2021年-2022年山东部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒的遗传进化分析.pdf

第45卷第12 期2023年12 月doi:10.3969/j.issn.1008-0589.2023040092021年2 0 2 2 年山东部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒的中国预防兽医学报Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine遗传进化分析Vol.45,No.12Dec.2023吕硕林，于海丽，王彬，时建皓，单虎，马清霞，张传美，杨海燕*（青岛农业大学动物医学院，山东青岛2 6 6 10 9)摘要：为了解山东部分地区PRRSV的分子流行及遗传进化情况，本研究对2 0 2 1年2 0 2 2 年采自山东部分地区的2 14份疑似PRRSV感染猪的临床样品通过RT-PCR检测，并经PCR扩增PRRSV阳性样品的ORF5基因和Nsp2基因，采用MegAlign和MEGAX软件对这两个基因进行同源性、遗传进化及其编码的关键氨基酸位点突变及分析。结果显示，2 14份临床样品中检出51份PRRSV阳性样品，检出率为2 3.8 3%。表明山东部分地区PRRSV的感染较为严重。经PCR扩增并测序得到2 6 条ORF5基因序列和2 0 条Nsp2基因序列。2 6 条ORF5基因序列之间的同源性为98.7%7 7.8%，与6 株PRRSV参考株（经典株VR2332、Ch-1a、疫苗株JXA1、Q YYZ及流行株NADC30、NA D C34)相应基因序列的同源性在8 0.1%9 8.7%，其中2 10 412 等17 株PRRSVORF5基因序列与NADC30株ORF5基因序列的同源性为8 0.1%9 1.9%；进化树结果显示，2 6 条ORF5基因分布于4个谱系中，分别为Lineagel（2 2 0 40 6 等2 2 株PRRSV ORF5基因）、Lineage3（2 2 0 7 14和2 11111株）、SubLineage8.7(HP-PRRSV-Like)(210806株）、SubLineage5.1(VR2332-Like)（2 10 6 2 9 株）谱系；2 0 条Nsp2基因主要分布于3个谱系中，其中2 2 0 110 等13株PRRSVNsp2基因位于SubLineage1.8（NA D C30-Li k e)谱系，2 10 6 2 9 株位于Lineage5谱系，与VR2332株遗传距离较近；2 2 0 7 14等6 株PRRSVNsp2基因位于Lineage8谱系。上述结果表明，山东部分地区流行的主要为PRRSVNADC30株，属于PRRSV-2，且流行的PRRSV的谱系较复杂，主要以Lineagel、Li n e a g e 8 及SubLineagel.8谱系为主。关键氨基酸位点变异分析结果显示，仅SubLineage1.8谱系中的2 112 2 1和2 2 0 10 9 株GP5氨基酸序列表现为强毒株特征R13及R151；2 10 8 0 6 株与RespPRRSMLV均为A137；除2 10 8 0 6 株在非中和表位(aa180a a 19 7)处的变化较为活跃外，其余GP5氨基酸序列与参考株GP5氨基酸序列的变异特征基本一致；在T细胞表位(aal17a a 131)中，SubLineagel.8谱系中的多数流行株(包括本研究中的2 11110 等12 株)均出现L120S、L12 0 F或I125F、I12 5L变异。2 10 6 2 9 株Nsp2氨基酸序列与以VR2332株为代表的Lineage5谱系的相应氨基酸序列高度一致，仅存在少数氨基酸的变异；2 2 0 114等5株PRRSVNsp2氨基酸序列在aa481、a a 532 a a 56 0 处分别缺失1+2 9 个氨基酸，与SubLineage8.7谱系缺失特征一致，尤其是2 10 8 0 6 株除在aa532aa560缺失2 9 个氨基酸外，在aa476a a 512 还缺失37 个氨基酸；2 2 0 110 等13株PRRSVNsp2氨基酸序列在aa323aa433、a a 48 3和aa504a a 52 2 处分别缺失111+1+19 个氨基酸，与SubLineage1.8谱系缺失特征一致。上述结果表明，各谱系PRRSVGP5氨基酸序列之间存在明显差异，同一谱系PRRSVGP5氨基酸序列与参考株相应氨基酸序列有相似性，但也存在一定差异，其中以SubLineagel.8GP5氨基酸的变异最为活跃。2 0 条Nsp2氨基酸序列与参考株Nsp2氨基酸序列具有一定相似性，但也存在部分的缺失和变异。也表明，目前山东部分地区PRRSV的流行情况较为复杂，仍以NADC30-LikePRRSV为优势流行株，对PRRS的防控形式仍很严峻。本研究为了解山东部分地区PRRSV流行变异情况及PRRS的防控提供参考依据。关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；遗传进化；ORF5基因；Nsp2基因中图分类号：S852.65文献标识码：A文章编号：10 0 8-0 58 9(2 0 2 3)12-12 0 7-0 9*Corresponding author;+Equal contributors收稿日期：2 0 2 3-0 4-13基金项目：跨区域科技合作(对口支援)项目(2 3-1-3-11-zyyd-nsh)十共同第一作者：吕硕林(19 9 8-)，女，山东临沂人，硕士研究生，主要从事预防兽医学研究；于海丽(19 9 7-)，女，山东淄博人，硕士研究生，主要从事临床兽医学研究.*通信作者：E-mail：h y 38 6 12 6.c o m；z h a n g c h u a n me i 10 0 16 3.c o m；ma q i n g x i a 2 0 0 6 16 3.c o m1208中国预防兽医学报2023年Genetic evolution analysis of PRRSV in some areas of ShandongProvince from 2021 to 2022LV Shuo-lint,YU Hai-lit,WANG Bin,SHI Jian-hao,SHAN Hu,MA Qing-xia,ZHANG Chuan-meit,YANG Hai-yan*(College of Veterinary Medicine,Qingdao Agricultural University,Qingdao 266109,China)Abstract:To understand the molecular epidemiology and genetic evolution of PRRSV in some areas of Shandong Province,214 clinical samples suspected to be infected with PRRSV collected there in 2021-2022 were detected by RT-PCR,and the ORF5and Nsp2 genes of PRRSV were amplified in positive samples by PCR.The resulting sequences were analyzed for the homology,genetic evolution and key amino acid site mutation with the MegAlign and MEGA X sofiwares.The results showed that 51 of 214clinical samples were detected as PRRSV positive samples and the positive detection rate was 23.83%.It shows that there isPRRSV infection in some areas of Shandong.Twenty-six ORF5 gene sequences and 20 Nsp2 gene sequences were obtained byPCR amplification and sequencing.The homology is 98.7%-77.8%among the 26 ORF5 gene sequences and it is 80.1%-98.7%comparing with the corresponding gene sequences of six PRRSV reference strains(classic strain VR2332,Ch-la,vaccine strainJXA1,QYYZ and epidemic strains NADC30 and NADC34)among which 17 PRRSV ORF5 gene sequences like 210412 strainshare 80.1%-91.9%of homology with those of NADC30 PRRSV reference strains.The phylogenetic tree analysis showed that 26ORF5 genes were distributed in four lineages,namely Lineagel(22 PRRSV ORF5 genes such as 220406 strain),Lineage3(220714and 21111 strain),Sublineare8.7(HP-PRRSV-Like)(210806 strain)and Sublineare5.1(VR 2332-Like)(210629 strain).TwentyNsp2 genes are mainly distributed in three lineages,among which 13 PRRSV Nsp2 genes,such as 220110 strain,are located inSubLineagel.8(NADC30-Like)pedigree;210629 strain is located in Lineage5 pedigree,which is close to VR2332.Six PRRSVNsp2 genes,such as 220714 strain,are located in Lineage8 pedigree.The above results show that PRRSV NADC30 strain belongsto PRRSV-2,and the pedigree of PRRSV is complex,mainly including Lineagel,Lineage8 and SubLineagel.8.The results ofmutation analysis of key amino acid sites showed that only 211221 and 220109 strains of PRRSV GP5 protein in SubLineage1.8(NADC30-Like)pedigree showed the characteristics of RI3 and RI51;210806 strain is A137 just like RespPRRS MLV;all the aminoacid sequence of GP5 protein is basically the same as that of reference strains in non-neutralizing epitopes(aa180-aa197)except for210806 strain,which is more active.Among the T cell epitopes(aal17-aal31),most of the epidemic strains in SubLineagel.8pedigree(including 12 strains such as 211110 in this study)have L120S,L120F or 125F,I2L mutations.The amino acid sequence ofNsp2 in 210629 strain is highly consistent with the corresponding that of Lineage5 pedigree represented by VR2332,but with a fewamino acid variations.The amino acid sequences of Nsp2 in five PRRSV,such as 220114 strain,were deleted by 1+29 aminoacids at a481,aa532-aa560,respectively,which was consistent with the deletion characteristics of SubLineage8.7(HP-PRRSV-Like).Especially,there were 37 amino acids deletion at aa476-aa512 in strain 210806,as well as 29 amino acids deletion ataa532-aa560.The amino acid sequences of Nsp2 in 13 PRRSV,such as 220110 strain,were deleted by 111+1+19 amino acids ataa323-aa433,aa483 and aa504-aa522,respectively,which was consistent with the deletion characteristics of SubLineagel.8pedigree.The above results showed that there were obvious differences among the amino acid sequences of PRRSV GP5 protein indifferent lineages,and these sequences in the same lineages were similar to those of reference strains,but there were also somedifferences,among which the amino acid mutation of Sublineagel.8 ORF5 was the most active.The amino acid sequences of 20Nsp2 are similar to those of the reference strain,but there are also some deletions and variations.The above results show that theepidemic situation of PRRSV in some areas of Shandong is complicated,and NADC30-Like PRRSV is still the dominant epidemicstrain,and the situation of prevention and control of PRRS is still very severe.This study provides a reference for understandingthe epidemic variation of PRRSV in some areas of Shandong Province and the prevention and control of PRRS.Key words:PRRSV;genetic evolution;ORF5 gene;Nsp2 gene第12 期吕硕林，等.2 0 2 1年2 0 2 2 年山东部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒的遗传进化分析1209猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive andrespiratory syndrome，PRRS)，又称猪蓝耳病，主要引起母猪繁殖障碍、各日龄猪呼吸系统症状的高度接触性传染病。引起该病的病原是PRRS病毒(PRRSV)，为单股正链RNA病毒，属动脉炎病毒科，动脉炎病毒属2,，分为PRRSV-1(Betaarterivirus suid 1)和PRRSV-2(Betaarterivirus suid 2)两种型3。PRRSV全长约15kb，基因组至少包含10 个开放阅读框(ORF)，其中ORF1a和ORFlab编码病毒的非结构蛋白，ORF2a、O RF2 b、O RF3、O RF4、O RF5、O RF5a、O RF6 和ORF7编码病毒的结构蛋白4。编码Nsp2蛋白的基因存在不同程度的插入、缺失和突变，在非结构蛋白编码基因中的变异程度最大，因此常被作为PRRSV的分子遗传标记5。ORF5编码的GP5蛋白是PRRSV变异程度最大的蛋白，含有与病毒中和、病毒保护相关的位点6 ，是亚单位疫苗研制的主要候选蛋白。PRRSV变异速度快，重组频率高，加之输入性病毒的侵入，使得我国对PRRS的防控难度增加。PRRSV分为两种基因型：欧洲型(PRRSV-1)以LV 株为代表，分布在欧洲；美洲型(PRRSV-2)以VR2332株为代表，分布在美洲和亚洲。我国目前流行的PRRSV-2主要分为Lineage5(VR2332-Like)、Li n-eage8(HP-PRRSV-Like)、Li n e a g e 3(Q YYZ-Li k e)和Lineagel(NADC30-Like/NADC34-Like)谱系 7 。19 9 6年我国首次分离到PRRSV，并将其命名为Ch-1a株18 。2005年，我国首次出现了Lineage3 PRRSV(FJ-1、QYYZ、G M 2 株等），这类病毒株主要流行于华南地区并在它们的Nsp2区域存在36 个氨基酸的连续插入9 。2006年，高致病性PRRS(HP-PRRS)暴发，引起猪的高热、高发病和高死亡率，在南方大范围流行，造成重大经济损失，该类病毒株的特点是在Nsp2区域存在30(1+2 9)个氨基酸的不连续缺失10 。2 0 13年，中国出现了NADC30-LikePRRSV，2 0 16 年以来成为我国主流PRRSV，在其Nsp2区域存在131个氨基酸的不连续缺失叫。2 0 17 年，我国辽宁省首次报道出现NADC34-likePRRSV，在其Nsp2区域存在10 0 个氨基酸的的连续缺失12-3。近年来，SubLineage1.8(NADC30-Like)在我国的流行逐渐扩大。除上述谱系外，Lineage5和Lineage3也在我国出现但未形成流行14。PRRSV在我国的流行情况呈现多基因谱系共存的复杂局面。为了解山东部分地区PRRSV的分子流行情况及遗传演化特征，本研究从山东部分地区采集2 14份疑似PRRSV感染猪的病料样品，通过RT-PCR检测PRRSV，并扩增PRRSV阳性病料样品的ORF5和Nsp2基因，分析这两个基因的同源性、遗传进化及关键氨基酸位点的突变，为了解山东部分地区PRRSV的流行变异情况及PRRS的防控提供流行病学参考依据。1材料与方法1.1疾病料样品来源对2 0 2 1年2 0 2 2 年从山东部分地区(烟台、威海、青岛)采集的2 14份疑似PRRSV感染猪的病料样品(肺脏、脾脏、淋巴结、肝脏、肾脏、及脑等)进行PRRSV检测，并对阳性样品中的PRRSV按照送检时间命名。1.2 主要试剂 One Step RT-PCR(Dye Plus)P612试剂盒、DNA/RNA提取试剂盒RM401试剂盒购自诺唯赞生物科技(南京)有限公司；猪繁殖与呼吸综合征弱毒活疫苗(R98株)购自齐鲁动物保健品有限公司。1.3引物的设计与合成参考国标GB/T18090-2008，针对美洲株和欧洲株PRRSV保守的ORF7(N)基因合成检测引物。参考文献15 合成PRRSVORF5和Nsp2基因扩增引物，通过扩增片段的长度区分经典PRRSV、H P-PRRSV 和NADC30-likePRRSV。本实验所用引物均由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。1.4病料样品PRRSV的RT-PCR检测取10 0 mg各病料样品置于EP管中，加入预冷的PBS，经高通量组织研磨器16 0 0 r/min研磨6 min，4、12000r/min离心5min，取上清液并采用DNA/RNA提取试剂盒提取病毒总RNA作为模板，以提取的PRRSV活疫苗R98株总RNA作为阳性对照，以无RNase水做为阴性对照，采用1.3中的检测引物经RT-PCR扩增，并由擎科生物公司测序。1.5PRRSVORF5和Nsp2基因的PCR扩增及测序以PRRSV阳性样品的总RNA作为模板，采用1.3中的PRRSVORF5和Nsp2基因引物分别扩增阳性样品中的这两种基因，并由上海生工生物工程技术服务有限公司测序。1.6PRRSVORF5基因序列的同源性、ORF5及Nsp2基因的遗传进化及关键氨基酸位点的分析采用MegAlign对扩增的PRRSV ORF5和Nsp2基因与Genbank中PRRSV参考株和流行株的相应基因序列1210中国预防兽医学报2023年比对，分析ORF5基因的同源性；采用MEGAX(Neighbor-Joining method，b o o t s t r a p 值为 10 0)构建ORF5和Nsp2基因的遗传进化树(30 条来自于GenBank中登录的国内外PRRSV参考株ORF5基因序列，2 6 条ORF5基因序列为本研究获得；2 8 条来自于GenBank登录的国内外参考株的Nsp2基因序列，2 0 条Nsp2基因序列为本研究获得)；采用MegAlign分析这两个基因编码的关键氨基酸位点的变异，分析山东部分地区PRRSV的遗传变异情况。2结 果2.1病料样品PRRSV的RT-PCR检测年2 0 2 2 年采集的2 14份疑似感染PRRSV的病料样品进行RT-PCR检测，结果显示，2 14份样品中，有51份检测到37 2 bp的目的条带(图1)，与预期一致，阳性检出率为2 3.8 3%，其中烟台PRRSV的阳性率为30.39%(31/102)，威海PRRSV的阳性率为2 1.0 5%(8/38)，青岛PRRSV的阳性率为16.2 2%(12/7 4)。上述结果表明山东部分地区PRRSV的感染较为严重。M1234562000bp1000bp750bp500bp250bp100bpM:DL2000 DNA Marker；1:PRRSV 活疫苗R98株;2：无RNase水；3 6：部分PRRSV阳性样品M:DL2000 DNA Marker;I:PRRSV live vaccine R98 strain;2:RNase-free ddH,O;3-6:Some PRRSV positive samples图1部分病料样品的PRRSV检测结果Fig.1 PRRSV test results of tissue samples2.2PRRSVORF5和Nsp2基因的PCR扩增及测序以阳性样品的总RNA作为模板，利用特异性引物，分别扩增阳性样品中的ORF5和Nsp2基因。结果显示，有2 6 份阳性样品扩增到ORF5基因(6 0 3bp)；2 0份阳性样品扩增到Nsp2基因，部分阳性样品未扩增出目的基因，其中1份阳性样品的Nsp2基因为10 2 1bp(经典PRRSV)，6 份阳性样品的Nsp2基因为9 31bp(HP-PRRSV)，13份阳性样品的Nsp2基因为6 2 8 bp(NADC30-Like PRRSV)(图2)。上述结果表明，山东部分地区流行的PRRSV种类较多。M234M56782000bp1900bp750bp500bp250bp100bplM：D L2 0 0 0 D NA M a r k e r；14：部分阳性样品ORF5基因的PCR扩增；58：部分阳性样品Nsp2基因的PCR扩增M:DL2000 NDA Marker;1-4:PCR amplification of ORF5 gene insome positive samples;5-8:PCR amplification of Nsp2 gene in some图2 PRRSV阳性样品中ORF5和Nsp2基因的PCR扩增结果Fig.2PCR amplification of ORF5 and Nsp2 genesin PRRSV positive samples2.3ORF5基因序列分析对 2 0 2 12.3.1ORF5基因同源性分析C分析结果显示，2 6 条ORF5基因之间的同源性为98.7%7 7.8%，与6 株PRRSV参考株(经典株VR2332、Ch-1a、疫苗株JXA1、Q YYZ及流行株NADC30、NADC34)的同源性为8 0.1%9 8.7%，其中2 10 6 2 9 株与VR2332株同源性最高，为9 8.7%；2 10 8 0 6 和220406株与JXA1株同源性最高，分别为9 7.8%和90.5%；2 11111和2 2 0 7 14株与QYYZ株同源性最高，分别为9 3.4%和8 9.1%；2 10 412 等17 株PRRSVORF5基因与NADC30株的同源性为8 0.1%9 1.9%；2 10 416等4株PRRSVORF5基因与NADC34株的同源性为87.6%9 6.4%。