DB13∕T 1095-2009 饲料用酶制剂中α-淀粉酶活力的测定 分光光度法(河北省).pdf

ICS 65.120 B 46 DB13 河北省地方标准DB 13fT 1095-2009 饲料用酶制剂中-淀粉酶活力的测定分光光度法2009-06-17发布2009-07-02实施河北省质量技术监督局发布DB 13fT 1095-2009 刚自本标准由河北省畜牧兽医局提出。本标准起草单位:河北省饲料产品质量监督检验站、闸北农业大学、河北省畜牧站。本标准主要起草人:武英利、王萍、赵国先、李海龙、霍韶瑜、李广东。1 范围饲料用酶制剂中一淀粉酶活力的测定一一分光光度法本标准规定了饲料用酶制剂中-淀粉酶活力的单位定义和测定方法。本标准适用于饲料用酶制剂中-淀粉酶活力的测定。2 规范性引用文件DB13/T 1095-2009 下列文件通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB!f 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法QB!f 1803一1993工业酶制剂通用试验方法3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1 -淀粉酶活力单位在60:、pH=6.0的条件下，1 h液化1g可溶性淀粉所需的酶的量，规定为一个酶活力单位。4原理-淀粉酶能将淀粉分子链中的-1.4葡萄糖昔键随机切断成长短不一的短链糊精、少量麦芽糖和葡萄糖，而使淀粉对腆呈蓝紫色的特异性反应逐渐消失，呈红棕色，其颜色消失的速度与酶活性有关，故可通过固定反应后的吸光度计算其酶活力。5 仪器和设备5.1 分析天平，感量为o.o1 g。5.2 研钵。5.3 容量瓶，50 mL, 100 mL。5.4 电炉，温度可调。5.5 恒温水陆锅，温控范围30:士0.1:-60:土0.1:。5.6 烧杯，250 mL、500mL。5.7 酸度汁，精度0.01。5.8 秒表。5.9 离心机，6o r/min (24ooXg)。5.10 移液器，精度10L。5.11 分光光度计。5.12 比色管，25 mL。6试荆DB 13/T 1095-2009 方法中所用试剂，除另有规定外均为分析纯试剂，所用水应符合GBrr6682-2008三级以上用水要求。6.1腆06.2 可溶性淀粉。6.3磷酸氢二锅(Na2HP04.12H20)0 6.4 拧撵酸(CJIS07.H20 )。7 溶液7.1 浓础渣称取腆llg、腆化饵22g，用少量水使完全榕解，然后用水定容至500mL，贮存于棕色瓶中。7.2 工作用融渡吸取浓腆液2.00mL，加腆化饵20g，用水洛解并定容至500mL，贮存于棕色瓶中，现用现配。7.3 可溶性淀粉溶渣，浓度20gIL 称取105Ct2t干燥至恒重的可榕性淀粉2.000g (精确至0.001g)，用少量水调成稀糊状，在搅动状态下缓缓加入70mL沸水，继续煮沸至榕液透明，冷却，转移并定容至100mL，此液现用现配。7.4 磷酸缓冲溶渡IpH6.0 称取磷酸氢二铀45.23g、拧攘酸8.07g，用水榕解定容至1000mL，调pH6.0o8 试样的选取和制备选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎至0.25mm，装入密封容器中，备用。9 分析步黯9.1 待那l酶液的制备9.1.1 称取试样12g (精确至O.02g)置研钵中，加少量磷酸缓冲榕液湿润，研磨3分钟，加15mL 磷酸缓冲榕液，tl昆匀，静置，将上层清液倾入100mL容量瓶中。9.1.2 沉渣部分继续研磨3分钟，加10mL磷酸缓冲痞液，混匀，静置，将上层清液倾入容量瓶中。9.1.3重复9.1.2操作至少3次将试样全部转移至容量瓶中用磷酸缓冲溶液定容至刻度，摇匀。9.1.4 量取9.1.3混悬溶液20mL, 6 000 r/min (2400Xg)离心10min，吸取上清液适量，用磷酸缓冲液稀释至酶活力3.7UlmL5.6 UlmL供试验用。9.2 测定9.2.1 准确量取淀粉榕液20.00mL置于25mL比色管中，准确加入磷酸缓冲溶液5.00mL，于温度60t、振摇速度100/分钟的水浴摇床中预热10mino 9.2.2 准确量取预先在温度60t、振摇速度100/分钟 的水浴摇床中预热10min的稀释酶液(9.1.4)1.00 mL加人9.2.1比色管中，置温度600C、振摇速度100/分钟的水洛摇床中反应5min (准确计时)。9.2.3 反应结束后立即准确量取反应液(9.2.2)1.00 mL加入装有5.00mL工作用腆液的25mL比色管中，摇匀，作为样品测试榕液。9.2.4 以工作用映液为空白对照，在660nm擅长处测定样品测试梅液的吸光度，根据测得的试样吸光度在QBrr1803-93附录A中查出对应的酶液浓度。9.3 结果计算与囊述9.3.1 结果计算-淀粉酶活力按(1)式进行计算:CxV x =一一一一一. . . . (1) M 2 式中:X一一酶活力，U倍。c-一从表中查出的试样溶液的酶活力，U!mL; v-一试样稀释总体积，mL;M-一试样质量，如9.3.2 结果表述DB13/T 1095-2009 每个样品应取2份平行样进行测定，以其算术平均值为分析结果，结果保留整数。10 重复性两平行测定结果的允许相对偏差不大于3.0%。3