定量分析样品前处理.pptx

定量分析样品前处理(一一)卤原子得活泼性卤原子得活泼性1 1、卤原子与碳原子直接相连卤原子与碳原子直接相连,卤原卤原子得活泼性和她直接相连得烃基得结子得活泼性和她直接相连得烃基得结构有很大关系构有很大关系(1)乙烯型卤和芳卤乙烯型卤和芳卤 不活泼不活泼(2)烯丙型卤和苄卤烯丙型卤和苄卤 活泼活泼(3)卤代烷型卤代烷型 介于两者之间介于两者之间2、分子中所含卤原子得个分子中所含卤原子得个数数 分子中所含卤原子得个数越多分子中所含卤原子得个数越多,活泼性越强活泼性越强,特别就是同一碳上含多特别就是同一碳上含多个卤原子或一个苯环上含多个卤原子个卤原子或一个苯环上含多个卤原子时时,活泼性增强更加明显活泼性增强更加明显3、卤素得种卤素得种类类IBrClF常见得含卤素有机药物常见得含卤素有机药物三氯叔丁醇三氯叔丁醇六氯对二甲苯六氯对二甲苯泛影酸泛影酸9大家应该也有点累了，稍作休息大家有疑问的，可以询问和交流大家有疑问的，可以询问和交流大家有疑问的，可以询问和交流大家有疑问的，可以询问和交流胆影酸胆影酸碘她拉酸碘她拉酸碘番酸碘番酸碘苯酯碘苯酯I盐酸胺碘酮盐酸胺碘酮诺氟沙星诺氟沙星醋酸氟轻松醋酸氟轻松磺溴酞钠磺溴酞钠(二二)含卤素有机药物得分析含卤素有机药物得分析直接回流后测定法直接回流后测定法碱性或酸性还原后测定法碱性或酸性还原后测定法氧瓶燃烧分解后测定法氧瓶燃烧分解后测定法1、直接回流后测定直接回流后测定法法 本法就是将含卤素有机药物溶于适本法就是将含卤素有机药物溶于适当溶剂当溶剂(如乙醇如乙醇)中中,加入氢氧化钠溶液加入氢氧化钠溶液(或一定量过量得硝酸银滴定液或一定量过量得硝酸银滴定液)后后,加加热回流使其水解热回流使其水解,将有机结合得卤素转将有机结合得卤素转变为无机得卤素离子变为无机得卤素离子,然后采用银量法然后采用银量法(Volhard法法)测定。测定。本法适用于含卤素有机药物结构本法适用于含卤素有机药物结构中卤素原子结合不牢固得药物中卤素原子结合不牢固得药物(如卤如卤原子和脂肪碳原子相连者原子和脂肪碳原子相连者)。原原理理 三三氯氯叔叔丁丁醇醇在在氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液中中加加热热回回流流水水解解,氯氯元元素素全全部部转转变变成成氯氯化化钠钠,然然后后用用剩剩余余滴滴定定法法,即即于于水水解解液液中中加加硝硝酸酸酸酸化化,再再加加入入定定量量过过量量得得硝硝酸酸银银滴滴定定液液,使使Cl-生生成成AgCl沉沉淀淀,过过量量得得硝硝酸酸银银,以以Fe3+为为指指示示剂剂,用用硫硫氰氰酸铵液回滴定。酸铵液回滴定。例三氯叔丁醇得测定例三氯叔丁醇得测定 ChP(2000)CCl3-C(CH3)2-OH+4NaOH 回流回流(CH3)2-CO+3NaCl+HCOONa+2H2ONaCl+AgNO3 AgCl+NaNO3 AgNO3+NH4SCNAgSCN +NH4NO3(淡棕红色淡棕红色)(Ksp=1、561010)(Ksp=1、010-12)Fe3+SCN Fe(SCN)2+测定方法测定方法 取本品约取本品约0、1g,精密称定精密称定,加乙加乙醇醇5ml溶解后溶解后,加加20%氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液5ml,加加热回流热回流15min,放冷至室温放冷至室温,加水加水20ml与硝酸与硝酸5ml,精密加硝酸银滴定液精密加硝酸银滴定液(0、1mol/L)30ml,再加邻苯二甲酸二丁酯再加邻苯二甲酸二丁酯5ml,密塞密塞,强力振摇强力振摇后后,加硫酸铁胺指示液加硫酸铁胺指示液2ml,用硫氰酸胺滴定用硫氰酸胺滴定液液(0、1mol/L)滴定滴定,并将滴定得结果用空白并将滴定得结果用空白试验校正。每试验校正。每1ml硝酸银滴定液硝酸银滴定液(0、1mol/L)相当于相当于6、216mg得得C4H7Cl3O1/2H2O。反应摩尔比为13T滴定度,每1ml滴定液相当于被测组分得mg数c滴定液浓度,mol/LM被测物得摩尔质量,g/moln1mol样品消耗滴定液得摩尔数,常用反应摩尔比体现,即反应摩尔比为1n 2、碱性或酸性还原后测定法碱性或酸性还原后测定法 本法就是将含卤素有机药物在碱性本法就是将含卤素有机药物在碱性或酸性下或酸性下,加还原剂加还原剂(如锌粉如锌粉)加热回流加热回流,药物产生还原裂解反应药物产生还原裂解反应,使有机结合得使有机结合得卤素转变为无机得卤素离子卤素转变为无机得卤素离子,然后采用然后采用银量法银量法(Fajans法法)测定。测定。本法适用于测定结构中碘与苯环本法适用于测定结构中碘与苯环直接相连直接相连,且一个苯环上含多个碘原且一个苯环上含多个碘原子得含卤素有机药物。子得含卤素有机药物。(1)碱性还原后测定法碱性还原后测定法例例 泛影酸得测定泛影酸得测定 ChP(2000)取本品约取本品约0、4g,精密称定精密称定,加氢氧化钠溶液加氢氧化钠溶液30ml与锌粉与锌粉1、0g,加热回流加热回流30min,放冷放冷,冷凝管冷凝管用少量水洗涤用少量水洗涤,滤过滤过,烧瓶与滤器用水洗涤烧瓶与滤器用水洗涤3次次,每次每次15ml,洗液与滤液合并洗液与滤液合并,加冰醋酸加冰醋酸5ml与曙红与曙红钠指示液钠指示液5滴滴,用硝酸银滴定液用硝酸银滴定液(0、1mol/L)滴定。滴定。每每1ml硝酸银滴定液硝酸银滴定液(0、1mol/L)相当于相当于20、46mg得得C11H9 I 3N2O4。COOHINHCOCH3IIH3COCHN+11NaOH +Zn回流回流COONaN H2 H2N+3NaI +2CH3COONa+2Na2ZnO2 +H2O USP(24)、BP(1998)ChP(2000)收收载载得得胆胆影影酸酸、碘碘番番酸酸、胆胆影影葡葡胺胺、泛泛影影葡葡胺胺、碘碘她她拉拉酸酸等均采用同法测定。等均采用同法测定。(2)酸性还原后测定法酸性还原后测定法 取本品得干燥品约取本品得干燥品约0、4g,精密称定精密称定,加锌粉加锌粉1g及冰醋酸及冰醋酸10ml,加热回流加热回流30min,放冷放冷,冷凝管冷凝管用水用水30ml洗涤洗涤,用脱脂棉过滤用脱脂棉过滤,烧瓶与脱脂棉用烧瓶与脱脂棉用水洗涤水洗涤2次次,每次每次20ml,洗液与滤液合并洗液与滤液合并,加四溴加四溴酚酞乙酯指示液酚酞乙酯指示液1ml,用硝酸银滴定液用硝酸银滴定液(0、1mol/L)滴定。终点时黄色沉淀变为绿色。每滴定。终点时黄色沉淀变为绿色。每1ml硝酸银滴定液硝酸银滴定液(0、1mol/L)相当于相当于19、031mg得得C11H12 I 3NO2。例例 碘番酸得测定碘番酸得测定 JP(13)3、氧瓶燃烧分解后测定氧瓶燃烧分解后测定法法 (1)原理原理 氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法:将有机药物放入充满氧将有机药物放入充满氧气得密闭燃烧瓶中进行燃烧气得密闭燃烧瓶中进行燃烧,并将燃烧所并将燃烧所产生得欲测物质吸收于适当得吸收液中产生得欲测物质吸收于适当得吸收液中,然后根据欲测物质得性质然后根据欲测物质得性质,采用适宜得分采用适宜得分析方法进行鉴别、检查或含量测定析方法进行鉴别、检查或含量测定 适用于含卤素、硫、氮、硒等适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物得分析有机药物得分析 本法特点就是简便、快速、破坏本法特点就是简便、快速、破坏完全完全,尤其适用于微量样品得分析尤其适用于微量样品得分析 (2)仪器与材料仪器与材料 仪器装置仪器装置 燃烧瓶为燃烧瓶为500、1000或或2000ml无色、磨口、厚壁、无色、磨口、厚壁、硬质玻璃锥型瓶硬质玻璃锥型瓶;瓶塞瓶塞空心空心,底部熔封铂丝一根底部熔封铂丝一根,下端呈下端呈螺旋状或网状螺旋状或网状称样用材料及称样称样用材料及称样 A、固体样品固体样品 无灰滤纸无灰滤纸 B、液体样品液体样品 纸袋纸袋 C、软膏类样品软膏类样品:将适量样品置不将适量样品置不含被测成分得蜡油纸中包裹严密含被测成分得蜡油纸中包裹严密,外层外层再用无灰滤纸包裹再用无灰滤纸包裹吸收液吸收液 A、作用作用:吸收液得作用就是将样品吸收液得作用就是将样品经燃烧分解所产生得各种价态得卤素、经燃烧分解所产生得各种价态得卤素、硫、氮、硒等硫、氮、硒等,定量地吸收并转变为一定量地吸收并转变为一定得便于测定得价态定得便于测定得价态氧气氧气B、吸收液得选择吸收液得选择氟氟 水水 氯氯 NaOH溶液溶液溴溴 H2O2-NaOH NaOH-硫酸肼饱和溶液硫酸肼饱和溶液碘碘 NaOH硫酸肼饱和溶液硫酸肼饱和溶液硫硫 NaOH或或H2O2 硒硒 硝酸溶液硝酸溶液(3)操作方法操作方法燃烧瓶燃烧前得准备燃烧瓶燃烧前得准备 用洗液洗净后用洗液洗净后,按各药品项下得规定加按各药品项下得规定加入吸收液入吸收液,将瓶口用水湿润将瓶口用水湿润,小心急速地通小心急速地通入氧气入氧气1min,立即用表面皿覆盖瓶口。立即用表面皿覆盖瓶口。样品得准备样品得准备 取样品适量取样品适量,精密称定后按规定方法包精密称定后按规定方法包裹裹,固定于铂丝下端得网内或螺旋处。固定于铂丝下端得网内或螺旋处。样品得燃烧样品得燃烧 点燃包有供试品得滤纸尾部点燃包有供试品得滤纸尾部,迅速放入迅速放入燃烧瓶中燃烧瓶中,按紧瓶塞按紧瓶塞,加水少量封闭瓶口加水少量封闭瓶口,俟燃烧完毕俟燃烧完毕(应无黑色碎片应无黑色碎片),充分振摇充分振摇,使使生成得烟雾完全吸入吸收液中生成得烟雾完全吸入吸收液中,放置放置15min,用水少量冲洗瓶塞及铂丝用水少量冲洗瓶塞及铂丝,合并洗合并洗液及吸收液液及吸收液,同法另做空白试验。然后按同法另做空白试验。然后按各药品项下规定得方法进行鉴别、检查或各药品项下规定得方法进行鉴别、检查或含量测定。含量测定。根根据据被被燃燃烧烧分分解解得得样样品品量量选选用用适适宜大小得燃烧瓶。宜大小得燃烧瓶。(4)注意事项注意事项 ChP(2000)规规定定得得燃燃烧烧瓶瓶体体积积为为500、1000或或2000ml三三种种,采采用用常常量量或半微量分析或半微量分析 待分解样品量待分解样品量 燃烧瓶得体积燃烧瓶得体积 35mg(微量分析微量分析)150250ml 2030mg(半微量分析半微量分析)300500ml 5060mg 1000ml 0、60、7g或更多或更多 2000ml或特殊结或特殊结构得燃烧瓶构得燃烧瓶 正正确确选选用用燃燃烧烧瓶瓶得得目目得得在在于于:样样品品能能在在足足够够得得氧氧气气中中燃燃烧烧分分解解完完全全;有有利利于于将将燃燃烧烧分分解解产产物物较较快快地地吸吸收收到吸收液中到吸收液中;防止爆炸得可能性。防止爆炸得可能性。测定含氟有机药物时测定含氟有机药物时,用石英制用石英制燃烧瓶燃烧瓶铂丝燃烧时起催化作用铂丝燃烧时起催化作用应同时做空白试验应同时做空白试验燃烧时要注意防爆燃烧时要注意防爆燃烧要完全燃烧要完全燃烧产生得烟雾完全被吸收燃烧产生得烟雾完全被吸收(5)应用应用例例 磺溴酞钠得含量测定磺溴酞钠得含量测定 ChP(2000)燃烧分解燃烧分解O2HBr+S2-+SO4+HBr+S2-NaBr+Na2SO4+H2O NaOH,H2O2溴溴 取本品约取本品约0、2g,照氧瓶燃烧法照氧瓶燃烧法(附录附录 C)进行有机破坏进行有机破坏,选用选用1000ml燃烧瓶燃烧瓶,以以0、4%氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液10ml,浓过氧化氢溶液浓过氧化氢溶液0、5ml与水与水10ml作为吸收液作为吸收液,俟生成得烟雾完全俟生成得烟雾完全吸入吸收液后吸入吸收液后,用水稀释至用水稀释至100ml,煮沸煮沸5分钟分钟,放冷放冷,加稀硝酸使成酸性加稀硝酸使成酸性,精密加硝酸银滴定精密加硝酸银滴定液液(0、1mol/l)20ml,摇匀摇匀,再加硫酸铁胺指示再加硫酸铁胺指示液液2mL,用硫氰酸胺滴定液用硫氰酸胺滴定液(0、1mol/L)滴定滴定,并将滴定得结果用空白试验校正。每并将滴定得结果用空白试验校正。每1mL硝硝酸银滴定液酸银滴定液(0、1mol/L)相当于相当于7、990mg得得溴溴(Br)。例例 碘苯酯得含量测定碘苯酯得含量测定 ChP(2000)原原理理 碘碘苯苯酯酯系系有有机机碘碘化化物物,用用氧氧瓶瓶燃燃烧烧分分解解,转转变变为为碘碘化化物物,继继而而氧氧化化为为游游离离得得碘碘,并并被被定定量量地地吸吸收收于于吸吸收收液液中中,和和氢氢氧氧化化钠钠反反应应,生生成成碘碘化化物物与与碘碘酸酸盐盐,加加入入溴溴-醋醋酸酸溶溶液液,使使全全部部转转变变为为碘碘酸酸盐盐,过过量量得得溴溴以以甲甲酸酸及及通通空空气气去去除除。