盐胁迫对露水草生理和有效成分含量的影响论文--本科毕业论文.doc

2015年度本科生毕业论文（设计）盐胁迫对露水草生理和有效成分含量的影响院 系：生命科学与技术学院 专 业：生物技术 年 级：2011 学生姓名：李春花 学 号：201101130277 导师及职称：陶宏征（讲师） 2015年4月2015 Annual Graduation Thesis (Project) of the College Undergraduate TheEffectonThePhysicsandProportion ofCyanotis arachnoidea bySalt Stress Department: College of Life Science and TechnologyMajor: BiotechnologyGrade: 2011Students Name: Li Chun-Hua Student No.: 201101130277Tutor: Lecturer Tao Hong-Zheng April, 2015毕业论文（设计）原创性声明本人所呈交的毕业论文（设计）是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文（设计）不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本论文（设计）的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确说明并表示谢意。 作者签名： 日期： 毕业论文（设计）授权使用说明本论文（设计）作者完全了解红河学院有关保留、使用毕业论文（设计）的规定，学校有权保留论文（设计）并向相关部门送交论文（设计）的电子版和纸质版。有权将论文（设计）用于非赢利目的的少量复制并允许论文（设计）进入学校图书馆被查阅。学校可以公布论文（设计）的全部或部分内容。保密的论文（设计）在解密后适用本规定。 作者签名： 指导教师签名：日期： 日期： 毕业论文（设计）答辩委员会(答辩小组)成员名单姓名职称单位备注 红河学院本科毕业论文 (设计)摘 要本研究利用不同浓度的中性盐溶液处理露水草幼苗，并测定在不同浓度的盐胁迫下露水草的各项生理指标和次生代谢产物含量的变化，从而研究出最适合促进露水草次生代谢产物含量增加的盐浓度。结果表明：（1）随着盐浓度的逐渐递增，露水草叶片中相对电导率和丙二醛含量逐渐升高；（2）随着盐浓度的增加，露水草叶片中光合参数、光合色素含量逐渐减少；（3）随着盐浓度的增加，露水草全株植物中-蜕皮激素含量也随着增加。结论：盐胁迫抑制露水草的生长但促进-蜕皮激素产物积累。 关键词：盐胁迫；露水草；生理指标；-蜕皮激素 ABSTRACTIn this study, by using different concentrations of neutral salt solution treated Cyanotis arachnoidea seedling, and measuring the change of Cyanotis arachnoidea in physiological indicators and secondary metabolite at different concentrations of salt stress, thus study Cyanotis arachnoidea best suited to promote secondary metabolites were increased salt concentration. The results show that: (1) With the gradually increasing salt concentration, Cyanotis arachnoidea leaves relatively relative electric conductivity and MDA content also increased; (2) With the increase of salt concentration, Cyanotis arachnoidea leaves photosynthetic parameters, photosynthetic pigment content gradually reduced; (3) with the increase of salt concentration, the whole Cyanotis arachnoidea -ecdysone content also increases. Conclusion: salt stress inhibited Cyanotis arachnoidea growth but promote - ecdysone product accumulation.Key words: salt stress; Cyanotis arachnoidea; physiological indicators; -ecdysone 目 录 1.前言11.1露水草的研究现状11.2盐胁迫的研究现状12.材料与方法32.1实验材料，仪器及试剂32.2实验方法33.结果与分析63.1盐胁迫对露水草光合参数的影响63.2盐胁迫对露水草的光合色素影响93.3盐胁迫对露水草的相对电导率影响93.4盐胁迫对露水草中丙二醛含量的影响103.5盐胁迫对露水草的蜕皮激素含量的影响114.讨论134.1盐胁迫对露水草光合参数的影响134.2盐胁迫对露水草的光合色素影响134.3盐胁迫对露水草的相对电导率影响134.4盐胁迫对露水草中丙二醛含量的影响134.5盐胁迫对露水草的次生代谢产物蜕皮激素含量的影响135.结论14参考文献15致 谢17151.前言1.1 露水草的研究现状 露水草(Cyanotis arachnoidea)别名珍珠露水草，属鸭跖草科蓝耳草属植物1，多年生草本，多生于海拔11002700m的亚热带山地草丛中、向阳缓坡针阔叶疏林下、草地、山野路边等处。云南除滇东北与滇西北的高寒山区外，全省大部分地区均有分布2，在红河州石屏县有大面积人工种植3，石屏露水草的加工利用是红河州“十一五”期间重点建设的项目之一。露水草性温，味辛、微苦。露水草中次生代谢产物蜕皮激素是一种具有多种药理作用的甾醇类化学物质，主要作用有：(1）对合成核酸和蛋白质具有促进作用；（2）可以影响糖代谢，有可能成为一种新型的胰岛素增敏剂；（3）对脂类代谢有促进作用；（4）有益于尿素平衡，可保护肾脏功能；（5）对心律不齐有疗效；（6）对淋巴系统有效应，可调节免疫；（7）具抗氧化作用；（8）对脑梗死脑缺血有疗效，可改善脑功能障碍；（9）可使内皮细胞免受损伤；（10）对表皮细胞分化有促进作用等4 。蜕皮激素首次发现是在1954年，Butenandt A和Karlson P从桑蚕蛹中分离鉴定出-蜕皮激素，之后又分离得到生物活性更强的-蜕皮激素。1966年，Nakanishi K等首次从白日青中分离得到植物蜕皮激素，随后，又有更多的植物分离出了-蜕皮激素，并且发现在植物中蜕皮激素含量与昆虫或节肢动物相比高多许多，尤其是在露水草中，蜕皮激素的含量非常高，是现所知含-蜕皮激素最高的植物之一5-6，全草-蜕皮激素含量占其干重的1.2%，地下部分则达到2.9 %7，所以露水草具有较高开发利用价值。1976年在露水草中提取出高含量次生代谢产物蜕皮激素，并被认为露水草的药用价值主要是蜕皮激素的效用8。传统药用价值主要体现为祛风活络，利湿消肿，退虚热。用于风湿性关节炎，四肢麻木，腰腿痛，肾炎水肿，虚热不退。外用于脚癣、湿疹，刀伤等。虽然露水草是一种具有非常高开发价值的中药材，但是通过查阅发现相关研究文献较少，并且集中于对其化学成分的分析如何提高其有效成分含量的研究较少。1.2 盐胁迫的研究现状 由于农业上化肥使用不当，工厂污水随意排放，气候干旱，管理不完善等诸多因素，造成全球大部分地区土地盐碱化越来越严重。当前，全球盐碱地积已达9.5108 hm29。中国盐渍土总面积约 1108 hm2，其中现代盐渍化土壤约037108 hm2， 残余盐渍化土壤约 0.45108 hm2，潜在盐渍化土壤约 0.17108 hm210。中国的盐渍化土壤主要分布在东北、华北和西北地区。