沉默环状RNA_胚胎致死异...4支持细胞增殖并促进其凋亡_史圣甲.pdf

论论著著文文章章编编号号：（）沉沉默默环环状状 胚胚胎胎致致死死异异常常视视觉觉样样蛋蛋白白 （）抑抑制制小小鼠鼠睾睾丸丸 支支持持细细胞胞增增殖殖并并促促进进其其凋凋亡亡史史圣圣甲甲，季季兴兴哲哲，孙孙建建华华，张张洲洲（西西北北妇妇女女儿儿童童医医院院生生殖殖中中心心，陕陕西西 西西安安 ；空空军军军军医医大大学学基基础础医医学学院院免免疫疫学学教教研研室室，陕陕西西 西西安安 ）收收稿稿日日期期：；接接受受日日期期：基基金金项项目目：陕陕西西省省卫卫健健委委卫卫生生健健康康科科研研基基金金（）；西西安安市市科科技技计计划划项项目目（）作作者者简简介介：史史圣圣甲甲（），男男，黑黑龙龙江江哈哈尔尔滨滨人人，主主治治医医师师，博博士士 ：；：通通讯讯作作者者，孙孙建建华华，：摘摘 要要 目目的的 观观测测沉沉默默环环状状 胚胚胎胎致致死死异异常常视视觉觉样样蛋蛋白白 （）对对小小鼠鼠睾睾丸丸 支支持持细细胞胞增增殖殖和和凋凋亡亡的的影影响响，并并探探索索潜潜在在机机制制。方方法法 应应用用小小干干扰扰 技技术术沉沉默默小小鼠鼠睾睾丸丸 细细胞胞 的的表表达达，沉沉默默 后后，采采用用 法法和和 乙乙炔炔基基 脱脱氧氧尿尿嘧嘧啶啶核核苷苷染染色色评评估估 细细胞胞增增殖殖能能力力，流流式式细细胞胞术术和和脱脱氧氧核核糖糖核核苷苷酸酸末末端端转转移移酶酶介介导导的的缺缺口口末末端端标标记记法法（）检检测测 细细胞胞的的凋凋亡亡。生生物物信信息息学学方方法法预预测测微微小小 （）与与 的的结结合合位位点点，荧荧光光素素酶酶报报告告实实验验检检测测 与与 的的结结合合能能力力。实实时时定定量量 检检测测 和和 表表达达水水平平。结结果果 沉沉默默 的的表表达达后后，细细胞胞增增殖殖速速度度和和 阳阳性性细细胞胞比比例例降降低低，凋凋亡亡细细胞胞比比例例增增加加。机机制制研研究究结结果果显显示示 可可结结合合并并下下调调 表表达达。结结论论 可可通通过过结结合合并并抑抑制制 表表达达促促进进小小鼠鼠 支支持持细细胞胞增增殖殖能能力力并并抑抑制制其其凋凋亡亡。关关键键词词 支支持持细细胞胞；环环状状 （）；环环状状 胚胚胎胎致致死死异异常常视视觉觉样样蛋蛋白白（）；微微小小 （）；细细胞胞增增殖殖；细细胞胞凋凋亡亡 中中图图分分类类号号 ，文文献献标标志志码码 （），；，：（，）（）（）（）（），；细胞与分子免疫学杂志（），（）DOI:10.13423/ki.cjcmi.009481 男男性性不不育育是是一一种种常常见见的的生生殖殖系系统统疾疾病病，其其中中伴伴有有精精子子发发生生障障碍碍、生生精精上上皮皮减减少少或或缺缺失失的的非非梗梗阻阻性性无无精精子子症症是是男男性性不不育育最最严严重重的的致致病病因因素素 。近近期期研研究究表表明明支支持持细细胞胞数数目目及及功功能能在在精精子子发发生生过过程程中中扮扮演演重重要要的的角角色色，其其可可通通过过提提供供结结构构、免免疫疫和和营营养养支支持持等等多多方方面面而而调调控控精精子子的的发发生生 。因因此此，探探索索支支持持细细胞胞数数目目和和功功能能的的调调控控机机制制，将将有有助助于于加加深深精精子子发发生生机机制制的的认认识识。环环状状 （，）是是一一类类新新的的内内源源性性非非编编码码 ，通通过过共共价价结结合合成成闭闭合合环环状状结结构构，无无 端端帽帽子子结结构构和和 端端多多聚聚 尾尾 。