第十一章多肽和蛋白质药物.pptx

第十一章多肽和蛋白质药物第十一章多肽和蛋白质药物2 分类分类寡肽寡肽:由由10个以下氨基酸组成得肽称为寡肽。有个以下氨基酸组成得肽称为寡肽。有二肽、三肽、四肽二肽、三肽、四肽之别。之别。按国际药学界通行得分类法按国际药学界通行得分类法,通常由通常由10100氨基酸分子脱水缩合而氨基酸分子脱水缩合而成得化合物叫多肽成得化合物叫多肽,它们得分子量低于它们得分子量低于10,000Da(Dalton,道尔道尔顿顿)也有文献把由也有文献把由210个氨基酸组成得肽称为寡肽个氨基酸组成得肽称为寡肽(小分子肽小分子肽);1050个氨基酸组成得肽称为多肽个氨基酸组成得肽称为多肽;由由50个以上得氨基酸组个以上得氨基酸组成得肽就称为蛋白质。成得肽就称为蛋白质。3、蛋白质得基本结构形式、蛋白质得基本结构形式:n多肽链多肽链(NHCHCONHCHCO)n多肽链得方向性多肽链得方向性:从从N末端指向末端指向C末端。末端。血红蛋白结构血红蛋白结构二、蛋白质得代谢可以用氮平衡表示二、蛋白质得代谢可以用氮平衡表示摄入食物得含氮量与排泄物中得含氮量之间得关系。摄入食物得含氮量与排泄物中得含氮量之间得关系。氮总平衡氮总平衡:摄入氮摄入氮=排出氮排出氮(正常成人正常成人)氮正平衡氮正平衡:摄入氮摄入氮排出氮排出氮(儿童、孕妇儿童、孕妇)氮负平衡氮负平衡:摄入氮摄入氮排出氮排出氮(饥饿、消耗性疾病患者饥饿、消耗性疾病患者)氮平衡得意义氮平衡得意义可以间接反映体内蛋白质代谢得概况。可以间接反映体内蛋白质代谢得概况。常用得蛋白质得测定方法常用得蛋白质得测定方法凯氏定氮法通过测定含氮量乘以凯氏定氮法通过测定含氮量乘以6、25来估来估算蛋白质得含量算蛋白质得含量三聚氰胺含氮量为三聚氰胺含氮量为66、6%蛋白质中含氮量平均为蛋白质中含氮量平均为16%。实验证明实验证明,健健康成年人每康成年人每天需补充食天需补充食物蛋白质物蛋白质3045g,才能才能保持氮得总保持氮得总平衡。这就平衡。这就就是蛋白质就是蛋白质得最小生理得最小生理需要量。需要量。大家学习辛苦了，还是要坚持继续保持安静继续保持安静第二节第二节 多肽药物得制备多肽药物得制备一、概述一、概述 活性多肽就是生化药物中非常活跃得一个领域活性多肽就是生化药物中非常活跃得一个领域,生物体内已生物体内已知得活性多肽主要就是从内分泌腺、组织器官、分泌细胞知得活性多肽主要就是从内分泌腺、组织器官、分泌细胞与体液中产生或获得得。与体液中产生或获得得。定义定义:以多肽激素与多肽类生长调节因子为主得一大类内源以多肽激素与多肽类生长调节因子为主得一大类内源性活性物质。性活性物质。研究活性多肽结构与功能得关系及活性多研究活性多肽结构与功能得关系及活性多肽之间结构得异同与其活性得关系肽之间结构得异同与其活性得关系,将有助将有助于设计与研制新得活性多肽药物。于设计与研制新得活性多肽药物。