上述结果表明山东部分地区流行的372bpPRRSV主要为PRRSVNADC30。2.3.2ORF5基因的遗传进化分析本研究将56 条ORF5基因序列构建遗传进化树，分析山东部分地区PRRSV的遗传进化关系。结果显示，2 6 条ORF5基因均属于PRRSV-2，分布于4个谱系或亚谱系中，其中220714和2 11111株属于Lineage3谱系；2 10 8 0 6 株属于SubLineage8.7(HP-PRRSV-Like，后同)谱系；2 10 6 2 9株属于SubLineage5.1（VR2 332-Li k e，后同）谱系；220406等2 2 株PRRSVORF5基因属于Lineage1谱系。Lineagel谱系中2 2 株PRRSV的ORF5基因又分别位于不同亚谱系中，2 2 0 50 7 等3株PRRSV的ORF5基因属于SubLineagel.5(NADC34-Like，后同)谱系，其中210416与2 2 0 2 19 株遗传距离较近；2 2 0 9 2 1等17 株PRRSV ORF5基因属于SubLineagel.8(NADC30-Like,后同)谱系；2 11114和2 2 0 40 6 株及其他所测的ORF5基因与PRRSV参考株ORF5基因遗传距离均较远，形成一个独立分支(图3)，上述结果表明，山东部分地区的ORF5基因主要属于PRRSV-2中的SubLineagel.8和positive samplesORF5基因的同源性第12 期吕硕林，等.2 0 2 1年2 0 2 2 年山东部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒的遗传进化分析1211分SubLineage5.1中野毒株与疫苗株的位点7，2 10 8 0 6SubLineagel.5谱系，SubLineage1.5谱系的出现值得警惕。1156982621727359978FJ0908/2018/China/MK2027947599LLNWK130/2017/China/MG9139872111422040646r BJ-4/2000/China/AF33183196AResp PRRSMLV/005/USA/AF066183VR2332/1992/US.A/U8739299287699999051TJ/2006/China/EU860248JXA1/2006/China/EF112445HUN4/2007/China/EF6350063TP/2006/China/EU8642332111112207149942L32450.050：本研究测序的ORF5基因的PRRSV；：疫苗株:The ORF5 gene of PRRSV obtained by sequencingin this study;A:Vaccine strains图3基于ORF5基因构建的PRRSV遗传进化树Fig.3Genetic evolution tree of PRRSV based on ORF5 gene2.3.3ORF5基因编码的GP5蛋白关键氨基酸位点的变异分析GP5蛋白的结构可以分为6 个区域，分别是信号肽区(Signal peptide，a a l a a 2 6)、胞外区(Extravirio，a a 2 7 a a 6 5)、跨膜区 1(Transmemberan l,TM 1，a a 6 6 a a 8 3)、跨膜区2(TM 2，a a 9 5a a 10 4)、跨膜区3(TM 3，a a l 12 a a 12 8)和胞外区(Intravirion,aa129aa200)。采用MegAlign分析结果显示，2 6 株PRRSVGP5蛋白中无氨基酸的插入或缺失，主要表现为氨基酸位点的变异。GP5氨基酸序列的aa13和aa151与PRRSV的毒力相关，强毒株具有R13和R151的特征16 。26株PRRSV仅SubLineage1.8谱系中的2 112 2 1及2 2 0 10 9株GP5氨基酸序列为强毒株特征R3及R151。