大大量量研研究究证证实实环环状状 可可通通过过调调控控关关键键基基因因的的表表达达而而在在多多种种疾疾病病的的发发生生及及进进展展中中起起到到举举足足轻轻重重的的作作用用 。但但是是，在在精精子子发发生生中中的的功功能能和和机机制制相相关关研研究究尚尚处处于于起起步步阶阶段段。胚胚胎胎致致死死异异常常视视觉觉样样蛋蛋白白 （，）在在生生精精功功能能正正常常的的睾睾丸丸组组织织中中高高表表达达，而而在在生生精精功功能能失失衡衡的的非非梗梗阻阻性性无无精精子子症症患患者者睾睾丸丸组组织织中中低低表表达达，是是精精子子发发生生潜潜在在的的调调控控因因子子 。来来源源于于 第第 至至 号号 外外 显显 子子 的的 环环 状状 （，）在在人人和和小小鼠鼠中中高高度度保保守守，但但其其在在精精子子发发生生中中的的 功功 能能 和和 机机 制制 尚尚 不不 清清 楚楚。本本 研研 究究 评评 估估 了了 对对小小鼠鼠支支持持细细胞胞系系 细细胞胞增增殖殖及及凋凋亡亡的的影影响响及及潜潜在在分分子子机机制制，以以期期揭揭示示 在在精精子子发发生生中中的的所所起起的的作作用用，为为临临床床非非梗梗阻阻性性无无精精子子症症治治疗疗提提供供可可靠靠有有效效的的治治疗疗靶靶点点。材材料料和和方方法法 材材料料 小小鼠鼠 支支持持细细胞胞系系购购自自武武汉汉普普诺诺赛赛公公司司；胎胎牛牛血血清清和和马马血血清清购购自自赛赛默默飞飞公公司司；、胰胰蛋蛋白白酶酶消消化化液液、蛋蛋白白裂裂解解液液、提提取取试试剂剂盒盒、法法试试剂剂盒盒、异异硫硫氰氰酸酸荧荧光光素素标标记记的的膜膜联联素素碘碘 化化 丙丙 啶啶（，）双双标标记记细细胞胞周周期期和和凋凋亡亡检检测测试试剂剂盒盒购购自自北北京京索索莱莱宝宝科科技技有有限限公公司司；和和 限限制制性性内内切切酶酶购购自自 公公司司；一一步步法法实实时时定定量量 试试剂剂盒盒购购自自北北京京康康为为世世纪纪公公司司；购购自自 公公司司；原原位位末末端端 转转 移移 酶酶 标标 记记 技技 术术（，）细细胞胞凋凋亡亡检检测测试试剂剂盒盒、乙乙炔炔基基 脱脱氧氧尿尿嘧嘧啶啶核核苷苷（，）增增殖殖检检测测试试剂剂盒盒、小小干干扰扰 （，）、小小干干扰扰 阴阴性性对对照照（，）、对对照照和和类类似似物物购购自自广广州州锐锐博博生生物物科科技技公公司司；紫紫外外分分光光光光度度计计购购自自 公公司司；流流式式细细胞胞仪仪购购自自 公公司司；荧荧光光定定量量 仪仪、多多功功能能酶酶标标仪仪购购自自 公公司司；荧荧光光显显微微镜镜购购自自 公公司司。方方法法 细细胞胞转转染染 将将 个个 细细胞胞铺铺至至 孔孔板板。细细胞胞约约长长满满 培培养养板板时时，取取 对对照照 类类似似物物滴滴加加至至 无无血血清清培培养养基基中中，制制备备试试剂剂 。取取 滴滴加加至至 无无血血清清培培养养基基中中，制制备备试试剂剂。将将试试剂剂和和试试剂剂轻轻柔柔混混合合，再再次次孵孵育育 ，制制备备转转染染试试剂剂。取取混混合合后后的的转转染染试试剂剂，逐逐滴滴滴滴加加至至 细细胞胞，后后将将细细胞胞培培养养液液更更换换为为完完全全培培养养基基。继继续续生生长长 后后，进进行行后后续续功功能能学学实实验验。将将转转染染 的的 细细胞胞命命名名为为对对照照组组，转转染染 的的 细细胞胞命命名名为为实实验验组组。