SN∕T 5220-2019 出口食品中3-氯丙醇酯及缩水甘油酯的测定 气相色谱-质谱法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 52202019出口食品中 3-氯丙醇酯及缩水甘油酯 的测定 气相色谱-质谱法Determination of 3-chloropropanol esters（3-MCPDE）and glycidol esters（GE）in food products for export Gas chromatography mass spectrometry method2019-12-27 发布2020-07-01 实施中 华 人 民 共 和 国 海 关 总 署发 布ICS 67.050X 04ISN/T 52202019前 言本标准按照 GB/T 1.12009 和 GB/T 20001.4-2015 的规则编写。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广州海关。本标准主要起草人：刘青、曾广丰、王志元、庞世琦、陈文锐、邹志飞、韦晓群、康文昱、黄瑾、张洋子。1SN/T 52202019出口食品中 3-氯丙醇酯及缩水甘油酯的测定 气相色谱-质谱法1范围本标准规定了出口食品中 3-氯丙醇酯和缩水甘油酯气相色谱-质谱测定方法。本标准适用于食用油、奶粉、油炸膨化食品及焙烤类食品中 3-氯丙醇酯和缩水甘油酯的定性检测和定量检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。3方法原理本标准通过水解反应将食品中存在的各种 3-氯丙醇酯（3-MCPDE）和缩水甘油酯（GE）全部转化为 3-氯丙醇（3-MCPD），经苯基硼酸（PBA）衍生化后，用气相色谱-质谱法测定其含量，并以其表示 3-MCPDE 的总量。方法通过在水解反应终点分别加入氯化钠-冰乙酸溶液（含氯的终止反应液，提供氯元素，使缩水甘油完全转化为 3-MCPD）和硫酸钠-冰乙酸溶液（不含氯的终止反应液，无法使缩水甘油转化为3-MCPD）进行对照试验，衍生化后分别测得 3-MCPDE 与 GE 的总量和 3-MCPDE 的实际含量，利用差减法从而得到 GE 的含量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯。水采用 GB/T 6682 规定的一级水。4.1甲醇：色谱纯。4.2冰乙酸：色谱纯。4.3甲醇钠。4.4无水硫酸钠。4.5氯化钠。4.6丙酮：色谱纯。4.7苯基硼酸。4.8叔丁基甲醚：色谱纯。4.9乙酸乙酯：色谱纯。4.10正己烷：色谱纯。4.11异辛烷：色谱纯。4.120.5 mol/L 甲醇钠-甲醇溶液：称取固体甲醇钠（4.3）2.701g 于 100 mL 容量瓶中，以甲醇（4.1）2SN/T 52202019定容至 100 mL，混匀。4.1310%硫酸钠-乙酸溶液：称取无水硫酸钠固体（4.4）10 g，溶于 100 mL 水中，再向溶液中加入4 mL 冰乙酸（4.2）。4.1420%氯化钠-乙酸溶液：称取氯化钠固体（4.5）20 g，溶于 100 mL 水中，再向溶液中加入 4 mL冰乙酸（4.2）。4.15丙酮-水溶液（19:1，V/V）：量取 190 mL 丙酮（4.6）和 10 mL 水，混匀。4.16苯基硼酸（PBA）溶液：称取 2.5 g 苯基硼酸（4.7）溶于 20 ml 丙酮-水（19:1，V/V）（4.15），混匀。4.17叔丁基甲醚-乙酸乙酯溶液（8:2，V/V）：量取 80 mL 叔丁基甲醚（4.8）和 20 mL 乙酸乙酯（4.9），混匀。4.18标准物质：棕榈酸-3-氯丙二醇酯（3-MCPDE-Palimtate，CAS 号 51930-97-3，分子量 587.36），和棕榈酸缩水甘油酯（Glycidyl Palmitate，CAS 号 7501-44-2，分子量 312.49），纯度均大于 98。4.19内标物：棕榈酸-d5-3-氯丙二醇酯（d5-3-MCPDE-Palimtate，CAS 号 1185057-55-9，分子量592.39），纯度大于 98。4.20标准储备液：分别准确称取 25.0 mg 的标准物质（精确到 0.001g），用叔丁基甲醚-乙酸乙酯溶液（4.17）溶解后定容至 50.0 mL 刻度，配制成浓度为 500 mg/L 的标准储备溶液，于 0 4 冰箱内储存，有效期 12 个月。4.21混合标准储备溶液：分别准确吸取 10.6 mL 棕榈酸-3-氯丙二醇酯，5.65 mL 棕榈酸缩水甘油酯标准储备液（4.20）于 50 mL 容量瓶中，用叔丁基甲醚-乙酸乙酯溶液（4.17）定容至刻度，配制成浓度为 20.0 mg/L（以 3-氯丙醇计）的混合标准储备溶液，于 0 4 冰箱内储存，有效期 6 个月。