DB43∕T 2174-2021 辣椒抗白绢病室内鉴定技术规程(湖南省).pdf

43DB43/T 21742021 湖南省地方标准辣椒白绢病抗性室内鉴定技术规程Rulers for Evaluation of pepper for resistance to Southern BlightICSCCS 67.080.20B 31发 布湖南省市场监督管理局2021-08发布-292021-10实施-29DB43/T 21742021 I 目 次 前言 1 范围 1 2 术语和定义 1 2.1 辣椒白绢病 Pepper Southern Blight 1 2.2 辣椒白绢病抗性 1 3 白绢病菌接种体制备 1 3.1 病原物分离与鉴定 1 3.2 接种体制备 1 3.3 培养基配制 1 3.4 病原物保存 2 4 白绢病抗性室内鉴定 2 4.1 鉴定室 2 4.2 鉴定材料育苗 2 4.3 接种时期 2 4.4 接种方法 2 4.5 接种后管理 2 5 病情鉴定 2 5.1 病情级别划分 2 5.2 调查方法 3 6 抗病性评价 3 6.1 抗病性评价标准 3 6.2 鉴定结果的有效性判别 3 7 记录与保存 3 附录 A（资料性）辣椒白绢病病原菌的学名、形态描述和分子鉴定 5 DB43/T 21742021 II DB43/T 21742021 III 前 言 本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本标准由湖南省农业农村厅提出。本标准由湖南省标准化技术委员会归口。本标准主要起草单位：湖南省蔬菜研究所、湖南农业大学植物保护学院、湖南省微生物研究院、湖南省植物保护研究所、湖南大学研究生院隆平分院、衡南县植保植检站。本文件主要起草人：郑井元、吴永红、周书栋、李雪峰、陈武、刘清术、朱春晖、文湘钰、张纯、王俊莹、张竹青、陈文超、杨莎、黄军、李伟兵。DB43/T 21742021 IV DB43/T 21742021 1 辣椒白绢病抗性室内鉴定技术规程 1 范围 本文件规定了辣椒白绢病抗性鉴定的定义和术语、接种体制备、室内抗性鉴定、病情调查、抗病性评价以及记录与保存。本文件适用于湖南省或相似地区辣椒种质资源白绢病抗性室内鉴定。2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文本。2.1 辣椒白绢病 Pepper Southern Blight 由齐整小核菌（Sclerotium rolfsii.sacc）侵害植株茎基部和根部引起的土传性病害。发病时近地面茎基部初呈浅褐色水浸状腐烂，渐变成深褐色，病部凹陷，表面产生白色绢丝状菌丝，集结成束，呈辐射状向茎上发展，并向茎基部四周地面扩展，病健部分界明显，在茎基部近土表有白色霉层产生，菌丝向左右扩大后绕茎一周，地上部叶片迅速萎蔫，叶色变黄变淡，整株枯死。2.2 辣椒白绢病抗性 辣椒在白绢病菌的侵染下，能尽量减少损害，或受到侵染后能恢复生长，继续保持生命活力的特征。3 白绢病菌接种体制备 3.1 病原物分离与鉴定 从发病田间采集具有典型症状的病株，采用常规植物病原菌分离方法分离辣椒白绢病病原物。分离物经寄主范围、培养性状、发病症状、形态学特征确认为辣椒白绢病菌后，再进行分离纯化、致病性测定和 DNA 分子鉴定，鉴定方法参考附录 A。3.2 接种体制备 在接种前进行病原物接种体的繁殖。具体为：将辣椒白绢病菌接种在 PDA 平板培养基上，25 2 下恒温培养箱中培养 4 d。菌丝长到培养皿的 4/5 时，用打孔器（d=5 mm）从平板培养皿中的白绢病菌菌落边缘打取菌饼，菌饼即为接种体。3.3 培养基配制 PDA（马铃薯葡萄糖琼脂）固体培养基的配制：马铃薯葡萄糖琼脂粉 40.1 g，用蒸馏水补足 1 L，pH调到 5.9，高压灭菌（121，20 min）。或取 200 g 去皮马铃薯，切碎，煮烂，双层纱布过滤，加入15 g 琼脂粉，补充蒸馏水至 1 L，pH 调到 5.9，高压灭菌（121，20 min）。DB43/T 21742021 2 3.4 病原物保存 将病原物依据使用时间的长短分别进行保存，短期使用时用 PDA 平板培养基保存于 4 的冰箱中；长期保存菌株时将菌核加入已灭菌的脱脂牛奶中制成菌核牛奶混合体，经冷冻干燥、抽真空后保存于Ampoule 管中，置于-20或-80 冰箱中。