白念珠菌实验开题报告-.ppt

白念珠菌白-灰形态转换调控基因相关实验 2014级硕士开题报告报 告 人：潘丽专 业：皮肤性病学 2015年10月1目录1.研究背景与意义2.国内外研究现状3.实验设计 4.预期结果及进展5.参考文献21.研究背景与意义 白色念珠菌（Candida albicans）是一种人类常见的机会致病真菌，常导致免疫系统受损的人群的粘膜表面或系统感染。白色念珠菌至少有七种不同形态，不同形态的菌落之间可以高频率的互相转换，不同形态之间的转换能力与白色念珠菌的致病能力密切相关。目前研究最多的是酵母形态-菌丝形态和白菌-灰菌形态转换。白色念珠菌（Candida albicans）是一种人类常见的机会致病真菌，存在于正常人的口腔、上呼吸道、肠道、阴道中，一般情况下，它是温和无害的，当机体免疫系统受损时可导致人群的粘膜表面或系统感染。被视为“隐形的杀手”【1】。白色念珠菌至少有七种不同形态，不同形态的菌落之间可以高频率的互相转换，不同形态之间的转换能力与白色念珠菌的致病能力密切相关。目前研究最多的是白菌-灰菌形态转换2。研究背景31.研究背景与意义welcome to use these PowerPoint templates,New Content design,10 years experience 研究背景 白念的白菌细胞转换成灰菌细胞后能够稳定传代，相反亦然。白菌在系统感染中具有较强的致病力，灰菌在表皮感染中具有较强的致病力。白菌-灰菌的转换受到基因的调控，转换的频率受到温度的影响，高温和低温都影响白-灰菌落的互相转换。22-27：利于白菌细胞灰菌细胞，灰菌细胞 保持稳定灰菌状态27：灰菌细胞则迅速转换为白菌细胞，转换 率达100%。41.研究背景与意义 研究意义 控制白色念珠菌的毒力，而不是完全杀灭白念已经成为一种新的治疗策略。通过实验能够找到调控白-灰转换的基因，可研发作用于靶基因的药物，使药物能暂时抑制白念珠菌侵袭性生长及形态转换，而保留共生的状态。最后，使用该药物即增加治疗白色念珠菌感染的效益，又降低抗菌药物的使用和减少多药耐药菌株出现的威胁。52、国内外研究现状 *国外相关的文献报道对白-灰有调控作用的基因有Efg1、TUP1、WOR1、NRG1、EAP2、CZF2等【2】。*调控的通路有RIM101和cAMP信号通路【3】。*国内仅有1篇文献提出白-灰转换的关键基因是WOR1基因【4】。63、实验设计实验材料：（1）购买已知基因序列的白念珠菌白菌细胞菌株及野生型菌株；（2）质粒DNA，引物和DNA序列测定；（3）白色念珠菌文库；（4）各种酶类、试剂盒和特殊进口试剂；（5）缓冲液及其他溶液；（6）培养液和固体培养基；（7）其他试剂。7abcd.dca.cba3、实验设计.dba.dcbabcd.abcd.敲除a基因敲除b基因敲除c基因敲除d基因不敲除基因实验组对照组.编号1234.83、实验设计在这里输入可长可短标题OT注意事项：1、实验条件：实验组、对照组均在相同的培养基中，25条件下培养，并进行白菌细胞的形态观察；2、实验材料要求购买的白念珠菌为稳定状态的白菌细胞；野生型菌株则为随机菌株；94.1、预期结果实验组白菌细胞灰菌白菌对照组白菌细胞灰菌列出锁定稳定白菌状态的菌株编号和对应的基因，说明敲除该基因可能阻断了白-灰转换，同时说明该基因可能只在灰菌中表达。104.1、预期结果举例：敲除了x基因的白菌细胞不能转换成灰菌细胞，那么我们推论敲除了x基因可能阻断了白-灰转换，同时推测该基因可能只在灰菌中表达。验证实验：检测x基因在野生型菌株中的表达，x基因是否只在灰菌中表达，在白菌中不表达，是否呈“全或无”的双稳态模式？114.2、预期进展*2015年11月2016年2月：继续查阅文献，学习实验方法*2016年3月8月：进行实验*2016年92017年4月：数据整理、分析、撰写论文，课题鉴定、论文答辩125、参考文献【1】现在真菌学【2】Guanghua Huang,Huafeng Wang,song Chou,Xinyi Nie.Bistable expression of EAP2,a master regulator of white-opaque switching in Candida albicans.Proc Natl Acad Sci U.S.A.【3】Benjamin R.Pointer,Michael P.Boyer and Martin Schmidt.Boric acid destabilizes the hyphal cytoskeleton and inhibits invasive growth of Candida albicans.Yeast 2015;32:389-398.【4】高宁，聂鑫怡，陈江野等。白念珠菌Wor1调控网络的鉴定以及在白-灰形态转换中的功能作用。13Thankyou!Thankyou!请各位老师批评指正！14