海藻糖增强嗜酸乳杆菌GDMCC1.208抑制动脉粥样硬化作用研究.pdf

第3 6卷 第3期2023 年08月 青 岛 大 学 学 报(自 然 科 学 版)J O U R N A L O F Q I N G D A O U N I V E R S I T Y(N a t u r a l S c i e n c e E d i t i o n)V o l.3 6 N o.3A u g.2023 文章编号:1 0 0 6 1 0 3 7(2 0 2 3)0 3 0 0 2 1 0 6d o i:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 0 0 6 1 0 3 7.2 0 2 3.0 3.0 5海藻糖增强嗜酸乳杆菌G DMC C 1.2 0 8抑制动脉粥样硬化作用研究高慧娟,李 欣,张 蕾,李培峰(青岛大学转化医学研究院,青岛 2 6 6 0 2 1)摘要:为探究海藻糖在嗜酸乳杆菌G DMC C 1.2 0 8增殖中的作用及两者组合物对载脂蛋白E基因敲除(A p o E-/-)小鼠动脉粥样硬化发展的影响,实验组A p o E-/-小鼠每日灌胃海藻糖或嗜酸乳杆菌G DMC C 1.2 0 8或两者组合物,空白对照组和实验对照组小鼠仅灌胃P B S。1 2周后,通过油红O染色方法测定小鼠主动脉粥样硬化病变面积,检测血清胆固醇水平。研究结果显示,相较于对照组,实验组小鼠主动脉粥样硬化病变面积减小,血清胆固醇水平降低,组合物干预组小鼠病变面积和胆固醇水平变化尤为显著;海藻糖可促进嗜酸乳杆菌G DMC C 1.2 0 8增殖,两者组合物可能是通过降低胆固醇水平抑制A p o E-/-小鼠动脉粥样硬化病变发展。这表明,海藻糖和嗜酸乳杆菌G DMC C 1.2 0 8组合物可能是一种预防和治疗动脉粥样硬化的新方法。关键词:嗜酸乳杆菌G DMC C 1.2 0 8;海藻糖;动脉粥样硬化;A p o E-/-小鼠中图分类号:R 5 4 2.2 文献标志码:A收稿日期:2 0 2 3-0 2-2 2基金项目:青岛市创新领军项目(批准号:R Z 1 9 0 0 0 2 6 0 4)资助。通信作者:李培峰,男,博士,教授,主要研究方向为非编码RNA与心脏疾病,细胞凋亡与心血管疾病及其分子机制等。E-m a i l:p e i f l i q d u.e d u.c n 心血管疾病患病率和死亡率逐年增加,已成为威胁人类健康的主要疾病之一1-2。动脉粥样硬化是大多数心血管疾病的潜在病理原因,目前治疗药物多为化学合成,具有较大疾病残留风险和多种副作用,临床效果不够理想3-4。研究发现,益生菌及其代谢产物在心血管疾病预防和治疗中发挥重要作用5-6,作为一种新型潜在“药物”引起广泛关注。嗜酸乳杆菌是一种具有多种优良特性和功效的肠胃益生菌,可改善动脉粥样硬化发生、发展的多个关键因素,包括胆固醇代谢失衡、炎症因子生成和肠道菌群紊乱等7-9。相较于其他益生菌,嗜酸乳杆菌具有更好的耐酸和耐胆盐性,有利胃肠道中菌体生存、定植和发挥效能。嗜酸乳杆菌属于兼性厌氧菌,其厌氧环境要求不严格,适于实验室培养。但很多嗜酸乳杆菌菌株作用效果并不理想,且不同菌株抑制动脉粥样硬化的作用机制有明显差异9-1 0。海藻糖作为一种天然非还原性双糖,广泛存在于细菌、酵母、真菌、昆虫、各种植物以及无脊椎动物1 1。海藻糖具有非特异性保护作用,可保护多种生物活性物质免受各种环境压力的影响,从而维持细胞的正常功能1 2。另外,海藻糖能够促进巨噬细胞清理畸形蛋白质、多余脂肪滴等各种细胞垃圾,能够清理动脉斑块1 3。综上,本研究选定嗜酸乳杆菌G DMC C 1.2 0 8和海藻糖,探究两者组合物对A p o E-/-小鼠动脉粥样硬化的抑制作用,以期为动脉粥样硬化疾病提供新研究方向和治疗方法,同时也为嗜酸乳杆菌和海藻糖相关产品研发提供理论参考。1 材料与方法1.1 嗜酸乳杆菌体外培养1.1.1 培养基配制 配制不添加碳源、添加2.0%浓度葡萄糖及0.5%、1.0%、2.0%、4.0%、6.0%浓度海青 岛 大 学 学 报(自 然 科 学 版)第3 6卷藻糖等7种MR S培养基。具体配方为:蛋白胨1 0.0 g/L、牛肉浸粉8.0 g/L、酵母浸粉4.0 g/L、磷酸氢二钾2.0 g/L、柠檬酸氢二铵2.0 g/L、乙酸钠5.0 g/L、硫酸镁0.2 g/L、硫酸锰0.0 4 g/L、吐温8 0 1.0 g/L、不添加碳源或添加2.0%葡萄糖或0.5%、1.0%、2.0%、4.0%、6.0%海藻糖。1.1.2 菌株接种培养 嗜酸乳杆菌G DMC C 1.2 0 8购自广东省微生物菌种保藏中心。嗜酸乳杆菌活化和传代时按照1%比例接种,待培养至第三代菌株时,各组培养基分别接种等量嗜酸乳杆菌,3 7 培养箱培养,每隔4 h左右测定菌液6 0 0 n m波长处吸光度,绘制生长曲线。1.2 动物实验对象及分组1.2.1 实验对象及喂养条件 实验动物选1 2只8周龄雄性野生型(w i d e t y p e,WT)C 5 7 B L/6 J小鼠,4 8只雄性A p o E-/-小鼠,体重为2 02 2 g,购自北京唯尚立德生物科技有限公司。