DB13_T 492-2004 猪免疫技术规程(河北省).pdf

841 DB13 河北省地方标准DB13厅492-2004猪免疫技术规程2004-03-10发布2004-03-10实施河北省质量技术监督局发布目IJ1=1 本标准的附录A、附录B为规植性附录.本括准由向北省畜牧局提出.本标准起草单位:柯北省畜牧曾医站.OB13厅492-24本标准主要起草人z翔文桂、李凯怡、自玉坤、王玉楠、路广计、李志民、陶茂晖、王据来、李鹏.DB13厅492-2004措兔疫技术规程1 范围本挥准规定了措主要侍蝇肃的兔症程序、免疫操作方桂、免班操作要求和免班敢果监制.本标准适用于向北省境内各提鼻措蝠对生辑的兔瘟.2 术语和定血下列术语和直义适用于本标准.2.1 擅苗Vaccine由特定细菌、病毒、立克拉民体、螺旋体、主原体等病原锚生物且且寄生血制成的，幢剌撞机体产生相应抗病能力的制品.2.2 免擅接种Vaccinating将班苗注入动物体内(肌肉、皮下、粘踵值动物时相应擅病产生特异性抵抗能力的方桂.2.3 免擅抗恤监剖Antibodymonitoring 动物进行免疫接种后，在一定时期内，通过血靖宇或其他方挂，时动物的免疫接种敢果进行定性或定量测量.3 克堕程序3.1 仔措仔措兔撞撞下列程序进行za)达到15日龄时，在射措喘气病灭捂苗弱毒苗);b)达到20日龄时，在射猪瘟弱毒细胞苗Ec)达到30日曲时，在射仔蜡副面毒面毒苗和措喘气病灭措苗弱毒苗);d)达到45日龄时，在射口蹄疫灭活苗E呻站到60日i惜时，在射宿瘟、精丹毒、精肺在三联苗-3.2 后岳母睛后岳母猪挂下列程序进行t呻配种前1.5个月，注射蜻乙型脑壳弱毒苗Eb)配种前1个月，注射精细小病毒弱毒瘟苗:c)达到7月龄时，住射口蹄擅灭措苗:d)达到5月曲至7月曲时，桂射精瘟、精丹毒、措肺班三联苗-3.3 后告公措后备公辑撞下到j程序进行z时达到5月龄至配种前半个月，在射措细小病毒弱毒疫苗和宿乙型脑虫弱毒苗Eb)达到5月龄至7月曲，在射措瘟、精丹毒、宿肺蓝三联苗圃3.4 可曹母措可茸母猪挂下列程序进行t呻每年5月份和10月份，各注射-(X宿瘟、精丹毒、宿肺擅三联苗tDB13厅492-2004b)每年4月曲和10月份，再注射-(X宿喘气病灭括苗(弱毒苗);呻每年5月份和10月份，轩拄射一次口蹄擅灭活苗:d)每年11月份ut12月份，注射措传染性胃肠炎疫苗t呻E种前1个月，注射蜡乙型脑壳弱毒苗:。产前40天，注射精thH犬病灭话苗:d)产前40天和15天，各住射一枕仔蜻大肠杆曲三价灭活苗(睛毒苗)i副产前30天和15天，红荆班同可繁母描各庄射一扭;仔桔红荆班苗，3.5 种公措种公辑可挂下列程序进行:呻每年5月份和10月份，各位射一(7(宿瘟、精丹毒、精肺在三联苗:b)每年4月份和10月份，各注射-X措喘气病灭括苗弱毒苗)罪1吉伪狂犬病灭活苗:c)每年5月份和10月份，冉注射一改口肺班灭活面:均每年11月份或12月份，住射措传染性胃肠炎班苗，3.6 商晶措商品精可挂下列耻厅:UHT:呻达到15日龄肘，注射辅喘气病灭插苗(弱毒苗);b)达到20日龄时，挂靠I措瘟弱毒细胞苗;c)达到30日龄时，注射辅喘气病灭插曲(Wili苗):d)达到3S日龄时，注射仔描画IJ伤寒弱毒苗;呻达到日曲时，注射口肺症灭活苗:f)达到60日酷时，注射蜡瘟、精丹毒、猪肺班三联苗圃4 兔擅操作育活4.1 保定时辑进行确实保定-4.2 击直注射部位颈部耳后2cmJcm处或臀部肌肉丰富部位-4.3 遣射部位消毒先用渭水将垃射部位擦洗，把而物搪洗掉.