土壤盐渍化是现代农业所面临的主要问题之一，盐分胁迫影响着植物产量、蛋白质合成和光合作用以及能量代谢11。土壤盐碱化将会影响土壤板结且肥力下降，另外不利于农作物吸收养分，阻碍作物生长。盐胁迫对植物生长发育最普遍和最显著的效应就是抑制生长，表现为植株矮小和产量降低12。胁迫对植物的生理及次生代谢产物主要有三方面效应，有增效效应，负效效应，完全抑制效应。在一定盐浓度下盐胁迫可促进植物次生代谢产物含量增加，次生代谢产物(Secondary metabolites)是由次生代谢产生的一类并非植物生长发育所必需的小分子有机化合物。次生代谢产物在植物体内的合成和积累是在植物具有相关基因的基础上，一定的环境条件诱导作用的结果，生境条件变化将引起植株次生代谢产物含量变化。目前国外对于环境条件对植株体内次生代谢产物形成和积累的诱导作用机制有很多不同的认识，提出了多个不同假说来解释不同环境条件下植物次生代谢的变化。其中碳素/营养平衡假说、生长/分化平衡假说和资源获得假说13都认为环境胁迫条件下，植株生长下降，但次生代谢产物含量增加；而在良好环境条件下，植株生长快，次生代谢产物含量低。因此，环境胁迫有利于或促进药用植物次生代谢有效成分的积累。黄璐琦等还提出道地药材形成“逆境效应理论”14，作为中药材“道地性”科学解释。盐胁迫是影响植物生长和产量提高的重要限制因子，因为盐胁迫降低了环境的渗透势而导致植物细胞失水，产生渗透胁迫，从而迫使植物在其自身范围内进行相应的渗透调节。植物对盐胁迫的反应涉及到生理、生化、细胞等多方面的变化，目的是在高渗透压的外界环境中仍然保持水分平衡及正常的光合活性，对盐胁迫产生耐受。虽然在植物的生长发育过程中，盐胁迫会造成植物发育迟缓，抑制植物组织和器官的生长和分化，使植物的发育进程提前，但是对于药用植物的有效成分含量增加却具有一定的促进作用。陈光登等15发现，在一定的盐胁迫下，淫羊藿根、叶和箭叶淫羊藿根、茎、叶均呈现在低浓度范围内总黄酮含量增加。韩立敏等16发现盐胁迫处理促进了丹参无菌苗中丹参素含量的影响。但未见盐胁迫对露水草有效成分含量的相关研究。2.材料与方法2.1 实验材料，仪器及试剂 2.1.1 实验材料材料：露水草种子购于葆元种业。2.1.2 实验仪器 Li-6400XT便携式光合仪、高速离心机（LGI10_2.4A）、恒温水浴锅（常州国华电子有限公，HH-4）、紫外分光光度计(T6新世纪)、可见分光光度计(上海菁华科技仪器有限公司)、电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司)、电热恒温鼓风干燥箱(DHG-9246A型)、恒温摇床（上海一恒科技有限公司）、电导仪、数显超声波仪、移液枪、烧杯、量筒、容量瓶、玻璃棒、研钵、离心管15ml、试管、试管架。2.1.3 实验试剂与耗材N,N-二甲基甲酰胺（DMF）、10%三氯乙酸（TCA）溶液、0.6% 硫代巴比妥酸（TBA）溶液、中性盐、无水乙醇、- 蜕皮激素、吸水纸、营养袋。2.2 实验方法2.2.1 实验材料预处理露水草种子浸泡12h后播种到大营养袋里，每隔1d浇一次水，当露水草幼苗叶长长至7cm时，进行移栽，移栽时挑选大小一致的幼苗，每个小花盆内移栽5棵，10d后进行盐胁迫处理，盐胁迫选用中性盐氯化钠，浓度设置为0、50、70、90、120mmolL-1，每个浓度处理5盆，每隔1d浇一次处理液，每盆每次浇100ml，处理10d后测定露水草光合参数、光合色素、丙二醛、相对电导率和蜕皮激素含量。2.2.2 各项实验指标的测定2.2.2.1 光合参数的测定实验前准备：选择晴朗的天气，测定时间为上午8:30-11:30；实验前一天将仪器充满电，检查仪器的吸收管，调试好仪器；实验前一天用湿毛巾擦去苗上的灰尘；实验当天将要测定的实验材料提前半小时放到光下进行充分光适应。实验步骤：仪器安装；开机与校正；参数设置及测定（饱和光强设为1000molm-2s-1，饱和二氧化碳设为500ppm），当光合速率稳定且胞间二氧化碳大于零时可以保存此次记录，测定完一个数据时剪下测定部位的叶面积，并坐标纸上画上叶面积；数据存取。