所有小鼠均为标准动物房喂养,鼠房温度保持2 02 2,相对湿度4 0%6 0%。严格控制1 2 h光照,1 2 h黑暗条件。适应性喂养1周,自由摄食,饮用水为高压消毒灭菌水。实验期间,定期更换垫料,确保垫料干燥和干净。1.2.2 小鼠分组及干预 表1中高脂饲料配方为普通饲料添加1 5%脂肪和0.2 5%胆固醇。各组小鼠灌胃体系均为0.2 m L,连续灌胃1 2周。为保证益生菌活性,灌胃所用菌液均为当天配制,每天固定灌胃时间。表1 小鼠分组及干预情况分组命名小鼠类型喂食饲料灌胃体系空白对照组(WT)C 5 7 B L/6 J小鼠普通饲料P B S实验对照组(A p o E-/-V e h i c l e)A p o E-/-小鼠高脂饲料P B S海藻糖干预组(A p o E-/-T r e)A p o E-/-小鼠高脂饲料2.0%海藻糖嗜酸乳杆菌干预组(A p o E-/-L a)A p o E-/-小鼠高脂饲料51 08 C F U嗜酸乳杆菌组合物干预组(A p o E-/-L a+T r e)A p o E-/-小鼠高脂饲料2.0%海藻糖和51 08 C F U嗜酸乳杆菌1.3 小鼠取材及指标检测1.3.1 小鼠取材 小鼠灌胃1 2周结束,眼球取血后打开小鼠腹腔及胸腔,生理盐水灌注心脏,冲洗主动脉血液,解剖镜下剥离小鼠主动脉外层脂肪组织。1.3.2 主动脉主体油红O染色 纵向剖开主动脉,油红O室温、避光染色1 5 m i n,6 0%异丙醇脱色,观察至背景无色时,于玻璃皿固定主动脉,观察拍照。1.3.3 血清胆固醇指标测定 小鼠眼球取血,置于E P管,室温放置2 h,4、2 5 0 0 r p m离心1 5 m i n,收集上层血清至无菌E P管,分装后于-8 0 冰箱保存。按照总胆固醇(t o t a l c h o l e s t e r o l,T C)、甘油三酯(t r i-g l y c e r i d e,T G)、高密度脂蛋白胆固醇(h i g h d e n s i t y l i p o p r o t e i n c h o l e s t e r o l,HD L-C)、低密度脂蛋白胆固醇(l o w d e n s i t y l i p o p r o t e i n c h o l e s t e r o l,L D L-C)检测试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)说明书,检测各项胆固醇水平。1.3.4 统计学方法 利用软件G r a p h p a d P r i s m 8完成统计学分析,计量结果以xs表示,两独立样本比较采用t检验,以p0.0 5表示差异具有统计学意义。2 实验结果2.1 嗜酸乳杆菌G DMC C 1.2 0 8菌株鉴定为确保所购菌株正确性,嗜酸乳杆菌G DMC C 1.2 0 8需通过基本鉴定。由图1可知,革兰氏染色后,电镜下呈现紫色,成双或链状排列,为革兰氏阳性杆菌。菌株1 6 S r R NA测序结果与G e n B a n k菌株序列同源性比对结果均显示菌株为嗜酸乳杆菌属,符合嗜酸乳杆菌菌株基本特征。2.2 海藻糖促进嗜酸乳杆菌G DMC C 1.2 0 8增殖研究报道2.0%海藻糖可促进嗜酸乳杆菌增殖并提高菌体耐酸性1 4。为验证海藻糖是否影响嗜酸乳杆菌G DMC C 1.2 0 8体外增殖,以常用碳源葡萄糖为实验对照,选定0.5%、1.0%、2.0%、4.0%和6.0%海藻糖22 第3期 高慧娟等:海藻糖增强嗜酸乳杆菌G DMC C 1.2 0 8抑制动脉粥样硬化作用研究图1 嗜酸乳杆菌G DMC C 1.2 0 8鉴定(a)菌株革兰氏染色镜下形态;(b)菌株1 6 S r R NA测序B l a s t结果浓度,测定菌体生长曲线。由图2可知,添加海藻糖组菌株增殖均高于葡萄糖,当海藻糖浓度升至2.0%后,提高海藻糖浓度对菌体增殖效果影响不显著,仅生长初期时效果有提升,为此选定2.0%海藻糖作为最佳实验浓度。为验证海藻糖能否促进嗜酸乳杆菌G DMC C 1.2 0 8体内定植,通过小鼠肠道内容物微生物宏基因组测序检测嗜酸乳杆菌相对丰度。A p o E-/-L a+T r e组嗜酸乳杆菌相对丰度显著高于A p o E-/-L a组(p0.0 5),表明2.0%海藻糖能够促进嗜酸乳杆菌G DM C C 1.2 0 8在A p o E-/-小鼠肠道中定植。图2 海藻糖促进嗜酸乳杆菌G DMC C 1.2 0 8增殖(a)嗜酸乳杆菌G DMC C 1.2 0 8生长曲线;(b)各组小鼠肠道嗜酸乳杆菌相对丰度2.3 组合物干预抑制主动脉粥样硬化病变灌胃1 2周实验结束后,分别称重小鼠肝脏、心脏等主要脏器,计算肝脏指数和心脏指数。表2数据显示,海藻糖和嗜酸乳杆菌G DMC C 1.2 0 8联合干预并未显著影响A p o E-/-小鼠体重、心脏指数和肝脏指数。