再用5%的腆町币175%的锢精，对在射部位由内及外划圆消毒团4.4瘟苗的精辑对需要稀辑的班甜，先将在茵的瓶口用75%的洒精捎毒，再按照使用说明书要求的配比用棉释擅!iIt生理盐水进行稀轩a4.5 兔植撞种用精毒好的住射器或ii撞注射器将配备好的疫苗，按照在苗使用说明书要求的剂量在入精体适直部位.5 兔在操作要求5.1 蜻在髓康的情况下才能免擅回5.2 在桂射弱毒病毒班苗时，不得使用抗病毒费茹物:在住射弱毒菌苗时，不得使用抗菌章提药物-5.3 免疫前，对免植拄射部位日消n栖精和l腆阳进行捎莓，5.4 同一批忱的精要同时进行免在，2 6 免在世果监罩IJ6.1 监泪l时间免班后15d.30d进行-6.2*比例种公猎100%.母精50%.仔猎5%.商品精5%.6.3 待幢样晶制备果血5毫升，分离血精岳植-6.4 幢测方活6.4.1 措瘟DB13厅492-2004正向间接血黯试验瞌单抗菌联免在咀附试验(ELISA).单抗ELISA试验方法撞附录A的规定进行.6.4.2 口蹄正向间接血凝试验，试瞌方法挂附录B的规定进行.3 DB13月92-2004附录A规范性附录)措瘟单克隆抗体ELISA试验方法A.l 方法提要本方法主要用于检测猪瘟兔班是杏合棉，是否为猪瘟强毒感染，以便制定正确的免疫程序，保障猪群免遭猪瘟强毒的感染。所RJ抗原包括猎也弱哗啦抗纯化酶联抗原和I措血强海单抗纯化酶联抗原，分别供检测经猪瘟弱毒疫苗免疫后产生的抗体手n感染猜瘟强在后产生的抗体之HJ.如果在精瘟弱毒酶联极上光毡t皮(00)火于琪等T-0.2且在强毒酶联桓上光密度(OD)小于0.5，说明指只经弱毒疫苗免疫放果好且无精瘟强毒感到.A.2试制a)碳酸铀、碳匮氧铀、氧化t由、捋陋二氢何、磷匮氢;铀(无7.10，磷醋氢二铀(12H20)、氧化何、样檀酸、邻苯二服(分析纯);b)吐温-20、98%浓硫陋、30%月1氧水(分析纯)，茶馆水(观蒸)，小牛血捕-A.3 设备和仪器a)酶标仪，492nm谊民施光n:b)困相96孔平底聚苯乙烯专用敏:c)恒温培养箱:d)震葫器:e)移植器z。天平感量O.OOlg);目1000mL非最瓶若二F;h)1.由nL.S.OmL、lO.OmL移植管若干:i)1mL、250mL峙口惟形瓶若干EA.4步骤A.4.1 试渣的配制A.4.1.1 包植擅称取碳醋铀1.S9g和酣醋氢铀2.93g放入1000mL轩lit瓶中，加燕惘*完全陪解后定容，加入适量3M氢氧化铀前植调PH为9.6.A.4.1.2 洗涤渣a)称取氧化铀B.Og、磷陋L氢饵O.2g、磷陋氢二铀(无水)2.13g、氧化怦O.2g脏入lOOOmL容量题中，加藕锢水完全溶解后定秤，加入适量3M氢氧化饷榕液调PH为7.4.b)量取上述榕液1000mL放入lOOOmL烧杯中，加入吐祖-200.5mL.搅拌均匀A.4.1.3 稀辑渣量取洗糠液lOOmL班人250mL班r.:.1锥形瓶巾，川人小牛血捎5mL.充分擂匀，A.4.1.4 底物渣a)称取拧攘酣21.Og放入lOOOmL非最瓶中，)Jn嚣惘;.完全榕fW(，而定秤，tllJ 1晶O.1M忡橡醋带植.4 DB13月492-一2004b)称取磷酸氢二铀(I2H20)7L6g放入1000mL容量瓶中，加蒸锢水完全禧解后定容，即成O.2M磷醋氢二铀榕液.c)量取o.1M拧撵陋禧液24.3mL和O.2M磷醒氢二铀精液25.7mL植入100mL磨口锥形瓶中，摇匀.d)取上述混合液20mL肢入100mL磨口锥形瓶中，加入邻苯二脏20mg摇匀，临用前加30%现氧7SL.A.4_ 1.5 终止擅量取500mL蒸锢水放入lOOOmL烧杯中，缰慢加入76mL浓硫酸，搅拌均匀-A.4.2 包被液将猪瘟弱毒单抗纯化酶联抗原、猪瘟强毒单抗纯化酶联抗原各作100倍稀释，以1，分别加入做好标记的酶联板孔中，置湿盒于4C过夜-A.4.3 去孔内液体.用洗涤液冲洗握3次，每次向隔Jmin-Smin.拍干-A.4.4 用稀释擅将持检血清作400倍稀释，每孔加l00丘.