鸡滑液囊支原体致病模型建立与灭活疫苗免疫效果评价.pdf

中国兽医杂志():鸡滑液囊支原体致病模型建立与灭活疫苗免疫效果评价尹丽萍 王 建 李昌明 王 莉 张凯云 姜 平 秦爱建 刘岳龙(江苏立华牧业股份有限公司 江苏 常州 常州市武进区畜牧兽医管理服务中心 江苏 常州 南京农业大学动物医学院 江苏 南京 扬州大学兽医学院 江苏 扬州)摘要:为科学评价鸡滑液囊支原体()灭活疫苗的免疫效果本试验选用 株田间流行的 菌株(、和)通过爪垫、静脉、气囊注射 种途径和不同攻毒剂量摸索建立 鸡攻毒致病模型的方法并以建立的模型为基础于攻毒后 根据临床病变评分和爪垫肿胀鸡只比例综合评价 和 两种商品化灭活疫苗的免疫效果结果显示本试验所建立的攻毒模型为 鸡爪垫注射 的 菌株该模型可致试验鸡爪垫肿胀率达疫苗效果评价试验中攻毒对照鸡只临床病变评分均值为 分爪垫肿胀鸡只比例高达 疫苗和 疫苗免疫后鸡只临床病变评分均值分别降低至 分和 分爪垫肿胀鸡只比例分别降低至 和 结果表明养殖场需要科学选择 灭活疫苗尤其需要以流行的强菌株建立相对稳定可靠的攻毒模型进行免疫保护效果评价关键词:滑液囊支原体 攻毒模型 灭活疫苗 免疫效果中图分类号:.文献标志码:文章编号:()(.):(.).().:.收稿日期:基金项目:武进区科技支撑项目()教育部禽类预防医学/江苏省动物预防医学重点实验室开放项目(年)江苏省重点研发计划项目()作者简介:尹丽萍()女博士生研究方向为规模化养殖场畜禽疾病净化:王建()男高级兽医师硕士研究方向为动物疫病防控和畜禽健康养殖:注:王建与尹丽萍对本文具有同等贡献通信作者:刘岳龙:研 究 论 文 卷 传染性滑液囊炎是由滑液囊支原体()引起的鸡或火鸡的传染性疾病一般多见于 周龄的鸡发病率为 死亡率为 成年鸡多呈慢性经过 不同毒力 菌株的定植能力和致病力存在差异不同品种鸡感染 后的临床表现同样存在差异 感染在我国普遍存在 我国养殖场一般根据自身情况采取“净化 生物安全 化药 疫苗”的综合防控策略其中大部分父母代种鸡场和商品鸡场主要还是采取“化药 疫苗”为主的防控措施疫苗是养殖场防控 的措施之一但是疫苗的免疫效果存在争议 目前 疫苗包括弱毒活疫苗和灭活疫苗两类其中活疫苗的保护效果与定植率存在一定相关性而定植率受养殖场野毒载量的影响野毒载量越高定植率越低 等研究发现 灭活疫苗能够诱导肉鸡细胞和体液免疫应答并在攻毒时产生高水平的保护具有潜在的应用前景 但是国内养殖场对 灭活疫苗的保护效果评价不一 灭活疫苗的保护效果与疫苗质量(菌株、含量、佐剂和制造工艺等)、田间菌株变异等有明显相关性因此 防控需要筛选合适的灭活疫苗 评价灭活疫苗的保护效果首先需要建立稳定可靠的致病模型 为此本试验通过比较不同 菌株、种注射途径攻毒后 鸡的临床表现筛选合适的菌株和攻毒途径建立较可靠的致病模型结合临床病变评分和爪垫肿胀鸡只比例综合评价 种市售灭活疫苗的保护效果为养殖场科学选用疫苗提供技术支持 材料与方法 材料 疫苗 种鸡 灭活疫苗分别购自、两个厂家 菌株 从本实验室 余株 菌株库中根据田间鸡群发病品种和死淘率、多位点序列分型()和 基因同源性分析结果筛选出 个典型代表性菌株分别为(年分离于江苏某育种公司 为 型)、(年分离于徐州某商品鸡场 为 型)、(年分离于江苏常州某育种公司 为 型)实验动物 日龄 级白来航鸡购自山东济南斯帕法斯家禽有限公司生产许可证号:(鲁)于负压隔离器内饲养 主要试剂快速磁珠法/提取试剂盒()购自济凡生物科技(北京)有限公司鸡滑液囊支原体抗体 试剂盒()购自荷兰 公司 方法 试验前鸡只 核酸鉴定和抗体测定对每只鸡进行核酸实时荧光定量()鉴定:采样时棉拭子接触到腭裂隙旋转 圈后放入含 无菌生理盐水的离心管中使用快速磁珠法/提取试剂盒提取 参照参考文献的 方法进行 鉴定 对每只鸡进行 抗体检测:采集血清使用滑液囊支原体抗体 试剂盒进行抗体检测 通过核酸鉴定和抗体测定确定试验鸡是否均为 阴性鸡 不同途径攻毒模型的建立将 只 日龄 鸡随机分为 个大组包括 个 菌株攻毒组(组攻毒、组攻毒、组攻毒)和生理盐水组(组)每个大组分为 个小组分别采用爪垫注射、静脉注射、气囊注射的感染方式共 个小组每个小组 只 鸡攻毒剂量为 菌株滴度为/组的 个小组鸡只均注射 生理盐水 试验周期为 每天观察并记录各组鸡只临床表现统计出现各部位病变的鸡只比例确定建立 攻毒模型的最适菌株和注射途径 爪垫注射攻毒模型的精确攻毒剂量摸索为确定 菌株的精确爪垫攻毒剂量避免剂量过高或过低导致试验产生较大误差 将 只 日龄 鸡随机分为 个组其中第、组为攻毒组分别按照、和/爪垫注射 第 组为对照组爪垫注射 生理盐水 试验周期为 每天观察鸡只并记录各组临床表现统计爪垫肿胀鸡只比例以此来判定合适的攻毒剂量 灭活疫苗免疫效果评价 将 只 日龄 鸡随机分为 个组、组分别免疫、厂家的灭活疫苗 组为攻毒对照组(注射生理盐水后攻毒)组为不攻毒对照组(注射生理盐水不攻毒)其中、组颈部皮下免疫 相应疫苗首次免疫后 周再次同剂量加强免疫 组和 组同时间注射等量生理盐水 完成二次免疫后第 天使用 菌株对、和 组的鸡只同一侧爪垫进行攻毒 组不攻毒 试验周期为 每天观察并记录各组鸡只临床表现统计爪垫肿胀鸡 期尹丽萍等:鸡滑液囊支原体致病模型建立与灭活疫苗免疫效果评价只比例参照参考文献 标准进行临床病变评分评分为(无病变)(严重病变)综合爪垫肿胀鸡只比例和临床病变评分综合评价疫苗的免疫效果 结果 试验前鸡只 核酸鉴定和抗体测定本试验使用的 鸡经 核酸鉴定和抗体测定均为阴性 不同途径攻毒模型的建立 攻毒后 各组鸡只临床表现统计结果如表 所示、组分别采用的 种攻毒途径中爪垫攻毒导致的爪垫肿胀鸡只比例可达 而出现关节炎、胸骨囊肿的鸡只比例较低静脉攻毒导致爪垫肿胀鸡只比例最高为 气囊攻毒中仅第 组鸡只出现爪垫肿胀比例为 关节炎比例为 因此选择爪垫注射作为最适攻毒途径攻毒后的鸡只爪垫肿胀占比作为攻 毒 效 果 的 评 价 参 数 个 攻 毒 菌 株 中 比其他 个菌株产生的爪垫肿胀、关节炎、胸骨囊肿鸡只比例更高 因此最终确定爪垫注射攻毒 菌株观察攻毒后 爪垫肿胀鸡只比例作为初级致病模型表 株不同 菌株通过爪垫、静脉和气囊攻毒导致的各部位病变 大组小组攻毒菌株攻毒途径 爪垫肿胀鸡只比例()关节炎鸡只比例()胸骨囊肿鸡只比例()爪垫(/)(/)(/)静脉(/)(/)(/)气囊(/)(/)(/)爪垫(/)(/)(/)静脉(/)(/)(/)气囊(/)(/)(/)爪垫(/)(/)(/)静脉(/)(/)(/)气囊(/)(/)(/)生理盐水爪垫(/)(/)(/)静脉(/)(/)(/)气囊(/)(/)(/)爪垫注射攻毒模型的精确攻毒剂量摸索 菌株不同剂量进行爪垫注射后的爪垫肿胀鸡只比例结果如表 所示攻毒后 第 组和第 组的爪垫肿胀鸡只比例均为 因此将 菌株临界最低攻毒剂量定为 /灭活疫苗免疫效果评价攻毒后 以临床病变评分和爪垫肿胀鸡只比例 个指标综合评价疫苗免疫效果结果如表 所示 组、组的鸡只爪垫肿胀比例分别为 、临床病变评分均值分别为 分和 分 组中 鸡只出现明显病变临床病变评分均值为 分 组 只试验鸡中 只出现爪垫严重肿胀且足部轻微变形剖检可见组织增生出现大量肉芽有大量脓性渗出物其余 只均未出现爪垫肿胀的现象 组 只试验鸡中 只出现爪垫轻微肿胀、增厚 只出现爪垫明显肿胀剖检可见组织增生 组 只试验鸡均出现爪垫肿胀的现象其中 只出现爪垫轻微肿胀、增厚 只出现足垫较明显肿胀且导致足部轻微肿胀剖检可见组织增生且有脓性渗出物研 究 论 文 卷 只爪垫严重肿胀且导致足部变形剖检可见大量肉芽且有大量脓性渗出物 综上免疫灭活疫苗可降低鸡只临床病变评分和爪垫肿胀鸡只比例且 组疫苗免疫后攻毒保护效果要优于 组表 菌株临界攻毒剂量测定 攻毒菌株 组别攻毒菌液剂量 爪垫肿胀鸡只比例()/(/)/(/)/(/)/(/)/(/)生理盐水 (/)表 疫苗 和 的免疫效果评价 组别不同临床病变评分/鸡只数量(只)/分 分 分 分 分总分 均值爪垫肿胀鸡只比例()组 (/)组 (/)组 (/)组(/)讨论近年来 感染在我国家禽产业中广泛存在滑液囊炎和腱鞘炎等是较为常见的临床症状 对国内大多数父母代养殖场而言 净化难度很大当务之急是要最大程度降低其导致的临床发病比例 关于 灭活疫苗的相关研究中 等研究发现免疫活疫苗组攻毒后感染支原体的比例为(/)免疫灭活疫苗组攻毒后感染支原体的比例为 (/)无论灭活疫苗还是活疫苗免疫都不能控制 在鸡场内的水平传播目前已经证实 灭活疫苗能部分阻止鸡只出现临床症状 丁美娟等使用 株对鸡只进行爪垫注射攻毒不治疗的情况下(/)鸡只出现爪垫肿胀 灭活疫苗免疫后仍有(/)的鸡只出现爪垫肿胀 青岛易邦生物工程有限公司的马爽等使用 /的 株进行爪垫攻毒免疫鸡攻毒后(/)获得保护对照未免疫鸡攻毒后(/)发病 本试验使用 /菌株爪垫攻毒建立了 鸡 致病模型鸡只爪垫肿胀率为 本试验与上述两者的研究相比存在两点不同:第一攻毒菌株不同 各实验室保存的菌株毒力存在差异 本实验室通过多株 菌株注射爪垫攻毒发现 田间流行株存在不同毒力型包括低毒力型和强毒力型 本试验中使用的 个菌株毒力相对较强而 是其中毒力最强的菌株 因此建立科学的 致病模型需要进行严谨的不同分离流行菌株的毒力测试第二攻毒剂量不同 本试验的攻毒剂量较低可能与毒株毒力相关 笔者曾将 的攻毒剂量提高至 /发现几种市售疫苗保护率均很低甚至为 本试验选择 种市售灭活疫苗通过攻毒后的临床病变评分和爪垫肿胀鸡只比例 个指标综合评价其免疫效果结果显示与不免疫攻毒对照组相 期尹丽萍等:鸡滑液囊支原体致病模型建立与灭活疫苗免疫效果评价比 种疫苗都对 菌株存在一定的保护但不能达到完全保护 该结果提示各养殖场应降低环境中的病毒载量在评价 疫苗时一定要选择流行的致病株和合适的剂量开展攻毒保护试验参考文献:():()(/)():王昆 禽滑液囊支原体灭活疫苗的初步研究 兰州:甘肃农业大学 朱晓玮 鸡滑液囊支原体灭活疫苗(株)生产工艺探索 南京:南京农业大学 杨铜王莉戎双琳等 黄羽肉鸡滑液囊支原体的分离鉴定及致病性研究 中国禽业导刊():():/.:():丁美娟周勇岐张小飞等 鸡滑液囊支原体病药物治疗与疫苗免疫及两种方法联合比较试验 中国家禽():马爽范根成孙健等 一种鸡滑液囊支原体: