DB61∕T 413-2007 饮料中D-苹果酸的测定—酶法(陕西省).pdf

DB61 陕西省地方标准DB61/T 413-20钉饮料中D一苹果酸的测定酶法2007-0弘03发布20009-03实施陕西省质量技术监督局发布阳IJ本辛苦准中的附录A为资料性附录。本标准由中华人员共新国接西出入境拴拴检疫局提古井归IJQ本栋准起草单位:中华人民共蒋国接器串入境检黯栓在窍。本各准起草:蒋宏乎在、欧宏、张春J、路茂盛。本标准系首次发布。DB611T 413-2007 DB61厅4132007饮料中D苹果霞的测定甲酶法菇圈本样准规定了酶法剿定饮料中D苹果酸兰的含握的方洁。本标准适刷了饮料中D-苹果酸含量制定。规范性引用文件干到文件中的条款通过本标准的引副市成).;本标准的条款。凡是注目期的引J+1文件，其回应所有的修改单(不包扭iWJl臭的声容或修订版均不适期于本标准，然剖，鼓励根据本缸准达成拚议的各方研究是否可使由这些文件的最新版本。凡是不注目期的引用文件，其最新版丰j道甩于本挥准。EN 12138:水果和蔬菜汁中?苹果酸含擎的酶测定2 转化D丰果酸盐税氢酶;堪础黯嘿岭按甘般 _.:踏破一黠嘿岭核节:酸氨器等活过嚣际单位，在250C的棕准条件F每分钟lU的爵活动成1mol的物景。吸光逻f宽物质的法度4荒乙基暖嗦乙磺酸、符号与缩陪读D-MDH NAD NADH U A C hepes 3 原理E一苹果酸(D立在果酸盐).在D苹果般盐腥氯蘸(D-MDH)存在的情况札通过NAD氧化变成革酌乙酸豆豆。革曹先乙酸主主立即出同样的鹊催化分解成丙醋酸盐辛11:-_:氧化藏。迁，在意gB昏牵来E忌。&t&EEZEke差事指gE雾海苦楚ZSE毒队队rgd整氢善巨Et-gbiFttsbzEIb黠箩丙醋酸盐+co二十NADH十日D-MDH, decarb D-苹果援盐+NAD NA凹的单播出?苹果酸盐的总量计算。陆剧的增撤出在334、340!&365nm条件:卡的眼光度值的平均数我得。试剂hep巳SNAD 5.2 D阳MDHNaCl KCl 4 5 5. 1 5.3 5.4 5.5 DB6刮1厅4剁13叩)5.6 Na句2HP04.-匀2臼205. 7 蘸蕾辅5.8日Cl5.9 NaOH 5.10 KOH 5. 11 重蒸7.15.12 也奇使用商品试荆盒6 设备6. 1 移;在枪(5mL、1 mL、50-200L10-50u 6. 2 t.n主:光径1.0cm6. 3 紫外分先光腹计，可变波长，在34侃m漠IJ定6. 4 折叠滤纸，孔径10m6. 5 离心扭6. 6 离心营、烧杯、在量瓶、移j夜枪配套滴头、藏璃梅等7 检jml步辍7.1 试剂配制7. 1. 1 hepes摆冲液在90mL重;在*中分别加入0.8g NaCl、O.037 g KCl、O. 0135 g NazHPO, 2H20、O.1 g葡萄梅、0.5 g hepes，充分洛解后，J.tj NaO过周内至7.05，定容空100mlo7.1.2 NAD工作;在:双L豆茶水洛解52.5rng干粉即为NAD工作壤，-15.C -号。它保存。7.1.3 D协MDH工作液，可0.6mL重蒸*溶解别的干粉即为D苹果般盐股氧鹊工作液，寸5C-一20.C保存。7.1.4到Cl2 mollL 7.1.5 NaO白2moVL7.1.6 KOH: 2moL 7.2 试样制衡7. 2. 1 光色或浅色果汁J+j KOH(用车在25rnl果汁前直至78，部主凉水稀料，使用1.000至1.800 mL法液进行检捕。7.2.2 浑法果汁样品过法浑汕样品，离告，版上靖液25时，户H KOH调整岗值至7-8，主日益恶本梅辛苦，使月J1. 000至1. 800 mL谑接进行检捕。7.2.3 含COz气体果汁样品白:去样品中的CO气体，添加NaOH1& KO页，调节pH7-8，并解育大约15分钟，吏J+j1. 000 1.800批流液进有检测。7. 3 检JI(按表l进行)7.3.1 设空告对照局!r句ega磊孬乐也94勇回应霉毡，348码等嗡磊总aeJDB61厅4132007瑕比色皿，假次却入1.000mLhepes缓冲液、O.100mL NAD工作滚、1.800 mL重蒸求，混合置6分钟后读取吸亮度假(Al)，再如入O.050 mL D-MD在工作液，待混合反服究成(大约20分钟)，卖瑕极光度量(A:.)