基于蜡螟感染模型研究亚抑菌浓度氟康唑对光滑念珠菌毒力的影响.pdf

论著基于蜡螟感染模型研究亚抑菌浓度氟康唑对光滑念珠菌毒力的影响程鹏1,2 阿祥仁2 周健武2 牟晓明2 田丽娟2 马小亚1(1.青海大学医学院,西宁 8 1 0 0 0 1;2.青海省人民医院医学检验科,西宁 8 1 0 0 0 7)【摘要】目的 基于蜡螟感染模型探究亚抑菌浓度(s u b-M I C)氟康唑(f l u c o n a z o l e,F L U)对光滑念珠菌毒力的影响。方法收集青海省人民医院2 0 2 1年4月至2 0 2 2年1 0月临床分离非重复的光滑念珠菌作为实验菌株,采用A T B法测定F L U对光滑念珠菌的最低抑菌浓度(M I C)。采用蜡螟感染模型检测光滑念珠菌的毒力,并采用病理学和病原学方法评估建模是否成功。穿刺及不同s u b-M I C F L U对健康蜡螟的影响:对照组不做任何处理,实验组分为三组,即P B S组(注射1 0 L P B S)、F L U亚组(分别注射1 0 L F L U药液,使感染蜡螟体内F L U浓度为0.5 m g/k g、1 m g/k g、2 m g/k g、4 m g/k g、8 m g/k g、1 6 m g/k g)和穿刺组(微量注射器穿刺但不注射)。不同s u b-M I C的F L U对光滑念珠菌感染蜡螟的影响:采用2.5 01 06酵母/只剂量感染蜡螟,2 h后,对照组再注射1 0 L P B S,实验组再注射不同浓度 F L U工作液,观测对光滑念珠菌感染的蜡螟的治疗效果。结果 F L U对9株临床分离的光滑念珠M I C为83 2 m g/L,光滑念珠菌A T C C 2 0 0 1的M I C为3 2 m g/L。实验组蜡螟肠组织病理切片中检测到酵母样孢子,肠组织培养出光滑念珠菌,对照组中肠组织病理切片和真菌培养均未发现真菌。穿刺可造成蜡螟损伤,但所致死亡率低于1 0%。1/2 M I C F L U可提高光滑念珠菌感染蜡螟生存率,具有统计学意义(P0.0 5)。结论 1/2 M I C F L U对光滑念珠菌感染的蜡螟具有一定的治疗作用,但浓度低于1/2 M I C对感染蜡螟无明显的保护作用。【关键词】光滑念珠菌;蜡螟;亚抑菌浓度;氟康唑【中图分类号】R 3 7 9.4 【文献标志码】A 【文章编号】1 6 7 3-3 8 2 7(2 0 2 3)1 8-0 2 9 1-0 5S t u d y o n t h e e f f e c t o f f l u c o n a z o l e w i t h s u b i n h i b i t o r y c o n c e n t r a t i o n o n t h e v i r u l e n c e o f C a n d i d a g l a b r a t a b a s e d o n t h e G a l l e r i a m e l l o n e l l a i n f e c t i o n m o d e lCHE N G P e n g1,2,A X i a n g r e n2,Z HOU J i a n w u2,MU X i a o m i n g2,T I AN L i j u a n2,MA X i a o y a1(1.M e d i c a l C o l l e g e o f Q i n g h a i U n i v e r s i t y,X i n i n g 8 1 0 0 0 1,C h i n a;2.D e p a r t m e n t o f M e d i c a l L a b o r a t o r y,Q i n g h a i P r o-v i n c i a l P e o p l es H o s p i t a l,X i n i n g 8 1 0 0 0 7,C h i n a)【A b s t r a c t】O b j e c t i v e B a s e d o n t h e G a l l e r i a m e l l o n e l l a i n f e c t i o n m o d e l,t h e e f f e c t o f s u b-M I C f l u c o n a z o l e o n t h e v i r u l e n c e o f C a n d i d a g l a b r a t a w a s i n v e s t i g a t e d.M e t h o d s N o n r e p e t i t i v e C a n d i d a g l a b r a t a s t r a i n s c l i n i c a l l y i s o l a t e d f r o m Q i n g h a i P r o v i n c i a l P e o p l es H o s p i t a l f r o m A p r i l 2 0 2 1 t o O c t o b e