DB13_T 553-2004 波尔山羊胚胎移植技术规程(河北省).pdf

B42 DB13?可北省地方标准DB13厅553-2004波尔山羊胚胎移植技术规程2004-07-05发布2004-07-05实施河北省质量技术监督局发布DB13rrss子-2004前-=目本标准附录A事l附录B为规班性附最圄本际准由阿北有菌牧局提山.本标准起草单位z阿I:;科技师范学院.本挥准主要起草人李佩国、间瞌山、张香斋、事章开、李蕴玉、李雪竹、孙铁路、赵宝华、莹中伸.DB 13rr553-2004 波尔山羊胚胎移植技术规程1 量用在圄本标准规定了植如山羊胚胎生产中供体羊的选挥、超fl排卵且配种、手术冲卵技术、胚胎质量鉴定、量体羊的选择和I胚胎手术移植技术.本际准适用于被缸山羊的胚胎生产和l移植.2 供体羊的选择2.1 供体羊应符合植尔山羊的品种特征，语系晴楚，遗传性稳定，生产性能良好.2.2 供体羊健康状况良好，体质健壮，无迪传性和传蜘性在病.蟹植机能正常，既往蟹盟力高-2.3 有1胎U上的繁殖虫，年龄在2-5岁，产后3个月的空怀母.T:.3 供悻草的超酣排ftla种3.1 超量排卵3.1.1 超勤排卵的季节和在情周期由11山芋，最适超盘排卵季节为当年9月下旬至11月下甸事1lA年的z月下旬至3月下旬.世缸山羊的发情周期在18d-21d.3.1.2 噩噩选择和1fIJ.根据供体羊个体情况，选择适宜的撒章和剂量，一般采用za)促卵泡章(FSH).肌拄100IU/只150IU/只:b)促黄体生成章(UOI根据陀11的注射剂量，肌注100IU/只-120IU/只td 氯前列烯醇OC口，肌注O.08mg/lA.每天在射两改.3.1.3 坦盟排卵古法3.1.3.1 且母币t情之日作为发情周期的Od.在母羊发情周拙的第15d开始，每天6:00-7:00和118:00-19:00各注射l改FSH.a结剖，迪描注射-3.1.3.2 在第5、6品;在射罔H时，同时肌肉注射ICl.3.1.33 确定供体羊盎情后立即注射LH.如果FSH未住射完供体.芋己盎情，停止注射FSH.立即在射LH.3.1.4 t民悻草草帽鉴定3.1.4.1 时间在第6j(注射f1SH时即对超排供体羊观察发情，3.1.4.2 方洁试f由公扎好试f古布，肢母羊群中试睛，句30-40只供体羊需1只健康试情公羊，当母平接受公羊爬晤，站立不动，国母.节目着公草旋转，井不断摆尾，作为盘情的标准.3.2 Di!种3.2.1 种公草的击挥种公平应符合世尔山羊的品种特征，谱罩情楚，遗传性稳定，生产性能优良:健康状况良好，体质健壮，无遗传手n传染性疾病z蟹盟机能正常，3.2.2 本主从供体羊接受爬跨进行第一改变配，每8h-12h配种l.直至发情结束.DB13rrS53-2004 3.2.3 人工授精3.2.3.1 操作要求a)来楠、精搜稀辑、输相剧的器械严格灭菌、消毒.b)来柏前对种公羊外生殖器捕洗泊串.c)稀释后的精植白皮要保持在25C-30C的环境中.d)输精前，母羊外阴部必须经过情洗捎毒，的输入的鲜*fl活力在0.6以上，每肮输精有效桔子数不少于3X 101，输柑&数不少于2次.f)选抨适宜的输柑部位E3.2.3.2 时间确认发悄时立即进行第一次输柑.之后每间隔8h-12h辅相1敌，直至发情结束.4 手术;中卵技术4.1 主要器材a)手术合:b)剃须刀;c)IHIJ;d)止血纱布:e)因毛如:f)手术刀柄:g)手术国:h)11.:血钳:111帕钳:持针器;k)脑剖1刊|可L脸管)i 1)手术刀片:111)蛙合或:的链合针:。)由于;p)120mm表面.nn.;Q)180mm表而皿:6#-8#头皮计尖端自饨);s)18#-20#头庄针(尖端蔚钝);t)lOnun透明暗脏管:u)lOmL注射辑:v)20mL注射器:w)8皿m班晴管:x)中35mm培养皿.y)体视显世镜，4.2 药晶a)15%由精、5%腆町、新措却灭、生理盐水、植体石蜡、茹水:的宵霉素、旺索、牛血捕白盟白、氧化铀(NaCl)、瞬醋二氢伺阻12P04)、瞬陋氢二饷CNa2HP04)、氧化何(KCO 4.3 试璋的配制2 DB 13rrSS3-2004 4.3.1 砸醋理冲盐水(PBS)称取NaCl8.0g、KH2P04O.挝、N句HP042.13g、KClO.句，力日Dl嚣*lOOOmL.完全带嗣后加适量的3M NaOH调pH为7.4.即为P田植-4.3.2中卵擅:w:取配置好的PBS植1000此，加入牛血情自蛋白句，充分掘匀即成.4.4 呻阳步晴4.4.1 手术4.4.1.1 术前准备手术前24h停止饲唱草料，阻量t水，手术器植在使用前用0.5%新拮尔灭植捏抱0.5h;严格控扑科手术型求进行自身捎莓，术者分工要明确-4.4.1.2 保定与靡醉将母tr-iql卧保定，麻醉，4.4.1.3 手术部位在高乳房mr端的2cm址，血中纯的两侧均可.4.4.1.4 术部菌宅毛范围约20cmX20cm.用肥皂水情洗手术部位，同时剌挣毛茬，再用捕水世挣-4.4.1.5 术部消毒手术部位植外科手术要求常规消毒，盖上术111 4.4.1.6避开血臂，用手术刀于术部辄向切开6cm-8cm茸的刀口，将应下结缔组织分寓，暴踞肌膜H手术刀将肌脏轻轻切开，暴露肌肉层，再用刀柄后蹦将肌肉层钝性剥离，国开阻脏.在骨盆腔，鹏肮周围触摸于宫角井轻轻地将于宫角引山切口外回4.4.2 输卵曹:中E4.4.2.1中E时间在超排母羊发情后66h.72h从晴.!ip曹丑t2-8细胞胚胎，址行蚌胚移植.4.4.2.2 万浩1+.16#-日#头皮针从于宫轴卵管接合部的于宫辅导人到输卵曹峡剖，将喇叭口导卵管从输卵啻喇叭口插入3c皿.4c田，导卵营远端与120mm表面皿相撞，助手事先用10mL注射器抽取5mL-8mL冲卵睛，与头皮计相岳，把忡卵植捏捏推抽卵智，胚胎即随同冲卵擅自输卵营回收到表面皿中，另一侧输卵曹忡胚操作方挂同上，4.4.3 于宫;中胚4.4.3.1 呻胚时间在超排母羊发情后6d-7d.4.4.3.2 万活用吾有脏营的肠钳夹在于宫角分叉址，从宫啻接合部的O.5cm处避开血管向于宫角方向插入6#.8#头皮针，当确认针头在宫腔内进埠畅通时，用硅脏管连于垃射器上，把忡卵植握握住入于宫腔.柿子宫角膨胀时，用于宫导卵管从于宫角基部导人子宫腔，导卵臂的另一端接一180阳的表面皿.同时轻轻挤压于宫角前拙，将忡卵植导出，每制!6子宫角需要50mL-60mL神卵撞，另一侧子宫角操作方法同上，4.4.4 术后处理4.4.4.1 冲胚完毕后，用25C.30C的生理盐J1(将内脏冲就干净:将25C.30C的页菌植伴而蜡5ml.10101注入血腔.肪轴连.4.4.4.2 供体母芋创口来用三层辑告浩田即胆膜、肌肉连撞撞告:皮肤结节辑舍，针脚间lil!lcm.在肌肉与皮肤间撇适量青、链毒素珊，以|由创口感染.4.4.4.3 术后3d-5d注射青毒草和l哇哇章，每天2X.3 DB 13rr553-2004 5 胚胎质量鉴定5.1 栓胚5.1.1 万洼将1&lY:J冲lff拙，在1皮大0(;-oofll l 1年视显微镜下捡胚，将检出的JB!H台政入有侃-存拙的:J5mm培养皿中.5.1.2 胚胎类型扭排母平发f.1f后i66h-72hlH白日.管f!Tl!法果提2细胞、4细胞、8细胞及少数16细胞胚胎目上述泣育j制挂国际)臣Jj白桦恤协会规定的敢问均表示J:J2.超排盯.友情后6d-7d用于古冲)If法采集胚胎，将胚胎分为呆脑m:;.(川、到古桑十，r.tj旺(CM)、!JLWJ囊胚(EB)、蜒胚(D).上述发育J剧按国际胚胎砂怖协会规庭的地刷分且W示为:3.0，1、5 6 g 5.2 胚胎的质提鉴草5.2.1 胚胎发商特征5.2.1.1 羁扭t(,)HIt现熙土Ijj:状细胞阻，分不悄分裂球1胜似草根I!i据透明-l17内脏的大部分-5.2.1.2 致密矗惶胚(Ct.)到UI血剧变小.Ill透明柑内腔的60%-70克，5.?.1.3 早期囊胚佳的细胞的一部分出现发亮的)H泡腔，JH旨在状，发暗的内细胞团和亮而透明井包阳缉腔的滋养层细胞，细胞i王ldl远iJ.:ni与!陀的10%-aO%，难以分i白内细胞团和l磁养层.5,2,1.嚣胚(a)内主，:Jlhl卫和i滋养民界限情|自i井I立集于一植，理旺ill一步扩火，胚泡腔明显，细胞充满透明带内!艳，5、2.2!IH台分组52.2.1 处丁去:fM2细胞的胚胎:卵裂球轮廓情楚，球体饱拙，透明适中，数日吻合即可定为l组:113所J到球比Ciir屯J.j2姐:l/2qj呼U扣!tr.:吁:立:I!l3纽;其余定为4组o1辑、2组、3级胚胎均可JH丁-衅JIf辑.ff.0 5、2，2.2.;.)tE主:如JH阶段z胚胎-般分).J1级、2组、3组、4钮，其l卡l、2:f1l3组均可用胚胎，4组胚胎无罪11;1ffilli.5.2，2.、2.1主纠I唱iJ盹F罚归E凹!萨5芦i:n肌H盹E拍2立主:J:.f叮T阶F段豆与!胚皿龄一E虱汪.J胚压附|附向形态元整.轮廓沽晰里球形分裂f球*太小均勾陆旺;细胞血吉纣占.构f句:紧k眩ti;A15.2.2.2.2:纽i旺H匹f仁川叫;川)i阶if-阶f告;:J阳阪H臣:刊)舶iK的hi;址庄古育阶段和和It阻f庄E占龄吁?扭;主E本-r)(oHf怕轮廓消i咽，也调和细胞密度良!t(.，可见一些f阿f细胞和I(!拙，tJUJMi-J 11 i lO%-JO%.5.2.2.2.:报;&i!(J胚胎21有阶段Jjj.c龄不太-致.J旺的轮廓不捕l啊，也调较11肯.结构植松散，说前虫i胞和1ft!拙较多，变:性2lUJiI:!)i:1侃-50%.5.2.2.4!j组JH!lrrl:*受帖卵、16细胞以下的圭和Ij卵、(H片的i且化卵，细胞变性带均)m4钮，不能tJlif移JJir，flj;1-.5.3 记录按照r-bltA中的要求i;i，r吁所有-n.S 噩悻羊的选择选忏.繁殖tJt能佑，无传染性疾病、也鹿、l瞟悄适中，年龄在1.5.6岁之间的经产f:J;干c.