2.2.2.2 光合色素的测定光合色素提取：将待测叶剪下并称取0.5g鲜重剪碎放入研钵中再加入5mlN,N-二甲基甲酰胺进行迅速研磨，研磨后至于离心管中，匀浆以4000rmin-1离心10min，其上清液即为光合色素提取液。光合色素测定：将光合色素提取液（对照组用N，N-二甲基甲酰胺）于波长664nm、647nm、480nm下测定OD值。色素浓度按以下公式计算(位为mgL-1):Chla=12A664-3.11A647 （1）Chlb=20.78A647-4.88A667 （2）Chl=Chla+Chlb （3）Car=(1000A480-1.12Chla-34.07Chlb)/245 （4） 样品色素含量（mgg-1FW-1）=色素浓度提取液体积样品鲜重 （5） 2.2.2.3 相对电导率的测定先用蒸馏水清洗带塞子的玻璃试管2次，再用去离子水浸泡过夜，最后倒置晾干。选取生长环境一致的材料，先用自来水冲洗干净，再用去离子水冲洗3次，用吸水纸吸去多余的水分。然后用剪刀剪下（由于叶片太窄了不容易用打孔器打）叶面积大小差不多一致的叶片，放入干净的玻璃试管中，加入10ml去离子水后将试管置于摇床上摇1h，测定电导率之前试管充分摇匀后用电导仪测定其初始电导值（S1）。测完各试管加塞，用保鲜膜封好试管口，置于沸水浴30min，彻底杀死植物组织，取出试管用自来水冷却至室温，并在室温下平衡10min摇匀，测其终电导率（S2），实验过程用去离子水做空白对照。测定过程中避免口中呼出的CO2进入试管，影响测定结果，此外，温度对溶液的电导率影响较大，必须在相同温度条件测定电导率。计算：相对电导率（%）=（S1-S0）/（S2-S0）100%。由于对照组也有少量电解质外渗，可按照下式计算由于盐胁迫而产生的外渗，称为伤害度（或伤害性外渗）。伤害度（%）=（Lt-Lck）/（1-Lck）100式中，Lt为处理叶片的相对电导度；Lck为对照叶片的相对电导度。2.2.2.4 丙二醛的测定丙二醛的提取：称0.5g露水草叶片，加入2mL10%TCA研磨及少量石英砂，研磨至匀浆，再加4mL10%TCA进一步研磨，匀浆置于离心管中，以4000rmin-1离心10min，其上清液即为丙二醛提取液。丙二醛的测定：取2ml丙二醛提取液（对照组加2mL蒸馏水），加1mL0.6%TBA，混合液在沸水浴中保温15min后，立即置于冰浴中冷却，然后离心10min，于波长532nm、450nm下测定OD值。按下列公式进行计算：丙二醛含量（mmolL-1）=6.4510-6A532-0.5610-6A450 （1）丙二醛含量（mgg-1FW-1）=（6.4510-6A532-0.5610-6A450）提取液体积72.05341000样品鲜重 （2）丙二醛含量（molg-1FW-1）=（6.4510-6A532-0.5610-6A450）提取液体积样品鲜重 （3）2.2.2.5 蜕皮激素测定标准曲线测量：精密称取-蜕皮激素对照品10mg，加10ml乙醇，配置为1mgml-1母液。用母液配制成浓度为0、0.005、0.010、0.015、0.020、0.025mgml-1，各浓度体积都配成10ml。蜕皮激素提取：将露水草苗连根拔出洗干净后在电热恒温鼓风干燥箱105下杀青20分钟，接着在65下烘干至恒定质量后研磨成粉，称取1.0g样品加入无水乙醇10ml，加2mg活性炭，浸泡并用超声波在50MHz下提取30min，10000rmin-1离心15min，取上清液，上清液继续离心，去上清液在242nm处测量吸光度，根据标准曲线回归方程计算样品液浓度。样品蜕皮激素含量（mgg-1DW-1）=样品液浓度（mgml-1）样品液体积（ml）样品干重（g）。3.结果与分析 用Q法对数据删除，数据采用SPSS13.0软件进行方差分析用SD进行多重比较，用origin软件进行作图。3.1 盐胁迫对露水草光合参数的影响 由表1可知，盐浓度为90molL-1时其净光合速率、蒸腾速率、气孔导度与对照组相比较变化更大，盐浓度为90molL-1时，实验组的净光合速率占对照组的35.6%，实验组的蒸腾速率占对照组的22.5%，实验组的气孔导度占对照组的15.8%，而对于胞间二氧化碳影响最大的盐浓度是120 mmolL-1在此浓度下实验组的胞间二氧化碳占对照组的12.9%。表1盐胁迫对露水草叶片光合参数的影响（1000umols-1m-2）(平均值SD，n=5)处理mmolL-1净光合速率蒸腾速率气孔导度胞间二氧化碳PnTrGsCi/（molm-2s-1）/（mmolm-2s-1）/（mmolm-2s-1）/（molmol-）CK0.3140.0590.2980.1490.0190.01028.59312.886500.2870.0840.2570.0840.0160.00831.0146.622700.1340.013*0.2300.0660.012+0.00332.5985.271900.1120.020*0.0670.007*0.0030.000*15.5605.164*1200.2330.010*0.1040.043*0.005.002*3.7021.555*由图15可知随着盐浓度的升高净光合速率、蒸腾速率、气孔导度、水分利用率都在先下降后升高，而胞间二氧化碳则先升高后降低，盐浓度为50mmolL-1时这五个指标与对照组相比较时没有显著差异，盐浓度为70 mmolL-1时，只有净光合速率与对照比较时有显著差异，盐浓度为90、120 molL-1时，净光合速率、蒸腾速率、气孔导度、胞间二氧化碳分别与对照组比较时，都表现出显著差异。盐浓度为70 mmolL-1时，水分利用最低，但与实验组比较时不存在显著差异。图1. 盐胁迫对露水草净光合速率的影响注：* 0.01P0.05，* P0.01 图2. 盐胁迫对露水草蒸腾速率的影响 图3. 盐胁迫对露水草气孔导度的影响 图4. 盐胁迫对露水草中胞间二氧化的影响 图5.盐胁迫对露水草水分利用率的影响3.2 盐胁迫对露水草的光合色素影响从表2可知对于叶绿素a盐浓度为90 mmolL-1时实验组与对照组比较时差异最大，且实验组的叶绿素a占对照组的43.5%，对于叶绿素b盐浓度为120 mmolL-1时实验组的与对照组比较时差异最大，且实验组的叶绿素b占对照组的372%，对于叶绿素a+叶绿素b盐浓度为90 mmolL-1时影响最大，且实验组的叶绿素a+叶绿素b占对照组的45.7%，对于类胡萝卜素盐浓度为120 mmolL-1时影响最大，且实验组的类胡萝卜素占对照组的57.1%。表2盐胁迫对露水草的光合色素影响(mg/gFW) (平均值SD，n=5)处理浓度(mmolL-1)叶绿素a叶绿素b叶绿素a+叶绿素b类胡萝卜素(mgg-1FW-1)(mgg-1FW-1)(mgg-1FW-1)(mgg-1FW-1)CK0.0620.0020.0430.0100.1050.0110.0280.001500.0480.003*0.0390.0000.0870.004*0.0250.001*700.0350.004*0.0340.0050.0690.009*0.0210.001*900.0270.007*0.0210.012*0.0480.006*0.0200.001*1200.0380.005*0.0160.006*0.0540.006*0.0160.003*由图6可知，随着盐浓度的升高叶绿素a、总叶绿素含量先逐渐降低后稍微升高，叶绿素b、类胡萝卜素含量都在逐渐降低，但各实验组中叶绿素a、总叶绿素、叶绿素b、类胡萝卜素与对照组比较时都存在显著差异。叶绿素a/b，类胡萝卜素/总叶绿素比值与对照组比较时都不存在显著差异。图6. 盐胁迫对露水草的光合色素影响3.3 盐胁迫对露水草的相对电导率影响由表3可知，随着盐浓度的升高，对露水草的伤害度也在逐渐增大。由图7可知随着盐浓度的增加，相对电导率也在逐渐增加，但是盐浓度在50nmolL-1，70 nmolL-1时实验组与对照组的相对电导率不存在差异显著，盐浓度为90nmolL-1，120 nmolL-1时实验组与对照组存在差异显著。表3盐胁迫对露水草的相对电导率素影响(%) (平均值SD，n=5)处理(mmolL-1)相对电导率（%）伤害度（%）CK0.4180.004500.4160.0110.865700.4170.0436.574900.468+0.015*10.5541200.6090.021*35.986图7. 盐胁迫对露水草叶片中相对电导率影3.4 盐胁迫对露水草中丙二醛含量的影响由表4可知，随着盐浓度的升高，丙二醛的相对增加量也在不断升高，且盐浓度为120 mmolL-1时相对增加量最高。处理(mmolL-1)丙二醛含量(umolg-1)相对增加量(%)CK0.0210.002500.0430.001*91.304700.0430.004*104.348900.0470.001*108.6961200.0570.001*152.174表4盐胁迫对露水草中丙二醛含量影响(%) (平均值SD，n=5)由图8可知，随着盐浓度的升高，露水草中丙二醛含量也在逐渐增加，且各实验组与对照组都存在显著差异，但是盐浓度为50、70、90mmolL-1时它们之间的丙二醛含量变化不明显。图8. 盐胁迫对露水草中丙二醛含量的影响3.5 盐胁迫对露水草的蜕皮激素含量的影响表5为不同浓度蜕皮激素的A242值，随着浓度的升高A242值在增加，根据表5绘制出图9关于蜕皮激素的标准曲线。表5标准曲线的绘制蜕皮激素浓度(mgml-1)A242000.0050.1070.010.2150.0150.3280.020.4490.0250.569图9.标准曲线由图10可知随着盐浓度的升高，露水草中蜕皮激素含量也在升高，且各实验组与对照组都存在显著差异。图10.胁迫对露水草中蜕皮激素含量影响4.讨论 4.1 盐胁迫对露水草光合参数的影响由于盐胁迫破坏了土壤里Na+，Cl-的平衡，使土壤里Na+，Cl-浓度升高，导致植物失水变黄，植物也会在自身调节从而减少水分丧失，如降低蒸腾速率，而降低蒸腾速率就要气孔关闭，气孔关闭会导致胞间二氧化碳首先增加但是气孔关闭时间长了，胞间二氧化碳将会逐渐消耗而减少，由于叶绿素含量降低从而导致光合速率降低。由于水分利用率是用光合速率和蒸腾速率之比来表示，所以光合速率减小导致水分利用率减小。说明一定浓度的盐胁迫会使露水草光合参数受抑制。4.2 盐胁迫对露水草的光合色素影响叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素都可以吸收光能，但只有少部分处于激发状态的叶绿素a将光能转化为电能。类胡萝卜素的作用是保护植物细胞免受氧化，叶绿素a/b的比值表示植物光合磷酸化。叶绿体是叶肉细胞中对盐胁迫最敏感的器官。在良好的生长环境中高等植物叶绿体具有结构完整、层次清晰、排列整齐等特点，但在高温17和盐胁迫18下，植物叶绿素含量降低是由于植物细胞中色素系统遭到破坏所导致的。NaCl作用下叶绿素被分解，叶绿体的发育受到影响，这是由于NaCl促进叶绿素霉的活性19。所以盐胁迫促使露水草光合色素含量降低。4.3 盐胁迫对露水草的相对电导率影响电导率是指酸、碱、盐电解质溶于水后分离出离子，使溶液具有导电的能力。检测植物中电解质含量的多少可以衡量植物的生长状态，由于植物在盐胁迫下破坏了植物内部的电解质平衡，使植物释放了大量的有机物质从而使离子浓度提高导致用电导仪测量时相对电导率随着处理盐浓度的增加而升高，伤害度是根据相对电导率计算得到的，相对电导率越高对植物伤害度越大。所以盐胁迫促进露水草相对电导率增加。4.4 盐胁迫对露水草中丙二醛含量的影响植物器官在衰老或者是在逆境条件下，会发生膜质过氧化作用而产生丙二醛，因此，本实验用丙二醛作为膜质过氧化指标，表示膜质过氧化程度，因而丙二醛的含量随着处理盐浓度的增加而逐渐增加。 4.5 盐胁迫对露水草的次生代谢产物蜕皮激素含量的影响由于优越环境会使植物徒长，消耗了植物积累的代谢，而不利于植物积累代谢产物。研究表明，植物在耐旱性、 抗寒性和耐盐性环境条件下对植物次生代谢产物的合成与积累具有重要作用20，合成植物次生代谢产物的种类及数量是根据所处的环境条件及其变化来决定 21。实验结果中盐胁迫促使蜕皮激素含量增加是正确的。5.结论 本实验研究盐胁迫对露水草生理和有效成分含量的影响。实验结果表明：（1）盐胁迫抑制露水草的生长；（2）随着盐浓度的升高光合参数、光合色素逐渐降低，即盐胁迫抑制光合作用抑制色素合成；（3）随着处理液盐浓度的增加，相对电导率，丙二醛含量逐渐增加，可知盐浓度越高对植物伤害越大；（4）随着处理液中盐浓度的增加露水草中蜕皮激素含量也在增加，且实验组与对照组存在显著差异，因此逆境可以促进露水草中蜕皮激素含量的积累。 红河学院本科毕业论文 (设计)参考文献 1 李美存,谭雁鸿.野生露水草人工栽培技术J.云南农业科技,2007,(4):40-42.2 李开金.露水草种苗繁育及栽培技术研究J.云南中医中药杂志,2009, 30(10): 32-33.3 朱银华,张萃良,李银焕.石屏县野生露水草生产现状及发展对策J.产业与科技论坛,2007,6(10):61-634 赵一璐,邢朝云,陈晶磊,等.植物蜕皮激素药理活性研究进展J.抗感染药学, 2010,7(3):147-1525 谭成玉,孔亮,李铣,等.云南露水草中的一种新植物甾酮的分离与分析J.色谱,2011,29(9):937-941.6 卜跃华,张晓笛,国无双.HPLC法测定露水草胶囊中蜕皮甾酮J.中成药,2013, 35(10):2301-2302.7 牟兰,杨生超,关德军,等.露水草-蜕皮激素含量积累规律与最佳采收期研究J.云南农业大学学报,2011,26(2):194-198,204.8 蒲崇德.露水草的栽培与利用J.中国野生植物,1992,2(19).9 彭程.盐胁迫对植物的影响及植物耐盐研究进展J.山东商业技术学院学院,2014,14(2):123-126.10 吕贻忠,李保国.土壤学M.北京:中国农业出版社,2006:356357.11 王东明,贾媛,崔继哲.盐胁迫对植物的影响及植物盐适应性研究进展J.中国农学通报,2009,25(04):124-128.12 王宝山.逆境植物生物学M.北京:高等教育出版社,2010.13 苏文华,张光飞,李秀华,欧晓昆.植物药材次生代谢产物的积累与环境的关系J.中草药,2005,36(9):1415-1418.14 黄璐琦,郭兰萍.环境胁迫下次生代谢产物的积累及道地药材的形成J.中国中药杂志,2007,32(4) :277-280.15 陈光登,黎云祥,张浩,等.盐胁迫对两种淫羊藿属植物生长及各器官总黄酮含量的影响J.西北植物学报,2008,28(10):2047-2054.16 韩立敏,俞嘉宁,魏新丽,王喆之.干旱、盐胁迫处理对丹参无菌苗中丹参素含量的影响J.中国中药杂志,2008,33(10):1211-1213.17 金兰.盐胁迫对苜蓿叶绿体SOD同工酶的影响J.青海师范大学学报:自然科学版,2002(2):54-55,58.18 姜义宝,王成章,李德峰,等.高温胁迫下苜蓿抗氧化系统及叶绿素含量对草酸的响应J.草业科学,2008,25(2):55-59.19 吕艳伟,何文慧,陈雨鸥,等.盐胁迫对小麦幼苗光合色素含量和细胞膜的影响J.江苏农业科学,2013,41(6):74-76.20 苏文华,张光飞,李秀华,等.植物药材次生代谢产物的积累与环境的关系 J .中草药,2005,36( 9) :14151418.21 段飞,杨建雄,周西坤,等.逆境胁迫对菘蓝幼苗中靛玉红含量的影响J.干旱地区农业研究,2006,24(3):111.致 谢本研究及学位论文是在我的导师陶宏征老师的亲切关怀和悉心指导下完成的。从课题的选择到项目的最终完成，陶宏征老师都始终给予我细心的指导和不懈的支持。一年多来， 陶宏征老师不仅在学业上给我以精心指导，同时还在思想、生活上给我以无微不至的关怀。感谢我的导师陶宏征老师，这片论文的每个实验细节和每个数据，都离不开你的细心指导，感谢陶老师在忙碌的教学工作中挤出时间来审查、修改我的论文。还有教过我的所有老师们，你们严谨细致、一丝不苟的作风一直是我工作、学习中的榜样；老师们循循善诱的教导和不拘一格的思路给予我无尽的启迪在此谨向所有教过我的老师致以诚挚的谢意和崇高的敬意。我还要感谢在一起愉快的度过毕业论文小组的同学们，正是由于你们的帮助和支持，我才能克服一个一个的困难和疑惑，直至论文的顺利完成。另外，要感谢实验室的管理老师，为我们的实验供了条件。感谢我的室友们，从遥远的家来到这个陌生的城市里，是你们和我共同维系着彼此之间兄弟般的感情，维系着寝室那份家的融洽。感谢我的父母含辛茹苦的培养我长大，感谢父母的关心我的生活学业。在此我向你们表示最衷心的感谢。最后，我要向百忙之中抽时间对本文进行审阅，评议和参与本人论文答辩的各位老师表示感谢！ 2015年4月17