基于UPLC-Q-TOF-MS技术分析西藏凹乳芹的化学成分及定量分析研究.pdf

中 国 食 物 与 营 养第 卷中国食物与营养():基金项目:中央引导地方项目“西藏园艺新品种及配套高产绿色技术示范推广”(项目编号:)作者简介:欧 珠()男 助理研究员 研究方向:药用植物栽培通信作者:白玛玉珍()女 研究员 研究方向:药用植物栽培基于 技术分析西藏凹乳芹的化学成分及定量分析研究欧 珠 白玛玉珍 杨 斌 土旦吉热 卢伟龙 李淑萍(西藏自治区农牧科学院蔬菜研究所 拉萨)摘 要:目的:采用超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱()技术 对凹乳芹中的主要酚类成分进行分析鉴定 并建立高效液相色谱()定量分析方法 方法:采用 以 甲酸水()乙睛()为流动相进行色谱分离 流速 /检测波长为 负离子模式下扫描采集数据 快速识别和鉴定凹乳芹中的化学成分 根据鉴定的结果建立 定量分析方法以用于凹乳芹的质量评价 结果:从凹乳芹中鉴定出 个化学成分 并建立了新绿原酸、绿原酸、阿魏酸和异绿原酸 的定量分析方法 结论:该方法为凹乳芹的化学成分质谱裂解规律和质量评价提供了科学依据关键词:西藏凹乳芹 超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱 多酚 定量分析西藏凹乳芹()为伞形科凹乳芹属植物凹乳芹的根 主要分布于拉萨、昌都、日喀则、山南和察隅等地 在四川和云南的西北部等地区也有分布 西藏凹乳芹性温 味辛、甘、微苦 为藏药五大根药之一 其根被用做炖汤调料 叶片则被做藏芹菜制成美味佳肴 研究表明 西藏凹乳芹根含有阿魏酸、川陈皮素、异甘草素和多糖等活性成分 用于治疗月经不调、痛经、消化不良和贫血等 本研究采用 技术 对西藏凹乳芹的成分进行分析并建立主要化学成分的高效液相色谱定量分析方法 为西藏凹乳芹的开发利用提供科学依据 仪器与试剂 美国 公司 超高液相色谱 美国安捷伦公司 中药粉碎机永康市久品工贸有限公司 高速冷冻离心机 德国 公司 型高速万能粉碎机北京科伟永兴仪器有限公司 型数控超声波清洗器 昆山禾创超声仪器有限公司 电子天平 上海舜宇恒平科学仪器有限公司 优普系列超纯水仪 四川优普超纯科技有限公司凹乳芹(采收时间 年)新绿原酸、绿原酸、阿魏酸、异绿原酸 (上海源叶生物科技有限公司 纯度)甲醇(分析纯)成都市科龙化工试剂厂乙腈、甲醇(色谱纯)美国 公司 方法 供试品溶液的制备凹乳芹烘干打粉 过 目 称取 加入 甲醇 超声 /离心 收集上清液 残渣重复提取 次 合并定容至 滤膜过滤备用 新绿原酸、绿原酸、阿魏酸、异绿原酸 对照品 用甲醇溶解定容至 以二倍稀释法制备不同浓度的对照品溶液 冷藏备用 分析条件色谱条件:()色谱柱 检测波长:柱温:流速:/进样量:流动相:甲酸水溶液()、乙腈()洗脱条件:质谱条件:负离子模式采集数据 电压是 脱溶剂气流速/锥孔气流速/离子源温度 离子源脱溶剂气温度 样品锥孔电压 离子源缺省电压 分子量范围:/第 期欧珠等:基于 技术分析西藏凹乳芹的化学成分及定量分析研究 超高液相色谱定量分析条件色谱条件:采用梯度洗脱 柱()检测波长:柱温:流速:/进样量:流动相:甲酸水溶液()、乙腈()洗脱条件:(图、图)经 分析后 根据供试品各化合物峰面积及标准曲线(表)按式()计算含量()式()中 含 量(/)、样 品 浓 度(/)、稀释倍数、样品体积()、样品质量()表 新绿原酸、绿原酸、阿魏酸和异绿原酸 