DB37_T 610-2006 无公害夏玉米生产技术规程(山东省).pdf

TCS65.120 B20 备案号:DB37 山东省也ETJ 方标准DB37/T 574一-2005饲料中地西洋快速筛选通则酶联免疫吸附测定法General Rule ofDiazepan Screening in Feeds-Enzyme Linked Immunosorbent Assay 2005-X x-x X发布2006-03-01实施山东省质量技术监督局发布目IJ1=1 本标准由山东省畜牧办公室、山东省畜牧业标准化技术委员会提山。本标准起草单位:山东省饲料监察所。本标准主要起草人:徐强、李会荣、孟凡胜、李俊玲、刘华阳。DB37/T574-2005 1范围饲料中地西洋快速筛选通则一酶联免疫吸附测定法本标准规定了用酌联免疫吸附法测定饲料中地西洋的方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中地西汗的快速筛选。DB37/T574-2005 本方法的最低定量限为lmg/kg。该方法适合于对试样的筛选，检测结果阳性者，需进步用其他方法确证。2规范性引用文件下列文件巾的条款通过木标准的引用而成为木标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于木标准，然而，鼓励根据木标准达成协议的各方研究是再可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682分析实验室用水规恪和试验方沾3原理利用物理方法将地西洋抗体吸附于固相载体表面，根据抗原抗体的特异性反应，加入标准或试料提取液及酣标地西洋抗原(己生日抗原)与抗体进行特异性的免疫竞争反应。未反应的酌标物在洗涤中被清除，结合的酶标记物I-lJ以由思色物、日示出来。思色的强弱与样品中的地西洋的量成反比。4试剂和材料除非另有说明，本标准所用试剂均由试剂盒厂商提供，水为蒸t田水，符合GB/T6682三级水的规定。不同品牌试剂市试剂组成略有差别。4.1酶标记的地西洋。4.2地西洋阳性、阴性对照晶。4.3底物溶液。4.4甲醇j窑j夜80%。4.5终止液。4.6滤纸。4.7吸水纸。5仪器、设备5.1酶标板48孔或96孔:5.2粉碎机。5.3天平:感量。19o5.4旋涡混合器。5.5离心机:转速3000r/min以上。5.6离心管50mL、1.5mLoDB37/T574一-20055.7单道、多道微量加液器。5.8眼头。5.9酶标仪。6试样的制备取饲料样品1000g，用四分法缩诫分取200gft右，粉碎全部过0.45mm孔径筛，充分1匀，装入磨口瓶中备用。7分析步骤不同品牌的试剂盒其测定步骤略有差别，使用不同品牌试剂盒时，试样的提取方法和测试程序可根据试剂盒说明书略作调整。7.1试样的提取称取试料5g(精确至O.Olg)于.50mL离心管中，加入10mL甲醇溶液，于揽涡混合器上涡旋3min，3000r/min离心5mi口。移取适量上清液，用磷酸盐缓冲液稀秤，使稀释后的样液处于检测范国内(不超出标准曲线)。7.2测试程序7.2.1.守所用酶标板及所古试剂从冰箱中取山，使试剂盒泪度升至20240C。注意每种试剂使用前均需摇匀。7.2.2将足够标准和试料所需数量的酶标板孔条插入微孔架，每个试样和标准需做2孔。7.2.3移取10L制备好的试样溶液和标准浴液于各白的微孔中，再加入100L酶结合物到每个微孔中，Jf轻轻震荡使其充分混匀。避光处室温孵育60min后，用双茶水300L重复洗板6次，最后于吸水纸七拍干酶标扳。7.2.4每孔加入100L底物溶液，并轻轻震荡使其充分泪匀，在避光处室温孵育30mi丑。7.2.5每孔加入终止液100L，轻轻震荡泪匀。微孔内液体的颜色由监色变为黄色。7.2.6 用日测法对样品孔的颜色和限量孔进行比较或用酌标仪进行测定。用酌析、仪，在450nm条件下测定标准孔及试料孔吸光度值A，女板过程应在加入终止液后30mi丑内完成。以军标准吸光度值A。为100%计算，折算出各标准和试样的相对吸光度值。以吸光度百分比为纵坐标，对应的各标准溶液浓度为横坐标，在半对数坐标上绘制标准曲线。根据试样吸光度，查标准向线得到地西洋的含量(ml)。7.3结果要IJ定7.3.1目泪1法:如果试杆孔颜色与阴性对照孔接近或更深，则判定该样品不含地西洋:如果试杆孔比|归性对照孔浅，比限量孔深，则判定该样品含有地西汗，1B浓度低于限量:如果试样孔和阳性对照相同，则判定该样品含有地西洋，且浓度等于限量:如果试样孔比阳性对HF、浅，则判定该样品含有地西洋且浓度高于限量。7.3.2酶标仪法:测定结果低于限量孔，地四汗含量合格:测定结果等于旦旦大于限量孔，地lill拌含量超标，不合格。8结果计算与表述8.1计算公式试样中地川$半的含量(X)以g/kg表示，按公式(1)计算x=旦!.xDm、，/11/，.、.2 DB37/T574-2005 式中:ml一一从标准曲线上查得的试料提取液中的地四汗的质量，单位为纳克，吨;m 试样质量，单位为克g;D一一稀释倍数。8.2以两次平行测定的算术平均值为测定结果，计算结果保留三位有效数宁。9精密度9.1重复性在同一实验室，两次独立测定结果的相对偏差不大于20%。9.2再现性在不同实验室，两次独立测定结果的相对偏差不大于40%。3