表2 小鼠体重及主要脏器重量指标统计G r o u pB o d y w e i g h t/gL i v e r i n d e x(%)C a r d i a c i n d e x(%)WT2 7.6 60.1 6 2 85.2 3 90.1 1 5 60.5 9 6 10.0 2 3 1 9A p o E-/-V e h i c l e2 9.9 00.3 9 3 64.8 4 40.2 4 1 20.5 4 4 40.0 2 9 7 9A p o E-/-T r e3 0.0 40.2 2 1 14.9 8 90.0 9 1 3 20.4 6 6 80.0 1 8 5 6A p o E-/-L a2 9.7 10.2 5 5 34.8 7 00.0 8 0 4 70.5 3 2 40.0 2 8 6 7A p o E-/-L a+T r e2 9.3 90.2 8 7 44.7 6 50.0 6 7 8 40.4 7 1 80.0 2 3 0 332青 岛 大 学 学 报(自 然 科 学 版)第3 6卷 为探究嗜酸乳杆菌G DMC C 1.2 0 8及海藻糖联合干预能否影响A p o E-/-小鼠动脉粥样硬化形成,通过油红O染色检测小鼠主动脉主体内膜面及根部横切面粥样硬化病变情况。由图3可知,WT组小鼠主动脉弓及主体下方均无斑块形成,A p o E-/-V e h i c l e组和A p o E-/-T r e组整体均有较多明显斑块。而A p o E-/-L a实验组主体内膜面斑块明显减少,仅主动脉弓处还存留部分斑块(p0.0 5)。A p o E-/-L a+T r e实验组整体斑块减少程度更加显著,主动脉弓处斑块面积减小明显,斑块颜色也有所减弱(p0.0 5)。利用I m a g e J软件,通过计算动脉粥样硬化病变面积/主动脉全内膜面积定量病变面积。这表明,海藻糖单独干预A p o E-/-小鼠并未表现明显的病变抑制作用,但海藻糖和嗜酸乳杆菌G DM C C 1.2 0 8组合物能明显减轻主动脉粥样硬化病变。取各组小鼠主动脉弓根部血管,通过油红O染色观察小鼠主动脉根部斑块形成情况。WT组主动脉腔壁光滑,无斑块形成。A p o E-/-小鼠均有不同程度斑块形成,其中A p o E-/-L a+T r e实验组斑块大小和厚度明显减弱(p 0.0 5),这与主动脉主体染色结果一致,表明嗜酸乳杆菌G DM C C 1.2 0 8能减轻A p o E-/-小鼠主动脉粥样硬化病变,海藻糖联合嗜酸乳杆菌G DM C C 1.2 0 8抑制主动脉粥样硬化病变效果更佳。图3 各组小鼠主动脉油红O染色结果及粥样硬化病变面积量化(a)主动脉主体内膜面;(b)主动脉根部横切面42 第3期 高慧娟等:海藻糖增强嗜酸乳杆菌G DMC C 1.2 0 8抑制动脉粥样硬化作用研究2.4 组合物干预影响血清胆固醇水平动脉粥样硬化是一种脂质驱动的动脉慢性炎症疾病,胆固醇水平改变与动脉粥样硬化形成有密切关系,降低胆固醇仍是防治心血管疾病有效策略1 5。因此,灌胃结束后检测各组小鼠血清胆固醇水平。由图4可知,A p o E-/-V e h i c l e组小鼠T C和L D L-C水平均显著高于WT组 小鼠(p0.0 5),A p o E-/-L a组和A p o E-/-L a+T r e组T C和L D L-C水平均显著低于A p o E-/-V e h i c l e组(p0.0 5),而各组血清T G和HD L-C水平无明显差异,表明海藻糖和嗜酸乳杆菌G DMC C 1.2 0 8联合干预能够显著降低小鼠血清胆固醇水平。3 讨论图4 各组小鼠血清胆固醇指标水平比较(a)T C;(b)L D L-C;(c)T G;(d)HD L-C 嗜酸乳杆菌具有良好的耐酸和耐胆盐性,代谢时产生多种抗菌物质,作为功能性食用菌具有广阔应用前景1 6。研究发现,动脉粥样硬化中嗜酸乳杆菌不同菌株的作用效果不尽相同,鉴于宿主细菌串扰的复杂性,需要筛选特定菌株。因此,研究嗜酸乳杆菌具体菌株功能和作用机制对研发抗动脉粥样硬化药物具有重要意义。本研究选取天然双糖海藻糖,可作为保护剂提高细菌活力和抗逆性,前期体外培养结果显示,2%浓度海藻糖可促进嗜酸乳杆菌G DMC C 1.2 0 8增殖。选取基因工程动物模型A p o E-/-小鼠探究海藻糖和嗜酸乳杆菌G DM-C C 1.2 0 8组合物干预对动脉粥样硬化形成的影响。相较于WT组小鼠,高 脂 高 胆 固 醇 饮 食 喂 养 的A p o E-/-小鼠体重明显偏高,但各组A p o E-/-小鼠之间体重无明显差异。各组A p o E-/-小鼠心脏和肝脏指数也无明显差异,表明组合物干预不会显著影响小鼠体重,但可明显减轻小鼠动脉粥样硬化斑块损伤,且组合物干预效果明显优于嗜酸乳杆菌单独干预。这表明海藻糖可以提升菌株抑制动脉粥样硬化的功效,具体原因可能是海藻糖保护菌株抵抗胃肠道恶劣环境破坏,从而增加进入肠道中的活菌量并促进菌株增殖。上述结果可为益生菌组合物功能研究提供新参考。血浆胆固醇水平改变和动脉粥样硬化发展有密切关系1 7。嗜酸乳杆菌是否有利于降低血清胆固醇水平仍有争论,有研究显示嗜酸乳杆菌能降低动物模型和人类的胆固醇水平1 8-1 9,亦有研究发现嗜酸乳杆菌对血清胆固醇无显著影响2 0,推测与菌株种类、实验对象及干预时间差异均有密切关系。相较于WT小鼠,A p o E-/-小鼠血清T C和L D L-C水平都有显著升高,而海藻糖和嗜酸乳杆菌G DMC C 1.2 0 8组合物干预可降低血清T C和L D L-C水平,本研究结果支持该组合物抑制动脉粥样硬化可能与胆固醇水平降低有关,而T G和HD L-C水平无显著差异可能与灌胃周期有关。本研究仅初步表明海藻糖和嗜酸乳杆菌G DMC C 1.2 0 8组合物可能是通过调节血清胆固醇水平抑制动脉粥样硬化,尚未探讨调节胆固醇水平的具体分子机制。研究中动物实验后期可根据小鼠生长情况,适当延长灌胃时间,探究灌胃周期对小鼠病变状态和各项指标的影响,以达到更好治疗效果。52青 岛 大 学 学 报(自 然 科 学 版)第3 6卷4 结论本研究通过细菌体外培养实验及小鼠灌胃实验,发现2.0%浓度海藻糖可促进嗜酸乳杆菌G DM-C C 1.2 0 8体外增殖和体内定植,海藻糖和嗜酸乳杆菌G DMC C 1.2 0 8不会显著影响A p o E-/-小鼠的体重和脏器指数,两者组合物可能是通过影响小鼠血清胆固醇水平进而抑制动脉粥样硬化发展。今后将探索胆固醇水平改变的具体通路及发掘动脉粥样硬化改善相关机制。参考文献1P E N G J T,X I AO X,HU M,e t a l.I n t e r a c t i o n b e t w e e n g u t m i c r o b i o m e a n d c a r d i o v a s c u l a r d i s e a s eJ.L i f e S c i e n c e s,2 0 1 8,2 1 4:1 5 3-1 5 7.2 王菲,李培峰,高岩岩.p-B R A F在心肌缺血再灌注损伤中的作用和机制研究J.青岛大学学报(自然科学版),2 0 2 2,3 5(2):1 2-1 8.3N I S S E N S E,N I CHO L L S S J,S I P AH I I,e t a l.E f f e c t o f v e r y h i g h-i n t e n s i t y s t a t i n t h e r a p y o n r e g r e s s i o n o f c o r o n a r y a t h e r o s c l e r o s i s:T h e A S T E R O I D t r i a lJ.J AMA,2 0 0 6,2 9 5(1 3):1 5 5 6-1 5 6 5.4J UN M,F OO T E C,L J C,e t a l.E f f e c t s o f f i b r a t e s o n c a r d i o v a s c u l a r o u t c o m e s:A s y s t e m a t i c r e v i e w a n d m e t a-a n a l y s i sJ.L a n c e t,2 0 1 0,3 7 5:1 8 7 5-1 8 8 4.5S A I N I R,S A I N I S,S HA RMA S.P o t e n t i a l o f p r o b i o t i c s i n c o n t r o l l i n g c a r d i o v a s c u l a r d i s e a s e sJ.J o u r n a l o f C a r d i o v a s c u l a r D i s e a s e R e-s e a r c h,2 0 1 0,1(4):2 1 3-2 1 4.6T AN G W H W,B A C KHE D F,L AN DME S S E R U,e t a l.I n t e s t i n a l m i c r o b i o t a i n c a r d i o v a s c u l a r h e a l t h a n d d i s e a s e:J A C C s t a t e-o f-t h e-a r t r e v i e wJ.J o u r n a l o f t h e Am e r i c a n C o l l e g e o f C a r d i o l o g y,2 0 1 9,7 3(1 6):2 0 8 9-2 1 0 5.7S ON G M,P A R K S,L E E H,e t a l.E f f e c t o f L a c t o b a c i l l u s a c i d o p h i l u s N S 1 o n p l a s m a c h o l e s t e r o l l e v e l s i n d i e t-i n d u c e d o b e s e m i c eJ.J o u r n a l o f D a i r y S c i e n c