的回归方程及线性范围功能成分标准曲线线性范围新绿原酸 /绿原酸 /阿魏酸 /异绿原酸 /图 对照品 色谱图 新绿原酸 绿原酸 阿魏酸 异绿原酸 图 样品 色谱图 结果与分析 酚酸类化合物的 分析通过化合物的一级、二级质谱及裂解规律并结合对照品比对、相关文献检索进行综合分析 实现目标化合物的鉴定和确证 凹乳芹甲醇提取物负模式的质谱基峰离子流图见图 通过 从凹乳芹的质谱总离子流图中鉴定出 个酚酸类化合物 分别是咖啡酰奎尼酸、咖啡酰葡萄糖、阿魏酰奎尼酸、二咖啡酰奎尼酸和阿魏酸二聚体等 其中 个化合物通过与对照品进行明确识别 鉴定的各化学成分的保留时间、质谱信息见表 在负离子模式下 共鉴定出 个酚酸和酚酸糖苷类化合物 化合物(保留时间 )和(保 留 时 间 )的 准 分 子 离 子 峰 为/根据相关文献 结合二级质谱裂解规律推测为奎尼酸和柠檬酸 化合物 (保留时间 )的准分子离子峰为/二级质谱产生的碎片/是脱去 所得 确定为咖啡酸 化合物、的保留时间分别是、为同分异构体 准分子离子峰为/共同碎片离子由失去咖啡酰基得/奎尼酸 为咖啡酰奎尼酸类化合物 通过与对照品比对 化合物 和 分别确定为 咖啡酰奎尼酸(新绿原酸)和 咖啡酰奎尼酸(绿原酸)结合文献数据 推测化合物 为 咖啡酰奎尼酸(隐绿原酸)化合物、的保留时间分别是、准分子离子峰为/也为同分异构体 二级质谱的碎片离子/咖啡酸和/咖啡酸为失去分子葡萄糖和 所得 推测为咖啡酰葡萄糖苷类化合物 化合物(保留时间)的准分子离子峰为/碎片离子/咖啡酰奎尼酸、/咖啡酸和/奎尼酸提示该化合物为二咖啡酰奎尼酸 通过与对照品比对 化合物 确定为 二咖啡酰奎尼酸(异绿原酸)根据分子式和二级质谱裂解规律可以推断化合物 和 也是二咖啡酰奎尼酸 参考相关文献和色谱保留时间 化合物 和 推测为 二咖啡酰奎尼酸(异绿原酸)和 二咖啡酰奎尼酸(异绿原酸)化合物(保留时间 )的准分子离子峰为/失去甲基和 得到碎片离子/和/通过与对照品比对 化合物 确定为阿魏酸 化合物 的保留时间为 准分子离子峰为/中 国 食 物 与 营 养第 卷 二级质谱中基准峰为/阿魏酸 阿魏酸失去 分子水和 得碎片离子/阿魏酸 与文献报道一致 被鉴定为阿魏酰奎尼酸 化合物 和 的保留时间分别是 和 与化合物 为同分异构体 鉴于阿魏酰奎尼酸和阿魏酰奎尼酸二级质谱中基准峰分别为/和/化合物 和 被鉴定为为阿魏酰奎尼酸和阿魏酰奎尼酸化合物(保留时间 )和(保留时间 )的准分子离子峰分别为/和 分子式为 失去分子葡萄糖得碎片离子/碎片离子/阿魏酸、/阿魏酸和/阿魏酸提示该化合物含有阿魏酰基团 根据相关文献 推测化合物 和 为阿魏酸二聚体葡萄糖苷 化合物 (保留时间 )的准分子离子峰为/二级质谱产生碎片离子/、/阿魏酸、/阿魏酸和/阿魏酸 结合参考文献 推测化合物 为阿魏酸三聚体图 凹乳芹负模式离子流 超高液相色谱定量分析与讨论新绿原酸、绿原酸、阿魏酸和异绿原酸 是凹乳芹的主要成分 其中绿原酸类化合物是凹乳芹重要的生理活性成分 绿原酸是植物细胞通过莽草酸途径合成的一种苯丙素类物质 这类化合物广泛存在于金银花、杜仲等植物 具有抗氧化、抗病毒、抗肿瘤和降血脂等多方面的药理作用 由表 可知 种活性成分中绿原酸的含量远高于其他 种活性成分含量 这一点在所有能够检测到的样品中均能够得到体现 新绿原酸和异绿原酸 的含量次之 而阿魏酸含量最低 个样品中有 个样品检测到新绿原酸 个样品检测到绿原酸 个样品检测到阿魏酸 个样品检测到异绿原酸 其中新绿原酸含量在 /之间平均含量为 /绿原酸含量在 /之间 平均含量为 /阿魏酸含量在 /之间 平均含量为 /异绿原酸 含量在 /之间 平均含量为 /结合 个样品来看 来自于丁青的样品新绿原酸、绿原酸、阿魏酸、异绿原酸 含量均为最高 品质最优 在 和 样品中均未检测到 种活性成分 品质相对较差 此外 由 和 组样品的含量可以看出 来自于内地和藏区的不同品种生长在同一地区其功能成分含量也不尽相同 来自于内地的品种仅检测到阿魏酸 且其含量明显低于藏区品种而来自于藏区品种仅有异绿原酸 未检出 其他 种功能成分含量均在较高的水平上第 期欧珠等:基于 技术分析西藏凹乳芹的化学成分及定量分析研究 表 凹乳芹化学成分的 鉴定结果峰编号()(/)化学式碎片离子/(/)鉴定化合物 奎尼酸 柠檬酸 咖啡酰奎尼酸(新绿原酸)咖啡酰葡萄糖苷 咖啡酰葡萄糖苷 咖啡酰奎尼酸(绿原酸)阿魏酰奎尼酸 咖啡酰奎尼酸(隐绿原酸)咖啡酸 阿魏酰奎尼酸 阿魏酰奎尼酸 阿魏酸 阿魏酸二聚体葡萄糖苷 咖啡酰葡萄糖苷 二咖啡酰奎尼酸(异绿原酸)二咖啡酰奎尼酸(异绿原酸)二咖啡酰奎尼酸(异绿原酸)阿魏酸二聚体葡萄糖苷 阿魏酸三聚体表 样品中新绿原酸、绿原酸、阿魏酸、异绿原酸 含量单位:/样品编号样品来源新绿原酸绿原酸阿魏酸异绿原酸 西藏山南市隆子县玉麦乡 西藏山南市曲松县曲松镇 西藏拉萨雄巴拉曲药厂 西藏林芝市米林县洛巴民族乡 西藏昌都市丁青县藏药厂 西藏日喀则药材市场 西藏日喀则药材市场 西藏山南市洛扎县拉康镇 成都荷花池中药材批发市场 成都荷花池中药材批发市场 西藏山南市曲松县曲松镇 西藏拉萨 西藏拉萨市中药材市场 西藏拉萨市中药材市场西藏拉萨市中药材市场西藏昌都市藏药厂 注:“”表示未检出 结论与讨论本研究采用 技术 对凹乳芹中的主要酚类成分进行了快速识别和鉴定 从凹乳芹中共鉴定出 个化学成分 其中咖啡酰奎尼酸、咖啡酰葡萄糖、阿魏酰奎尼酸、二咖啡酰奎尼酸、阿魏酸二聚体和三聚体是首次在凹乳芹中被发现 并建立了新绿原酸、绿原酸、阿魏酸和异绿原酸 的 定量分析方法绿原酸类化合物是凹乳芹的主要活性成分 表明凹乳芹具有抗氧化、抗病毒、抗肿瘤和降血脂等药理作用 本研究为凹乳芹的化学成分质谱裂解规律和质量评价提供了科学依据 中 国 食 物 与 营 养第 卷参考文献 王天志 李涛 藏药“加哇”的化学成分研究.天然产物研究与开发():占堆 魏荣锐 马勤阁 等 西藏凹乳芹根、叶提取物的急性及亚急性毒性研究.天然产物研究与开发():李涛 王天志 藏药加哇中黄酮类成分和阿魏酸的定量分析.中国中药杂志():刘兴琴 丁济超 李继兴 等 西归粗多糖对运动疲劳小鼠的免疫调节作用.食品工业科技():才让南加 多杰仁青 文成当智 等 西藏凹乳芹在藏医药中的应用.中华中医药杂志():():/.:龚兴成 刘文静 曹丽波 等 /法快速定性分析金银花的化学成分.中国中药杂志():高学玲 申慧 邹明亮 /法测定黄山贡菊花、叶和茎中酚类物质.天然产物研究与开发:.():.:().:().:王鑫 李楠 齐佳慧 等 金银花中绿原酸的提取工艺研究.黑龙江大学工程学报():王娟娟 秦雪梅 高晓霞 等 杜仲化学成分、药理活性和质量控制现状研究进展.中草药():朱文卿 任汉书 郑媛媛 等 金银花的功能性成分及其生物活性研究进展.食品工业科技():杨晓丽 张君利 王京峰 等 绿原酸抗肿瘤作用及机制研究进展.中国实验方剂学杂志():庞美蓉 刘零怡 高汪磊 等 绿原酸调节糖脂代谢的作用机制研究进展.中草药():():()()()()/: