T∕GZCX 019-2022 刺梨及其制品中多糖含量的测定.pdf

T/GZCX 019-2022ICS 67.080.10X 04T/GZCX团体标准团体标准T/GZCX 019-2022刺梨及其制品中多糖含量的测定刺梨及其制品中多糖含量的测定2022-11-22 发布2022-12-01 实施贵 州 省 刺 梨 行 业 协 会发 布T/GZCX 019-2022第 1 页 共 8 页前言本标准按照 GB/T 1.1-2020 标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则给出的规则起草。本标准由国药集团贵州大健康产业发展有限公司提出。本标准由贵州省刺梨行业协会归口。本标准起草单位：国药集团贵州大健康产业发展有限公司、国药集团同济堂（贵州）制药有限公司、贵州初好农业科技开发有限公司、贵州金维宝生物技术有限公司、贵州天赐贵宝食品有限公司、贵州明安实业有限公司、中志浩刺梨产业开发(贵州)有限公司。本标准主要起草人：漆正方、孙宜春、钱品、陈杉、闫福泉、朱荣金、蔡志林、王鹏娇、刘正芬。本标准为首次发布。T/GZCX 019-2022第 2 页 共 8 页刺梨及其制品中多糖含量的测定A1范围本标准规定了刺梨及其制品中多糖含量测定的紫外分光光度法。本标准适用于刺梨鲜果、刺梨干果、刺梨果脯、刺梨冻干粉、刺梨喷干粉、刺梨原汁、刺梨浓缩汁等刺梨及其制品中多糖含量的测定。本标准方法的检出限：5.0 mg/100g；定量限：8.9 mg/100g。2规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1刺梨鲜果新鲜、未经过加工的刺梨成熟果实。3.2刺梨干果以刺梨果实为原料，经脱水，未经糖渍，添加或不添加食品添加剂制成的刺梨制品。3.3刺梨果脯T/GZCX 019-2022第 3 页 共 8 页以刺梨果实、白砂糖或其他甜味剂为主要原料，添加或不添加食品添加剂，经预处理、糖渍、干燥或不干燥等工艺制成的刺梨制品。3.4刺梨冻干粉通过真空冷冻干燥方法制成的刺梨粉末制品。3.5刺梨喷干粉以刺梨果实、刺梨原汁或刺梨浓缩汁，经喷雾干燥制成的刺梨粉末制品。3.6刺梨原汁以刺梨果实为原料，经清洗、物理破碎、机械压榨、过滤或不过滤、灭菌后取得的清汁或浊汁制品。3.7刺梨浓缩汁以刺梨果实为原料，经清洗、物理破碎、机械压榨等工艺后，再经浓缩工艺除去一定水分后制得的制品。4方法原理多糖在浓硫酸的作用下，水解成单糖并迅速脱水生成糖醛衍生物，糖醛酸衍生物与苯酚反应生成橙黄色溶液，在 490 nm 处有特征吸收。5试剂和材料5.1试剂除另有规定外，仅使用分析纯试剂和 GB/T 6682 规定的一级水。T/GZCX 019-2022第 4 页 共 8 页5.1.1葡萄糖（C6H12O6，CAS 号：50-99-7）标准品，纯度 98.0%。使用前应于 105 恒温干燥至恒重。5.1.2硫酸（H2O4S），=1.84 g/mL。5.1.3无水乙醇（C2H6O）。5.1.4苯酚（C6H6O），重蒸馏。5.2试剂配制5.2.1葡萄糖对照品溶液（100 mg/L）：称取 0.1 g（精确至 0.001g）葡萄糖标准品，置 100 mL 烧杯中，加少量水溶解，转至 1000 mL棕色容量瓶中，加上定容至刻度，摇匀，置 4 冰箱中避光保存。5.2.280%乙醇溶液：量取无水乙醇 80 mL，置 100 mL 容量瓶中，加水定容至刻度。5.2.380%苯酚溶液：称取苯酚 80 g（精确至 0.01 g），置 100 mL烧杯中，加水少量溶解，转移至 100 mL 棕色容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，置 4 冰箱中避光保存。5.2.45%苯酚溶液：量取 5 mL80%苯酚溶液（5.2.3），溶于 75 mL水中，混匀，现配现用。6仪器和设备6.1紫外分光光度计。6.2高速破壁机。6.3分析天平，感量为 0.0001 g。T/GZCX 019-2022第 5 页 共 8 页6.4超声波提取器。