e,2 0 1 5,9 8(3):1 4 9 2-1 5 0 1.8B E N D A L I F,K E R D OU C HE K,HAMMA-F A R A D J I S,e t a l.I n v i t r o a n d i n v i v o c h o l e s t e r o l l o w e r i n g a b i l i t y o f L a c t o b a c i l l u s p e n t o s u s K F 9 2 3 7 5 0J.B e n e f i c i a l M i c r o b e s,2 0 1 7,8(2):2 7 1-2 8 0.9HUAN G Y,WAN G J F,QUAN G H,e t a l.L a c t o b a c i l l u s a c i d o p h i l u s AT C C 4 3 5 6 p r e v e n t s a t h e r o s c l e r o s i s v i a i n h i b i t i o n o f i n t e s t i n a l c h o l e s t e r o l a b s o r p t i o n i n a p o l i p o p r o t e i n E-k n o c k o u t m i c eJ.A p p l i e d a n d E n v i r o n m e n t a l M i c r o b i o l o g y,2 0 1 4,8 0(2 4):7 4 9 6-7 5 0 4.1 0 CHE N L H,L I U W,L I Y M,e t a l.L a c t o b a c i l l u s a c i d o p h i l u s A T C C 4 3 5 6 a t t e n u a t e s t h e a t h e r o s c l e r o t i c p r o g r e s s i o n t h r o u g h m o d u l a t i o n o f o x i d a t i v e s t r e s s a n d i n f l a mm a t o r y p r o c e s sJ.I n t e r n a t i o n a l I mm u n o p h a r m a c o l o g y,2 0 1 3,1 7(1):1 0 8-1 1 5.1 1 E L B E I N A D,P AN Y T,P A S TU S Z AK I,e t a l.N e w i n s i g h t s o n t r e h a l o s e:A m u l t i f u n c t i o n a l m o l e c u l eJ.G l y c o b i o l o g y,2 0 0 3,1 3(4):1 7 R-2 7 R.1 2 S A R KA R S,D AV I E S J E,HUAN G Z B,e t a l.T r e h a l o s e,a n o v e l mT O R-i n d e p e n d e n t a u t o p h a g y e n h a n c e r,a c c e l e r a t e s t h e c l e a r a n c e o f m u t a n t h u n t i n g t i n a n d a l p h a-s y n u c l e i nJ.J o u r n a l o f B i o l o g i c a l C h e m i s t r y,2 0 0 7,2 8 2(8):5 6 4 1-5 6 5 2.1 3 S E R G I N I,E VAN S T D,Z HAN G X Y,e t a l.E x p l o i t i n g m a c r o p h a g e a u t o p h a g y-l y s o s o m a l b i o g e n e s i s a s a t h e r a p y f o r a t h e r o s c l e r o s i sJ.N a t u r e C o mm u n i c a t i o n s,2 0 1 7,8:1 5 7 5 0.1 4 WAN G R M,L I N,Z HE N G K,e t a l.E n h a n c i n g a c i d t o l e r a n c e o f t h e p r o b i o t i c b a c t e r i u m L a c t o b a c i l l u s a c i d o p h i l u s N C FM w i t h t r e h a l o s eJ.F EM S M i c r o b i o l o g y L e t t e r s,2 0 1 8,3 6 5(1 9):f n y 2 1 7.1 5 WANG L J,Z HOU B H,Z HOU X,e t a l.C o m b i n e d l o w e r i n g e f f e c t s o f r o s u v a s t a t i n a n d L.a c i d o p h i l u s o n c h o l e s t e r o l l e v e l s i n r a tJ.J o u r n a l o f M i c r o b i o l o g y a n d B i o t e c h n o l o g y,2 0 1 9,2 9(3):4 7 3-4 8 1.1 6 GAO H J,L I X,C HE N X T,e t a l.T h e f u n c t i o n a l r o l e s o f l a c t o b a c i l l u s a c i d o p h i l u s i n d i f f e r e n t p h y s i o l o g i c a l a n d p a t h o l o g i c a l p r o c e s s e sJ.J o u r n a l o f M i c r o b i o l o g y a n d B i o t e c h n o l o g y,2 0 2 2,3 2(1 0):1 2 2 6-1 2 3 3.1 7 G R O E N E N A G,HA LMO S B,T A L L A R,e t a l.C h o l e s t e r o l e f f l u x p a t h w a y s,i n f l a mm a t i o n,a n d a t h e r o s c l e r o s i sJ.C r i t i c a l R e v i e w s i n B i o c h e m i s t r y a n d M o l e c u l a r B i o l o g y,2 0 2 1,5 6(4):4 2 6-4 3 9.1 8 HUANG Y,WAN G J F,C HE N G Y,e t a l.T h e h y p o c h o l e s t e r o l a e m i c e f f e c t s o f L a c t o b a c i l l u s a c i d o p h i l u s Am e r i c a n t y p e c u l t u r e c o l l e c-t i o n 4 3 5 6 i n r a t s a r e m e d i a t e d b y t h e d o w n-r e g u l a t i o n o f N i e m a n n-P i c k C 1-l i k e 1J.B r i t i s h J o u r n a l o f N u t r i t i o n,2 0 1 0,1 0 4(6):8 0 7-8 1 2.1 9 AN D R A D E S,B O R G E S N.E f f e c t o f f e r m e n t e d m i l k c o n t a i n i n g L a c t o b a c i l l u s a c i d o p h i l u s a n d B i f i d o b a c t e r i u m l o n g u m o n p l a s m a l i p i d s o f w o m e n w i t h n o r m a l o r m o d e r a t e l y e l e v a t e d c h o l e s t e r o lJ.J o u r n a l o f D a i r y R e s e a r c h,2 0 0 9,7 6(4):4 6 9-4 7 4.2 0 I V E Y K L,HO D G S ON J M,K E R R D A,e t a l.T h e e f f e c t o f y o g h u r t a n d i t s p r o b i o t i c s o n b l o o d p r e s s u r e a n d s e r u m l i p i d p r o f i l e;A r a n-d o m i s e d c o n t r o l l e d t r i a lJ.N u t r i t i o n M e t a b o l i s m a n d C a r d i o v a s c u l a r D i s e a s e s,2 0 1 5,2 5(1):4 6-5 1.