提提取取 胰胰蛋蛋白白酶酶消消化化液液处处理理对对照照组组或或实实验验组组 细细胞胞，而而后后使使用用 裂裂解解液液裂裂解解实实验验组组和和对对照照组组 细细胞胞 ，应应用用 注注射射器器反反复复抽抽吸吸数数次次，从从而而使使细细胞胞充充分分裂裂解解。加加入入 氯氯仿仿，振振荡荡 ，室室温温静静置置约约 。、离离心心 后后，吸吸取取离离心心产产物物的的水水相相层层。加加入入 体体积积的的乙乙醇醇，将将混混合合物物转转移移至至吸吸附附柱柱中中。、离离心心 后后，加加 入入 去去 蛋蛋 白白 液液。、再再次次离离心心 ，而而后后加加入入 漂漂洗洗液液。、离离心心 ，去去除除残残留留试试剂剂。向向离离心心后后沉沉淀淀中中，加加入入 去去 酶酶的的 ，室室温温放放置置 后后，、离离心心 ，所所得得液液体体即即为为细细胞胞总总 ，测测定定 纯纯度度与与浓浓度度，备备用用。实实时时定定量量 检检测测对对照照组组或或实实验验组组 细细胞胞的的 和和 表表达达水水平平 按按前前述述方方法法提提取取对对照照组组或或实实验验组组 细细胞胞 。而而后后，按按照照一一步步法法实实时时定定量量 说说明明书书所所述述组组分分，配配置置一一步步法法实实时时定定量量 反反应应试试剂剂：，或或对对照照的的正正义义及及反反义义引引物物各各 ，细胞与分子免疫学杂志（），（），模模板板 （），去去 酶酶 补补齐齐至至 。振振荡荡混混匀匀后后，离离心心 使使混混合合液液至至管管底底。将将八八连连管管放放置置在在 机机中中，设设置置 反反应应条条件件为为：反反转转录录 ；（预预变变性性 、变变性性 、退退火火 延延伸伸 ）个个循循环环；保保存存样样品品。正正义义引引物物为为 ，反反义义引引物物为为 ；正正 义义 引引 物物 为为 ，反反 义义 引引 物物 为为 ；正正义义引引物物为为 ，反反 义义 引引 物物 为为 ；正正义义引引物物为为 ，反反义义引引物物为为 ；和和 为为内内参参，相相对对表表达达水水平平计计算算公公式式 。法法检检测测 细细胞胞增增殖殖 按按照照每每孔孔 个个细细胞胞，接接种种对对照照组组或或实实验验组组 细细胞胞至至 孔孔板板，每每组组各各设设置置 个个复复孔孔，共共接接种种五五板板。过过夜夜培培养养后后，向向对对照照组组或或实实验验组组 细细胞胞接接种种孔孔中中加加入入 溶溶液液，孵孵育育 后后，应应用用酶酶标标仪仪在在 记记录录吸吸光光度度（）值值，所所获获数数值值为为实实验验组组和和对对照照组组细细胞胞第第 天天吸吸光光度度（）值值。后后，对对照照组组或或实实验验组组 细细胞胞再再次次各各取取一一板板，重重复复上上述述步步骤骤，连连续续检检测测，获获取取第第 至至第第 天天 值值。将将两两组组细细胞胞第第 至至第第 天天 值值录录入入 软软件件，绘绘制制细细胞胞增增殖殖曲曲线线。检检测测 细细胞胞增增殖殖活活性性 向向对对照照组组或或实实验验组组 细细胞胞加加入入 培培养养液液，室室温温条条件件下下孵孵育育 。清清洗洗后后，向向对对照照组组或或实实验验组组 细细胞胞中中加加入入 甘甘氨氨酸酸，摇摇床床孵孵育育 。清清洗洗后后，向向两两组组细细胞胞中中加加入入 染染色色反反应应液液，室室温温避避光光摇摇床床孵孵育育 。清清洗洗后后，向向两两组组细细胞胞中中加加入入 ，摇摇床床孵孵育育 。清清洗洗后后，向向两两组组细细胞胞中中加加入入 染染色色体体液液，室室温温避避光光摇摇床床孵孵育育 。清清洗洗细细胞胞后后，荧荧光光显显微微镜镜拍拍照照。