r 2 0 2 2 w e r e c o l l e c t e d,a n d t h e m i n i m u m i n h i b i t o r y c o n c e n t r a t i o n(M I C)o f f l u c o n a z o l e a g a i n s t C a n d i d a g l a b r a t a w a s d e t e r m i n e d b y A T B m e t h o d.T h e v i r u l e n c e o f C a n d i d a g l a b r a t a w a s t e s t e d b y t h e G a l l e r i a m e l l o n e l l a i n f e c t i o n m o d e l,a n d t h e s u c c e s s o f t h e m o d e l w a s e v a l u a t e d b y p a t h o l o g i c a l a n d p a t h o g e n i c m e t h o d s.E f f e c t s o f p u n c t u r e a n d d i f f e r e n t s u b-M I C F L U s o n h e a l t h y G a l l e r i a m e l l o n e l l a:t h e c o n t r o l g r o u p d i d n o t d o a n y t r e a t m e n t,a n d t h e e x p e r i m e n t a l g r o u p w a s d i v i d e d i n t o t h r e e g r o u p s,n a m e l y P B S g r o u p(1 0 L P B S),F L U s u b g r o u p(i n-j e c t 1 0 L f l u c o n a z o l e s o l u t i o n r e s p e c t i v e l y,m a k i n g t h e F L U c o n c e n t r a t i o n i n t h e b o d y o f i n f e c t e d G a l l e r i a m e l l o n e l l a 0.5 m g/k g,1 m g/k g,2 m g/k g,4 m g/k g,8 m g/k g,a n d 1 6 m g/k g)a n d p u n c t u r e g r o u p(m i c r o s y r i n g e p u n c t u r e b u t n o i n j e c-t i o n).U s e 2.5 01 06 y e a s t s/l a r v a i n f e c t e d w i t h G a l l e r i a m e l l o n e l l a,a f t e r 2 h,t h e c o n t r o l g r o u p w a s i n j e c t e d w i t h 1 0 L P B S,t h e e x p e r i m e n t a l g r o u p w a s i n j e c t e d w i t h d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s o f F L U w o r k i n g s o l u t i o n,o b s e r v i n g t h e t h e r a p e u t i c基金项目:青海省2 0 2 2年创新平台建设专项项目(2 0 2 2-Z J-T 0 1)作者简介:程鹏,男(汉族),硕士研究生在读.E-m a i l:1 1 7 2 9 7 5 7 5 1q q.c o m通信作者:阿祥仁,E-m a i l:x i a n g r e n a_0 0 11 6 3.c o m192 中国真菌学杂志 2 0 2 3年8月 第1 8卷 第4期 C h i n J M y c o l,A u g u s t 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.4 e f f e c t o n t h e G a l l e r i a m e l l o n e l l a i n f e c t e d b y C a n d i d a g l a b r a t a.R e s u l t s T h e M I C o f f l u c o n a z o l e t o 9 c l i n i c a l l y i s o l a t e d C a n d i d a g l a b r a t a w a s 8 