6-戊基-2H-吡喃-2-...菌活性及其对病害的防治效果_刘曼.pdf

研究论文doi:10.16801/j.issn.1008-7303.2022.01226-戊基-2H-吡喃-2-酮对草坪币斑病菌的抑菌活性及其对病害的防治效果刘曼,牛启尘,尹淑霞*,王子玥(北京林业大学草业与草原学院，北京100083)摘 要：由 Clarireediaspp.引起的草坪币斑病是对草坪最具有破坏性的病害之一，6-戊基-2H-吡喃(6-pentyl-2H-pyran-2-one,6PP)是木霉菌属(Trichodermaspp.)重要的抗菌次生代谢产物。为探究 6PP 对草坪币斑病菌的抑菌活性、防治效果以及草坪币斑病菌对 6PP 的生理响应，本研究采用菌丝生长速率法测定了 6PP 对草坪币斑病菌的抑制活性，分别采用室内离体叶片和盆栽试验测定了 6PP 对草坪币斑病的预防和治疗作用，并分析了在 6PP 影响下草坪币斑病菌菌丝结构及抗逆相关酶活性的变化。结果显示，6PP 对两种草坪币斑病菌 C.jacksonii 和 C.monteithiana均具有高抑制活性，其中对 C.monteithiana 的平均有效抑制中浓度(EC50)为 0.37g/mL，对C.jacksonii 的 EC50值为 0.04g/mL；经 6PP 处理后，C.jacksonii 和 C.monteithiana 菌丝生长异常，细胞膜通透性增加，相对电导率上升，细胞膜脂过氧化，细胞膜受损；C.jacksonii 过氧化物酶(POD)的活性显著上升，但 pH 值不变，而 C.monteithiana 超氧化物歧化酶(SOD)活性、pH 值和胞外多糖(EPS)显著上升。1g/mL 的 6PP 在离体条件下对币斑病的预防效果为91.14%；盆栽条件下，防治效果为 72.21%。6PP 对草坪币斑病菌抑制作用显著，且在离体和盆栽条件下对病害均有良好的防治效果，具备开发成生态友好型杀菌剂的潜力。关键词:草坪币斑病菌；6-戊基-2H-吡喃；抑菌活性；草坪币斑病；防治效果；病原生理响应中图分类号：S482.7；TQ458文献标志码：AInhibitory activity of 6-pentyl-2H-pyran-2-one against thepathogenesis fungi of dollar spot and its control efficacyLIUMan,NIUQichen,YINShuxia*,WANGZiyue(School of Grassland Science,Beijing Forestry University,Beijing 100083,China)Abstract:Turfdollarspot,causedbyClarireediaspp.,isoneofthemostdestructivefungaldiseasesonturf.6-Pentyl-2H-pyran-2-one(6PP)isacriticalantifungalsecondarymetaboliteproducedbyTrichodermaspp.Inordertoexploretheantifungalactivityof6PPagainstClarireediaspp.anditscontrolefficacytoTurfdollarspot,theinhibitionactivityof6PPonClarireediaspp.wasmeasuredby收稿日期：2022-03-18；录用日期：2022-10-11；网络首发日期：2022-10-14.Received:March18,2022;Accepted:October11,2022;Published online:October14,2022.URL:https:/doi.org/10.16801/j.issn.1008-7303.2022.0122http:/ Journal of Pesticide ScienceE-mail:mycelialgrowthratemethod,andtheprotectiveandcurativeactivitiesof6PPagainstthediseasewasmeasuredondetachedleavesandpottedplants.Thechangesinmycelialstructureandactivitiesofstressresistancerelatedenzymeofthepathogensunder6PPtreatmentwereanalyzed.Theresultsshowedthat6PPhadefficientinhibitionactivityonC.jacksoniiandC.monteithiana.Theaverageeffectiveinhibitorymediumconcentration(EC50)of6PPtoC.monteithianawas0.37g/mL,andtheaverageEC50valuetoC.jacksoniiwas0.04g/mL.Afterbeingtreatedwith6PP,mycelialofbothC.jacksoniiandC.monteithianagrewabnormally,cellmembranepermeabilityandrelativeconductivityaswellasperoxidatedcellmembraneincreased.Theperoxidase(POD)activityofC.jacksoniiincreasedsignificantlyalthoughitspHremainedunchanged,whilethesuperoxidedismutase(SOD)activity,pHandexopolysaccharides(EPS)ofC.monteithianaincreasedsignificantly.Thepreventiveeffectsof1g/mL6PPondollarspotwere91.14%in vitroand72.21%inpots.6PPhasasignificantinhibitoryeffectonTurfdollarspotandhasagoodcontrolefficacyonthediseasein vitroandinpots.Thestudyrevealedthepotentialof6PPtobeaneco-friendlyfungicidepreventingTurfdollarspot.Keywords:Clarireedia spp.;6-pentyl-2H-pyran-2-one;antifungalactivity;Turfdollarspot;controlefficacy;pathogenphysiologicalresponse草坪币斑病是温带地区精细化养护草坪上最严重的真菌性病害之一。研究显示，草坪币斑病的致病菌为 Clarireedia 属真菌，共有 6 个种，其中 C.jacksonii 和 C.monteithiana 在世界范围内分布广泛，其寄主范围广，几乎能侵染所有的草坪草1-2。近年来，广泛使用多菌灵、二甲酰亚胺、脱甲基抑制剂(DMI)和琥珀酸脱氢酶抑制剂(SDHI)等化学杀菌剂保护草坪草免受草坪币斑病菌侵害，但已有文献表明，币斑病菌株对上述杀菌剂均产生了不同程度的抗性3-5。此外，化学杀菌剂可能通过地表径流和土壤入渗进入地下水，对环境、动物以及人类健康产生危害6-7，因此亟需开发绿色、安全、高效的新型杀菌剂防治草坪币斑病。自 20 世纪 30 年代以来，木霉菌 Trichodermaspp.以其优良的抑菌效果引起了研究学者们的广泛关注8-10。木霉菌具有对环境友好、病菌不易产生抗药性等优点，但在实际生产应用中易受立地条件影响，导致田间防治时存在防治效果不稳定的问题11-12。木霉菌次生代谢物与木霉菌的生物活性功能密切相关13-14。研究表明，木霉菌代谢产物可以激活葡萄藤对霜霉病病原菌 Plasmoparaviticola 的防御机制15。康宁木霉 T.koningii 和哈茨木霉 T.harzianum 产生的哈茨酮内酯具有抗真菌活性和调节植物生长的双重作用16。木霉菌产生的可溶性代谢物对由 Colletotrichum falcatum 引起的甘蔗红腐病表现出良好的生防效果，且在大田条件下防治效果依然高效稳定17。使用人工合成或提取的木霉菌抑菌代谢物代替木霉菌防治植物病害，可以减少活体微生物在田间使用过程中出现的效果不稳定的问题，同时兼具利用木霉菌活体生物防治病害的优势。6-戊基-2H-吡喃-2-酮(6-pentyl-2H-pyran-2-one,以下简称 6PP，结构式见图式 1)于 1972 年在绿色木霉 T.viride 中首次发现并分离提纯。