6.5涡旋振荡器。6.6离心机，4000 r/min。6.7组织捣碎机。7分析步骤7.1试样制备将刺梨鲜果（3.1）刺梨鲜果去皮、去籽，组织捣碎机打浆，混合均匀，备用；去除刺梨果干（3.2）和刺梨果脯（3.3）中可见杂质，用高速破壁机粉碎，将其制成粉状，备用；刺梨冻干粉（3.4）和刺梨喷干粉（3.5）研磨均匀备用。7.2试样提取7.2.1固态试样：取 7.1 样品 0.2 2 g，精密称定（精确到 0.0001 g），置 50mL 具塞离心管内，用 5 mL 水浸润样品，缓慢加入无水乙醇 20 mL，同时用涡旋振荡器振摇，使混合均匀，置超声波提取器中超声提取30 分钟。提取结束后，离心 10 分钟，弃去上清液。沉淀用 80%乙醇溶液 10 mL 洗涤后离心 5 分钟，弃去洗涤液，用水将上述沉淀物转移入圆底烧瓶。加水 50 mL，置超声波提取器中超声处理 30 分钟，滤过，收集滤液；沉淀物再加水超声、滤过，重复 2 次。残渣洗涤23 次，洗涤液合并滤液转至 200 mL 容量瓶中，加水定容至刻度。此溶液为样品测定液（如颜色过深，可通过 C18 SPE 小柱等进行脱色处理）。T/GZCX 019-2022第 6 页 共 8 页如样品多糖含量较高，可适当稀释后再进行分析测定。7.2.2液态试样：刺梨原汁（3.6）、刺梨浓缩汁（3.7）等液体样品，精密量取样品 510 mL，置 50 mL 具塞离心管内，其余操作同 7.2.1。7.3标准工作曲线准确量取葡萄糖对照品溶液（5.2.1）0.0 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL 分别置于 20 mL 具塞试管中，用水补至 1.0mL。加入 5%苯酚溶液 1.0 mL（5.2.4），然后快速加入硫酸 5.0 mL（5.1.2）（与液面垂直加入，勿接触试管壁，以便与反应液充分混合，静置 10 分钟。使用旋涡振荡器使反应液充分混合，将试管放置于 30 水浴中反应 20 分钟，在 490 nm 处测定吸光度。以葡萄糖质量浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。7.4空白试验与试样的测定平行进行，取相同量的所有试剂，采用相同的分析步骤，但不添加试样。7.5试样的测定准确量取试样提取液（7.2)适量，置于 20 mL 具塞试管中，加入 5%苯酚溶液 1.0 mL（5.2.4），然后快速加入硫酸 5.0 mL（5.1.2）（与液面垂直加入，勿接触试管壁，以便与反应液充分混合，静置10 分钟。使用旋涡振荡器使反应液充分混合，将试管放置于 30 水浴中反应 20 分钟，在 490 nm 处测定吸光度。若样品多糖含量较高（吸光度不在 0.10.8 之间），可适当稀T/GZCX 019-2022第 7 页 共 8 页释后再进行分析测定。8分析结果的表述8.1刺梨鲜果、刺梨干果等固态试样样品中多糖含量以质量分数 x 计，单位以克每百克（g/100g）表示，按式（1）计算：x=m1V1m2V20.9 10-4（1）式中：m1从标准曲线上查得样品测定液中含糖量，单位为微克（g）；V1样品定容体积，单位为毫升（mL）；V2比色测定时所移取样品测定液的体积，单位为毫升（mL）；m2样品质量，单位为克（g）；0.9葡萄糖换算成葡聚糖的校正系数。计算结果保留至小数点后两位。8.2刺梨原汁、刺梨浓缩汁等液态试样样品中多糖含量以质量分数 x 计，单位以克每百毫升（g/100mL）表示，按式（2）计算：x=m1V1VV20.9 10-4（2）式中：m1从标准曲线上查得样品测定液中含糖量，单位为微克（g）；T/GZCX 019-2022第 8 页 共 8 页V1样品定容体积，单位为毫升（mL）；V2比色测定时所移取样品测定液的体积，单位为毫升（mL）；V样品体积，单位为毫升（mL）；0.9葡萄糖换算成葡聚糖的校正系数。计算结果保留至小数点后两位。9精密度在重复条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的 10%。_