m g/L3 2 m g/L,a n d t h a t o f C a n d i d a g l a b r a t a A T C C 2 0 0 1 w a s 3 2 m g/L.Y e a s t-l i k e s p o r e s w e r e d e t e c t e d i n t h e p a t h o l o g i c a l s e c t i o n o f t h e i n t e s t i n a l t i s s u e o f t h e G a l l e r i a m e l l o n e l l i n t h e e x p e r i m e n t a l g r o u p,a n d C a n d i d a g l a b r a w a s c u l t u r e d i n t h e i n t e s t i n a l t i s s u e.N o f u n g u s w a s f o u n d i n t h e p a t h o l o g i c a l s e c t i o n a n d f u n g a l c u l t u r e o f t h e i n t e s t i-n a l t i s s u e i n t h e c o n t r o l g r o u p.P u n c t u r e c o u l d c a u s e d a m a g e t o t h e G a l l e r i a m e l l o n e l l a,b u t t h e m o r t a l i t y w a s l e s s t h a n 1 0%.1/2 M I C f l u c o n a z o l e c o u l d i m p r o v e t h e s u r v i v a l r a t e o f C a n d i d a g l a b r a t a i n f e c t e d G a l l e r i a m e l l o n e l l a w i t h s t a t i s t i c a l s i g n i f i c a n c e(P0.0 5).C o n c l u s i o n 1/2 M I C f l u c o n a z o l e h a d i n h i b i t o r y e f f e c t o n t h e v i r u l e n c e o f C a n d i d a g l a b r a t a,b u t t h e c o n c e n t r a-t i o n b e l o w 1/2 M I C h a d n o o b v i o u s p r o t e c t i v e e f f e c t.【K e y w o r d s】C a n d i d a g l a b r a t a;G a l l e r i a m e l l o n e l l a;s u b i n h i b i t o r y c o n c e n t r a t i o n;f l u c o n a z o lC h i n J M y c o l,2 0 2 3,1 8(4):2 9 1-2 9 5 光滑念珠菌(C a n d i d a g l a b r a t a)是一种机会性致病 菌,是 侵 袭 性 真 菌 病 的 第 二 大 常 见 病 原体1。在老年体弱患者、肿瘤患者以及免疫功能低下患者中发病率高,病死率可高达5 0%2。氟康唑(f l u c o n a z o l,F L U)是一种一线三唑类广谱抗真菌药物,不良反应小、防治真菌感染效果确切,为WHO指定的治疗全身性真菌感染的首选药物3。亚抑制浓度(s u b-M I C)是 指 低 于 最 低 抑 菌 浓 度(M I C)的抗生素浓度,在预防和治疗真菌感染的过程中,难免会出现病原菌暴露于亚抑菌浓度药物中的情况。众多研究表明4-5,很多s u b-M I C抗生素会对病原菌毒力产生影响,继而影响抗感染治疗效果。本研究拟采 用蜡螟感染 模 型 探 究s u b-M I C F L U对光滑念珠菌毒力的影响,以期为临床使用低剂量F L U防治光滑念珠菌感染的治疗效果预估提供一定的理论依据。1 材料与方法1.1 材料实验菌株来源 收集青海省人民医院2 0 2 1年6月至2 0 2 2年1 0月临床分离的光滑念珠菌共9株,其中来源于肺泡灌洗液3株、血液2株、胸腔积液2株、伤口分泌物2株,编号分别为(L 1、L 2、L 3、B 1、B 2、P 1、P 2、W 1、W 2),剔除重复菌株。所有菌株经微生物质谱鉴定为光滑念珠菌。质控菌株:光滑念珠菌AT C C 2 0 0 1,购自北京科展生物科技有限公司。所有菌株均用脑心浸出液-8 0 保存。