它是一种无毒的、具有椰子香味的不饱和内酯，能从多种木霉菌的培养物中分离得到，包括橘绿木霉T.citrinoviride、哈茨木霉、康宁木霉、深绿木霉T.atroviride 和绿色木霉 T.viride。6PP 具有广谱性抗真菌活性，对菜豆大斑病菌 Macrophominaphaseolina、立枯丝核菌 Rhizoctonia solani、罗氏菌核 Sclerotium rolfsii、尖孢镰刀菌 Fusariumoxysporum、辣椒疫霉 Phytophthora capsica 和甜瓜疫霉 P.melonis 具有良好的抑菌作用，极具应用潜力18-21。目前尚未见有关利用 6PP 防治草坪币斑病的相关报道，其抑菌活性、防治效果和机理有待验证和探索。本文研究了 6PP 对 2 种草坪币斑病菌的抑菌活性和防治效果，并通过一系列生理生化指标的测定，探究 6PP 对草坪币斑病菌的抑菌活性以及对病害的防治效果，旨在为草坪币斑病的低毒科学防治提供参考。No.1刘曼等:6-戊基-2H-吡喃-2-酮对草坪币斑病菌的抑菌活性及其对病害的防治效果105 1 材料与方法 1.1 供试材料供试菌株来自北京林业大学草地保护实验室，菌株编号为 N8、N13、N14、N18、73 和 112，其中 N8、73、112 为 Clarireedia jacksonii，N13、N14、N18 为 C.monteithiana；供试草坪草为匍匐翦股颖 A4Agrostis stoloniferaL.A4。基本培养基(MM)：10g 葡萄糖、1.5gK2HPO4、2gKH2PO4、1g(NH4)2SO4、0.5gMgSO47H2O、2g 酵母提取物、15g 琼脂粉加去离子水定容到1L，灭菌；马铃薯葡萄糖液体培养基(PDB)：20g 葡萄糖、6g 马铃薯浸粉加去离子水定容到1L，灭菌。6PP购自北京迈瑞达科技有限公司，纯度为 97%。1.2 仪器DZF-6020MBE 真空干燥箱(上海博讯有限公司)；DL-CJ-2NDI 型超净工作台(北京东联哈尔仪器制造有限公司；SX700 高压灭菌锅(天美科学仪器有限公司)；SPX 型智能生化培养箱(宁波江南仪器厂)；DDSJ-318 型电导率仪(北京扬海伟业科技公司)；FE28pH 计(大连贝尔分析仪器有限公司)；岛津 UV-2600i 型紫外线分光光度计(上海滴冠有限公司)；MultifugeX1R型高速冷冻离心机(赛默飞世尔科技有限公司)；ECLIPSEE100 型电子显微镜(南京江南永新光学有限公司)。1.3 试验方法1.3.1菌株的鉴定参照 Hu 等22的方法，将6 株供试菌株在 MM 平板上于 25 下黑暗培养3d 后，刮取菌丝，使用 OMEGA真菌 DNA 提取试剂盒(百迈客生物科技有限公司)提取病原菌DNA。随后利用真菌通用正向引物 ITS-1(5-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3)和反向引物 ITS-4(5-AACTTGCAATGTGG-3)对币斑病菌的ITS 基因进行扩增和测序，将测序结果进行拼接后，于 NCBI(NationalCenterforBiotechnologyInformation)上进行 BLAST 序列相似性搜索。利用 MEGA7.0 软件和基于 1000 次重复的引导值构建系统发育树。标准菌株编号及其参考文献见附加材料表 S1。1.3.26PP 对菌株的抑制效率采用菌丝生长速率法23测定 6PP 对 6 株病菌的有效抑制中浓度(EC50)。菌株在 MM 培养基上预培养 3d 后，在菌落边缘取直径 6mm 的菌饼，分别接种到最终质量浓度为 0、0.025、0.05、0.075、0.1、0.125、0.15、0.175、0.2、0.225、0.25 和 0.275g/mL6PP 的 MM 平板上，接菌后将平板置于 25 黑暗条件下培养，以不含 6PP 的平板为对照。对照组菌落直径超过培养皿直径 2/3 时，采用十字交叉法测量各处理的菌落直径，计算 6PP 对币斑病菌菌丝生长的抑制率，求出毒力回归方程。每个浓度重复 3 次，试验重复 2 次。1.3.36PP 对币斑病菌菌丝形态的影响在培养 2d的菌落(菌株 N8 和 N18)的边缘取菌饼转移到含有 0.075g/mL6PP 的 MM 培养基上，以不含6PP 的培养基为对照。在 25 下培养 3d 后，取适量菌丝在光学显微镜下观察菌丝形态。