A 137 是区992106024821082856211221199928NADC30/2008/USA/JN654459WUH5/2015/China/KU523366HENAN-HEB/2012/China/KJ143621HENAN-XINX/2012/China/KF611905HNjz15/2015/China/KT945017CHsx1401/2015/China/KP861625210418211110SDhz1512/2018/China/KX980392SDYG1606/2016/China/KY053458220110220807JL.580/2013/China/KR706343221105HLJZD22-1812/China/2018/MN648450220921MN184C/2001/USA/EF48873921041699?220219220507NADC34/2017/USA/MF32698521062999,CH-1la/1996/China/AY032626ACH-IR/2008/China/EU807840210806JXA1-P80/2008/China/FJ548853GD/2009/China/GU143913HNyc15/2015/China/KT945018SCya17/2017/China/MH324400GM2/2011/China/JN66242499QYYZ/2011/China/JQ308798Lelystad virus/1991/Netherland/M96262JPRRSV-1株与RespPRRSMLV株GP5氨基酸均为A137(图4)，表220224210601210412210421210603211009220109211217明其可能来源于疫苗株的变异。GP5蛋白的胞外结构域含2 个主要独立的抗原表位簇，其中A2/V2L28A29N30为诱骗表位，能够诱导机体迅速产生抗体但无中和作用，另一个是S37H38F39/SubLineagel.8LQL4142Y4N为中和抗原表位(Rimary neutralizingepitope，PNE)，H F%L是中和表位的关键氨基酸，是中和抗体的结合位点18 。在aa27a a 30 处，Sub-Lineage8.7中的2 10 8 0 6 株与参考株JXA1均为V27L28V2N3；Li n e a g e 3中的2 11111株与参考株QYYZ为PRRSV-2一致的 A2L28V29s30；Su b Li n e a g e 1.5中的2 2 0 2 19 株和SubLineagel.5210416株具有一致的N30S变异；SubLineage1.8中的210418株发生L2I、2 112 2 1株和2 2 0 2 2 4株均发生L28P的变异，其余变化均与参考株VR2332一致。在Lineages/SubLineages.1Lineage8/SubLineage8.7Lineage3aa37a a 44处，Lineage3中的2 2 0 7 14株和2 11111株与参考株QYYZ一致，均发生H38Y和L39S的变异；Sub-Lineage1.8中的2 11110 株发生L39S、Su b Li n e a g e 8.7 中的2 10 8 0 6 株发生F39I的变异，该变化与参考株JXA1一致；Lineage1中的2 10 416 株和2 10 6 0 2 株发生L4S的变异。各谱系PRRSV的中和表位相对保守，具有一致的变化特征，其中Y38S是PRRSVQYYZ-Like谱系的独有特征，区别于其他谱系。另外，在非中和表位(aa180a a 19 7)处，除2 10 8 0 6 株GP5氨基酸在该处变化较为活跃外，其余PRRSV与对应谱系参考株GP5蛋白氨基酸序列的变异特征基本一致。在T细胞表位(aal17a a 131)中，SubLineage1.8谱系中的多数流行株(2 11110 株等12 株)出现L120S、L12 0 F或12 5F、I12 5L变异。上述结果表明，GP5蛋白氨基酸序列在PRRSV各谱系之间存在明显差异，同一谱系之间GP5氨基酸序列与2.3.1中的6 株PRRSV参考株GP5氨基酸序列具有相似特点，但也存在一定差异，其中以SubLin-eage1.8谱系GP5氨基酸序列的变异最为活跃。2.4NNsp2基因序列分析2.4.1Nsp2基因的遗传进化分析本实验采用48 条Nsp2基因构建遗传进化树，分析Nsp2基因的遗传进化关系。结果显示，2 0 株PRRSVNsp2基因主要分布于3个谱系中，其中2 2 0 110 等13株PRRSV条Nsp2基因位于SubLineagel.8谱系；2 10 6 2 9 株位于Lineage5谱SPESGSTM 1 aa66-aa83PVLTHIVSYGALTTSHELDIVGLITVSTAGYYHGRYVLSSIYAVCALAALVCEAIRLAKNGMSWRYECIRMQjOrity80PVLIHIVSYGALIISSHELDIVALVTVSGGAGASSG，：工GAIAG.GGG工GAGLAAGGGA工AG工工AGAAG工工A工AVAAYINELLDIKGLYRWRSPVIIEKGGKVDVGGHLIDLKRVYLDGSAAIEVIKISAEOHG151600YTRRLYRR5PVIEKRGGRVEVEGHLIDERVVLDGSVGVGVKIIKIKKKPVVYAPVXXNPNAVPEPSS工SS工SSGXXNXXNVDNXXNVTM 2 aa95-aa10490100SIAGEVHGRYVLSSIYAVCIALAALICFVIRFAKNCAYYYYAAAAYYAYYAYYYYYYKYYYKVYC工YSRYYYYYYYYG工AGGA工AG工AGAGGLG工Intracirion