蛋白结构模拟预测蛋白结构模拟预测H5型禽流感病毒保守中型禽流感病毒保守中与表位及其抗病毒多肽得初步设计与表位及其抗病毒多肽得初步设计 多肽药物得种类多肽药物得种类1、多肽激素、多肽激素2、多肽类细胞生长调节因子、多肽类细胞生长调节因子3、含有多肽成分得其她生化药物、含有多肽成分得其她生化药物 1、多肽激素、多肽激素(1)脑垂体多肽激素脑垂体多肽激素 促皮质素促皮质素(ACTH),促黑激素促黑激素MSH,催产素催产素,加压素加压素(2)下丘脑激素下丘脑激素 促甲状腺激素释放激素促甲状腺激素释放激素,抑制激素抑制激素,促性腺激素释放激素促性腺激素释放激素(3)甲状腺激素甲状腺激素 甲状旁腺激素甲状旁腺激素,降钙素降钙素(4)胰岛激素胰岛激素 胰高血糖素胰高血糖素,胰解痉多肽胰解痉多肽(5)胃肠道激素胃肠道激素 胃泌素胃泌素,胆囊收缩素胆囊收缩素,肠泌素肠泌素,肠血管肠血管活性肽活性肽,抑胃肽抑胃肽,缓激肽缓激肽,P物质物质(6)胸腺激素胸腺激素 胸腺素胸腺素,胸腺肽胸腺肽,胸腺血清因子胸腺血清因子促黑激素促黑激素MSHMSH主要作用于黑色素细胞。体内黑色素主要作用于黑色素细胞。体内黑色素细胞分布于皮肤及毛发、眼球虹膜色素层细胞分布于皮肤及毛发、眼球虹膜色素层及视网膜色素层、软脑膜。皮肤黑色素细及视网膜色素层、软脑膜。皮肤黑色素细胞位于表皮与真皮之间胞位于表皮与真皮之间,胞浆内得黑色素小胞浆内得黑色素小体内含酪氨酸酶体内含酪氨酸酶,可促进酪氨酸转变为黑色可促进酪氨酸转变为黑色素、素、MSH作用主要为激活酪氨酸酶作用主要为激活酪氨酸酶,并促进并促进酪氨酸酶合成酪氨酸酶合成,从而促进黑色素合成从而促进黑色素合成,使皮使皮肤及毛发颜色加深肤及毛发颜色加深。甲状腺激素甲状腺激素:提高神经兴奋性与身体提高神经兴奋性与身体发育作用。发育作用。地方性甲状腺肿地方性甲状腺肿 甲亢甲亢 地方性克汀病病人地方性克汀病病人(呆小症呆小症)2、多肽类细胞生长调节因子、多肽类细胞生长调节因子表皮生长因子表皮生长因子,转移因子转移因子,心钠素心钠素 3 3、含有多肽成分得其它物质、含有多肽成分得其它物质妇血宁妇血宁,蛇毒蛇毒,胚胎素胚胎素,助应素助应素蛇毒就是毒蛇从毒腺中分泌出来得蛇毒就是毒蛇从毒腺中分泌出来得一种液体一种液体,主要成份就是毒性蛋白主要成份就是毒性蛋白质质,约占干重得约占干重得90%至至95%。蛇毒得治癌作用蛇毒得治癌作用中国医科大学中国医科大学蛇毒研究室试图从蛇毒研究室试图从辽宁辽宁大大连蛇岛产得蝮蛇毒中找到能抑制肿瘤生长有连蛇岛产得蝮蛇毒中找到能抑制肿瘤生长有效成分效成分,开展了蛇岛蝮蛇得原毒与分离毒对开展了蛇岛蝮蛇得原毒与分离毒对比抑制肿瘤试验比抑制肿瘤试验,9个不同浓度得蛇毒对小鼠个不同浓度得蛇毒对小鼠肉瘤均有不同程度得抑制作用肉瘤均有不同程度得抑制作用,抑瘤率有得高抑瘤率有得高达达87、1%、二二、主主要要多多肽肽类类药药物物得得制备制备(一一)胸胸腺腺激激素素(Thymus hormones)胸胸腺腺就就是是一一个个激激素素分分泌泌器器官官,对对免免疫疫功功能能有有多多方方面面得得影影响响。胸胸腺腺激激素素可可以以促促进进T细细胞胞得得前前身身细细胞胞得得分分化化、发发育育、成成熟熟为为T细细胞。胞。1、胸腺素胸腺素(Thymosin)胸胸腺腺肽肽组组分分5(Thymosin fraction 5,TF5)、胸胸腺腺激激素素制制剂剂总得说来都与调节免疫功能有关都与调节免疫功能有关。