每个菌株设 3 个重复，试验重复 2 次。1.3.4免疫组织化学染色币斑病菌 N8 和N18 用于对活性氧(ROS)、过氧化氢(H2O2)进行染色，参照 Mojicak 等24方法。Tris-HCl 缓冲液(0.1mol/L,pH=7.6)、质量浓度为 0.3%的氯化钴(CoCl2)按照体积比9:1 混合，将不同处理的菌丝浸泡在 3mL1mg/mL的 3,3-二氨基联苯胺(3,3-diaminobenzidine)染液中，显色时加入 510mL30%H2O2,染色 8h 后，将菌丝浸泡在无水乙醇中脱色 12h，光学显微镜下观察染色后的菌丝。1.3.56PP 对币斑病菌细胞膜通透性的影响参照 Duan 等25的方法，将币斑病菌 N8、N18 接种于 MM 上，25 培养 3d 后，打取 5 个直径 6mm的菌饼，接种于含有 100mLPDB 的 250mL 摇菌瓶中，于 25、175r/min 恒温摇床上摇培 36h后，处理组添加 0.075g/mL 的 6PP，对照组添加等量的无菌水，继续培养 36h。于 5000r/min 下离心 10min 后收集菌丝，上清液备用。称取菌丝0.3g，悬浮于 20mL 的无菌水中，分别在 0、5、10、20、40、60、80、100、120、140、160 和180min 时使用电导率仪测定溶液的电导率。之后将溶液煮沸 5min，并测定最终的电导率。每个菌株设 3 个重复，试验重复 2 次。按照公式(1)计算菌体的相对电导率。RC/%=R1R2100(1)式中：RC为相对电导率，%；R1为某时间的OO O图式 1 6-戊基-2H-吡喃-2-酮结构式Scheme 1 Structural formula of 6-pentyl-2H-pyran-2-one106农药学学报Vol.25电导率，S/cm；R2为再放入恒温水浴中加热5min，取出冷却至室温后再测定的电导率，S/cm。1.3.66PP 对币斑病菌 pH 值的影响按照 1.3.5 节方法培养草坪币斑病菌 N8 和 N18，打取 5 个直径 6mm 的菌饼，接种于含有 100mLPDB 的250mL 摇菌瓶中，于 25、175r/min 恒温摇床上摇培 36h 后，处理组添加 0.075g/mL 的6PP，对照组添加等量的无菌水，继续培养 36h。于 10000r/min 下离心 10min，收集上清液，测定菌液 pH 值。每个菌株设 3 个重复，试验重复 2 次。1.3.7币斑病菌胞外多糖(EPS)含量测定参照文献方法测定26。取 1mL 上清液(同 1.3.5 节)至5mL 无菌离心管中，加入 3 倍体积的无水乙醇，于 10000r/min 下离心 60min，弃去无水乙醇，将沉淀物在 60 真空下干燥 60min，之后溶解于8mL 无菌水中，水解后取 2mL 溶液，加入 1mL5%苯酚溶液和 5mL 浓硫酸，涡旋 10s 后在 25放置 30min，在 490nm 处测量溶液的吸光值，并用葡萄糖标准曲线定量。以无菌水为对照。每处理设 3 个重复，试验重复 2 次。1.3.8丙二醛(MDA)含量测定采用硫代巴比妥酸法27测定。按照 1.3.5 节方法处理并收集菌丝。将菌丝与 Tris-HCl 缓冲液(0.05mol/L，pH=7.5)按体积比1:5 研磨均质化，于 15000r/min 下冷冻离心 20min。以 2mL 上清液和 2mL0.5%硫代巴比妥酸为反应液，混匀后将试管放入沸水中煮10min，冷却后以 5000r/min 离心 10min。以0.5%硫代巴比妥酸溶液为对照组，分别于波长532、600 和 450nm 处测量吸光度值，计算 MDA含量。每处理设 3 个重复，试验重复 2 次。1.3.9币斑病菌对 6PP 的生理响应按照 1.3.5 节方法收集菌丝，称取 0.5g 菌丝于预冷的研钵中，加入 1mL 预冷 0.05mol/L 磷酸缓冲液(pH=7.8)，于 12000r/min 下离心 10min，上清液用于过氧化物酶活性(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)的测定。采用愈创木酚法28测定 POD 活性，以每分钟内 A470变化 0.01 为 1 个过氧化物酶活性单位(U)。采用氮蓝四唑(NBT)光还原法29测定 SOD 活性，以抑制 NBT 光化还原的 50%为 SOD 酶的一个活力单位(U)。