Virus-de-la-Hepatitis-B13709：病毒性肝炎b13709-de-la.ppt

Diagnstico VirolgicoBioq.Alejandro KucBioq.Alejandro Kuc Servicio de Inmunologa-Hospital“Dr.Julio C.Perrando”Servicio de Inmunologa-Hospital“Dr.Julio C.Perrando”Ctedra de Virologa-FaCENA-UNNECtedra de Virologa-FaCENA-UNNE rea de Inmunologa-IMR-UNNErea de Inmunologa-IMR-UNNEImportanciaDeterminar una intervencin teraputicaDefinir el pronstico en la evolucin de un paciente Indicar la necesidad de una vacunacinAdoptar medidas de salud pblica en una comunidad:epidemiologa.Tendencia:Sensibilidad y RapidezMtodos de DiagnsticoDirectos:presencia de presencia de virusvirus en muestras clnicas en muestras clnicas Agente infeccioso:Agente infeccioso:aislamiento viral aislamiento viral P Partculaartcula viral:viral:microscopa electrnica microscopa electrnica A Antgenos virales:ntgenos virales:inmunomarcacin inmunomarcacin GGenomas virales:biologa molecularenomas virales:biologa molecularIndirectos:resrespuesta puesta de de anticuerposanticuerpos especficos especficos antivirales en el suero del pacienteantivirales en el suero del pacienteTipo de MuestrasVirus respiratorios:aspirado nasofarngeoaspirado nasofarngeoLesiones Cutneas:raspado e hisopadoraspado e hisopadoSangre:aislamiento viralaislamiento viralSuero:bsqueda de anticuerpos(serologa)bsqueda de anticuerpos(serologa)Materia Fecal:enterovirusenterovirusOrina:aislamiento de CMVaislamiento de CMVLCR:enterovirus y parotiditisenterovirus y parotiditisMuestras oculares:hisopadohisopadoTejidos:aislamiento viral o inmunohistoqumicaaislamiento viral o inmunohistoqumicaTransporte y conservacinAislamientoAislamiento Inmediatamente(inactivacin Inmediatamente(inactivacin y contaminacin)y contaminacin)No congelarNo congelarConservacinConservacin Temp amb:horasTemp amb:horas 4C:1-2 das4C:1-2 das-20C:meses-20C:meses-70C:aos-70C:aosMtodos Directos1-Aislamiento ViralHuevos,Animales o ClulasTipos de cultivos celularesPrimario:directamente del tejido humano o Primario:directamente del tejido humano o animal;1-2 subpasajesanimal;1-2 subpasajesDiploide:derivado del tejido fetal o de RN;Diploide:derivado del tejido fetal o de RN;20-50 subpasajes20-50 subpasajesHetroploide:extradas de tejido tumoral o Hetroploide:extradas de tejido tumoral o tranformado;infinitos subpasajestranformado;infinitos subpasajesVariacin en susceptibilidadEs indispensable el Diagnstico presuntivoEs indispensable el Diagnstico presuntivoInoculacin e incubacin(ATB)Decontaminar muestras no estrilesDecontaminar muestras no estrilesInocular en tubos de cultivo:200-300 Inocular en tubos de cultivo:200-300 L de L de muestra en medio con ATBmuestra en medio con ATB1 hr a 37 para permitir la adsorcin1 hr a 37 para permitir la adsorcinAadir medio de cultivo y cambiarlo cada 2-Aadir medio de cultivo y cambiarlo cada 2-3 das.3 das.Deteccin de los efectos de los virusAccin citopatognica:tipo,magnitud,velocidad y Accin citopatognica:tipo,magnitud,velocidad y cultivocultivoDeteccin de los efectos de los virusAccin citopatognica:tipo,magnitud,velocidad y Accin citopatognica:tipo,magnitud,velocidad y cultivocultivoHemadsorcinHemadsorcinDeteccin de los efectos de los virusAccin citopatognica:tipo,magnitud,velocidad y Accin citopatognica:tipo,magnitud,velocidad y cultivocultivoHemadsorcinHemadsorcinHemaglutinacinHemaglutinacinDeteccin de los efectos de los virusDeteccin de los efectos de los virus Accin citopatognica:tipo,magnitud,velocidad y cultivoAccin citopatognica:tipo,magnitud,velocidad y cultivo HemadsorcinHemadsorcin HemaglutinacinHemaglutinacin InterferenciaInterferencia Dx presuntivo:debe confirmarseDx presuntivo:debe confirmarseIdentificacinIdentificacin InmunofuoresenciaInmunofuoresencia ImunoperoxidasaImunoperoxidasaCuantificacin de virusCuantificacin de virus Titulacin de punto finalTitulacin de punto final Plaqueo bajo agarosaPlaqueo bajo agarosa2-Microscopa ElectrnicaMtodosInmunoelectromicroscopaInmunoelectromicroscopaColoracin negativaColoracin negativaVentajasRpido Rpido(pocas muestras)(pocas muestras)DesventajasCosto del MECosto del MEBaja SensibilidadBaja Sensibilidad3-Inmunoflourescencia TcnicaTcnica DirectaDirecta IndirectaIndirectaVentajasVentajas Muestra estableMuestra estable Muy SensibleMuy Sensible Muy EspecficaMuy Especfica RpidoRpidoDesventajasDesventajas Costo del MFCosto del MF Observador experimentadoObservador experimentadoIFIIFIIFIIFIIFIIFI4-AglutinacinVentajasVentajas SencilloSencillo RpidoRpido No requiere No requiere equipamientoequipamientoDesventajasDesventajas Poco especificaPoco especifica5-Enzimoinmunoensayo(EIA)VentajasVentajas Muy SensibleMuy Sensible No se necesita observador experimentadoNo se necesita observador experimentado Gran numero de muestras simultneamenteGran numero de muestras simultneamente AutomatizableAutomatizableDesventajasDesventajas Falsos Positivos(necesita confirmacin)Falsos Positivos(necesita confirmacin)ELISAEnzymeLinkedImmuno-SorbentAssayTests Rpidos en un solo paso5-Radioinmunoensayo(RIA)Fundamento idntico a ELISAFundamento idntico a ELISAVentajasVentajas Similar al ELISASimilar al ELISADesventajasDesventajas Reactivos InestablesReactivos Inestables Residuos RadiactivosResiduos Radiactivos Relativamente mas CostosoRelativamente mas CostosoMtodos IndirectosMtodos IndirectosDeteccin de IgMDeteccin de IgM Infeccin agudaInfeccin aguda Infeccin congnitaInfeccin congnita FR:f+FR:f+IgG:f-IgG:f-IgM CapturaIgM CapturaDeteccin de IgGDeteccin de IgGSeroconversinSeroconversinRecin NacidosRecin NacidosAvidezAvidez 4 ttulosTcnicasAglutinacin de Aglutinacin de partculaspartculasIFI IFI EIAEIA ELISAELISA LIALIARIARIAWestern BlottWestern BlottWestern BlotMuy especificaMtodo confirmatorio1234Western Blot