加加入入碘碘化化钾钾,使使与与碘碘酸酸盐盐反反应应析析出出游游离离碘碘,用用硫硫代代硫硫酸酸钠钠液液滴滴定定,碘碘与与淀淀粉粉结结合合所显得蓝色消失即为终点所显得蓝色消失即为终点 取取本本品品约约20mg,精精密密称称定定,照照氧氧瓶瓶燃燃烧烧法法进进行行有有机机破破坏坏,用用氢氢氧氧化化钠钠试试液液2ml与与水水l0ml为为吸吸收收液液,待待吸吸收收完完全全后后,加加溴溴醋醋酸酸溶溶液液(取取醋醋酸酸钾钾10g,加加冰冰醋醋酸酸适适量量使使溶溶解解,加加溴溴0、4ml,再再加加冰冰醋醋酸酸使使成成1000m1)l0ml,密密塞塞,振振摇摇,放放置置数数分分钟钟,加加甲甲酸酸约约lml,用用水水洗洗涤涤瓶瓶口口,并并通通入入空空气气流流约约35min以以除除去去剩剩余余得得溴溴蒸蒸气气,加加碘碘化化钾钾2g,密密塞塞,摇摇匀匀,用用硫硫代代硫酸钠滴定液硫酸钠滴定液(0、02Mol/L)滴滴定定,至至近近终终点点时时,加加淀淀粉粉指指示示液液,继继续续滴滴定定至至蓝蓝色色消消失失,并并将将滴滴定定得得结结果果用用空空白白试试验验校校正正。每每lml得得硫硫代代硫硫酸酸钠钠滴滴定定液液(0、02mol/L)相相当当于于1、388mg得得C19H29IO2。滴定度得计算滴定度得计算 放大反应放大反应2mol碘苯酯碘苯酯1molI21molI21molNaIO+1molNaI1molNaIO1/3molNaIO3+2/3molNaImolNaI+Br2molNaIO3即即2mol碘苯酯碘苯酯2molNaIO32mol NaIO3+10I-6molI2即即2mol碘苯酯碘苯酯1molI2 6molI212molI12molNa2S2O3反应摩尔比为反应摩尔比为1 698:140、氧瓶燃烧法中得装置有A、磨口硬质玻璃锥形瓶B、磨口软质玻璃锥形瓶C、铂丝D、铁丝E、铝丝96:133(99x:138)、选择氧瓶燃烧法所必备得实验物品A、磨口硬质玻璃锥形瓶B、铂丝C、普通滤纸D、氢气 E、无灰滤纸99:76、氧瓶燃烧法测定含氯有机药物时所用得吸收液多数为A、H2O2溶液B、H2O2NaOH溶液C、NaOH溶液D、硫酸肼饱和液E、NaOH硫酸肼饱和液99:134、氧瓶燃烧法可用于A、含卤素有机药物得含量测定B、醚类药物得含量测定C、检查甾体激素类药物中得氟D、检查甾体激素类药物中得硒E、芳酸类药物得含量测定二、含金属有机药物得分析二、含金属有机药物得分析 含金属得有机药物含金属得有机药物:金属原子不与碳金属原子不与碳原子直接相连原子直接相连,通常为有机酸及酚得金通常为有机酸及酚得金属盐或配位化合物属盐或配位化合物 如酒石酸锑钾、葡萄糖酸锑钠、如酒石酸锑钾、葡萄糖酸锑钠、富马酸亚铁富马酸亚铁 有机金属药物有机金属药物:金属原子直接与碳原金属原子直接与碳原子以共价键相连子以共价键相连,结合比较牢固结合比较牢固 如卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利如卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利酒石酸锑钾酒石酸锑钾硬脂酸镁硬脂酸镁富马酸亚铁富马酸亚铁葡萄糖酸锑钠葡萄糖酸锑钠卡巴胂卡巴胂醋酸苯汞醋酸苯汞汞撒利汞撒利含金属有机药物定量分析前得含金属有机药物定量分析前得处理方法处理方法 不经有机破坏得分析方法不经有机破坏得分析方法 直接测定法直接测定法;经水解后测定法经水解后测定法;经还原经还原-汞齐化后测定法汞齐化后测定法 经有机破坏得分析方法经有机破坏得分析方法 湿法破坏湿法破坏(硝酸硝酸-高氯酸法高氯酸法;硝酸硝酸-硫酸硫酸法法;硫酸硫酸-硫酸盐法等硫酸盐法等););干法破坏干法破坏(一一)不经有机破坏得分析方法不经有机破坏得分析方法1、直接测定法直接测定法 适用于金属原子不直接与碳原子适用于金属原子不直接与碳原子相连得含金属有机药物或某些相连得含金属有机药物或某些CM键键结合不牢固得有机金属药物。结合不牢固得有机金属药物。富马酸亚铁得含量测定富马酸亚铁得含量测定 ChP (2000)取本品约取本品约0.3g，精密称定，加稀硫酸，精密称定，加稀硫酸 15ml，加热溶解后，放冷，加新沸过的，加热溶解后，放冷，加新沸过的冷水冷水50ml与邻二氮菲指示液与邻二氮菲指示液2 滴，立即用滴，立即用硫酸铈滴定液硫酸铈滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每的结果用空白试验校正。每1ml硫酸铈滴硫酸铈滴定液定液(0.1mol/L)相当于相当于16.99mg 。原理原理Fe2+Ce4+Ce3+Fe2+Fe2+e-Fe3+红色红色浅蓝色浅蓝色OOCCHOHCCO+Fe2+例例 葡萄糖酸葡萄糖酸锑钠得得测定定 ChP(2000)取取本本品品约约0、3g,精精密密称称定定,置置具具塞塞锥锥形形瓶瓶中中,加加水水100ml、盐盐酸酸15ml与与碘碘化化钾钾试试液液10ml,密密塞塞、振振摇摇后后,在在暗暗处处静静置置10min,用用硫硫代代硫硫酸酸钠钠滴滴定定液液(0、1mol/L)滴滴定定,至至近近终终点点时时,加加淀淀粉粉指指示示液液,继继续续滴滴定定至至蓝蓝色色消消失失,并并将将滴滴定定得得结结果果用用空空白白试试验验校校正正。