仪器与试剂 微生物质谱仪购自中元汇吉生物有限公司;D e n s i CHE K P l u s比浊仪和酵母样真菌药敏试剂盒(AT B F UNGU S 3)均购自生物梅里埃法国股份有限公司;隔水式恒温温箱购自上海鸿都实业有限公司;1 0 L微量进样器购自上海高鸽工贸有限公司;无菌空平皿购自上海仁度生物科技股份有限公司;脑心浸出液购自杭州滨和微生物试剂有限公司;沙堡弱琼脂培养基(含氯霉素0.1 2 5 g/L)购自江门市凯林贸易有限公司;念珠菌显色培养基购自郑州博赛生物技术股份有限公司;磷酸盐缓冲液(P B S)购自欧蒙(杭州)医学实验诊断有限公司。实验动物 蜡螟购自天津惠裕德生物科技有限公司,幼虫为五龄幼虫,长度23 c m,体重2 5 0 3 5 0 m g;贮存条件:(1 02),避光;培养条件:温度(3 52)、湿度6 0%、避光6。实验用药 F L U氯化钠注射液(2 0 0 0 m g/L)购自扬子江药业集团有限公司。使用无菌生理盐水稀释为4 8 0 m g/L的工作液。每只蜡螟注射1 0 L工作液,即蜡螟体内F L U浓度约为1 6 m g/k g。其余工作液浓度均按此方法进行配制。1.2 方法菌悬液制备 实验菌株转种于S D A培养基,2 8 培养4 8 h。取单个菌落用P B S洗涤3次,配制 成 半 数 致 死 浓 度:2.5 01 08C F U/m L菌悬液7。M I C的测定 实验菌株转种于S D A培养基,2 8 培养4 8 h。取单个菌落用0.8 5%N a C l制备2.0 M c F的菌悬液,用移液枪取2 0 L菌悬液加入AT B F 2培养基,混匀,用移液枪取1 3 5 L分别加至AT B F UNGU S 3试条杯状凹,盖上盖板,置于3 5 培养箱中孵育2 4 h。从F L U低浓度开始,与生长对照杯状凹比较,无生长测试杯对应测试杯浓292 中国真菌学杂志 2 0 2 3年8月 第1 8卷 第4期 C h i n J M y c o l,A u g u s t 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.4 度记录为M I C。蜡螟感染模型构建 随机选取2 5 03 5 0 m g健康蜡螟进行实验,每组1 0只,用7 5%酒精消毒蜡螟腹部,用微量进样器经蜡螟最后一只左侧尾足下方 向 蜡 螟 体 内 注 射1 0 L、浓 度 为2.5 01 08C F U/L的光滑念珠菌菌悬液(即2.01 06酵母/只)、不同s u b-M I C的F L U或者P B S7-8。将蜡螟放置于铺有无菌滤纸的洁 净平皿(直径9 0 mm)中,置于温度3 7、湿度6 0%的恒温培养箱中避光孵育2 h后,在蜡螟最后一只右侧尾足下方注射1 0 L相应浓度的F L U药液,并放回3 7 温箱中孵育。每天记录蜡螟生存状况,持续观察5 d9。蜡螟感染模型病理学和病原学检测 收集实验组死亡的蜡螟新鲜尸体(死亡时间2 h)和对照组蜡螟活体。分别分离出肠管,经固定、脱水、石蜡包埋,将组织横向切片,用HE染色,使用光学显微镜观测;取虫体用7 5%酒精消毒后研磨,并加入1 m L无菌生理盐水混匀稀释,用接种环取1 L分别接种于念珠菌显色培养基和S D A培养基,置于2 8 温箱中培养4 8 h后,S D A培养基上取单个菌落进行微生物质谱鉴定。穿刺及不同s u b-M I C的F L U对健康蜡螟的影响 对照组:随机选取1 0只健康蜡螟,不做任何处理,放置于将蜡螟放置于铺有无菌滤纸的洁净平皿(直径9 0 mm)中,置于温度3 7、湿度6 0%的恒温培养箱中避光孵育。实验组:分为三组,即P B S组(注射1 0 L P B S)、F L U亚组和穿刺组(微量注射器穿刺但不注射)。本实验独立进行,重复三次,结果取均值。不同s u b-M I C的F L U对光滑念珠菌感染蜡螟的影响 对照组:随机选取1 0只健康蜡螟,注射1 0 L的P B S,2 h后再注射1 0 L的P B S。实验组:随机选取1 0 0只健康蜡螟随机分成1 0组,每组1 0只。每只蜡螟采用21 06酵母/只剂量的菌悬液感染蜡螟,2 h后分别注射用1 0 L工作液,使蜡螟体内F L U浓度分别为0.5 m g/k g、1 m g/k g、2 m g/k g、4 m g/k g、8 m g/k g和1 6 m g/k g。本实验独立进行并重复三次,结果取均值。1.3 统计学分析采用S P S S 2 6.0软件进行数据分析。计量资料采用均数标准差(xs)表示,采用单因素方差分析(ANOVA分析);P0.0 5为差异有统计学意义。使用O r i g i n 2 0 2 1软件绘制生存曲线图。2 结 果2.1 F L U对光滑念珠菌的M I C值检测结果 AT B法检测1 0株光滑念珠菌对F L U的M I C值范围为83 2 m g/L。根据美国临床和实验室标准协会(C L S I 2 0 2 0版)1 0推荐方法进行药敏实验结果判读,8株光滑念珠菌对F L U敏感,2株为中介,其中1株为光滑念珠菌标准菌株AT C C 2 0 0 1(见表1)。2.2 蜡螟感染模型建模结果本实验选用的蜡螟幼虫为五龄健康幼虫,体重为2 5 03 5 0 m g/只,长度23 c m,身体呈乳白色(见图1 A)。