1.3.106PP 对草坪离体叶片币斑病的防治作用采用离体叶片法测定 6PP 对草坪币斑病的预防和治疗作用30。预防作用测定：选取位于同一位置，大小相仿，健康且展开的草坪叶片作为试验试材，将具有相似长度(7cm)的叶片切下并放在无菌培养皿(直径 9cm)中被无菌水完全浸湿的定性滤纸上。将 6PP 用 0.1%的吐温 20 稀释，药液的最终质量浓度为 0、0.1、0.5 和1g/mL，喷洒到叶片表面，直到液体在叶片表面自由流动。24h 后，将 5mm 币斑病菌的菌饼(菌株 N8 和 N18)放置在叶片表面(每片叶一个菌饼)，用封口膜密封并放置于光照培养箱(25、光照 16h、湿度 80%)。2d 后，十字交叉法测量叶片上病斑的直径。治疗作用测定：先用币斑病菌 N8 和 N18 接种叶片，接种方法、培养条件同预防作用，在接种24h 后喷施最终质量浓度分别为 0、0.5 和 2g/mL6PP药液。2d 后测量病变长度，并按照公式(2)计算防治效果(E)。每处理使用 10 片叶。E/%=L1L2L1100(2)式中：L1为对照的病变长度，cm；L2为6PP 处理的病变长度，cm。结果为 10 个重复的平均值标准差。1.3.116PP 对草坪植株的防治效果选择生长状况大致相同的健壮草坪植株，测定 6PP 对草坪币斑病的预防和治疗作用。预防作用测定：分别用 0.25、0.5 和 1g/mL6PP 进行整株喷雾处理，每株喷施 2mL，叶面均匀挂满雾滴不流淌即可，诱导处理 24h 后，将草坪币斑病菌 N8 和 N18 的 1 个菌饼(10mm)分别接种到经过 6PP 处理过的草坪上，并放置于光照培养箱(25、光照 16h、湿度 80%)，培养 7d后，统计病情指数。以此接种点为中心调查周围的 100 枚叶片。以无菌水只接菌为对照，每个处理 4 株，重复 3 次。治疗作用测定：先用币斑病菌 N8 和 N18 接种草坪植株，接种方法、培养条件同预防作用，在接种 24h 后喷施最终浓度分别为 0、0.5、1 和 2g/mL6PP药液。7d 后测量病变长度，并计算防治效果。按公式(3)计算病情指数(DI)。DI=(Nii)(Nt9)100(3)式中：Ni为各级病株数；i 为相应的级数值；Nt为调查总株数。1.4 统计分析通过 SPSS16.0 软件对试验数据进行统计分No.1刘曼等:6-戊基-2H-吡喃-2-酮对草坪币斑病菌的抑菌活性及其对病害的防治效果107析，应用 Duncan 氏新复极差法进行差异显著性检验，采用 prism9.0 软件(GraphPad 公司)进行数据处理和图形制作。2 结果与分析 2.1 菌株鉴定根据系统发育关系，6 株菌株划分为 2 个种，其中 N8、112、73 菌株为 C.jacksonii，N18、N13、N14 菌株为 C.monteithiana。供试菌株与币斑病菌模式菌株(Typestrain)的同源性均达到了 98%以上(图 1)。2.2 6PP 对币斑病菌抑制效果6PP 对各菌株菌丝的生长具有抑制作用(图 2-A)，较高质量浓度的 6PP(0.2g/mL)有效抑制了 C.monteithiana3 株菌株菌丝的生长，径向生长抑制率为 60.72%、85.20%和 97.71%，并完全抑制了 C.jacksonii3 株菌株菌丝的生长，径向生长抑制率为 100%。6PP 对 C.jacksonii 的抑菌效果较好，在较低质量浓度(0.05g/mL)时，对 N8、73 和 112 的抑制率分别达到 80.40%、99.50%和97.77%，对 C.monteithiana 的 N13、N14 和N18 的抑制率分别是 20.10%、19.80%和 32.72%(图 2-B)。6PP 对 C.jacksonii 的 EC50值显著低于C.monteithiana(P0.05)，其中 6PP 对 C.monteithiana3 株菌株的平均 EC50值为 0.37g/mL，对 C.jacksonii3 株菌株的平均 EC50值为 0.04g/mL(表 1)。