每每lml得得硫硫代代硫硫酸酸钠钠滴滴定定液液(0、1mol/L)相相当当于于6、088mg得得Sb。如枸如枸橼酸酸铁铵得得测定定 ChP(2000)取取本本品品约0、5g,精精密密称称定定,置置具具塞塞锥锥形形瓶瓶中中。加加水水15ml溶溶解解后后,加加硫硫酸酸lml,加加热热至至溶溶液液由由暗暗棕棕色色变变成成淡淡黄黄色色,放放冷冷至至约约15,滴滴加加高高锰锰酸酸钾钾试试液液至至溶溶液液显显粉粉红红色色并并持持续续5s,加加盐盐酸酸15ml与与碘碘化化钾钾试试液液15ml,密密塞塞,静静置置3min,加加水水50ml稀稀释释后后,用用硫硫代代硫硫酸酸钠钠滴滴定定液液(0、1mol/L)滴滴定定至至近近终终点点时时,加加淀淀粉粉指指示示液液2ml,继继续续滴滴定定至至蓝蓝色色消消失失,并并将将滴滴定定得得结结果果用用空空白白试试验验校校正正。每每lml得得硫硫代代硫硫酸酸钠钠滴滴定液定液(0、1mol/L)相当于相当于5、585mg得得Fe。2、用硫酸水解后测定法用硫酸水解后测定法例例 硬脂酸镁得测定硬脂酸镁得测定 ChP(2000)取本品约取本品约0、1g,精密称定精密称定,精密加硫酸精密加硫酸滴定液滴定液(0、05mol/L)50ml,煮沸至油滴澄煮沸至油滴澄清清,继续加热继续加热10min,放冷至室温放冷至室温,加甲基橙加甲基橙指示液指示液12滴滴,用氢氧化钠滴定液用氢氧化钠滴定液(0、1mol/L)滴定。每滴定。每1ml硫酸滴定液硫酸滴定液(0、05mol/L)相当于相当于2、016mg得得MgO。原理原理:Mg(C17 H35COO)2+H2SO4 MgSO4 +2 C17 H35COOH2NaOH+H2SO4 Na2SO4 +2H2O 某些含汞有机药物某些含汞有机药物,由于由于CHg键键不牢固不牢固,在水溶液在水溶液(冰浴冰浴)中滴加硫酸中滴加硫酸使其水解使其水解,将有机汞定量转化成硫酸将有机汞定量转化成硫酸汞汞,再用硫氰酸铵滴定液滴定。再用硫氰酸铵滴定液滴定。例例 汞撒利得测定汞撒利得测定 取本品约取本品约0、5g,精密称定精密称定,加蒸馏水加蒸馏水10ml,置冰浴中置冰浴中,滴加硫酸滴加硫酸10ml,随滴随搅拌随滴随搅拌,至产生得沉淀复溶解至产生得沉淀复溶解,再加蒸馏水再加蒸馏水50ml,硫硫酸铁铵指示液酸铁铵指示液2ml,用硫氰酸铵滴定液用硫氰酸铵滴定液(0、1mol/L)滴定。每滴定。每1ml硫氰酸铵滴定液硫氰酸铵滴定液(0、1mol/L)相当于相当于25、29mg得汞撒利得汞撒利。3、经还原经还原-汞齐化后测定汞齐化后测定法法 本本法法系系在在酸酸性性或或碱碱性性溶溶液液中中,加加锌锌粉粉、加加热热回回流流,将将药药物物中中有有机机结结合合得得汞汞还还原原析析出出金金属属汞汞,并并与与过过量量得得锌锌生生成成锌锌汞汞齐齐。将将锌锌汞汞齐齐溶溶于于硝硝酸酸后后,选选用用适适当当得得方方法法测测定定汞汞得得含含量量,并并换换算算成成含含汞汞有有机药物得含量。机药物得含量。如醋酸苯汞得含量如醋酸苯汞得含量测定定 取取本本品品约约0、5g,精精密密称称定定,置置100ml烧烧瓶瓶中中,加加水水15ml,甲甲酸酸5ml与与锌锌粉粉1g,附附回回流流冷冷凝凝器器,煮煮沸沸30min。放放冷冷,滤滤过过,滤滤纸纸和和锌锌汞汞齐齐用用蒸蒸馏馏水水洗洗涤涤至至洗洗液液对对石石蕊蕊试试纸纸不不显显酸酸性性反反应应。将将锌锌汞汞齐齐溶溶解解在在稀稀硝硝酸酸(1 2)40ml中中,置置蒸蒸气气浴浴上上加加热热3min,加加尿尿素素0、5g和和足足够够得得高高锰锰酸酸钾钾试试液液至至显显桃桃红红色色。冷冷却却后后,加加过过氧氧化化氢氢溶溶液液脱脱色色,加加硫硫酸酸铁铁铵铵指指示示剂剂lml,用用硫硫氰氰酸酸铵铵滴滴定定液液(0、1mol/L)滴滴定定,即即得得。每每1ml硫硫氰氰酸酸铵铵液液(0、1mol/1)相相当当于于16、84mg得得C8H8O2Hg。(二二)经有机破坏得分析方法经有机破坏得分析方法 适用于金属原子与碳原子结合牢适用于金属原子与碳原子结合牢固得有机金属药物。固得有机金属药物。