DB22∕T 2389-2015 水稻对稻瘟病抗性鉴定技术规程.pdf

ICS 65.020.01 B 05 备案号：48404-2016 DB22 吉林省地方标准 DB 22/T 23892015 水稻对稻瘟病抗性鉴定技术规程 Technique specification for identification of rice blast disease resistance 2015 - 12 - 15 发布 2016 - 01 - 25 实施吉林省质量技术监督局 发 布 本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印DB22/T 23892015 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由吉林省农业委员会提出并归口。 本标准起草单位：吉林省农业科学院。 本标准主要起草人: 任金平、刘晓梅、姜兆远、李莉、张金花、李淑芳、孙辉、王琳、高鹏、郑建波、吴宪。 本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印DB22/T 23892015 1 水稻对稻瘟病抗性鉴定技术规程 1 范围 本标准规定了水稻抗稻瘟病鉴定接种体准备、鉴定方法、抗性评价与副产物处理。 本标准适用于水稻种质资源及水稻品种（系）对稻瘟病抗性的鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 1300 农作物品种区域试验技术规范 水稻 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 接种体 inoculum 用于人工接种鉴定用的稻瘟病菌( Pyricularia grisea )分生孢子悬浮液，其孢子浓度约为2105 个/ml。 3.2 苗瘟 blast of seedling 水稻3叶4叶期发生的稻瘟病。 3.3 参鉴材料 tested cultivars 包括水稻种质资源、品种（系）。 3.4 对照材料 control cultivars 抗性为感病的蒙古稻。 3.5 喷雾接种 spray inoculation 苗期鉴定时，用与空气压缩机（0.8 Mpa）链接的猴头喷雾器将接种体喷洒于稻苗上，喷雾量为 300 ml/m2。 3.6 产孢培养基 sporulated medium 燕麦片30 g、西红柿汁200 ml、琼脂20 g、蒸馏水1000 ml。 3.7 自然诱发鉴定 identification by natural induction 在自然条件下利用感病品种诱发的鉴定方法。 本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印DB22/T 23892015 2 3.8 叶瘟 leaf blast 水稻移栽后叶片上发生的稻瘟病。 3.9 穗瘟 panicle blast 水稻抽穗后穗颈和枝梗上发生的稻瘟病。 3.10 病圃 disease nursery 在稻瘟病易发区设立具有代表性的诱发水稻叶瘟和穗瘟的鉴定圃。 4 接种体准备 4.1 病原标样采集与保存 采集省内各地区田间具有典型稻瘟病症状的穗颈，去掉多余枝梗及籽粒保留穗颈长度5 cm，阴干后阴凉干燥处保存。 4.2 病原物分离 将穗颈浸泡4 h后放在铺有无菌滤纸的培养皿内， 于27 温箱保湿培养24 h， 孢子达到透明状态时，采用震落法震落在水琼脂培养基上，然后挑取单孢至PDA培养基上培养。 4.3 菌种保存 将有致病性的纯培养物接种到灭菌的稻节上，置于干燥器内室温保存。 4.4 生理小种鉴定与编号 应按全国统一的生理小种鉴别方法进行病原菌生理小种鉴定并编号。 4.5 接种体悬浮液的制备 选择10 个优势小种菌株，27 条件下在PDA培养基上培养7 d后，移至产孢培养基上，再培养5 d 7 d，无菌条件下洗去表面菌丝进行12 h光暗培养3 天，用无菌水洗涤稀释至孢子终浓度2105 个/ml。 5 鉴定方法 5.1 苗瘟鉴定 5.1.1 鉴定设计 将试验材料直接穴播于盛有肥沃土壤的育苗盘（60 cm30 cm）内，每盘60 穴，每份材料播一穴，每穴10 粒种子，每盘设对照材料1 份。一叶一心期和接菌前各施一次氮肥，每平方米施硫酸铵30 g。试验设3 次重复。 5.1.2 接种时间和方法 在水稻3 叶4 叶期进行喷雾接种。 每平方米接种孢子液300 ml， 接种后于26 28 的温室内，黑暗保湿(RH95%)16 h后移去遮光物，保湿控温管理。 本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印DB22/T 23892015 3 5.1.3 调查时间方法 水稻接种后7 d8 d当对照材料发病达7级或以上时进行调查，每份材料逐株逐叶调查。 