或金胺）抗酸染色或金胺“O O”染色染色 n n结核性脑膜炎时脑脊液蛋白质含量显著升结核性脑膜炎时脑脊液蛋白质含量显著升高，而革兰染色镜检细菌阴性，但若将脑高，而革兰染色镜检细菌阴性，但若将脑脊液标本进行抗酸染色，则脊液标本进行抗酸染色，则25%25%左右的患者左右的患者呈现抗酸菌阳性。如果取呈现抗酸菌阳性。如果取5ml-10ml5ml-10ml脑脊液，脑脊液，离心，进行快速抗酸染色检查，则可在离心，进行快速抗酸染色检查，则可在80%80%的病例中发现抗酸杆菌。的病例中发现抗酸杆菌。2024/5/25 周六43n n1 1 1 1直接涂片检查直接涂片检查直接涂片检查直接涂片检查n n墨汁染色墨汁染色墨汁染色墨汁染色 脑脊液标本脑脊液标本脑脊液标本脑脊液标本3000r/min3000r/min3000r/min3000r/min离心离心离心离心10min10min10min10min15min15min15min15min，取沉，取沉，取沉，取沉淀物做墨汁负染色，显微镜下见黑色背景中的透亮菌体和淀物做墨汁负染色，显微镜下见黑色背景中的透亮菌体和淀物做墨汁负染色，显微镜下见黑色背景中的透亮菌体和淀物做墨汁负染色，显微镜下见黑色背景中的透亮菌体和宽厚荚膜，有时见出芽，可报告宽厚荚膜，有时见出芽，可报告宽厚荚膜，有时见出芽，可报告宽厚荚膜，有时见出芽，可报告“找到新生隐球菌找到新生隐球菌找到新生隐球菌找到新生隐球菌”。直接涂片染色不易见假丝酵母菌及曲霉菌的菌丝与孢子。直接涂片染色不易见假丝酵母菌及曲霉菌的菌丝与孢子。直接涂片染色不易见假丝酵母菌及曲霉菌的菌丝与孢子。直接涂片染色不易见假丝酵母菌及曲霉菌的菌丝与孢子。2024/5/25 周六44中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检验方法真菌学检验方法n n2 2分离培养分离培养n n（1 1）疑似为化脓性球菌感染者，将血液或）疑似为化脓性球菌感染者，将血液或脑脊液标本先增菌，再接种巧克力平板和脑脊液标本先增菌，再接种巧克力平板和血平板，血平板，5 51010二氧化碳环境，二氧化碳环境，35 35 培培养养1824h1824h，挑取可疑菌落涂片染色镜检，挑取可疑菌落涂片染色镜检，进一步作生化试验、血清学试验等鉴定。进一步作生化试验、血清学试验等鉴定。2024/5/25 周六452024/5/25 周六46Optochin Optochin 敏感试验敏感试验2024/5/25 周六47胆汁溶菌试验胆汁溶菌试验2024/5/25 周六48肺炎链球菌肺炎链球菌n n血液、脑脊液标本需肉汤培养基增菌培养，血液、脑脊液标本需肉汤培养基增菌培养，接种血平板。需置接种血平板。需置5%5%10%CO210%CO2环境培养。环境培养。观察菌落性状和溶血特性。观察菌落性状和溶血特性。2024/5/25 周六49肺炎链球菌鉴定肺炎链球菌鉴定n n肺炎链球菌呈肺炎链球菌呈矛头状矛头状，常，常成双成双排列，有荚排列，有荚膜；血平板上形成灰白色、圆形凸起的细膜；血平板上形成灰白色、圆形凸起的细小菌落，培养小菌落，培养48h48h后后菌落呈菌落呈“脐状脐状”凹陷凹陷，有有草绿色溶血环草绿色溶血环，多数菌株分解菊糖，多数菌株分解菊糖，胆胆盐溶解试验和盐溶解试验和optochinoptochin敏感试验阳性敏感试验阳性，籍，籍此可区别肺炎链球菌与草绿色链球菌。此可区别肺炎链球菌与草绿色链球菌。2024/5/25 周六50药物敏感性试验药物敏感性试验n n青霉素是抗链球菌的首选药物，值得注意青霉素是抗链球菌的首选药物，值得注意的是的是耐青霉素的肺炎链球菌耐青霉素的肺炎链球菌(penicillinresistant(penicillinresistant Streptococous Streptococous pneomoniapneomonia，PRSP)PRSP)和草绿色链球菌，若来和草绿色链球菌，若来源于血和脑脊液，则应检测该菌株对头孢源于血和脑脊液，则应检测该菌株对头孢曲松、头孢噻肟和美洛培南的曲松、头孢噻肟和美洛培南的MICMIC以判断敏以判断敏感、中介或耐药。感、中介或耐药。2024/5/25 周六512024/5/25 周六521.1.1.1.与类白喉杆菌与类白喉杆菌与类白喉杆菌与类白喉杆菌 幼龄为革兰阳性，陈旧为革兰阴性幼龄为革兰阳性，陈旧为革兰阴性幼龄为革兰阳性，陈旧为革兰阴性幼龄为革兰阳性，陈旧为革兰阴性 25252525动力阳性而不符合革兰阴性杆菌动力阳性而不符合革兰阴性杆菌动力阳性而不符合革兰阴性杆菌动力阳性而不符合革兰阴性杆菌 2.2.2.2.与与与与B B B B群链球菌群链球菌群链球菌群链球菌 相同：呈短链状排列，相同：呈短链状排列，相同：呈短链状排列，相同：呈短链状排列，37373737无动力，无动力，无动力，无动力，CAMPCAMPCAMPCAMP试验阳性试验阳性试验阳性试验阳性 鉴别：触酶试验鉴别：触酶试验鉴别：触酶试验鉴别：触酶试验-本菌阳性本菌阳性本菌阳性本菌阳性 3.3.3.3.与粪肠球菌与粪肠球菌与粪肠球菌与粪肠球菌 相同：耐盐、耐碱、耐胆汁相同：耐盐、耐碱、耐胆汁相同：耐盐、耐碱、耐胆汁相同：耐盐、耐碱、耐胆汁 鉴别：触酶试验。鉴别：触酶试验。鉴别：触酶试验。鉴别：触酶试验。在在在在 BAPBAP形成狭窄形成狭窄形成狭窄形成狭窄 溶血，在半固体培养提高分离阳性率溶血，在半固体培养提高分离阳性率溶血，在半固体培养提高分离阳性率溶血，在半固体培养提高分离阳性率n n药物敏感性试验药物敏感性试验药物敏感性试验药物敏感性试验n n本菌对青霉素、链霉素、四环素、氯霉素和红霉素等多种本菌对青霉素、链霉素、四环素、氯霉素和红霉素等多种本菌对青霉素、链霉素、四环素、氯霉素和红霉素等多种本菌对青霉素、链霉素、四环素、氯霉素和红霉素等多种抗生素敏感；对磺胺类、杆菌肽、羧苄青霉素、多粘菌素抗生素敏感；对磺胺类、杆菌肽、羧苄青霉素、多粘菌素抗生素敏感；对磺胺类、杆菌肽、羧苄青霉素、多粘菌素抗生素敏感；对磺胺类、杆菌肽、羧苄青霉素、多粘菌素B B耐药，首选药物为氨苄青霉素。耐药，首选药物为氨苄青霉素。耐药，首选药物为氨苄青霉素。耐药，首选药物为氨苄青霉素。产单核细胞李斯特菌产单核细胞李斯特菌4 4冷增菌生长成扩散呈倒松树状冷增菌生长成扩散呈倒松树状冷增菌生长成扩散呈倒松树状冷增菌生长成扩散呈倒松树状，2024/5/25 周六53产单核细胞李斯特菌产单核细胞李斯特菌n n药物敏感性试验药物敏感性试验n n本菌对青霉素、链霉素、四环素、氯霉素本菌对青霉素、链霉素、四环素、氯霉素和红霉素等多种抗生素敏感；对磺胺类、和红霉素等多种抗生素敏感；对磺胺类、杆菌肽、羧苄青霉素、多粘菌素杆菌肽、羧苄青霉素、多粘菌素B B耐药，首耐药，首选药物为氨苄青霉素。选药物为氨苄青霉素。2024/5/25 周六54脑膜炎奈瑟菌革兰染色脑膜炎奈瑟菌革兰染色2024/5/25 周六55脑膜炎奈瑟菌透射电镜图脑膜炎奈瑟菌透射电镜图2024/5/25 周六56糖发酵试验糖发酵试验糖发酵试验糖发酵试验（葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、阴性对照）（葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、阴性对照）（葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、阴性对照）（葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、阴性对照）返回返回2024/5/25 周六57中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检验方法真菌学检验方法脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌 脑脊液先经血清肉汤培养基增菌后脑脊液先经血清肉汤培养基增菌后,再经巧再经巧克力平板划线分离克力平板划线分离.平板置于平板置于5%CO25%CO2环境中环境中3718-24h3718-24h后可形成直径后可形成直径1-2mm,1-2mm,圆形圆形,凸起凸起,光滑光滑,湿润湿润,灰褐色露珠状菌落灰褐色露珠状菌落.挑取可疑菌挑取可疑菌落涂片染色检查落涂片染色检查,并进一步作生化反应等实并进一步作生化反应等实验予以鉴定。验予以鉴定。2024/5/25 周六58中枢神经系统感染标本的细菌、中枢神经系统感染标本的细菌、真菌学检验方法真菌学检验方法脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌用已知脑膜炎奈瑟菌多价诊断血清与待检菌作直用已知脑膜炎奈瑟菌多价诊断血清与待检菌作直接凝集试验接凝集试验,再用单价血清鉴别型别再用单价血清鉴别型别;通过氧化通过氧化酶试验酶试验,触酶试验及糖类发酵等生化反应作出鉴定触酶试验及糖类发酵等生化反应作出鉴定.氧化酶和触酶阳性，脑膜炎奈瑟菌分解葡萄糖、氧化酶和触酶阳性，