1、湿法破坏湿法破坏 (1)(1)硝酸硝酸-高氯酸法高氯酸法 本法适用于血、尿、组织等生物样品本法适用于血、尿、组织等生物样品得破坏得破坏,有机金属药物经破坏后有机金属药物经破坏后,得到得无得到得无机金属离子一般呈高价态。机金属离子一般呈高价态。本法不能用于含氮杂环药物得破坏本法不能用于含氮杂环药物得破坏 (2)硝酸硝酸-硫酸法硫酸法 本法适用于大多数有机物质得破坏本法适用于大多数有机物质得破坏,破坏得到得无机金属离子均为高价态。破坏得到得无机金属离子均为高价态。本法不能用于含碱土金属有机药物得本法不能用于含碱土金属有机药物得破坏破坏 (3)硫酸硫酸-硫酸盐法硫酸盐法 本法就是往样品中加入浓硫酸作氧化本法就是往样品中加入浓硫酸作氧化剂剂,加入硫酸盐提高硫酸得沸点加入硫酸盐提高硫酸得沸点,增强硫酸增强硫酸得氧化破坏能力得氧化破坏能力,且防止硫酸得分解损失。且防止硫酸得分解损失。本法常用于含砷或锑有机药物得破坏本法常用于含砷或锑有机药物得破坏,破坏得到得无机金属离子多为低价态。破坏得到得无机金属离子多为低价态。(4)其她湿法其她湿法 硝酸硝酸硫酸硫酸高氯酸法高氯酸法 硫酸硫酸氧化剂法氧化剂法(过氧化氢法、高锰过氧化氢法、高锰酸钾酸钾)破坏后破坏后,金属呈高价态金属呈高价态2、干法破干法破坏坏 适用于湿法不易破坏完全得有适用于湿法不易破坏完全得有机物以及某些不能用硫酸进行破坏机物以及某些不能用硫酸进行破坏得有机药物。不适用于含易挥发性得有机药物。不适用于含易挥发性金属金属(如汞、砷等如汞、砷等)有机药物得破坏有机药物得破坏注意事项注意事项:(1)加热或灼烧时加热或灼烧时,应控制温度在应控制温度在420以下以下(2)一定要灰化完全一定要灰化完全(3)经本法破坏后经本法破坏后,所得灰分往往不易所得灰分往往不易溶解溶解,但不要轻易弃去但不要轻易弃去第二节 药品质量标准分析方法验证 一、目得 证明所采用得分析方法适合于相应得检测要求,方法验证过程和结果均应记载在药品标准起草和修订说明中。二、用途(一)药品质量标准起草时,分析方法需经验证。(二)药物合成方法变更、制剂得组分变更、原分析方法进行修订时,分析方法需经验证。三、需验证得分析项目1、鉴别试验;2、杂质定量或限度检查;3、原料或制剂中有效成分含量测定;4、制剂中其她成分(降解产物、防腐剂等)得测定;5、溶出度、释放度等功能检查中得溶出量等得测试方法。验证内容有验证内容有:准确度、精密度准确度、精密度(重重复性、中间精密度和重现性复性、中间精密度和重现性)、专属性、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用检测限、定量限、线性、范围和耐用性性四、验证内容 (一一)准确度准确度(accuracy)准确度就是指用该方法测定得结果准确度就是指用该方法测定得结果与真实值或参考值接近得程度与真实值或参考值接近得程度,用百分用百分回收率表示。回收率表示。测定回收率R(recovery)得具体方法可采用“回收试验法”和“加样回收试验法”。回收试验 空白+已知量A得对照品(或标准品)测定,测定值为M 加样回收试验 已准确测定药物含量P得真实样品+已知量A得对照品(或标准品)测定,测定值为M 数据要求 规定得范围内,至少用9次测定结果评价,如制备三个不同浓度样品各测三次。1、含量测定方法得准确度含量测定方法得准确度 原料药可原料药可用已知纯度得对照品或样用已知纯度得对照品或样品进行测定品进行测定,或用本法所得结果与已建或用本法所得结果与已建立准确度得另一方法测定得结果进行立准确度得另一方法测定得结果进行比较。比较。制制剂剂可可用用含含己己知知量量被被测测物物得得各各组组分分混混合合物物进进行行测测定定,即即采采用用在在空空白白辅辅料料中加入原料药对照品得方法。中加入原料药对照品得方法。如如不不能能得得到到制制剂剂得得全全部部组组分分,可可向向制制剂剂中中加加入入已已知知量量得得被被测测物物进进行行测测定定,或或与与另另一一个个已已建建立立准准确确度度得得方方法法比比较较结结果。果。中药分析得准确度一般用加样回中药分析得准确度一般用加样回收试验衡量。中药回收率一般要求在收试验衡量。中药回收率一般要求在95105%范围内范围内,有些方法操作步骤有些方法操作步骤繁多时繁多时,可要求在可要求在90110%范围内。范围内。RSD一般在一般在3%以内。以内。2、杂质定量测定得准确度、杂质定量测定得准确度 可可向向原原料料药药或或制制剂剂中中加加入入已已知知量量杂杂质质进进行行测测定定。如如果果不不能能得得到到杂杂质质或或降降解解产产物物,可可用用本本法法测测定定结结果果与与另另一一成成熟熟得方法进行比较。得方法进行比较。(二二)精密度精密度(precision)精密度就精密度就是指在规定条件下是指在规定条件下,同一个均匀样品同一个均匀样品,经经多次取样测定所得结果之间得接近程度。多次取样测定所得结果之间得接近程度。用偏差用偏差(d)、标准偏差、标准偏差(SD)、相对标准、相对标准偏差偏差(RSD)(变异系数变异系数,CV)表示。表示。偏差(d):测量值与平均值之差标准(偏)差(SD或S)相对标准(偏)差(RSD),也称变异系数(CV)1、重复性重复性 在相同条件下在相同条件下,由同一由同一个分析人员测定所得结果得精密度个分析人员测定所得结果得精密度;在规在规定得范围内定得范围内,至少用至少用9次测定结果评价次测定结果评价,如如制备三个不同浓度样品各测三次或把被制备三个不同浓度样品各测三次或把被测物浓度当作测物浓度当作100%,至少测至少测6次进行评价。次进行评价。2、中间精密度中间精密度 同一实验室同一实验室,不同时不同时间由不同分析人员用不同设备所得结果间由不同分析人员用不同设备所得结果得精密度。考察随机变动因素得影响。得精密度。考察随机变动因素得影响。变动因素为不同日期、不同分析人员、变动因素为不同日期、不同分析人员、不同设备不同设备 3、重现性重现性 不同实验室不同实验室,不同分析不同分析人员测定结果得精密度。当分析方法将人员测定结果得精密度。当分析方法将被法定标准采用时被法定标准采用时,应进行重现性试验。应进行重现性试验。如建立药典分析方法时通过协同检验得如建立药典分析方法时通过协同检验得出重现性结果出重现性结果,协同检验得过程、重现协同检验得过程、重现性结果均应记载在起草说明中。性结果均应记载在起草说明中。(三三)检测限检测限(limit of detection,LOD)检测限系指试样中被测物能被检测限系指试样中被测物能被检测出得最低量。就是限度试验参检测出得最低量。就是限度试验参数数,无需定量测定。常用无需定量测定。常用%、ppm、ppb表示。表示。1、非仪器分析目视法、非仪器分析目视法 用用已已知知浓浓度度得得被被测测物物,试试验验出出能能被被可靠地检测出得最低浓度或量。可靠地检测出得最低浓度或量。2、信噪比法、信噪比法 用于能显示基线噪音得分析方法用于能显示基线噪音得分析方法(仪仪器分析方法器分析方法),就是把已知低浓度试样就是把已知低浓度试样测出得信号与空白样品测出得信号进测出得信号与空白样品测出得信号进行比较行比较,算出能被可靠地检测出得最低算出能被可靠地检测出得最低浓度或量。一般以信噪比浓度或量。一般以信噪比(S/N)3 1或或2 1时得相应浓度或注入仪器得量确定时得相应浓度或注入仪器得量确定检测限。检测限。3、数据要求、数据要求 应附测试图谱应附测试图谱,说明测试过程和检说明测试过程和检测限结果。测限结果。(四)定量限(1imit of quantitation,LOQ)指样品中被测物能被定量测定得最低量,结果应具有一定准确度和精密度。常用%、ppm、ppb表示。常用信噪比法确定定量限,一般以信噪比(S/N)为101时相应得浓度或注入仪器得量进行确定,也可用仪器所测空白背景响应标准差(SD)得10倍为估计值,再经试验确定。(五五)专属性专属性(specificity)指有其她指有其她成分成分(杂质、降解物、辅料等杂质、降解物、辅料等)可能存在可能存在情况下采用得方法能准确测定出被测物情况下采用得方法能准确测定出被测物得特性得特性,能反映该方法在有共存物时对能反映该方法在有共存物时对供试物准确而专属得测定能力。就是指供试物准确而专属得测定能力。就是指该法用于复杂样品分析时相互干扰程度该法用于复杂样品分析时相互干扰程度得度量。得度量。(六六)线性线性 在设计得范围内在设计得范围内,测试结果与试样中测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系得程度。被测物浓度直接呈正比关系得程度。数据要求数据要求:应列出回归方程、相关系应列出回归方程、相关系数和线性图。数和线性图。(七七)范围范围 指达到一定精密度、准确度和线性指达到一定精密度、准确度和线性得条件下得条件下,测试方法适用得高低限浓度测试方法适用得高低限浓度或量得区间。