4 白绢病抗性室内鉴定 4.1 鉴定室 苗期人工接种鉴定室通常为温室或智能温室，具备调节温度、湿度和光照的条件，使人工接种后具备良好的发病环境。4.2 鉴定材料育苗 待鉴定的辣椒种子在 10的次氯酸钠溶液中浸种 8 min10 min，无菌水振荡洗涤 2 次3 次，冲洗干净后置于 28 的恒温培养箱中催芽，露白后播种于育苗钵内。育苗基质为营养基质、蛭石（或细沙）以 31 的比例混合，并经高温蒸汽灭菌（121，30 min），温室育苗，温度 25 30 左右。幼苗应生长健壮、小大一致。4.3 接种时期 最适接种期为花蕾初现时。4.4 接种方法 采用包埋法，具体为：用镊子将接种体接种在离植株茎基部 2 cm 的土壤里，用土包埋，每株接种1 个菌饼。以不接菌饼植株为空白对照，以接种 Qiemen 辣椒品种为感病对照，鉴定材料顺序或者随机排列，每份材料重复 3 次，每一重复 30 株苗。4.5 接种后管理 接种后将植株置于可控温控湿的温室中，保持空气相对湿度 90以上 2 d，保持土壤相对湿度 95以上，白天温度 25 30，晚上 22 25，光照 12 h14 h。5 病情鉴定 5.1 病情级别划分 接种后第 4 d 调查病情，幼苗病情级别及其相对应的症状描述见表 1。表 1 辣椒白绢病抗性室内鉴定病情级别的划分 病情级别 症状特征 0 全株无症状 1 茎基部轻微变色，部分叶片萎蔫 3 茎基部超过二分之一变褐色，半数叶片萎蔫 5 茎基部形成褐色圈，全株叶片萎蔫 7 整株萎蔫枯死 DB43/T 21742021 3 5.2 调查方法 调查每份鉴定材料接种病原物后的发病情况，依据病害症状描述，逐株调查和登记病情级别，计算出病情指数（DI）。病情指数的计算按公式（1）计算：(sn)100NsDI（1）公式中:DI 病情指数；s 各病情级别的代表数值；n 各病情级别的植株数；N 调查总植株数；S 最高病情级别的代表数值。6 抗病性评价 6.1 抗病性评价标准 根据鉴定材料 3 次重复的病情指数（DI）平均值确定其抗性水平，划分标准见表 2。表 2 辣椒白绢病抗性室内鉴定抗性评价标准 病情指数（DI）抗性评价 DI=0 免疫（I）0 DI 10 高抗（HR）10 DI 30 抗病（R）30 DI 50 中抗（MR）50 DI 70 感病（S）DI 70 高感（HS）6.2 鉴定结果的有效性判别 当感病对照材料达到其相应感病程度（DI50），该批次的辣椒白绢病抗性鉴定即为有效。7 记录与保存 辣椒白绢病抗性室内鉴定结果记载表格见表 3，记载表归档保存 3 年。表 3 辣椒白绢病抗性室内鉴定结果记载表 编号 品种 名称 重复 区号 各病情级别植株数 病情指数 0 1 3 5 7 I II III DB43/T 21742021 4 表 3 辣椒白绢病抗性室内鉴定结果记载表（续）评价病指 抗性评价 播种日期 接种日期 苗龄大小 接种病原菌分离物编号 调查日期 调查人 DB43/T 21742021 5 附 录 A（资料性）辣椒白绢病病原菌的学名、形态描述和分子鉴定 A.1 学名和形态描述 辣椒白绢病菌 Sclerotium rolfsii.Sacc.白绢病病原有性阶段为担子菌门罗氏阿太菌（Athelia rolfsii），同物异名为罗氏伏革菌（Corticium folfsii）。无性阶段为小核菌属的齐整小核菌（Sclerotium rolfsiis），自然条件下很少产生有性世代，田间发病多由无性阶段的齐整小核菌（Sclerotium rolfsiis）产生的营养菌丝和菌核引起。白绢病侵染辣椒后可引起辣椒白绢病，其症状为病茎基部暗褐色，其上长出白色绢丝状菌丝体，呈辐射状扩展，四周尤为明显，后期在病部菌丝上产出褐色白菜籽状小菌核，菌核大小 0.4 mm1.7 mm。菌丝生长适宜条件为 25 30、pH 5.06.0，菌核萌发适宜条件为 25 35、pH 4.06.0、光照、相对湿度 70100。A.2 白绢病病原鉴定 辣椒白绢病病原菌鉴定参考文献：潘宝贵,刘邮洲,王述彬*,刘金兵,刁卫平,戈伟,郭广君.辣椒白绢病病原菌的分离与鉴定.辣椒杂志,2016,14(02):31-33.