检检测测 细细胞胞凋凋亡亡 向向对对照照组组和和实实验验组组 细细 胞胞 加加 入入 细细 胞胞 固固 定定 液液，孵孵 育育 。清清洗洗后后加加入入 渗渗透透剂剂，孵孵育育 。清清洗洗后后，向向对对照照组组和和实实验验组组 细细胞胞加加入入 末末端端脱脱氧氧核核苷苷酸酸转转移移酶酶，孵孵育育 。向向对对照照组组和和实实验验组组 细细胞胞加加入入 柠柠檬檬酸酸钠钠缓缓冲冲液液（，）孵孵育育 。清清洗洗 次次后后，加加入入 染染色色液液，室室温温避避光光摇摇床床孵孵育育 ，清清洗洗 次次后后，荧荧光光显显微微镜镜拍拍照照。流流式式细细胞胞术术检检测测 细细胞胞凋凋亡亡 胰胰蛋蛋白白酶酶消消化化液液处处理理对对照照组组或或实实验验组组 细细胞胞，反反复复清清洗洗细细胞胞后后，向向对对照照组组或或实实验验组组 细细胞胞沉沉淀淀加加入入 结结合合缓缓冲冲液液，重重悬悬并并调调整整细细胞胞数数至至 个个 。向向 个个对对照照组组或或实实验验组组 细细 胞胞 加加 入入 染染色色液液 ，室室温温避避光光孵孵育育 。清清洗洗细细胞胞后后，向向对对照照组组或或实实验验组组细细胞胞加加入入 染染色色液液 ，室室温温避避光光孵孵育育 。清清洗洗细细胞胞后后，向向对对照照组组或或实实验验组组细细胞胞沉沉淀淀加加入入 ，细细胞胞重重悬悬混混匀匀后后，流流式式细细胞胞仪仪检检测测。荧荧光光素素酶酶报报告告基基因因 合合成成 全全长长序序列列，应应用用 和和 酶酶对对荧荧光光素素酶酶报报告告载载体体 质质粒粒进进行行酶酶切切。将将野野生生型型和和 结结合合位位点点突突变变的的 插插入入 对对应应位位点点，所所得得载载体体即即为为 野野 生生 型型 或或 突突变变型型。当当 细细胞胞汇汇合合度度至至 时时，将将 野野生生型型或或 突突变变型型载载体体与与 对对照照或或类类似似物物共共转转染染至至 细细胞胞，将将转转染染 对对照照的的 细细胞胞命命名名为为 对对照照组组，将将转转染染 类类似似物物的的 细细胞胞命命名名为为 类类似似物物组组。后后，裂裂解解各各组组细细胞胞后后加加入入萤萤火火虫虫荧荧光光素素酶酶检检测测试试剂剂，测测定定混混合合物物的的荧荧光光强强度度。而而后后加加入入海海肾肾荧荧光光素素酶酶检检测测试试剂剂，再再次次测测定定混混合合物物荧荧光光强强度度。根根据据两两次次检检测测荧荧光光强强度度的的比比值值计计算算各各组组相相对对荧荧光光素素强强度度。统统计计学学分分析析 实实验验数数据据统统计计分分析析及及图图像像绘绘制制采采用用 软软件件。计计量量资资料料以以 表表示示，两两组组间间差差异异评评估估应应用用独独立立样样本本 检检验验，为为差差异异有有统统计计学学意意义义。结结果果 敲敲低低 抑抑制制 支支持持细细胞胞增增殖殖实实时时定定量量 结结果果显显示示 可可有有 效效 沉沉 默默 细细 胞胞 中中 表表 达达（，图图 ）。沉沉 默默 细细 胞胞 后后，法法结结果果显显示示，与与对对照照组组相相比比，细细胞胞增增殖殖速速度度明明显显降降低低（，图图 ）。染染色色结结果果提提示示，沉沉默默 细细胞胞中中 表表达达后后，阳阳性性细细胞胞比比例例明明显显减减少少，差差异异有有统统计计学学意意义义（，图图 、）。期 史圣甲，等 沉默环状胚胎致死异常视觉样蛋白（）抑制小鼠睾丸支持细胞增殖并促进其凋亡：实实时时定定量量 检检测测 细细胞胞 水水平平；：法法检检测测 细细胞胞增增殖殖活活性性；：增增殖殖的的 细细胞胞（染染色色，）；：增增殖殖 细细胞胞百百分分比比的的半半定定量量分分析析 对对照照组组 图图 沉沉默默 抑抑制制 细细胞胞增增殖殖 沉沉默默 表表达达促促进进支支持持细细胞胞凋凋亡亡流流式式 细细 胞胞 术术 结结 果果 显显 示示，沉沉 默默 支支 持持 细细 胞胞 中中 表表达达后后，凋凋 亡亡 细细 胞胞 百百 分分 比比 升升 高高（，图图 、），阳阳性性细细胞胞比比例例升升高高（，图图 、）。：流流式式细细胞胞术术检检测测 细细胞胞凋凋亡亡水水平平；：凋凋亡亡细细胞胞百百分分比比的的定定量量分分析析；：检检测测凋凋亡亡的的 细细胞胞；：阳阳性性细细胞胞百百分分比比的的定定量量分分析析 对对照照组组 图图 沉沉默默 促促进进 细细胞胞凋凋亡亡 结结合合并并抑抑制制 登登录录 网网站站（：），搜搜索索框框输输入入 ，即即 。搜搜索索后后列列表表即即为为与与 存存在在结结合合位位点点的的 ，结结果果显显示示 存存在在 结结合合位位点点（图图 ）。荧荧光光素素酶酶报报告告基基因因显显示示 与与 类类似似物物共共转转染染后后，相相对对荧荧光光强强度度较较 对对照照共共 转转 染染 组组 明明 显显 降降 低低（，图图 ）；而而 与与 结结合合位位点点突突变变后后，两两组组间间相相对对荧荧光光强强度度无无明明显显变变化化。实实时时定定量量 结结果果显显示示，沉沉默默支支持持细细胞胞中中 表表达达后后，表表达达水水平平升升高高（，图图 ）。：与与 的的结结合合位位点点；：荧荧光光素素酶酶报报告告基基因因检检测测 与与 共共转转染染后后的的相相对对荧荧光光强强度度；：实实时时定定量量 检检测测 表表达达 对对照照组组；对对照照组组 图图 结结合合并并抑抑制制 表表达达 讨讨论论 是是近近年年来来新新近近发发现现的的一一类类内内源源性性非非编编码码 ，因因其其具具有有独独特特的的环环状状结结构构，使使其其在在体体内内具具有有极极高高的的稳稳定定性性 。大大量量研研究究显显示示 可可作作为为“海海绵绵”、剪剪切切或或转转录录调调控控因因子子、亲亲本本基基因因修修饰饰因因子子等等在在多多种种疾疾病病进进程程中中调调控控细细胞胞功功能能 。然然而而，既既往往研研究究对对 在在精精子子发发生生和和成成熟熟中中的的功功能能及及机机制制鲜鲜有有报报道道。随随着着研研究究的的不不断断深深入入，越越来来越越多多的的研研究究表表明明 与与精精子子发发生生和和成成熟熟同同样样关关系系密密切切。本本课课题题组组前前期期研研究究表表明明生生精精功功能能正正常常和和生生精精功功能能 异异 常常 的的 睾睾 丸丸 组组 织织 中中 存存 在在 大大 量量 差差 异异 表表 达达 的的 。等等 也也发发现现弱弱精精症症患患者者和和健健康康对对照照男男性性的的 表表达达谱谱也也存存在在巨巨大大差差异异。等等 发发现现 是是精精子子发发生生的的重重要要调调控控因因子子，并并可可作作为为非非梗梗阻阻性性无无精精症症患患者者睾睾丸丸显显微微取取精精结结局局的的重重要要预预测测因因子子。等等 也也发发现现睾睾丸丸源源 可可反反映映睾睾丸丸生生精精微微环环境境，并并可可以以预预测测睾睾丸丸中中残残存存精精子子情情况况，是是非非梗梗阻阻性性无无精精子子症症患患者者显显微微取取精精结结局局的的可可靠靠预预测测指指标标。本本课课题题组组也也证证实实沉沉默默 的的表表达达可可显显著著抑抑制制人人睾睾丸丸支支持持细细胞胞增增殖殖而而抑抑制制其其凋凋亡亡 。