(下转第3 3页)62 第3期 王少营等:基于转录组测序初步筛选维生素C延缓秀丽隐杆线虫衰老的相关基因P r e l i m i n a r y S c r e e n i n g o f G e n e s R e l a t e d t o V i t a m i n C D e l a y i n g t h e A g i n g o f C a e n o r h a b d i t i s E l e g a n s B a s e d o n T r a n s c r i p t o m e S e q u e n c i n gWANG S h a o-y i n g,WANG S h a o-c o n g,L I P e i-f e n g,Z E NG H u a n-y u(I n s t i t u t e o f T r a n s l a t i o n a l M e d i c i n e,Q i n g d a o U n i v e r s i t y,Q i n g d a o 2 6 6 0 2 1,C h i n a)A b s t r a c t:T h e c o n c e n t r a t i o n g r a d i e n t s o f b l a n k c o n t r o l g r o u p(0 m g/m L v i t a m i n C g r o u p),0.4 m g/m L v i t a m i n C g r o u p,0.8 m g/m L v i t a m i n C g r o u p a n d 1.6 m g/m L v i t a m i n C g r o u p w e r e e s t a b l i s h e d t o c o n s t r u c t v i t a m i n C-t r e a t e d C a e n o r h a b d i t i s e l e g a n s m o d e l,e x p l o r e v i t a m i n C r e g u l a t e d C a e n o r h a b d i t i s e l e-g a n s l o n g e v i t y p a t h w a y-r e l a t e d g e n e s,a n d d e t e c t t h e r e l a t i o n s h i p b e t w e e n v i t a m i n C a n d C a e n o r h a b d i t i s e l e g a n s l o n g e v i t y.I l l u m i n a H i S e q w a s u s e d i n t h e c o n t r o l g r o u p a n d t r e a t m e n t g r o u p t o a n a l y z e t h e G e n e t r a n s c r i p t o m e s e q u e n c i n g.T h e d i f f e r e n t i a l l y e x p r e s s e d g e n e s a f f e c t i n g t h e l i f e s p a n o f C a e n o r h a b d i t i s e l e-g a n s w e r e m i n e d b y G e n e O n t o l o g y(GO)a n d K y o t o E n c y c l o p e d i a o f G e n e s a n d G e n o m e s(K E G G).T h e r e s u l t s s h o w t h a t 0.8 m g/m L v i t a m i n C s i g n i f i c a n t l y e x t e n d s t h e l i f e s p a n o f C a e n o r h a b d i t i s e l e g a n s c o m p a r e t o o t h e r c o n c e n t r a t i o n s.T h e e x p r e s s i o n o f l i p s-1 0 g e n e i s s i g n i f i c a n t l y u p r e g u l a t e d a n d i n v o l v e d i n t h e l i f e-r e l a t e d p a t h w a y r e g u l a t i o n p r o c e s s o f C a e n o r h a b d i t i s e l e g a n s,i n d i c a t i n g t h a t v i t a m i n C c a n a f-f e c t t h e l i f e s p a n a n d r e g u l a t e t h e r e