，空自眼光度佳盏(A2-Al)恼。7.3.2 样品检到取比色盟，假次加入LOOOmL h叩es援;中靖、。.100mL NAD工作清、O.100 mL 式样液、1.700 mL 重茶水混合置6分钟岳读墩吸光度值(AI)，再加入0.05。她D-MDH工作攘，持海合反应完成大约20分钟)，读取吸先E蒙古董(A:.)，样品吸先度谊差=(A:.甲Al)样品。褒1检索IJ程序# 加入比色班的榕液空白对照样品检测hepes辍冲攘1.000mL 1.000mL NAD工作液0.100mL 0.100mL (、粹品精液 0.100mL 双蒸水1.800mL 1.700mL 滋合，大约6分钟启读取暖光度值(A1)也主引入以下溶被后开始反应。偏MDH工律接。王OmL0.05仇nL?fit-Jaj34113号字号混合，等持反应完成(大约20分钟)，读取空自和样品的吸光度值(A2)分别那样品与空白的圾亮度值差，用样品吸光度值差蜡去空白吸光度值差可以得到公式。): f:.A= (A2鹏A1)刷一(ArAJ)拙.(1)最后的吸先度值差应大子0.100，方能得黠最精确的结果。去!?-FrBfjfPFA计算8 摄据公式(2)计算法度:VXMW X L1AX f.,.(2) C叫、XdXV2Xl000 式中z要拉黯物质的战度glL要检削物质的摩尔后重髓。0-苹果酸声塞尔质嚷134.09glmol、妇苹果霞盐雕忽13207g/mol 这色服中测试搭载的总体积，单位是mLC MW 民由试样如备的样品榕液的总体棋，单位是mLV2 样品洛液的稀释音鼓f 比色肥的光程，单位是cmd NADP汩的消光系数:E 3 在340nm黑6.31 x mmor1 x cm-1 眼光度值整LlA DB61厅41320079 D-苹果酸检测时的质控试验9.1 D苹果酸质控溶液是个栋;性的口平果酸水溶淄9.2 原控的应用9.2. 1 添加踵控;在滚到反应体系中9.2.2 重新开始进行定量反应样品溶被反应结束，A2值己知，如。OSOmL的旗控;在加到拉蜒混合滚中，反应结束后(Omn)，搜撞上面的等式(A3-A2)计算浓度差，在该考患t立交黑体积华读暖先E支主人20可以表察冀吸光度量增力罚。9.2.3 商标质控可以作为民i棕，对正磷的实验过程进行监测，决定样品溶按中是否有杂璜于挠。表2最控i式路程序的溶液空样品标准样品+标准hepes援冲液1.000mL 1. OOOmL 1.000mL 1. OOOmL NAD工作被O. 100mL O. lOOmL O. 100mL O. 100mL 样品j容液O.100mL O.050mL l资控溶液O. 100mL O.050mL 1.800mL 1. 700mL 1. 700mL 1. 700mL 提合，大约6分钟盯读取眼光度筐(At)，按照7.3拉黯H和我1拴黯程序继结操悖。4 标准的收率可通过公式(3)进有计算J X L1A 11，1忏如嚼ML1A 11，捂L1A场x 100划. .川.黛. . . . 。B61丹、4132007附录A(资特性甜录注意事项KBE墨警备tz雪塾tgzEit，s兹在臼EEE事ZZE辈革够多主苔1、检测D尊果酸时用到的试剂无危害性，1.是必须遵街基本的实验窒规章制度e2、配制好的援冲液、费每荆冻干粉等应存于2它，-SOC0配制成的NAD工作撒在2C-8.C可稳定五周，或在150C玉皇250C条件下可保存三个月。雷己制成的D划DH工作模在20C8它可稳定3夭。建议对酶剂最好现用现配制。3飞冷藏的缓冲被使南前四温至室温后再使用。4、所有使用的试剂必须保证不含p苹果酸。5、如果黯董到吸光度值整偏小如0.100)，莫过样品搭液应寰薪处理，黯在7.3.2翻)中可加大样品的体积，减少量蒸7.k体裂，使样品军口空白洛液的最终体亭、柏碍。6、可通过回校率检割测试过程中的可能摸失。7、测试t也可使用德由等生产的商品试齐u盒，1旦操作前须仔细拥读有关提明书。5 8、各对照组成立的情况下方可判定结果。