4.22内标溶液：准确称取 1.00 mg 的内标物质（精确到 0.001g），用叔丁基甲醚-乙酸乙酯溶液（4.17）溶解后定容至 50.0 mL 刻度，配制成浓度为 20.0 mg/L 的内标溶液，于 0 4 冰箱内储存，有效期 12个月。4.23微孔滤膜：0.22 m，有机相型。5仪器和设备5.1气相色谱-质谱联用仪（GC-MS），配电子轰击源（EI 源）。5.2涡旋混合器。5.3超声波水浴。5.4冷冻离心机：15，10 000 r/min。5.4氮吹浓缩仪。5.5水浴恒温振荡器。5.6分析天平：感量 0.001 g。6测定步骤6.1样品制备6.1.1提取6.1.1.1奶粉样品称取 2 g（精确至 0.001 g）试样于 50 mL 具塞聚四氟乙烯离心管中（每个样品需要两份作对照），加入 2.0 mL 去离子水，准确加入 50 L 的 20.0 mg/L 内标溶液（4.22），再加入 5 mL 正己烷（4.10），超声提取 15 min，以不低于 10 000 r/min，离心 10 min。取出后，移取上清液于新的 50 mL 离心管中，3SN/T 52202019重复提取 1 次 2 次，合并提取液。置于氮吹浓缩仪中，于 40-50下用氮气吹至提取液剩余 5 mL作为待反应液。6.1.1.2油炸膨化类食品样品称取颗粒或粉末状试样 2 g（精确至 0.001 g）于 50 mL 具塞聚四氟乙烯离心管中（每个样品需要两份作对照），加入 2.0 mL 去离子水，准确加入 50 L 的 20.0 mg/L 内标物溶液（4.22），再加入 5mL正己烷（4.10），超声提取 15 min，以不低于 10 000 r/min，离心 10 min。取出后，移取上清液于新的50 mL 离心管中，重复提取 1 次 2 次，合并提取液。置于氮吹浓缩仪中，于 40 50下用氮气吹至提取液剩余 5 mL 作为待反应液。6.1.1.3食用油样品称取0.5 g（精确至0.001 g）油样品于15 mL具塞聚四氟乙烯离心管中（每个样品需要两份作对照），准确加入 50 L 的 20.0 mg/L 内标物溶液（4.22），再加入 2 mL 叔丁基甲醚-乙酸乙酯溶液（4.17），将离心管置于超声波清洗器于 45下，超声混合提取 15 min，作为待反应液。6.1.1.4焙烤类食品样品称取颗粒状试样 2 g（精确至 0.001 g）于 50 mL 具塞聚四氟乙烯离心管中（每个样品需要两份作对照），加入 2.0 mL 去离子水，准确加入 50 L 的 20.0 mg/L 内标物溶液（4.22），再加入 5 mL 正己烷（4.10），超声提取 15 min，以不低于 10 000 r/min，离心 10 min。取出后，移取上清液于新的 50 mL 离心管中，重复提取 1 次 2 次，合并提取液。置于氮吹浓缩仪中，于 40 50下用氮气吹至提取液剩余 5 mL 作为待反应液。6.1.2水解反应在 6.1 的待反应液中加入 1 mL 叔丁基甲醚-乙酸乙酯溶液（食用油无需加入该溶液），再向离心管中加入 0.5 mL 甲醇钠-甲醇溶液（4.12）进行水解反应，严格控制反应时间，7 min 后，向每一组对照样品中分别加入 3 mL 10%硫酸钠-乙酸溶液（4.13）、3 mL 20%氯化钠-乙酸溶液（4.14），充分振荡，使水解反应及时终止。再加入 3 mL 正己烷进行脱脂，充分混匀后静置，待水相有机相分层明显后，吸取上层弃去，脱脂操作进行两遍。6.1.3衍生化反应脱脂后，向各离心管中加入 0.2 mL PBA 溶液（4.16），振荡混匀后，置于水浴恒温振荡器中，于70环境衍生反应 20 min。衍生后，离心管冷却至室温，加入 5 mL 乙酸乙酯涡旋提取两遍，合并两次提取液于 40下用氮气吹干，残留物用 1.00 mL 异辛烷（4.11）定容，充分涡旋混合过有机膜后，滤液作为待测样液供 GC-MS 分析。6.2测定6.2.1测定条件 气相色谱-质谱测定的参考条件如下：a)离子源：电子轰击源（EI 源）b)色谱柱：DB-5ms 毛细管柱（30.0 m0.25 mm0.25 m），或相当者；c)程序升温：60保持 1min，以 5/min 的速率升温至 180，再以 30/min 的速率升温至280，保持 2min；d)进样口温度：280；4SN/T 52202019e)GC-MS 接口温度：280；f)进样量：1 L；g)监测方式：选择离子扫描模式（SIM 模式）；3-MCPD-DBA：m/z196、147*、91d5-3-MCPD-DBA：m/z 201、150*、93h)溶剂延迟：4min。6.2.2气相色谱-质谱测定按照上述测定条件，分别对混合标准工作溶液和样品试液进行检测，以保留时间和离子丰度比对样品进行定性，标准曲线內标法对样品进行定量。3-MCPD-PBA 的参考保留时间为 19.344 min，d5-3-MCPD-PBA 的参考保留时间为 19.289 min。典型的色谱图参见附录 A 中的图 A.1。3-MCPDE 衍生物和 d5-3-MCPDE 衍生物典型的质谱图分别见附录 A 中的图 A.2 和图 A.3。6.3标准曲线的绘制用适量体积的叔丁基甲醚-乙酸乙酯溶液（4.17）将混合标准储备溶液（4.21）稀释（每个标准品需要两份作对照），配置成浓度分别为 0.0200 mg/L、0.200 mg/L、0.500 mg/L、1.00mg/L、2.00 mg/L的混合标准工作溶液，经过 6.1.2 和 6.1.3 的处理步骤后，得到 3-MCPDE 测定曲线和 3-MCPDE、GE总量测定曲线。按照 6.2 的测定条件浓度由低到高进样测定，以目标物定量离子峰面积/内标物定量离子峰面积-目标物浓度作图，得到标准曲线及回归方程，参见附录 B。7结果计算和表述7.13-MCPDE 的含量试样中 3-MCPDE 的含量(以 3-MCPD 计)由色谱数据处理软件或按式（1）计算获得。1000mV CX11=（1）式中：X1 试样中 3-MCPDE 的含量，单位为微克每千克（g/kg)；*为定量离子C1 从标准曲线求得的试样溶液中 3-MCPDE 的含量，单位为毫克每升（mg/L)；V 试样最终的定容体积，单位为毫升（mL)；m 试样的称样质量，单位为克（g)。计算结果保留三位有效数字。7.2GE 的含量试样中 GE 的含量(以 3-MCPD 计)由色谱数据处理软件或按式（2）计算获得。12X-1000mV CX=（2）式中：X 2 试样中 GE 的含量，单位为微克每千克（g/kg）；C 从标准曲线求得的试样溶液中 3-MCPDE 和 GE 的总含量，单位为毫克每升（mg/L)；V 试样最终的定容体积，单位为毫升（mL）；5SN/T 52202019m 试样的取样质量，单位为克（g）；X1 试样中 3-MCPDE 的含量，单位为微克每千克（g/kg）；计算结果保留三位有效数字。8定量限本标准的定量限：奶粉样品的定量限为 25.0 g/kg；油炸膨化类食品样品的定量限为 125 g/kg；食用油样品的定量限为 100 g/kg；焙烤类食品样品的定量限为 20.0 g/kg。9回收率和精密度奶粉样品（婴幼儿奶粉）、油炸膨化类食品样品（薯片）、食用油样品（橄榄油、大豆油）和焙烤类食品样品(蛋糕、面包和曲奇)，分别在三个添加浓度范围内的回收率和精密度数据参见附录 B。6SN/T 52202019附录A（资料性附录）图 A.1气相色谱-质谱联用法测定 3-MCPDE 和 GE 的衍生物典型提取离子色谱图（0.20mg/L 1：d5-3-MCPDE 衍生物，m/z150；2：3-MCPDE 和 GE 衍生物 m/z147）图 A.23-MCPDE 衍生物的典型质谱图图 A.3d5-3-MCPDE 衍生物的典型质谱图7SN/T 52202019附录B（资料性附录）样品类型基质添加水平 g/kg回收率%RSD%3-MCPDEGE3-MCPDEGE奶粉婴幼儿奶粉25.084.889.510.311.712592.495.07.18.525093.593.97.57.1油炸膨化类食品薯片12585.187.24.86.925089.290.06.36.450088.786.65.03.4食用油橄榄油10090.290.09.66.920092.492.68.67.250094.590.07.77.1大豆油10082.485.74.14.320086.185.95.83.450087.487.63.43.9焙烤类食品蛋糕20.01091076.16.620099.992.13.23.5100090.781.22.92.6面包20.01001007.37.320090.490.54.93.5100089.384.32.33.8曲奇20090.693.76.86.250091.51003.52.8100088.094.14.42.0中华人民共和国出入境检验检疫中国海关出版社有限公司出版北京市朝阳区东四环南路甲 1 号（100023）编辑部：[phone]网址 ；www.hgbook 北京中献拓方科技发展有限公司印刷开本 8801230 1/16 印张 0.75 字数 24 千字2019 年 7 月第一版 2019 年 7 月第一次印刷印数 1500书号：1551754 定价 21.00 元出口食品中 3-氯丙醇酯及缩水甘油酯的测定 气相色谱-质谱法行 业 标 准SN/T 52202019SN/T 52202019*SN/T 52202019