2.3 6PP 对平板培养条件下币斑病菌菌丝形态的影响菌株 N8 和 N18 的对照组菌丝呈现出完整、XTH2_SH_SPClarireedia jacksonii_CBS138618_Type strainGQ924924_Beijing_ZoysiagrassGQ924926_Beijing_BentgrassGQ924925_Beijing_Zoysiagrass.KF048091_D-C-1_Bermuda grassClarireedia monteithiana_RB19_Type strainCAU1_SH_UnKnownN18N13N14BH5_SH_SPGU002301_Foshan_seashore papalumKF048088_HD8-1_Zoysia grassXC14_HN_SP_IntronKF048090_HE-1_Carpet grassSZ11_HN_SP_IntronXC1_HN_SP_IntronXC5_HN_SP_Intron(Clarireedia paspali_Type strain)XC6_HN_SP_IntronRutstroemia maritima_CBS311137Rutstroemia bolaris_KL222Rutstroemia firma_CBS115861009896969998100868510094Clarireedia homoeocarpa_CBS31037_Type strainClarireedia bennettii_(as Rutstroemia paludosa)_CBS46473Clarireedia bennettii_(as Rutstroemia calopus)_CBS85497Clarireedia bennettii_CBS30937_Type strainKF048089 ML7-3 Paspalum spp.GQ924923_Tianjin_Festuca arundinacea(Schreber)Hackel_GQ386985_shenzhen_seashore paspalum709772N8112730.010C.MonteithianaC.jacksonii图 1 基于 ITS-rDNA 序列采用邻接法(NJ)构建的系统发育树Fig.1 Phylogenetic tree constructed using neighbor-joining method based on ITS rDNA sequences108农药学学报Vol.25均匀的形态，菌丝表面光滑且能自然延展(图 3-a,3-c)，而在 0.075g/mL 的 6PP 处理下，N8 和N18 显示出不同的形态变化。其中 N8 菌株，菌丝顶部的分支增加，菌丝细胞膨大(图 3-b)，菌丝浆液凝结外渗，菌丝浆分布均匀；而 N18 菌丝变细且聚集，隔膜变短(图 3-d)。2.4 6PP 对币斑病菌过氧化物积累的影响DAB 染色结果显示，菌株 N8 与 N18 的 6PP处理组菌丝与 DAB 孵化时生成棕色产物(图 4-a，4-c)，而对照组没有发现色素沉积。2.5 6PP 对菌丝体相对电导率的影响两种草坪币斑病菌株(N8 和 N18)菌丝的相对电导率随着时间的推移大致呈现先增加后逐渐稳定的趋势。经 6PP 处理后，N8 和 N18 菌丝的相对电导率高于对照组(图 5)，N8 和 N18 对照组和处理组在 180min 内相对电导率均显著上升(P0.05)。N18 对照组菌液的平均 pH 值为 4.84，处理后的菌液 pH 平均值为5.20，N18 处理菌株的菌液 pH 变化显著高于对照组的菌液(P0.05)(图 6)。2.7 6PP 对币斑病菌 MDA 的影响与对照组相比，经过 6PP 处理的草坪币斑病菌 MDA 含量均显著升高(P0.05)。N8 对照组MDA 含量为 0.74mol/g，处理后为 1.91mol/g。N18 对照组 MDA 含量为 0.82mol/g，处理后为1.64mol/g(图 7)。2.8 6PP 对 EPS 含量的影响N8 对照组的 EPS 含量为 8.09mg/L，处理后为 19.27mg/L，增长率为 58.02%；N18 对照组的表 1 6PP 对币斑病菌的 EC50值Table 1 EC50 value of 6PP to Clarireedia strains菌株Strain毒力回归方程Toxicityregressionequation相关系数CorrelationcoefficientEC50/(g/mL)95%置信限95%CL/(g/mL)C.monteithianaN13y=0.85+0.48x0.9760.830.501.16C.monteithianaN14y=0.71+0.40 