或量得区间。(八八)耐用性耐用性 指测定条件稍有变动时指测定条件稍有变动时,结果不受影响得承受程度结果不受影响得承受程度,为常规检验为常规检验提供依据。就是衡量实验室和工作人员提供依据。就是衡量实验室和工作人员之间在正常情况下实验结果重现性得尺之间在正常情况下实验结果重现性得尺度。度。(九九)应用应用 1、鉴鉴别别试试验验除除专专属属性性、耐耐用用性性外外,其她都不要求。其她都不要求。2、杂质得限量检查除专属性、检测杂质得限量检查除专属性、检测限、耐用性外限、耐用性外,其她都不要求。杂质得其她都不要求。杂质得定量测定除检测限外定量测定除检测限外,其她都要求。其她都要求。3、含量测定及溶出量测定除检测限、含量测定及溶出量测定除检测限、定量限外定量限外,其她都要求。其她都要求。(十十)各种含量测定方法对效能指标得各种含量测定方法对效能指标得要求要求 1 1、容量分析法容量分析法:用原料药精制品用原料药精制品(含量含量9999、5 5)或对照品考察方法得或对照品考察方法得精密度精密度,相对标准差一般应不大于相对标准差一般应不大于0 0、2 2;进行回收率试验。进行回收率试验。回收率一般在回收率一般在9999、7 7100100、3 3之间之间。2 2、UV法法:用适当用适当浓度得精制品度得精制品进行行测定定,其其RSD一般不大于一般不大于1。制。制剂得得测定测定,回收率一般回收率一般应在在98102之之间。线性线性:吸光度吸光度A一般在一般在0、20、7,浓度点度点n5。用。用浓度度c对A作作线性回性回归处理理,得一直得一直线方程方程,r应大于大于0、999(n5),方程得截距方程得截距应近于零。近于零。3、HPLC法法:要求要求RSD2,回收率回收率98102之间。之间。线性范围线性范围:用精制品配制一系列标用精制品配制一系列标准溶液准溶液,浓度点浓度点n应为应为57,用浓度用浓度c对对峰高峰高h或被测物得响应值之比进行回或被测物得响应值之比进行回归处理归处理,建立回归方程建立回归方程,r应大于应大于0、999,截距应趋于零。截距应趋于零。专属性专属性:要考查辅料、有关物质或要考查辅料、有关物质或降解产物对主药得色谱峰就是否有干降解产物对主药得色谱峰就是否有干扰扰,如有干扰应设法排除如有干扰应设法排除99:73、精密度就是指(B)A、测得得测量值与真值接近得程度 B、测得得一组测量值彼此符合得程度 C、表示该法测量得正确性 D、在各种正常试验条件下,对同一 样品分析所得结果得准确程度 E、对供试物准确而专属得测定能力99x:76、精密度就是指该法(D)A、测得得测量值与真值接近得程度 B、测得得测量值与回收率接近得程度 C、测量得正确性 D、测得得一组测量值彼此符合得程度 E、对供试物准确而专属得测定能力 96:138、在药物分析中,精密度就是表示该法得(BD)A、测量值与真值接近程度 B、一组测量值彼此符合程度 C、正确性 D、重现性 E、专属性 95:106110应要求得效能指标:A、检测限 B、定量限 C、两者均要求 D、两者均不要求95:106、含量测定方法评估(D)95:107、杂质限量检查(A)95:108、杂质定量测定(B)95:109、溶出度测定(D)95:110、中间体含量测定(D)97:126、药物杂质检查所要求得效能指标为(CDE)A、准确度 B、精密度 C、选择性 D、检测限 E、耐用性 98:138、评价药物分析所用得测定方法得效能指标有(BCD)A、含量均匀度 B、精密度 C、准确度 D、粗放度 E、溶出度例例15A、精密度、精密度 B、定量限、定量限C、两者皆就是、两者皆就是 D、两者皆不就是、两者皆不就是1、某法测得一组测量值间彼此符合程度(A)2、测量值和真值接近得程度(D)3、测定结果得重现性(A)4、可定量测得被测药物得最低水平参数(B)5、药物分析方法得效能指标(C)例例6、相对标准差表示相对标准差表示(C)A、准确度B、回收率C、精密度D、纯净度E、限度例例7、精密度得一般表示方法有精密度得一般表示方法有(AE)A、相对标准差B、相对平均偏差C、相对误差D、绝对误差E、标准差 例例8、检测限得表示方法有检测限得表示方法有(ABC)A、百分数 B、ppm C、ppbD、g E、ng例例9、用用信信噪噪比比法法表表示示检检测测限限时时,信信噪噪比一般应为比一般应为(BC)A、11 B、21 C、31D、41 E、51