同时，将猪瘟阳性、阴性血清以100倍稀释作对照，37C培育l.Sh-2h.A.4.5 重复A.4.3.A.4.6 用稀轩液将兔抗猪JgG辣椒过氧化物酶结合物作100倍稀释，每孔加入100阵.37C培育1.Sh-2ho A.4.7 重复A.4.3oA.4.8 每孔加入底物液100.室温下观察显色反应(当阴性对照孔略微显色，立即终止反应，并以阴性孔作空自调军).A.4.9 每孔加入终止液SO阵，于酶标仪上测定490nm波长的光密度(00).A.5 判定标准在猪瘟弱毒酶联板上Ea)OO0.2.为猪瘟弱毒抗体阳性:b)OD0.2，为猪瘟弱毒抗体阴性.在猪血强毒酶联艇上za)ODO.s.为猪瘟强毒抗体阳性zb)000.5，为猪瘟强毒抗体阴性.5 OB13厅492-2004附录B规范性附景E向间接血踵试验方法8.1 方法提要本方法主要用于检测口肺症免疫娃价，以便制定正确的免疫程序，保障精群兔遭口蹄疫强毒的感染，接种口蹄疫疫苗的猪群兔班抗体强价达到1:128为免疫合格固8.2试IIJ稀释液、口蹄疫d二向血凝抗l屈、口蹄疫阴性此1照JITL清、口蹄班对照阳性血捕。B.3 设备和民器吗V型血凝桓:时移植器:c)橄量震蝠器:d)恒温培养箱，B.4 操作步啤B.4.1 加雷帽擅在血撞艇上L排6排的1孔-9孔T第7排的1孔-4孔和l第6孔:第8排的1孔.12孔各加辑释檀50ulo B.4.2 精悍骨幢血清取1号持植血情50L加入第1排第1孔，井将盟咀插入孔盹，右手姆指轻压弹簧l次-27*泪句避免产生过多的气泡)，从国孔耻lU50l1L替人第2孔，h!匀后取出50JJ.l移入第3孔.直至第9孔捆匀后取出50L丢弃.此时第l排1孔-9孔恃检血情的稀释度(稀释倍数)依次为1:2(1)1:4(2)1:8(3)1:16(4):32(5)1:64(6)1:128(7)1:256(8)1:52(9)目取2号持植血情如入第2排，取3号特拉血精加入第3排.均按上述万法稀释，注意每取一份血捕时.!IZ，.Di换盟咀一个E8.4.3 辑辑阴性对照血清在血凝植上的第7排第l孔加阴性血情50阵，对倍稀释至第4孔，泪句后从该孔取出50J1L丢弃0此时阴性血清稀抨倍数依次为1:2(1)1:4(2):8(3)1:16(4)回第6孔为稀辑檀对厢，B.4.4 幅辑阳性对照血清在血凝板上的第8罚I:m1孔加阳性血捕50L.时借辅料至第12孔，泪匀后从该孔取出50L丢弃.此时阳性血情稀释倍数依次为1:2(1)1:4(2)1:8(3)1:16(4)1:32(5):64(的1:128(7)1:256(8)1:512(9)0 8.4.5 加正向血植抗原槛栓血清各孔、阴性对朋血清各孔、阳性对l照血情各孔、稀释液对照冉孔均再加正向血酶诊断擅充分掘句，瓶底应无血球抚淀)25L.8.4.8 掘黯fl句将血踊板置于融量握葫器上握蔼1min-2min，如无振渴器，用手轻轻摇匀，然后将血凝板撞在自跟上观察各孔虹血球是否由匀，不出现血璋凯旋为合格.盖上班恒，室温(-且37C下静置1.5h-6 DB13厅492-20042h判定结果-B.5 判定标准移去玻植，将血凝极撞在白纸上，先观察阴性对照血清1:16孔，稀释液对照孔，均应无鞭集(血球全部沉入孔底形成边缘整齐的小圆点)，或侃出现+凝集(血球大部沉于孔底，边缘稍有少量血球悬浮).阳性对照血清孔1:2-1:256各孔应出现村叶忡+凝集为合格I(少量血球沉入孔底，大部血球悬浮于孔内)0在对照孔合格的前提下，再观察待植血请各孔，以呈现+凝集的最大稀释倍数为该份血糟的抗体效价.例如1号待植血清1孔-5孔呈现村H忡忡凝集，6-7孔呈现+摄集，第8孔呈现+黯集，第9孔无凝集，那么就可判定该份血捕的抗体效价为1:128.接种口蹄疫疫苗的猪群免疫抗体效价达到1:128(即第7孔呈现+凝集为免疫合格.注11JJ表示完全不凝集或010%血球凝集.+表示10%2S%血球凝集.r+表示50%血球凝集.+忡表示75%血球凝集.忡忡表示90%.100%血球凝集.7