最最新新研研究究同同样样表表明明转转录录自自 酰酰基基磷磷脂脂酰酰乙乙醇醇胺胺细胞与分子免疫学杂志（），（）磷磷脂脂酶酶 （，）的的 可可通通过过与与 互互作作而而调调控控睾睾丸丸支支持持细细胞胞周周期期 。上上述述研研究究均均有有力力的的证证实实了了 是是精精子子发发生生和和成成熟熟的的潜潜在在调调控控因因子子，因因此此深深入入探探索索睾睾丸丸特特异异性性 的的表表达达模模式式和和功功能能意意义义重重大大。，也也被被称称为为 抗抗原原 （，）或或人人 样样神神经经元元蛋蛋白白 （，），是是胚胚胎胎致致死死异异常常视视觉觉 结结合合蛋蛋白白家家族族成成员员，在在物物种种间间保保守守，通通过过与与富富含含 的的 互互作作而而促促进进翻翻译译 。研研究究显显示示 在在人人和和小小鼠鼠睾睾丸丸组组织织中中均均呈呈高高表表达达，并并可可通通过过激激活活细细胞胞外外信信号号调调节节激激酶酶 蛋蛋白白激激酶酶 （，）通通路路而而促促进进小小鼠鼠精精原原干干细细胞胞增增殖殖而而抑抑制制其其凋凋亡亡 。值值得得注注意意的的是是，可可转转录录出出多多条条 ，其其中中 和和 在在物物种种间间保保守守，长长度度均均为为 个个核核苷苷酸酸序序列列，具具有有高高度度的的同同源源性性。在在本本研研究究中中，课课题题组组发发现现 是是支支持持细细胞胞增增殖殖和和凋凋亡亡的的潜潜在在调调控控因因子子。本本研研究究结结果果表表明明沉沉默默小小鼠鼠 支支持持细细胞胞中中 （）的的表表达达，将将导导致致细细胞胞增增殖殖能能力力降降低低、而而凋凋亡亡水水平平升升高高。因因此此，非非梗梗阻阻性性无无精精症症患患者者睾睾丸丸组组织织中中异异常常升升高高的的 将将诱诱导导支支持持细细胞胞凋凋亡亡，而而缺缺乏乏足足够够数数目目且且功功能能正正常常的的支支持持细细胞胞提提供供的的生生精精微微环环境境，这这也也可可能能是是非非梗梗阻阻性性无无精精症症患患者者精精子子发发生生障障碍碍的的机机制制之之一一。近近年年来来，研研究究证证实实 可可通通过过结结合合并并抑抑制制相相关关 的的表表达达，从从而而解解除除 对对下下游游靶靶基基因因的的转转录录抑抑制制，进进而而参参与与调调控控疾疾病病的的发发生生发发展展 。为为了了探探索索 调调控控 细细胞胞增增殖殖和和凋凋亡亡的的机机制制，通通过过生生物物信信息息学学网网站站比比对对 和和 的的序序列列，并并检检索索 潜潜在在结结合合 的的生生物物学学功功能能 ，发发现现 与与 存存在在互互补补序序列列，是是其其潜潜在在结结合合 。既既往往研研究究发发现现 在在青青春春期期后后睾睾丸丸中中的的表表达达迅迅速速降降低低，并并可可靶靶向向抑抑制制支支持持细细胞胞功功能能的的关关键键调调控控因因子子雄雄激激素素受受体体（，）和和 肾肾 母母 细细 胞胞 瘤瘤 基基 因因 （，）的的表表达达。此此外外，转转基基因因小小鼠鼠青青春春期期后后将将出出现现血血睾睾屏屏障障和和生生精精功功能能损损伤伤，导导致致精精子子生生成成数数目目的的大大幅幅降降低低 ，这这进进一一步步印印证证了了 与与支支持持细细胞胞功功能能、精精子子发发生生密密切切相相关关。因因此此，我我们们进进一一步步分分析析了了 和和 之之间间的的调调控控关关系系。荧荧光光素素酶酶报报告告基基因因实实验验进进一一步步佐佐证证了了生生物物信信息息学学的的发发现现，荧荧光光素素酶酶载载体体与与 类类似似物物共共转转染染后后，荧荧光光素素酶酶强强度度降降低低，提提示示 的的确确可可与与 结结合合。