x0.9240.150.110.18C.monteithianaN18y=0.71+0.45x0.9790.120.110.13C.jacksoniiN8y=3.12+3.43x0.9010.030.020.04C.jacksonii73y=0.28+0.31x0.8900.030.010.04C.jacksonii112y=0.27+0.28x0.9890.050.030.06ABC.Monteithiana N13C.Monteithiana N14C.Monteithiana N18C.jacksonii N8C.jacksonii 73C.jacksonii 112CK0.025 g/mL0.050 g/mL0.075 g/mL0.100 g/mL0.125 g/mL0.150 g/mL0.175 g/mL0.200 g/mL0.225 g/mL0.250 g/mL0.275 g/mL1.51.00.5000.16PP 的质量浓度Concentration of 6PP/(g/mL)抑制率 Inhibition rate/%0.20.3N13N14N18N873112图 2 不同浓度 6PP 对币斑病菌 N13、N14、N18、N8、112 和 73 的抑制作用Fig.2 The inhibition effect of 6PP against Clarireedia spp.strains N13,N14,N18,N8,112 and 73No.1刘曼等:6-戊基-2H-吡喃-2-酮对草坪币斑病菌的抑菌活性及其对病害的防治效果109EPS 含量为 5.20mg/L，处理后为 21.30mg/L，增长率为 75.59%。6PP 处理后 N8 和 N18 菌株的EPS 含量均显著高于对照组(P0.05)，其中 N18的增长率高于 N8(图 8)。2.9 6PP 对抗氧化酶活性的影响6PP 处理后 N8 和 N18 菌株 SOD 活性均显著高于对照组(P0.05)，N8 对照组的 SOD 活性为7.69U/g，处理后为 12.76U/g，增长率为 39.73%；N18 对照组的活性为 6.90U/g，处理后为 12.75U/g，增长率为 45.88%，即 N18 的增长率高于 N8。表 2 180 min 内C.jacksonii N8 和C.monteithiana N18的相对电导率的变化Table 2 The changes of the relative conductivity of C.jacksonii N8 and C.monteithiana N18 within 180 min处理Teatment180min内相对电导率的变化Changeofrelativeconductivitywithin180minC.jacksoniiN832.871.10bN8+0.075g/mL6PP45.210.90aC.monteithianaN1821.771.23BN18+0.075g/mL6PP26.781.56A注：不同字母表示 0.05 水平上的差异显著性。表中数据为 3 次独立重复试验的平均值标准误差。Note:Differentlettersrepresentsignificantdifferencesbetweendifferenttreatments(P0.05).ThedatainthetablearethemeanSEfromthethreeindependentreplicates.CKabcd400 x400 x400 x400 x+0.075 g/mL注：a、b：分别为 C.jacksoniiN8 对照组和处理组币斑病菌菌丝；c、d：分别为 C.monteithianaN18 对照组和处理组币斑病菌菌丝。Note:Myceliaofthe C.jacksoniiN8controlgroup(a)andthetreatmentgroup(b);MyceliaofC.monteithianaN18controlgroup(c)andtreatmentgroup(d).图 3 6PP 对C.jacksonii N8 和C.monteithiana N18菌丝形态的影响Fig.3 Effect of 6PP on the mycelial morphology ofC.jacksonii N8 and C.monteithiana N18CKabcd400 x400 x400 x400 x+0.075 g/mL注：a、b：分别为 C.jacksoniiN8 对照组和处理组币斑病菌菌丝；c、d 分别为 C.monteithianaN18 对照组和处理组币斑病菌菌丝。