经光滑念珠菌感染2 h后,虫体逐渐出现棕色或黑色斑点,逐渐变黑,直至死亡,全部变成黑色(见图1 A)。蜡螟组织病理切片显微镜下,可观察到实验组蜡螟肠组织中有酵母样孢子(见图1 D箭头示),而对照组蜡螟肠组织未见真菌(见图1 C)。蜡螟尸体经7 5%酒精消毒,研磨后接种于S D A和念珠菌显色培养基。实验组蜡螟组织匀浆在念珠菌显色培养基上形成表面光滑、中央呈紫红色、边缘色淡、圆形菌落,可初步判定为光滑念珠菌。S D A上可见光滑湿润、隆起、奶油色菌落,经微生物质谱鉴定确认为光滑念珠菌。对照组未发现真菌生长,说明蜡螟感染模型建模成功。2.3 穿刺及不同s u b-M I C的F L U对健康蜡螟的影响对照组未发现蜡螟死亡,说明本实验所用蜡螟在本实验条件下无自然死亡现象。P B S组、F L U各亚组和穿刺组蜡螟生存率均未达到1 0 0%,说明穿刺对 蜡 螟 具 有 一 定 的 损 伤,但 死 亡 率 均 小 于1 0%,说明穿刺对蜡螟损伤很小(见图2)。表1 F L U对光滑念珠菌的M I C值T a b.1 M I C v a l u e s o f F L U t o C a n d i d a g l a b r a t a菌株L 1L 2L 3B 1B 2P 1P 2W 1W 2A T C C 2 0 0 1M I C(m g/L)1 681 61 61 61 63 2883 2敏感性SSSSSSISSI注:S为敏感,I为中介。392 中国真菌学杂志 2 0 2 3年8月 第1 8卷 第4期 C h i n J M y c o l,A u g u s t 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.4 图1 蜡螟感染模型及病理学检测.A.蜡螟幼虫感染光滑念珠菌后逐渐变黑;B.蜡螟幼虫感染2 4 h后;C.P B S组蜡螟肠组织(1 0 0 0);D.感染蜡螟肠组织(1 0 0 0)F i g.1 I n f e c t i o n m o d e l a n d p a t h o l o g i c a l e x a m i n a t i o n o f G a l l e r i a m e l l o n e l l a.A.T h e G a l l e r i a m e l l o n e l l a l a r v a e g r a d u a l l y t u r n b l a c k a f t e r b e i n g i n f e c t e d w i t h C a n d i d a g l a b r a t a;B.A f t e r 2 4 h i n f e c t i o n o f G a l l e r i a m e l l o n e l l a;C.I n t e s t i n a l t i s s u e o f G a l l e r i a m e l l o n e l l a i n P B S g r o u p(1 0 0 0);D.I n f e c t e d i n t e s t i n a l t i s s u e o f G a l l e r i a m e l l o n e l l a(1 0 0 0)图2 穿刺及不同s u b-M I C F L U对健康蜡螟的影响F i g.2 E f f e c t s o f p u n c t u r e a n d d i f f e r e n t s u b-M I C F L U s o n h e a l t h y G a l l e r i a m e l l o n e l l a2.4 不同s u b-M I C F L U对感染蜡螟的治疗作用如图3所示,感染蜡螟5 d生存率逐渐降低,且第1天死亡率最高,第5天趋于稳定。感染蜡螟经1/2 M I C、1/4 M I C、1/8 M I C、1/3 2 M I C的F L U和P B S治疗后,5 d生存率(%)分别为4 5.0 02.8 3、2 3.3 36.6 7、2 1.3 37.8 9、1 7.6 76.1 0、2 0.0 05.4 4。其中,1/2 M I C F L U对感染蜡螟较0 M I C F L U(即P B S)具有明显的治疗作用(P0.0 5)。3 讨 论蜡螟(G a l l e r i a m e l l o n e l l a)幼虫是一种无脊椎动物,其免疫应答与哺乳动物的先天免疫应答结构和功能相似,可作为较为理性的动物模型9。此图3 不同s u b-M I C F L U对感染蜡螟生存率的影响F i g.3 E f f e c t s o f d i f f e r e n t s u b-M I C F L U s o n t h e s u r v i v a l r a t e s o f i n f e c t e d G a l l e r i a m e l l o n e l l a外,蜡螟易养殖、实验操作相对简单且结果易于观察、成本低、亦不涉及伦理问题等优点,使得蜡螟感染模型越来越多被用于真菌毒力评估和抗菌药物疗效研究1 1。本实验成功构建了光滑念珠菌感染蜡螟的动物模型。观察到对照组无蜡螟死亡,说明本实验所用蜡螟在本实验条件下无自然死亡现象;使用P B S、0.51 6 m g/k g的F L U和用微量进样器穿刺蜡螟,蜡螟5 d生存率均未达到1 0 0%,说明穿刺对蜡螟具有一定的损伤,但每组蜡螟死亡平均不超过一只,说明穿刺对蜡螟损伤很小。此外,也观测到不同浓度的F L U注射蜡螟,蜡螟生存率无统计学差异(P0.0 5),说明0.51 6 m g/k g的F L U对蜡螟不良反应也很小。使用抗生素是防治病原体感染最常用和最有效的解决方案,但药物到达不同组织器官中往往达492 中国真菌学杂志 2 0 2 3年8月 第1 8卷 第4期 C h i n J M y c o l,A u g u s t 2 0 2 3,V o l 1 8,N o.4 不到M I C,即s u b-M I C。s u b-M I C抗生素对病原微生物生理状态具有调控作用,且调控作用可因抗菌药物种类、浓度、作用时间、实验条件或具体菌株的差异,可能会呈现抑制或诱导等不同结果1 2。如亚抑菌浓度阿莫西林、多西环素、磷霉素、青霉素G四环素、万古霉素可增强粪肠球菌分离株的生物膜形成能力1 3。S i r i p e n等1 4采用结晶紫实验研究s u b-M I C对光滑念珠菌和白念珠菌生物膜的影响发现,与1 M I C的卡泊芬净(C A S)或F L U相比,1/2 M I C、1/4 M I C的联合氟康唑(C A S-F L U)都可以使白念珠菌生物膜减少,其中1/4 M I C的C A S-F L U抑制作用更加明显,但1 M I C C A S或F L U对白念珠菌生物膜无抑制作用。对白念珠菌和光滑念珠菌混合生物膜,1/2 M I C、1/4 M I C的C A S-F L U都可以使白念珠菌生物膜减少,但两种浓度对生物膜抑制率与单独的C A S没有差异,F L U作为应用 最 为 广 泛 的 抗 真 菌 药 物,有 关s u b-M I C F L U对光滑念珠菌毒力的影响尚缺乏相关研究,尤其是涉及体内研究更少。因此,本研究基于蜡螟感染模型研究s u b-M I C F L U对光滑念珠菌毒力的影响,采用穿刺方式感染蜡螟,此方式感染蜡螟菌量确切、效果好,是目前应用最多的感染方式1 5。本研究采用2.5 01 06酵母/只菌量注射感染蜡螟,2 h后再注射1 0 L的1/2 M I C、1/4 M I C、1/8 M I C和1/1 6 M I C F L U对感染蜡螟进行干预,发现1/2 M I C F L U的感染蜡螟具有一定的保护作用,生存率可提高约2 5%(P0.0 5),与Am e s等7研究结果相似,即3 m g/k g、6 m g/k g和1 2 m g/k g F L U不能有效治疗光滑念珠菌感染,但该实验未涉及1 6 m g/k g F L U对光滑念珠菌感染蜡螟治疗作用。本实验中发现1 6 m g/k g F L U对临床分离菌株P 2和光滑念珠菌A T C C 2 0 0 1感染的蜡螟具有治疗作用,蜡螟生存率分别提高了2 0%和2 3.3 3%,说明较高浓度的F L U才能对光滑念珠菌感染蜡螟具有治疗作用。综上所述,蜡螟感染模型是评价真菌毒力的良好动物模型。1/2 M I C F L U对光滑念珠菌感染的蜡螟具有保护作用,但更低浓度的F L U对感染蜡螟无明显保护作用。因此,临床预防和治疗光滑念珠菌感染过程中,应尽量避免光滑念珠菌暴露于低于1/2 M I C的F L U环 境 中。本 实 验 得 出s u b-M I C的F L U对光滑念珠菌感染蜡螟的宏观整体治疗作用,但具体的病理机制仍有待进一步研究。参 考 文 献1 GA B A L D N T,GME Z-MO L E R O E,B A D E R O.M o l e c-u l a r t y p i n g o f C a n d i d a g l a b r a t aJ.M y c o p a t h o l o g i a,2 0 2 0,1 8 5(5):7 5 5-7 6 4.2 刘静,郑秋实,黄广华.光滑念珠菌的生物学、流行病学以及耐 药 机 制 研 究 进 展 J.菌 物 学 报,2 0 2 0,3 9(1 1):2 0 1 4-2 0 2 4.3 P A P P A S P G,KAU F FMAN C A,AN D E S D R,e t a l.C l i n i c a l p r a c t i c e g u i d e l i n e f o r t h e m a n a g e m e n t o f c a n d i d i a s i s:2 0 1 6 u p d a t e b y t h e i n f e c t i o u s d i s e a s e s s o c i e t y o f Am e r i c aJ.C l i n I n f e c t D i s,2 0 1 6,6 2(4):e 1-5 0.4 E L-HOU S S A I N I H H,E L NA B AWY O M,NA S S E R H A,e t a l.I n f l u e n c e o f s u b i n h i b i t o r y a n t i f u n g a l c o n c e n t r a t i o n s o n e x t r a c e l l u l a r h y d r o l a s e s a n d b i o f i l m p r o d u c t i o n b y C a n d i d a a l b i c a n s r e c o v e r e d f r o m E g y p t i a n p a t i e n t sJ.BMC I n f e c t D i s,2 0 1 9,1 9(1):5 4.5 C HE N J,Z HOU H,HUAN G J,e t a l.V i r u l e n c e a l t e r a-t i o n s i n S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s u p o n t r e a t m e n t w i t h t h e s u b-i n h i b i t o r y c o n c e n t r a t i o n s o f a n t i b i o t i c sJ.J A d v R e s,2 0 2 1,3 1:1 6 5-1 7 5.D O I:1 0.1 0 1 6/j.j a r e.2 0 2 1.0 1.0 0 8.6 赵望,孙毅,曾同祥.大蜡螟作为病原真菌动物实验模型的相关研究J.中国真菌学杂志,2 0 2 0,1 5(4):2 4 8-2 5 2.7 AME S L,D UX B UR Y S,P AWL OWS KA B,e t a l.G a l l e r i a m e l l o n e l l a a s a h o s t m o d e l t o s t u d y C a n d i d a g l a b r a t a v i r u-l e n c e a n d a n t i f u n g a l e f f i c a c yJ.V i r u l e n c e,2 0 1 7,8(8):1 9 0 9-1 9 1 7.8 MA R C O S-Z AMB R ANO L J,B O R D A L L O-C A R D ONA M,B O R GH I E,e t a l.C a n d i d a i s o l a t e s c a u s i n g c a n d i d e m i a s h o w d i f f e r e n t d e g r e e s o f v i r u l e n c e i n G a l l e r i a m e l l o n e l l aJ.M e d M y c o l,2 0 2 0,5 8(1):8 3-9 2.9 I GNA S I AK K,MA XWE L L A.G a l l e r i a m e l l o n e l l a(g r e a-t e r w a x m o t h)l a r v a e a s a m o d e l f o r a n t i b i o t i c s u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g a n d a c u t e t o x i c i t y t r i a l sJ.BMC R e s N o t e s,2 0 1 7,1 0(1):4 2 8.1 0 B E R KOW E L,L O C KHA R T S R,O S T R O S KY-Z E I C H-N E R L.A n t i f u n g a l s u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g:C u r r e n t a p p r o a-c h e sJ.C l i n M i c r o b i o l R e v,2 0 2 0,3 3(3):e 0 0 0 6 9-1 9.1 1 S M I TH D F Q,C A S A D E VA L L A.F u n g a l i mm u n i t y a n d p a t h o g e n e s i s i n m a mm a l s v e r s u s t h e i n v e r t e b r a t e m o d e l o r-g a n i s m G a l l e r i a m e l l o n e l l aJ.P a t h o g D i s,2 0 2 1,7 9