更更为为重重要要 的的 是是，沉沉 默默 表表达达后后，细细 胞胞 中中 表表达达水水平平明明显显升升高高，这这提提示示 很很可可能能通通过过靶靶向向抑抑制制 的的表表达达而而参参与与调调控控支支持持细细胞胞功功能能和和精精子子发发生生。综综上上所所述述，本本研研究究发发现现沉沉默默 表表达达抑抑制制小小鼠鼠 细细胞胞增增殖殖并并促促进进凋凋亡亡，该该功功能能可可能能与与 结结合合并并抑抑制制 表表达达相相关关。本本研研究究初初步步探探索索了了小小鼠鼠支支持持细细胞胞数数目目及及功功能能的的 调调控控机机制制，研研究究成成果果为为鉴鉴定定非非梗梗阻阻性性无无精精子子症症潜潜在在诊诊断断和和治治疗疗靶靶点点奠奠定定了了必必要要的的理理论论基基础础。参参考考文文献献：，：，（）：，（）：，（）：，：，（）：，：，（）：，：，（）：，：，（）：张张开开亮亮，韩韩庚庚，陈陈明明，等等 环环状状 对对骨骨肉肉瘤瘤细细胞胞生生物物学学行行为为的的影影响响 山山西西医医科科大大学学学学报报，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：期 史圣甲，等 沉默环状胚胎致死异常视觉样蛋白（）抑制小鼠睾丸支持细胞增殖并促进其凋亡 ，（）：，（）：，（）（），：，（）：，（）：史史圣圣甲甲，孙孙建建华华，刘刘项项，等等 敲敲低低环环状状 类类网网格格蛋蛋白白重重链链 （）表表达达抑抑制制人人睾睾丸丸支支持持细细胞胞增增殖殖 细细胞胞与与分分子子免免疫疫学学杂杂志志，（）：，（），（）：，（）：，（）：，：，：，：，：，：，：，：，：，：细细胞胞与与分分子子免免疫疫学学杂杂志志 年年征征订订启启事事 细细胞胞与与分分子子免免疫疫学学杂杂志志 为为北北大大图图书书馆馆 中中文文核核心心期期刊刊要要目目总总览览 医医药药卫卫生生类类核核心心期期刊刊、百百种种中中国国杰杰出出学学术术期期刊刊、中中国国高高校校百百佳佳科科技技期期刊刊、中中国国科科技技信信息息研研究究所所“中中国国科科技技论论文文统统计计源源期期刊刊（中中国国科科技技核核心心期期刊刊）”、中中国国科科学学院院文文献献情情报报中中心心“中中国国科科学学引引文文数数据据库库（）核核心心库库来来源源期期刊刊”，清清华华大大学学“中中国国学学术术期期刊刊综综合合评评价价数数据据库库（）”统统计计源源期期刊刊、武武汉汉大大学学“中中国国学学术术期期刊刊评评价价研研究究报报告告中中国国核核心心学学术术期期刊刊”，各各种种国国内内数数据据库库收收录录期期刊刊。同同时时也也是是 、等等国国外外著著名名数数据据库库收收录录期期刊刊。本本刊刊为为月月刊刊，国国内内外外公公开开发发行行。精精装装双双面面铜铜版版纸纸彩彩色色印印刷刷，每每月月 日日出出版版。本本刊刊自自办办发发行行，欢欢迎迎各各单单位位直直接接联联系系本本刊刊编编辑辑部部购购买买，量量大大从从优优，国国际际邮邮发发代代号号 。地地址址：陕陕西西省省西西安安市市长长乐乐西西路路 号号空空军军军军医医大大学学 细细胞胞与与分分子子免免疫疫学学杂杂志志 编编辑辑部部；邮邮编编：网网站站：电电话话：（兼兼传传真真）；：联联系系人人：韩韩老老师师 细细胞胞与与分分子子免免疫疫学学杂杂志志 编编辑辑部部 细胞与分子免疫学杂志（），（）