5.1.4 分级与记录 应按附录A表A.1分级，按附录B表B.1记录。 5.2 叶瘟和穗瘟鉴定 5.2.1 病圃选择 选择常年易发生重病田块设为病圃，每份材料每次重复的病圃面积不少于1 m2 。 5.2.2 病圃试验设计 每份材料移栽3 行，行长1 m，行距为20 cm，每行7 穴，每穴3 株，按顺序排列，区行垂直两端栽诱发。品种蒙古稻2行作为诱发行，株行距与参鉴品种相同。其余应按NY/T 1300的规定执行。 5.2.3 病圃管理 病圃施肥量高于当地生产田10%，其余应按NY/T 1300的规定执行。 5.2.4 调查时间和方法 5.2.4.1 叶瘟 在水稻孕穗期（7月下旬）对参鉴材料进行逐株逐叶调查，1周后复查1次。 5.2.4.2 穗瘟 在水稻黄熟期（9月上中旬）对每份参鉴材料进行调查，连续实查100 穗，1 周后复查1 次，记载每穗的发病情况、总穗数、病穗数，计算病穗率。 5.2.5 分级与记录 5.2.5.1 叶瘟 应按附录A表A.1分级，按附录B表B.2记录。 5.2.5.2 穗瘟 穗瘟发病率与分级的关系见附录A表A.2，应按附录B表B.3记录。 6 抗性评价 6.1 评价原则 依据苗瘟、叶瘟、穗瘟的调查数据，以最高数值作为参鉴材料的抗性级别，在中抗到高感的评价区间，当同级别数值在各个点次出现频率低于25%时，抗性评价上调一个级别，作为参鉴材料的苗瘟、叶瘟和穗瘟的最终级别。 6.2 评价标准 本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印DB22/T 23892015 4 稻瘟病抗性评价分级标准见附录A表A.1、表A.2，将参鉴材料划分为高抗（HR）、抗(R)、中抗(MR)、中感(MS)、感(S)、高感(HS)6个类型。 6.3 抗性记录 按附录B表B.4记录。 7 副产物处理 7.1 接种体 将接种后剩余的接种体集中灭菌处理。 7.2 病株 将发病稻株深埋或焚烧。 本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印DB22/T 23892015 5 附 录 A （规范性附录） 水稻稻瘟病分级标准 水稻苗叶瘟调查分级见表A.1。 表A.1 水稻苗叶瘟调查分级标准 病 级 病 情 抗性评价0 无病。 高抗 1 针头状大小褐点 2 褐点较大，直径小于 1 mm 抗 3 圆形至椭圆形的灰色病斑，边缘褐色，直径 1 mm2 mm 中抗 4 典型纺锤形病斑， 长 1 cm2 cm， 通常局限在两叶脉之间， 病斑面积小于叶面积的 2.0% 5 典型纺锤形病斑，病斑面积占叶面积的 3.0%10.0% 中感 6 典型纺锤形病斑，病斑面积占叶面积的 11.0%25.0% 7 典型纺锤形病斑，病斑面积占叶面积的 26.0%50.0% 感 8 典型纺锤形病斑，病斑面积占叶面积的 51.0%75.0% 9 全叶枯死 高感 水稻穗瘟发病率群体抗性分级见表A.2。 表A.2 水稻穗瘟发病率群体抗性分级标准 病 级 病穗率（d） 抗性评价 0 0 高抗 1 5.0% 抗 3 5.0%d10.0% 中抗 5 10.0%d25.0% 中感 7 25.0%d50.0% 感 9 50.0% 高感 本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印DB22/T 23892015 6 附 录 B （资料性附录） 水稻稻瘟病记录表 水稻苗瘟调查记录表见表B.1。 表 B.1 水稻苗瘟调查记录表 地点： 调查日期： 调查人： 分菌系 田间编号 品种名称 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 最高病级 1 2 水稻叶瘟调查记录表见表B.2。 表 B.2 水稻叶瘟调查记录表 地点： 调查日期： 调查人： 病级 最高病级 田间编号 品种名称 第一次 第二次 1 2 水稻穗瘟调查记录表见表B.3。 表 B.3 水稻穗瘟调查记录表 地点： 调查日期： 调查人： 田间编号 品种名称 调查总穗数 穗颈瘟数 枝梗瘟数 发病率/% 发病率级别 1 2 本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印DB22/T 23892015 7 水稻稻瘟病抗性鉴定结果表见表B.4。 表 B.4 水稻稻瘟病抗性鉴定结果表 地点： 调查日期： 调查人： 苗瘟 叶瘟 穗瘟 田间 编号 品种名称 病级 抗性 病级 抗性 发病率/%发病率级别 抗性 1 2 _ 本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印本标准仅供内部使用 不得翻印