DB43∕T 2402-2022 茄子耐低温鉴定技术规程(湖南省).pdf

ICS 67.080CCS B 31B43湖 南 省 地 方 标 准DB43/T 24022022茄子耐低温鉴定技术规程Code of practice for eggplant low temperature resistance identification2022-07-08 发布2022-10-08 实施湖南省市场监督管理局 发布DB43/T 24022022目 次前言.m1范围.12规范性引用文件.13术语和定义.14耐低温性鉴定.15耐低温性综合判定.26耐低温评价分级.2附录A（资料性）茄子冷害分级标准.3附录B（资料性）检测指标的测定方法.4附录C（规范性）茄子耐低温鉴定记载表.6IDB43/T 24022022_L-_ 1刖 5本文件按照GB/T 1.1-2020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规 定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖南省农业农村厅提出。本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：湖南省蔬菜研究所、怀化市农业农村局。本文件主要起草人：吴双花、汪端华、杨建国、李倩、王鑫、彭妙。IIIDB43/T 24022022茄子耐低温鉴定技术规程1范围本文件规定了茄子苗期耐低温鉴定的耐低温性鉴定、耐低温性综合判定、耐低温评价分级等内容。本文件适用于茄子苗期的耐低温性鉴定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。GB 16715.3瓜菜作物种子 第3部分：茄果类3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1耐低温性 chilling-resistance指茄子在低温胁迫下，其生长发育对低温胁迫的耐受能力。3.2冷害 cold damage0 以上低温对茄子生长的损害。3.3耐低温级别 chilling resistance level按照耐低温性从强到弱的分级。4耐低温性鉴定4.1 催芽试验种子质量应符合GB 16715.3要求，选取400粒饱满种子，用。全g/L的赤霉素溶液浸种4 h 后，将种子播于培养皿中，保持滤纸湿润，置于30 恒温箱中催芽，待种子露白后播种于50孔穴盘,常规管理。4.2 育苗当植株长至34片真叶时，设置3个处理，每个处理选取长势一致、健康无损害的植株90株，移 入人工气候室，每个处理设置3个重复，每重复30株，设置温度为25,相对湿度75%,光照强度 250 u mol.m 1,光照时间 16 h,处理 7 d=1DB43/T 240220224.3 低温胁迫处理处理一：相对湿度75%,25 0umol.m-2S-1,光照时间16 h,5 c处理3 d后，调查茄子幼苗的冷害 指数，测定茄子幼苗叶片中的相对电导率、丙二醛含量、脯氨酸含量、可溶性蛋白含量（测定方法参照 附录B）,而后转入25 c培养箱，光照处理16 h,光照强度25 0 nmol.111飞处理4 d,统计各处理植 株存活率，档案记载见附录C1。对照：25 为对照，相对湿度75%,光照强度250口11101.111飞光照时间16 h,3 d后测定茄子 幼苗叶片中的相对电导率、丙二醛含量、脯氨酸含量、可溶性蛋白含量（测定方法参照附录B）,7 d 后统计植株存活率，档案记载见附录C1。5耐低温性综合判定对测定的相对电导率、丙二醛含量、脯氨酸含量、可溶性蛋白含量值，通过采用隶属函数法统计和 分析，各材料各指标隶属函数值进行累加后得到的平均值即为平均隶属度，用于综合评价茄子材料的耐 低温能力，平均隶属度越高则材料耐低温性越强，低温处理后的存活数能要在一定程度上反应植株的耐 寒性，存活率越高表明耐寒性越高，具体计算公式参照附录B.5或B.6。6耐低温评价分级根据此判断耐低温性强弱，分为5级：0.70三9声1.00为高耐，0.60三9声0.69为耐寒，0.40三%W0.59为中耐，0.30三格三0.39为低耐，0三%三0.29为不耐，档案记载见附录C7。表2茄子耐低温评价标准,Pij耐低温等级0.70-1.00高耐低温0.60-0.69耐低温0.40-0.59中耐低温0.30-0.39低耐低温至0.29不耐低温2DB43/T 24022022附录A（资料性）茄子冷害分级标准茄子冷害分级标准见表A.1。表A.1茄子冷害分级标准耐低温级别冷害症状描述0植株生长正常，无明显症状1植株第1、2叶叶缘失水，其他无明显冷害症状2植株第1、2叶叶缘失水严重，第3叶叶缘略失水，心叶无明显冷害症状3植株第1、2叶叶缘出现脱水斑，第3叶叶缘严重失水，心叶略失水4植株第1、2叶脱水斑连接成片，第3叶出现脱水斑，心叶严重失水5全部叶片萎焉，幼苗在常温下不能恢复冷害指数按照A.1计算:CI=E X LaxX100(A.1)式中：C,冷害级数 st j级冷害株数 s 总株数；max 最iWj级别数；I-L 2,3,3DB43/T 24022022附录B（资料性）检测指标的测定方法B.1相对电导率测定采用电导法，将处理组叶片和对照组叶片用去离子水冲洗2次，再用洁净滤纸吸净表面水分。用直 径68 1nm的打孔器避开主脉打取叶圆片，每组叶片打取叶圆片30片，分装在3支洁净试管中，每管 放10片，并加入10 ml的去离子水，放入真空干燥箱中用真空泵抽气10 min以抽出细胞间隙的空气，叶片变成半透明，沉入水下。室温保持lh,期间多次摇动试管，或者将试管振荡lh后，用电导仪测其 初电导值（M）,测毕，将各试管盖塞封口，置沸水浴中10 min,以杀死植物组织，取出试管后冷却至室温，并在 室温下平衡lOmin,摇匀，测其终电导值（S2）。设置空白试管（蒸储水）做对照（SO）,档案记载见 附录C2。相对电导率按照B.1计算：5 1-5 0 S2-S0(B.1)式中：S0空白对照；S1初电导值；S2终电导值。B.2 脯氨酸含量测定脯氨酸标准溶液的配置：准确称取25 mg脯氨酸，用蒸储水溶解后定容至250 ml,其浓度为 lOOug/mE再取此液10 ml,用蒸储水稀释至100 ml,即成lOOug/ml的脯氨酸标准液。脯氨酸含量用酸性前三酮比色法测定，称取新鲜叶片0.5 g,加入5 ml 13%的磺基水杨酸，沸水 中加盖提取10 min,冷却后过滤，定容至50 ml,吸取滤液2 ml,加入2 ml冰醋酸和3 ml酸性水合 黄三酮显色液，沸水浴40位口。冷却至室温，加入5 1nl甲苯，充分振荡，静置分层后取上层溶液5 20 nm 下比色。同时以不同浓度的标准液做对比绘制标准曲线，从标准曲线中查出测定液中脯氨酸含量。档案记载 见附录C3,脯氨酸含量按照B.2计算：CVF=.（B.2）a-W式中：C 标准曲线查得提取液中脯氨酸含量；v 提取液体积；a 测定时所用样品的体积；W 样品重。B.3 丙二醛含量测定丙二醛含量测定采用2-硫代巴比妥酸法测定，取酶液1 ml,加2 ml 0.67%的TBA溶液，沸水浴 15 min,冷却后置于离心管，在4000 rpm的冷冻离心机中离心20 min,于600 nm、532 nm、450 nm 4DB43/T 24022022下比色，档案记载见附录B4,丙二醛MDA含量按照B.3计算：NMDA含量=Cx.（B.3）W式中：C MDA浓度；N 提取液体积；W植物组织鲜重。B.4 可溶性蛋白含量测定可溶性蛋白含量采用考马斯亮蓝法测定，取鲜叶0.5 g,加入2 ml蒸储水研磨，磨成匀浆后用8 ml 蒸储水冲洗研钵，洗涤液收集在同一离心管中，在4000 r/min下离心10 min,取上清2ml转入10 ml 容量瓶中并用蒸储水定容。另取试管，吸取定容后的样品溶液0.5 ml,再加入5 ml的考马斯亮蓝G-25 0 蛋白试剂，充分混合，放置2 min后，以空白液为对照，用1 cm比色皿在5 95 nm下测定吸光度0D值。将蛋白提取液更换成牛血清蛋白浓度梯度溶液，按照相同的方法测定吸光度0D值，绘制标准曲线，再 用标准曲线算出茄子叶片中可溶性蛋白的含量，档案记载见附录B5。样品可溶性蛋白含量（P）按照C.4 计算：P=Cx-.（B.3）axW式中：C 查标准曲线所得每管蛋白质含量；v 提取液体积；a 测定所提取液体积；W植物鲜重。B.5耐寒性综合评价按照B.5和B.6计算：隶属函数值舄=（%-心）/（/皿一七）.（B.5）反隶属函数值与=l-（4-&n）/（/max-七）（当某指标与耐寒性呈负相关）（B.6）PfEP”指标数（H,2,3,4,；j=L 2,3,4）式中：小 一一指标的最大值；&n-指标的最小值；I-指标的任意值。5DB43/T 24022022附录C(规范性)茄子耐低温鉴定记载表表B.1茄子存活率统计表序号品种名称存活数总株数存活率12表B.2相对电导率档案记载表序号品种名称样品来源初电导值终电导值相对电导率记载人12表B.3脯氨酸含量档案记载表序号品种名称样品来源脯氨酸(mg/g)记载人12表B.4丙二醛含量档案记载表序号品种名称样品来源脯氨酸(mg/g)记载人126DB43/T 24022022表B.5可溶性蛋白含量档案记载表序号品种名称样品来源脯氨酸(mg/g)记载人12表B.6冷害分级实验操作档案记载表序号品种名称样品来源级数各级株数最高级别数记载人12表B.7茄子耐低温综合评价表序号品种名称耐低温性记载人127