Note:Myceliaofthe C.jacksoniiN8controlgroup(a)andthetreatmentgroup(b);MyceliaofC.monteithianaN18controlgroup(c)andtreatmentgroup(d).图 4 C.jacksonii N8 和C.monteithianaN18 的 DAB 染色结果图Fig.4 DAB staining of C.jacksonii N8 andC.monteithiana N1810090807060504030020406080100时间 Time/min相对电导率 Relative conductivity/%120 140 160 180 20010090807060504030020406080100时间 Time/min相对电导率 Relative conductivity/%120 140 160 180 200N8N18N8+0.075 g/mL 6PPN18+0.075 g/mL 6PP图 5 6PP 对C.jacksonii N8 和C.monteithiana N18 菌丝体相对电导率的影响Fig.5 Effect of 6PP on the relative conductivity of mycelia of C.jacksonii N8 and C.monteithiana N18110农药学学报Vol.25N8 对照组的 POD 活性为 1.31U/(gmin)，处理后为 2.40U/(gmin)，其增长率为 45.42%，两者存在显著性差异(P0.05)(图 9)。2.10 6PP 对草坪离体叶片币斑病的预防和治疗离体条件下，以草坪币斑病菌株 N8 和 N18作为侵染源。预防试验中，6PP 对 N8 和 N18 引6420N8N8+0.075 g/mL 6PPaapH6.05.05.54.54.0N18N18+0.075 g/mL 6PPbapH注:不同小写字母代表不同处理之间在0.05水平上差异显著。Note:Differentlowercaselettersrepresentsignificantdifferencesbetweendifferenttreatments(P0.05).图 6 6PP 对C.jacksonii N8 和C.monteithiana N18 菌液 pH 值的影响Fig.6 Effect of 6PP on bacterial fluid pH of C.jacksonii N8 and C.monteithiana N182.01.01.50.50N8ba2.01.01.50.50N18ba丙二醛含量 MDA/(mmol/g)丙二醛含量 MDA/(mmol/g)N18+0.075 g/mL 6PPN8+0.075 g/mL 6PP注:不同小写字母代表不同处理之间在0.05水平上差异显著。Note:Differentlowercaselettersrepresentsignificantdifferencesbetweendifferenttreatments(P0.05).图 7 6PP 对C.jacksonii N8 和C.monteithiana N18 菌丝体 MDA 含量的影响Fig.7 Effect of 6PP on MDA of C.jacksonii N8 and C.monteithiana N18 mycelium3020100N8ab胞外多糖含量 Content of EPS/(mg/L)3020100N18ab胞外多糖含量 Content of EPS/(mg/L)N8+0.075 mg/mL 6PPN18+0.075 mg/mL 6PP注:不同小写字母代表不同处理之间在0.05水平上差异显著。Note:Differentlowercaselettersrepresentsignificantdifferencesbetweendifferenttreatments(P0.05).图 8 6PP 对C.jacksonii N8 和C.monteithiana N18 菌丝体 EPS 含量的影响Fig.8 Effect of 6PP on the EPS content of C.jacksonii N8 and C.monteithiana