受休芋就-打号、血阳、吁!I组1啡、tt人节现27 胚胎手术移植技术4 DB 13rrSS3-2004 7.1 曼悻草的同期他在情处理7.1.1 方法7.1.1.1 药品z辄前列烯瞎.7.1.1.2 剂量O.07I11g/只执.7.1.1.3 方法z与供体羊同时ld行第一战注射z第二次植射在第一次注射后lOd.第二lX注射后12h-48h观察发情.7.1.2 i提悻草、噩悻羊同期化在情判定7.1.2.1 供体羊、受体羊均采用试情公羊确认衷情圄7.1.2.2把供体羊友情之日定为Od，与供体羊同时黠情的量体羊定为Oh受体.比供体羊提前12h发情的定为+12h受体.提前24h的定为+24h曼体.比供体羊推迟12h发情的受体定为一12h受体，推迟24h的定为-24h受体.7.1.2.3 胚移植时Oh量体，士12h量体移植敢果无显著差异.如果景仲缺乏，可使用:!:24h量体.超过土24h的呈体不再使用.7.2 胚脂事撞撞术7.2.1 暨悻移植所需嚣棉a)立体显微镜:b)手术台:c)剃.iJI刀zd)剪毛剪:-手术刀柄zf)止血钳:g)rl1帕钳:h)持针器2j)手术刀片:j)缉合针:的撞告结:1)创布:时止血纱布:n)16#针头尖端磨钝);0)35mm培养.DR.:p)卡介苗注射器:q)针头式细菌撞骗tr)5mL一次性注射器17.2.2 曼体移植所需药晶75%酒精、5%础町、新洁尔灭、生理盐水、植体石蜡、青霉素、链霉素.7.2.3 曼悻移撞操悻步砸7.2.3.1 桔植器的制作a)将卡介苗在射器就净，棋干.b)盘山注射器内芯.将注射器智的前端在酒精灯上灼烧，控制成长5cm-6cm.直径lmm-l.2mm的细管.冲却后用砂片将尖端断齐，再将芯插入管内.锥意管与芯是配套的不能捕泪。c)将断齐的口端在锢相灯上小心烧站，使其圆滑，但不能变形，即制成移植器.7.2.3.2 暨体母幸的手术法警植技术7.2.3.2.1 手术过程同4.4.1.5 DB13厅553-20047.2.3.2.2 胚胎的移植部位=与供体母羊冲胚部位-Jio抽卵臂胚在轴卵骨移植，于宫胚在于自移植-7.2.3.3 咀回胚胎用移植器先咂一段lcm长的保存植，再一段0.5cm的空气，然后咂咀胚Jl由.肯胚胎的描性不超过1.5cm.7.2.3.4 蛐卵曹事植将具有直-体一侧的输卵啻伞部拨开，找到营口，把最有胚胎的移植器从此插入3cm4cm.然肝将胚胎轻轻推入输卵管即可.7.2.3.5 子宫事植将且，有茧-体一侧的于古角1fl(山，用共咄匾钝的16#针头在于古壁上扎一孔，把装有胚胎的移植器从此孔插入于古腔内，frtl至于宫角尖端后将胚胎轻轻推出即可.7.2.3.6 术后处理操作步骤同4.4.4.7.2.3.7 记录按附录B11战前里体植记最.6 附景AE规范性附景供悻羊!记景A.l 供体羊来胚后应植阳衰A.l做好记录，量A.1提悻草JR:&记景盲主供体羊耳号与配公羊踵挣酶相撞来本主!i2人工授精日期和改量第一第二E舶提型&质量来旺由体I!植E噩胚2细胞E4 自11胞胚时间量瞌量分组盘盘分居盘盘分锺量量分组备注(记录相撞排卵所用的菌物、方桂且且他DB 13rrSSJ-2004 耳号第三8细胞胚盘盘分组坦化来提E盘胚胎总量盘盘7 DB13厅55)-2004附景B规范性附景)暨恤草事植记最8.1量体草喜植后应撞囊.1做好记录.晕目.1 噩悻草事植记景辅号量体品种泣移植盎情移植耳号年龄地点时间时间E E龄、lJl.Q:、产羔盘盘情出各位