(1)结结构构与与性性质质 就是由在80热热稳稳定定得4050种种多多肽肽组成得混混合物合物,分子量在分子量在100015000之间之间,等电点在等电点在3、59、5之间之间。为了便于不同实验室对这些多肽得鉴鉴别别与与比比较较,根据它们得等等电点电点以及在等电聚焦分离等电聚焦分离时得顺序而命名。共分三个区域三个区域:区包括等电点低于区包括等电点低于5、0得组分得组分,区包括等电点在区包括等电点在5、07、0之间得组分之间得组分,区区则则指指其其等等电电点点在在7、0以以上上者者(此此区区内内组组分分很很少少)。对对分分离离得得多多肽进行免疫活性测定肽进行免疫活性测定,有活性得称为胸腺素。有活性得称为胸腺素。(2)生产工艺生产工艺:工艺路线工艺路线(3)活力测定活力测定E-玫瑰花结升高百分数不得低于玫瑰花结升高百分数不得低于10%,分子量在分子量在15000以下。以下。T淋巴细胞表面有针对绵羊红细胞淋巴细胞表面有针对绵羊红细胞(SRBC)得特异性得特异性受体受体,称为称为E受体。在一定得实验条件下受体。在一定得实验条件下,SRBC与与T细胞表面得受体结合细胞表面得受体结合,形成以形成以T细胞为中心细胞为中心,四周环四周环绕绕SRBC,状如玫瑰花得细胞集团状如玫瑰花得细胞集团,故名故名E玫瑰花结。玫瑰花结。玫瑰花结试验就是体外检测人与动物细胞免玫瑰花结试验就是体外检测人与动物细胞免疫功能得一种方法。疫功能得一种方法。E玫瑰花结试验就是玫瑰花结试验就是T淋巴细淋巴细胞计数得一种重要方法。胞计数得一种重要方法。(二二)促促 皮皮 质质 激激 素素 (ACTH)促肾上腺皮质激素促肾上腺皮质激素 1、结结构构与与性性质质:垂垂体体包括腺腺垂垂体体与与神神经经垂垂体体,可分泌多种激素多种激素。促促皮皮质质激激素素就就是是从从垂垂体体前前叶叶提提取取出出来来得得一一种种多多肽肽激激素素。易易溶溶于于水水,等等电电点点为为6、6。在在干干燥燥与与酸酸性性溶溶液液中中较较稳稳定定,虽虽经经100加加热热,但但活活力力不不减减;在在碱碱性性溶溶液液中中容容易易失失活活。能能溶溶解解于于70%得得丙丙酮或酮或70得乙醇中。得乙醇中。ACTH为39个个氨氨基基酸酸组成得直链多肽,种属差异仅仅表现在第2533位位上上。ACTH得得24肽肽即即124位位得得片片段段(ACTH 124)具具有有全全部部活活性性。这就是因为ACTH得第24位氨基酸之后得部分,不参与同受受体体得作用,它仅仅维维持持整个多多肽肽结结构构得得稳稳定定性性。ACTH可可被被胃胃蛋蛋白白酶酶部部分分水水解解,但但仍仍有有活活力力,ACTH在溶液中存在着高度得 螺旋螺旋。作用与用途作用与用途 ACTH能维持肾上腺皮质得正常功能正常功能,促进促进皮质激素得合成与分泌合成与分泌。2、生产工艺、生产工艺(1)工艺路线工艺路线:(2)工艺过程工艺过程:提取提取 分离分离 精制精制CMC(羧甲基纤维素 弱酸)717阴离子交换树脂处理色、热原、负离子 梯度洗脱。(三三)降钙素降钙素(Calcitonin,CT)1、结构与性质、结构与性质 降降钙钙素素就是一种调节血钙浓度得多多肽肽激激素素,由甲甲状状腺腺内得滤滤泡泡旁旁细细胞胞(C细细胞胞)分泌。就是由32个个氨氨基基酸酸残基组成得单单链链多多肽肽,降钙素肽链得脯脯氨氨酸酸端端与生物活性有密切得关系,去掉脯脯氨氨酸酸则则失失活活。降降钙钙素素分分子子量约量约3500。物理性质物理性质:溶于水溶于水与碱性碱性溶液,不溶于丙酮、乙醇、不溶于丙酮、乙醇、氯仿、乙醚、苯、异丙醇及四氯化碳等氯仿、乙醚、苯、异丙醇及四氯化碳等,难溶于有难溶于有机酸。水溶液中机酸。水溶液中27 可保存可保存7天。天。降钙素降钙素在人及哺乳动物体内,主要存在于甲状甲状腺、甲状旁腺、胸腺与肾上腺等组织腺、甲状旁腺、胸腺与肾上腺等组织中,鱼类则在鲑、鳗、鳟等得终鳃体鲑、鳗、鳟等得终鳃体里含量较多。各种不同动物来源得降钙素,氨基酸排列顺序有些差异排列顺序有些差异。降钙素得主要功能就是降低血钙降低血钙。由于降钙素有抑制破骨细胞活力破骨细胞活力得作用,所以能抑制骨盐得溶解吸收,从而阻止钙从骨中释出阻止钙从骨中释出。血钙平衡血钙平衡:血钙高可促使降钙素降钙素分泌增加,使血钙降低,血钙低时可促使甲状旁腺素甲状旁腺素分泌增加而使血钙升高,两者互相制约,共同维持。共同维持。2、生产工艺、生产工艺 制造降钙素得原料主要有猪猪甲甲状状腺腺与与鲑鲑、鳗鳗得得心心脏脏或或心心包包膜膜。用化化学学合合成成与基基因因工工程程技技术术制备降钙素已获成功。工艺路线工艺路线:提取、分离、精制提取、分离、精制制丙酮粉、离心与过滤(工业考虑)、离子洗脱分离。总结思考题1、多肽类药物得分类、多肽类药物得分类2、胸腺素组分、胸腺素组分5得提取过程。得提取过程。第二节第二节 蛋白质类药物蛋白质类药物一、主要蛋白质类药物有以下几种一、主要蛋白质类药物有以下几种:1、蛋白质激素蛋白质激素(1)垂体蛋白激素垂体蛋白激素 生长素生长素,催乳素催乳素,促甲状促甲状腺素腺素,促黄体生成激素促黄体生成激素,促卵泡激素促卵泡激素(2)促性腺激素促性腺激素 人绒毛膜促性腺激素人绒毛膜促性腺激素,绝经绝经尿促性腺激素尿促性腺激素,血清促性腺激素血清促性腺激素(3)其她蛋白质激素其她蛋白质激素:胰岛素及其它激素胰岛素及其它激素生长素生长素2、血浆蛋白质血浆蛋白质白蛋白白蛋白,纤维蛋白溶酶原纤维蛋白溶酶原,血纤蛋白等血纤蛋白等3、蛋白质类细胞生长调节因子蛋白质类细胞生长调节因子干扰素等干扰素等4、粘蛋白粘蛋白胃膜素胃膜素,硫酸糖肽硫酸糖肽,内在因子内在因子5、胶原蛋白胶原蛋白明胶明胶,阿胶阿胶阿胶 本品为马科动物驴本品为马科动物驴Equus asinus L、及其及其她驴皮经煎煮浓缩制成得固体胶。她驴皮经煎煮浓缩制成得固体胶。6、碱性蛋白碱性蛋白硫酸鱼精蛋白硫酸鱼精蛋白7、蛋白酶抑制剂蛋白酶抑制剂胰蛋白酶抑制剂胰蛋白酶抑制剂,大豆胰蛋白酶抑制剂大豆胰蛋白酶抑制剂8、植物凝集素植物凝集素PHA,ConA胰蛋白酶抑制剂胰蛋白酶抑制剂二、主要蛋白质类药物得制备二、主要蛋白质类药物得制备(一一)白蛋白白蛋白(Albumin)1、结构与性质、结构与性质 白白蛋蛋白白又称清清蛋蛋白白,就是血浆中含量最多得蛋白质,约占总总蛋蛋白白得得55。同同种种白蛋白制品无无抗抗原原性性。主要功能就是维持血浆胶体渗透压血浆胶体渗透压。白蛋白为单单链链,由575个个氨氨基基酸酸残基组成,分子量为65000,pI4、7,沉沉降降系系数数(S20,w)4、6,电电泳泳迁迁移移率率5、92。可溶于水与半半饱饱与与得硫酸铵溶液中,一般当硫酸铵得饱与度为60以上时析出沉淀析出沉淀。性质性质:对酸较稳定对酸较稳定。受热受热后可聚合变性聚合变性,但仍较其她血浆蛋白质耐热耐热,蛋白质得浓度浓度大时热稳定性热稳定性小小。在白蛋白溶液中加入氯化钠氯化钠或脂肪酸得盐脂肪酸得盐,能提高白蛋白得热稳定性热稳定性。利用这种性质利用这种性质,使白蛋白与其她蛋白质分离。使白蛋白与其她蛋白质分离。人血丙种球蛋白即免疫球蛋白就是一类主人血丙种球蛋白即免疫球蛋白就是一类主要存在于血浆中、具有抗体活性得糖蛋白。要存在于血浆中、具有抗体活性得糖蛋白。对血清进行电泳后发现对血清进行电泳后发现,抗体成分存在于抗体成分存在于与与球蛋白部分球蛋白部分,故通称为免疫球蛋白故通称为免疫球蛋白(Ig)。免疫球蛋白约占血浆蛋白总量得免疫球蛋白约占血浆蛋白总量得20%,除存除存在于血浆中外在于血浆中外,也少量地存在于其她组织液、也少量地存在于其她组织液、外分泌液与淋巴细胞得表面。具有被动免外分泌液与淋巴细胞得表面。具有被动免疫作用疫作用,可用于预防流行性疾病如病毒性肝可用于预防流行性疾病如病毒性肝炎、脊髓灰质炎、风疹、水痘与丙种球蛋炎、脊髓灰质炎、风疹、水痘与丙种球蛋白缺乏症。白缺乏症。2、生产工艺、生产工艺(1)工艺路线工艺路线:(2)工艺过程工艺过程:提取、分离、精制提取、分离、精制利利凡凡诺诺沉沉淀淀 弱酸性,氯化钠 超滤器浓缩 热处理,灭活病毒 除菌(过滤)。质量检验白蛋白得质量检验白蛋白得质量检验 性状性状:淡黄色略带粘稠状得澄清液体或白色疏松物体淡黄色略带粘稠状得澄清液体或白色疏松物体,pH=6、67、2 溶解时间溶解时间:15min 水分水分:1min 白蛋白含量白蛋白含量:不低于本品规格不低于本品规格 纯度纯度:白蛋白含量应占蛋白含量得白蛋白含量应占蛋白含量得95%以上以上;残余硫酸残余硫酸 铵含量铵含量0、01%;无菌试验、安全试验、毒性试验、热无菌试验、安全试验、毒性试验、热 原试验符合标准原试验符合标准人血丙种球蛋白得质量检验人血丙种球蛋白得质量检验 性状性状:无色或淡褐色得澄明液体无色或淡褐色得澄明液体,微带乳光微带乳光,不含异物或不含异物或 摇不散得沉淀摇不散得沉淀,pH=6、67、4 含量含量:丙种球蛋白含量应占蛋白质含量得丙种球蛋白含量应占蛋白质含量得95%以上以上 稳定性稳定性:在在57加热加热4h不得出现结冻现象或絮状物不得出现结冻现象或絮状物 防腐剂含量防腐剂含量:酚含量酚含量0、25%,硫柳贡硫柳贡0、005%固体总量固体总量:制品中固体总量百分数与蛋白质含量百分数之制品中固体总量百分数与蛋白质含量百分数之差不得大于差不得大于2%残余硫酸铵含量残余硫酸铵含量:0、1%其她其她:无菌试验、防腐剂试验、安全试验、热原试验应符无菌试验、防腐剂试验、安全试验、热原试验应符合规定合规定(二二)、干扰素、干扰素(interferon,IFN)1、性质性质细胞因子中得一个家族细胞因子中得一个家族,以干扰病毒复制而得名。以干扰病毒复制而得名。根据产生细胞不同可分为根据产生细胞不同可分为干扰素、干扰素、干扰素与干扰素与干干扰素三类。干扰素扰素三类。干扰素(IFN)就是一种广谱抗病毒剂就是一种广谱抗病毒剂,并不直接杀伤或抑制病毒并不直接杀伤或抑制病毒,而主要就是通过细胞表而主要就是通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白,从而抑制从而抑制乙肝乙肝病毒得复制病毒得复制 。作用与用途由于干扰素得抗病毒作用由于干扰素得抗病毒作用,抗细胞抗细胞分裂及免疫调节作用分裂及免疫调节作用,可用于可用于:(1)病毒性疾病病毒性疾病 普通感冒普通感冒,疱疹疱疹性角膜炎性角膜炎,带状疱疹带状疱疹,水痘、慢性水痘、慢性活动性乙型肝炎。活动性乙型肝炎。(2)恶性肿瘤恶性肿瘤 成骨肉瘤成骨肉瘤,乳腺癌乳腺癌,多发性骨髓瘤多发性骨髓瘤,黑色素瘤、淋巴瘤、黑色素瘤、淋巴瘤、白血病等白血病等(3)由于病毒引起得良性肿瘤可控由于病毒引起得良性肿瘤可控制疾病发展。制疾病发展。上海生物制品研究所北京三元基因工程有限公司长春海伯尔生物技术有限责任公司深圳科兴生物工程有限公司哈药集团生物工程有限公司天津华立达生物工程有限公司沈阳三生制药有限责任公司安徽安科生物工程(集团)股份有限公司二、干扰素生产企业二、干扰素生产企业人白细胞启动诱生人干扰素37,12h启动白细胞正式诱生仙台病毒37,12h白细胞培养物离心分离2500rpm粗制干扰素KSCN处理HClpH3、5沉淀1乙醇除杂5 上清液1二次酸除杂蛋白HClpH5、55、8上清液2沉淀分离NaOHpH8、0沉淀2KSCN处理PBS,pH5、2上清液3酸沉淀HClpH3、0沉淀3溶解PBS,NaOHpH7、07、5溶解液透析透析液干扰素2 2、传统生产工艺传统生产工艺人白细胞人白细胞1)分离灰黄层分离灰黄层 取献血者血液取献血者血液(每份每份400ml)采入含抗凝血采入含抗凝血剂得塑料袋内剂得塑料袋内,离心后分出血浆离心后分出血浆,小心吸小心吸取灰黄层取灰黄层,每份血可吸每份血可吸13-15ml,约为血中约为血中细胞得细胞得40-50,放置放置4冰箱过夜。冰箱过夜。2)氯化铵处理氯化铵处理每份灰黄层加入每份灰黄层加入30m缓冲盐水缓冲盐水,在加入总体积在加入总体积9倍量得倍量得0、83得氯化铵溶液得氯化铵溶液,混匀混匀,4放置放置10min。然后离心。然后离心20min,收集沉淀细胞收集沉淀细胞,做成悬浮做成悬浮液液,再用氯化铵处理一次再用氯化铵处理一次,融解残存得红细胞。取融解残存得红细胞。取沉淀得白细胞并悬浮于培养液中沉淀得白细胞并悬浮于培养液中,置于冰浴置于冰浴,取样取样作活细胞计数作活细胞计数,用预温培养液稀释成用预温培养液稀释成107个个/ml。培。培养液得基础成分为养液得基础成分为Eagles培养基。培养基。体外诱生干扰素制备工艺体外诱生干扰素制备工艺:Sendai病毒诱导人白细胞1989年:IFN-n3/Alferon,批准上市存在问题:产量低:1g IFN,需要 3亿ml人血白细胞,来源困难,工艺复杂,收率低,价格昂贵,潜在得血源性病毒污染得可能性干扰素生产工艺路线(1)2 2、基因工程生产工艺基因工程生产工艺人源转化细胞系培养生产工艺人源转化细胞系培养生产工艺:1999年:IFN-n1/Wellferon,批准用于临床。优点:首次实现大规模商业化生产。缺点:活性低,退出临床应用。干扰素生产工艺路线干扰素生产工艺路线(2)基因工程大肠杆菌发酵生产工艺基因工程大肠杆菌发酵生产工艺:上市产品:重组人干扰素rhuIFN 1986,rhuIFN-2a,rhuIFN-2b;1990,rhuIFN-1b;1993,rhuIFN-1b;20012002:PEG化IFN,PEG-Intron,Pegasys 表达产物:无糖基化,N-met,无活性包涵体 工艺特点:发酵过程,随后变性、复性过程。干扰素生产工艺路线干扰素生产工艺路线(3)动物无限细胞系培养生产工艺动物无限细胞系培养生产工艺:上市产品:rhuIFN-1a1996,Avonex(Biogen);2002,Rebif(Serono)表达产物:166 aa 糖基化蛋白,22、5 ku工艺特点:细胞培养,分泌表达缺点:产量低,成本高,过程严格干扰素生产工艺路线干扰素生产工艺路线(4)宿主:腐生型假单胞杆菌(Pseudomonas putida)上市产品:IFN-2b/安福隆表达产物:无糖基化可溶性蛋白质,具有天然分子结构与生物活性工艺特点:发酵周期短(几个小时),无需变性、复性过程,获得有活性产品,纯化过程:淘汰抗体亲与层析干扰素生产工艺路线干扰素生产工艺路线(5)基因工程假单胞杆菌发酵生产工艺基因工程假单胞杆菌发酵生产工艺(三三)胰岛素胰岛素(Insrlin)胰岛素广泛存在于人与动动物物得得胰胰脏脏中,正常人得胰脏约含有200万万个胰岛,胰岛由-、-与与-三三种种细细胞胞组组成成,其中-细胞制造胰胰岛岛素素,-细胞制造胰胰高高血血糖糖素素与胰胰抗抗脂脂肝肝素素,-细胞制造生生长长激激素素抑抑制制因因子子。胰岛素在-细胞中开始时就是以活性很弱得前前体体胰胰岛岛素素原原存在得,进而分解分解为胰岛素进入血液循环。1、结构与性质、结构与性质 胰岛素由51个氨基酸组成。不同种属动物得胰岛素分子结构大致相分子结构大致相同同,主要差别在A链二硫桥中间得第链二硫桥中间得第8、9与与10位上得三个氨基酸及位上得三个氨基酸及B链链C末端人得就是末端人得就是苏氨酸苏氨酸,猪得就是丙氨酸猪得就是丙氨酸,抗原性比抗原性比其她来源得胰岛素要低。胰岛素得性质有胰岛素得性质有:牛胰岛素得分子量为5733,猪为5764,人为5784。胰岛素得等电点为等电点为5、305、35。胰岛素在pH4、56、5范围内几乎不溶于水范围内几乎不溶于水,易溶易溶于稀酸或稀碱溶液于稀酸或稀碱溶液;在在80%以下乙醇或丙酮中溶解以下乙醇或丙酮中溶解;在在90%以上乙醇或以上乙醇或80%以上丙酮中难溶以上丙酮中难溶;在乙醚中不溶乙醚中不溶。在高高浓浓度度锌锌得溶液中,pH68时胰岛素溶解度急剧下降。2、生产工艺、生产工艺 胰岛素在弱酸下或混悬在中性缓冲液中稳定。胰岛素在弱酸下或混悬在中性缓冲液中稳定。工艺路线工艺路线:3质量检定1)原料检定原料检定2)生产过程质控生产过程质控3)产品性状产品性状4)产品纯度检测产品纯度检测5)效价检测效价检测