结核病实验室诊断.ppt

结核病核病实验室室诊断断检 验 科科 任任 易易 1.1.结结核病背景核病背景核病背景核病背景资资料料料料 2.2.结结核病常核病常核病常核病常规检验规检验 3.3.结结核病核病核病核病实验实验室室室室诊诊断断断断 4.4.体外体外体外体外r-r-r-r-干干干干扰扰素素素素释释放放放放试验试验 5.5.小小小小 结结背景背景结核病流行核病流行现状状全球有三分之一人口（20亿）感染了结核杆菌我国现患肺结核病人达500万，占全球病人总数的1/4背景背景结核病感染、核病感染、传播、播、发病病过程程潜伏感染染肺病或其他疾病 潜伏感染复发 细菌在人体复制播散Disseminates发作Onset康复Recovery时间表Time诊断Diagnosis治疗Treatment痊愈2个月（months）背景背景当前当前结核病的研究核病的研究新型抗新型抗结核核药物物(50%)(50%)新型快速新型快速诊断技断技术(40%)(40%)新型新型结核疫苗核疫苗(10%)(10%)JID 2012:205(Suppl 2),S147.背景背景结核分枝杆菌基核分枝杆菌基础结核分枝杆菌（核分枝杆菌（M.tuberculosisM.tuberculosis）简称称为结核杆菌（核杆菌（tubercle tubercle bacillibacilli）。早在）。早在18821882年，德国年，德国细菌菌学家柯赫（学家柯赫（Robert KochRobert Koch）就已）就已证明明结核分枝杆菌是核分枝杆菌是结核病的病原菌。本核病的病原菌。本菌可侵犯全身各菌可侵犯全身各组织器官，但以肺部器官，但以肺部感染最多感染最多见。在微生物分在微生物分类中，中，结核分枝杆菌属于核分枝杆菌属于放放线菌菌门、放、放线菌菌纲、放、放线菌目、分菌目、分枝杆菌科、分枝杆菌属枝杆菌科、分枝杆菌属分枝杆菌复合群共包括人型、牛型、分枝杆菌复合群共包括人型、牛型、非洲型和田鼠型，而人型非洲型和田鼠型，而人型结核分枝杆核分枝杆菌是人菌是人类主要的致病菌主要的致病菌背景背景结核分枝杆菌基核分枝杆菌基础（1 1）结核杆菌可核杆菌可经多途径感染，由呼吸道、消化道和破多途径感染，由呼吸道、消化道和破损皮肤侵入皮肤侵入机体，最常机体，最常见为经呼吸道感染引起呼吸道感染引起肺肺结核核。（2 2）结核杆菌无核杆菌无内毒素内毒素和和外毒素外毒素，也不，也不产生侵生侵袭性性酶，其致病性主，其致病性主要与其要与其细胞壁内含大量胞壁内含大量脂脂质有关。主要包括：有关。主要包括：磷脂磷脂：可刺激：可刺激单核核细胞增生，与胞增生，与结核核结节和干酪和干酪样坏死坏死形成有关形成有关 分枝菌酸分枝菌酸：与抗酸染色性有关：与抗酸染色性有关 索状因子索状因子：可破坏：可破坏细胞胞线粒体膜，与粒体膜，与慢性肉芽慢性肉芽肿形成有关形成有关 硫酸硫酸脑苷苷酯：抑制吞噬溶：抑制吞噬溶酶体形成，具有体形成，具有抗吞噬作用抗吞噬作用 蜡蜡质D D，可刺激机体的，可刺激机体的迟发型超敏反型超敏反应。（3 3）结核杆菌主要引起核杆菌主要引起细胞免疫胞免疫反反应，属于，属于传染性免疫染性免疫结核病患者的常核病患者的常规检验三大常三大常规（血常（血常规、尿常、尿常规、大便常、大便常规）血沉血沉血流血流变检测肺肺结核患者血液粘滞性、凝固性、聚集性核患者血液粘滞性、凝固性、聚集性均增高，血流均增高，血流缓慢，易于促成肺内微血栓慢，易于促成肺内微血栓形成形成 微循微循环学学杂志志 常常规检测，无特异性。，无特异性。结核病患者的常核病患者的常规检验腺苷脱氨腺苷脱氨酶（ADA）:其血清其血清/浆膜腔膜腔积液比液比值更有意更有意义。C反反应蛋白蛋白（CRP）:X线提示有空洞的提示有空洞的结核病人比没有核病人比没有空洞的空洞的结核病人以及健康人核病人以及健康人显著升高。但是著升高。但是CRP正常不能正常不能排除排除结核病。核病。Infection.17(1):13-4,1989 Jan-Feb辅助治助治疗检测：肝功能、：肝功能、肾功能、血脂、血糖。功能、血脂、血糖。NSE、AFU等指等指标用于用于鉴别诊断。断。CA 125标志的使用，可以作志的使用，可以作为结核病核病疗效判断指效判断指标。结核病与肺部核病与肺部肿瘤患者均升高。瘤患者均升高。中国实用内科杂志2003年第2期结核病患者的常核病患者的常规检验超敏超敏C反反应蛋白：蛋白：肺肺结核是核是结核分枝杆菌感染核分枝杆菌感染导致机体致机体细胞免疫功能下降的慢胞免疫功能下降的慢性呼吸道性呼吸道传染病，患者血清中染病，患者血清中HSCRP、免疫球蛋白、免疫球蛋白、补体可体可发生改生改变。中国中国实验诊断学断学 2009年年01期期降降钙素原（素原（PCT）肺肺结核患者血清核患者血清PCT水平明水平明显低于社区低于社区获得性肺炎（得性肺炎（CAP）患者，）患者，HIV阴性阴性的肺的肺结核患者血清核患者血清PCT水平并不会明水平并不会明显增高，故可用于增高，故可用于PTB和和CAP的的鉴别诊断，但当断，但当PCT水平大于正常水平大于正常值时，其，其预后价后价值较差。可作差。可作为肺肺结核和肺核和肺结核核伴感染伴感染诊断的断的辅助指助指标。EurRespirJ2011;37(2):371结核病核病实验室室诊断技断技术简介介1.结核抗体核抗体2.结核蛋白核蛋白芯片芯片3.体外体外r-干干扰素素试验4.结核杆菌核杆菌分泌抗原分泌抗原1.涂片涂片2.培养培养3.药敏敏4.菌型菌型鉴定定细菌学菌学免疫学免疫学分子生物学分子生物学其其 他他1.HPLC2.质谱技技术3.流式技流式技术1.实时荧光光定量定量PCR2.DNA3.RNA4.耐耐药基因基因突突变5.菌型菌型鉴定定6.测序序结核分枝杆菌形核分枝杆菌形态学学检测1.1.直接抹片法直接抹片法直接抹片法直接抹片法2.2.离心制片法离心制片法离心制片法离心制片法1.1.抗酸染色抗酸染色抗酸染色抗酸染色2.2.荧荧光染色光染色光染色光染色1.1.普通普通普通普通显显微微微微镜镜2.2.荧荧光光光光显显微微微微镜镜3.3.自自自自动阅动阅片技片技片技片技术术涂片涂片染色染色镜检结核杆菌离心制片技核杆菌离心制片技术直直接接涂涂片片法法离心制片法离心制片法合合 计阳阳 性性阴阴 性性阳阳性性41410 04141(15.9%)(15.9%)阴阴性性1717199199216216(84.1%)(84.1%)合合计5858（22.6%22.6%）199199(77.4%)(77.4%)25725720152015年年7 7月至月至20152015年年1111月，月，对本院本院257257例痰液和例痰液和纤维支气管支气管镜灌洗液灌洗液进行行直接涂片法和离心制片法比直接涂片法和离心制片法比对验证试验，结果如下：果如下：结论：离心制片法的确能提高：离心制片法的确能提高结核杆菌涂片核杆菌涂片检测的阳性率。的阳性率。结核杆菌自核杆菌自动阅片技片技术20162016年年2 2月至月至20162016年年3 3月，本院月，本院对308308例涂片例涂片进行人工行人工阅片片和和计算机自算机自动阅片比片比对试验；结果符合的果符合的为286286例，例，总符符合率合率为92.58%92.58%。结核分枝杆菌体外核分枝杆菌体外药敏敏试验结核杆菌体外核杆菌体外药敏敏试验MIC测定法定法固固 体体培养法培养法液体液体仪器法器法液体液体微量法微量法结核分枝杆菌体外核分枝杆菌体外药敏敏试验 Drug free Isoniazid Ethambutol Inoculum media 0.2 mcg/ml 2.0 mcg/ml 10-3 [phone]%resistant 34.6 0.1Interpretation Resistant Susceptible结核分枝杆菌体外核分枝杆菌体外药敏敏试验1234 挑取菌落挑取菌落磨菌、稀磨菌、稀释接种菌液接种菌液孵育孵育7-107-10天天显色，色，读取取结果果结核分枝杆菌液体微量核分枝杆菌液体微量药敏敏结核分枝杆菌体外核分枝杆菌体外药敏敏试验结核分枝杆菌液体微量核分枝杆菌液体微量显色法色法药敏敏试验 收集我院收集我院2015年年8月至月至11月的月的临床分离菌株床分离菌株511例，例，使用液体微量使用液体微量显色法色法进行了行了利福平、异烟利福平、异烟肼、链霉素、霉素、乙胺丁醇、卷曲霉素、氧氟沙星、乙硫异烟胺乙胺丁醇、卷曲霉素、氧氟沙星、乙硫异烟胺对氨基水氨基水杨酸、左氧氟沙星、莫西沙星、利福布丁、阿米卡星、酸、左氧氟沙星、莫西沙星、利福布丁、阿米卡星、卡那霉素、卡那霉素、氯苯吩苯吩嗪等等十四种抗十四种抗结核核药物物的体外的体外药敏敏试验。其中。其中MDR-TBMDR-TB菌株菌株7575例（例（14.7%14.7%）。）。药物物RFPRFPINHINHSMSMEMBEMBCPMCPMOFXOFXETHETHPASPASLVFLVFMOFMOFRFBRFBAMIAMIKANKANCLOCLO耐耐药例数例数8080146146949458585050616141414949535362626060111113138787耐耐药率率%15.715.728.628.618.418.411.411.49.89.811.911.98.08.09.69.610.410.412.112.111.711.72.22.22.52.517.017.0结核分枝杆菌体外核分枝杆菌体外药敏敏试验结核分枝杆菌液体微量核分枝杆菌液体微量显色法色法药敏敏试验比比对实验 收集收集临床分离菌株和国家参比室的床分离菌株和国家参比室的质控菌株控菌株117117例，使例，使用液体微量用液体微量显色法和色法和罗氏比例法氏比例法进行了利福平、异烟行了利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇、卷曲霉素、氧氟沙星、乙硫异烟胺、霉素、乙胺丁醇、卷曲霉素、氧氟沙星、乙硫异烟胺、对氨氨基水基水杨酸、左氧氟沙星、莫西沙星、酸、左氧氟沙星、莫西沙星、利福布丁、阿米卡星、卡那霉素、利福布丁、阿米卡星、卡那霉素、氯苯吩苯吩嗪等等十四种抗十四种抗结核核药物物的比的比对实验。总符合率超符合率超过90%90%。结核病分子生物学核病分子生物学诊断断一、一、结核分枝杆菌探核分枝杆菌探针溶解曲溶解曲线技技术结核病分子生物学核病分子生物学诊断断结 果果 判判 断断结核病分子生物学核病分子生物学诊断断溶解曲溶解曲线法法比例法比例法药敏敏敏感度敏感度特异度特异度阳阳 性性预测值%阴阴 性性预测值%总符符合率合率%敏敏 感感耐耐 药%INHINH敏敏 感感1101104 490.590.598.298.295.595.596.696.696.196.1耐耐 药2 23838RFPRFP敏敏 感感1031032 295.895.897.297.294.194.198.198.196.896.8耐耐 药3 34646收集我院收集我院样本本库的的临床分离菌株床分离菌株154154例，例，进行了溶解曲行了溶解曲线法法耐耐药基因突基因突变分析以及分析以及罗氏比例法氏比例法药敏敏试验，总符合率在符合率在96%96%以上。并以上。并对耐耐药结果不相符的果不相符的1111株菌株菌进行了基因行了基因测序分序分析，均析，均证实有耐有耐药基因突基因突变。结核病分子生物学核病分子生物学诊断断二、二、结核分枝杆菌核分枝杆菌R RNANA检测(TB-RNA)(TB-RNA)RNARNA作作为临床分子床分子诊断靶断靶标的的优点：点：RNA RNA 拷拷贝数数 DNA DNA拷拷贝数数更具更具临床意床意义:生命力旺盛的病原体生命力旺盛的病原体RNARNA转录活活跃RNARNA远不如不如DNADNA稳定，病原体死亡，定，病原体死亡，RNARNA很快降解很快降解 1.1.交叉交叉污染少染少 2.2.较好的愈后指好的愈后指标结核病分子生物学核病分子生物学诊断断 统计今年我院住院患者今年我院住院患者179179例，分析涂片、例，分析涂片、培养和培养和TB-RNATB-RNA检测报告，告，结果如下：果如下：患者患者类型型例数例数TB-RNA TB-RNA 阳性例数阳性例数阳性率阳性率涂片阳性涂片阳性2727232385.2%85.2%涂片阴性涂片阴性142142414128.9%28.9%培养阳性培养阳性6868626291.1%91.1%培养阴性培养阴性1111112 21.8%1.8%我院涂片、培养阳性率分我院涂片、培养阳性率分别为：15.1%15.1%和和37.9%37.9%；TB-RNATB-RNA的的总阳性率阳性率为35.8%35.8%。结核病分子生物学核病分子生物学诊断断三、三、EasyNAT TB-DNAEasyNAT TB-DNA检测（恒温（恒温扩增法）增法）原理：将病原体原理：将病原体DNADNA扩增、核酸增、核酸杂交和核酸交和核酸试纸条条检测三种三种技技术有机地融有机地融为一体，在恒温一体，在恒温扩增反增反应中加入两中加入两对TBTB特异特异性引物、一性引物、一对特异性探特异性探针，同，同时 一次性完成一次性完成TB DNATB DNA的的扩增及增及杂交交 过程，然后用一次性核酸程，然后用一次性核酸检测装装 置置进行定性行定性诊断。断。检测目目标片段片段:目目标为结核分枝杆菌核分枝杆菌 特异性特异性IS6110IS6110片段。片段。结核病分子生物学核病分子生物学诊断断操作步操作步骤结核病分子生物学核病分子生物学诊断断 20152015年年6 6月，我科参加月，我科参加CTCTCCTCTC“EasyNATEasyNAT结核分枝杆菌核酸核分枝杆菌核酸检测试剂盒盒现场应用用评估估”项目目,结果如下果如下：患者患者类型型例数例数EasyNAT TB-DNAEasyNAT TB-DNA检测阳性率阳性率%阳性阳性阴性阴性涂片阳性涂片阳性7 77 70 0100.0100.0涂片阴性涂片阴性43432 241414.74.7培养阳性培养阳性10109 91 1*90.090.0培养阴性培养阴性40400 040400.00.0注注*：1 1例培养阳性最例培养阳性最终鉴定定为非非结核分枝杆菌核分枝杆菌结核病分子生物学核病分子生物学诊断断四、四、Gen-Xpert MTB/RIFGen-Xpert MTB/RIF进行行标本本处理、理、实时PCRPCR和利福平耐和利福平耐药性性检测的完整平台的完整平台痰痰标标本可以直接放入模本可以直接放入模块块中，而无需与任何中，而无需与任何试剂进试剂进行混合行混合处处理理GeneXpert GeneXpert 设备设备可可进进行行标标本液化、去本液化、去污污染、富集、染、富集、DNADNA提提取、取、rpoB rpoB实时扩实时扩增、增、应应用分子灯塔用分子灯塔检测检测耐耐药药相关的突相关的突变变容易使用，不需要容易使用，不需要进进行分子生物学培行分子生物学培训训操作完全自操作完全自动化，化，使用起来既容易又安全使用起来既容易又安全。结核病分子生物学核病分子生物学诊断断Xpert MTB/RIFXpert MTB/RIF与与PCR TB-DNAPCR TB-DNA检测的比的比较：阳性符合率阳性符合率99.0399.03，阴性符合率，阴性符合率92.6192.61，总符合率符合率95.3195.31Gen-XpertPCR TB-DNAPCR TB-DNA合合计阳性阳性阴性阴性阳阳 性性2042042121225225阴阴 性性2 2263263265265合合 计206206284284490490结核病分子生物学核病分子生物学诊断断涂片阳性肺涂片阳性肺结核核:Xpert:Xpert 检出率出率=99.35=99.35涂片阴性肺涂片阴性肺结核核:Xpert:Xpert 检出率出率=35.32=35.32Gen-Xpert涂片涂片结果果合合计阳性阳性阴性阴性阳阳 性性1521527171223223阴阴 性性1 1130130131131合合 计153153201201354354结核病分子生物学核病分子生物学诊断断Xpert MTB/RIFXpert MTB/RIF与与BD960BD960液体培养比液体培养比较实验：阳性符合率阳性符合率95.5295.52，阴性符合率，阴性符合率95.5195.51，总符合率符合率=95.5195.51Gen-Xpert培养培养+鉴定定结果果合合计阳性阳性阴性阴性阳性阳性2132131212225225阴性阴性1010255255265265合合计223223267267490490结核病分子生物学核病分子生物学诊断断Xpert MTB/RIFXpert MTB/RIF与比例法与比例法药敏比敏比较实验：阳性符合率阳性符合率 96.8896.88，阴性符合率，阴性符合率 95.5395.53，总符合符合率率 95.7395.73，Gen-Xpert利福平利福平药敏敏试验合合计耐耐药（阳性）（阳性）敏感（阴性）敏感（阴性）耐耐药（阳性）（阳性）31318 83939不确定不确定0 02 22 2敏感（阴性）敏感（阴性）1 1171171172172合合计3232179179211211结核病分子生物学核病分子生物学诊断断WHOWHO关于关于Xpert MTB/RIFXpert MTB/RIF的的建建议Xpert MTB/RIF Xpert MTB/RIF 应该用于用于MDR-TBMDR-TB的高危人群、的高危人群、以便尽早以便尽早发现MDR-TBMDR-TB患者，有效控制疫情。患者，有效控制疫情。Xpert MTB/RIF Xpert MTB/RIF 在在MDRMDR或或HIVHIV问题不十分不十分严重重的地区，可以考的地区，可以考虑作作为显微微镜检查基基础之上之上的后的后续检测，特，特别是用于涂阴是用于涂阴标本本的的进一步一步检测。体外体外r-r-干干扰素素释放放试验蛋白质水平结核菌素核菌素试验（TST）T-SPOT.TBQuantiFERON-TB Gold in-tube(QFT-GI)潜伏性潜伏性结核核（LTBILTBI）体外体外r-r-干干扰素素释放放试验干干扰素素检测阴性阴性干干扰素素检测阳性阳性TB抗原多抗原多肽T细胞胞活化活化T细胞胞 干干扰素素体外体外r-r-干干扰素素释放放试验特异性特异性 只只针对结核分枝杆菌复合群敏感，与核分枝杆菌复合群敏感，与绝大多数大多数环境分枝杆境分枝杆菌和卡介苗（菌和卡介苗（BCGBCG）无交叉反）无交叉反应 美国美国FDAFDA数据：特异性数据：特异性97.1%(297/306)97.1%(297/306)国内国内临床数据：特异性床数据：特异性94.1%(478/508)94.1%(478/508)灵敏度灵敏度 基本不受免疫力低下基本不受免疫力低下/受抑制影响，在肺外受抑制影响，在肺外结核患者中有核患者中有很高的很高的检出率出率 美国美国FDAFDA数据：灵敏度数据：灵敏度95.6%(175/183)95.6%(175/183)国内国内临床数据：灵敏度床数据：灵敏度95.3%(624/655)95.3%(624/655)体外体外r-r-干干扰素素释放放试验阴性阴性结果果阳性阳性结果果空白空白对照照抗原抗原AESAT-6抗原抗原BCFP10阳性阳性对照照（PHA）实验效效果果图体外体外r-r-干干扰素素释放放试验检测特异性的提高特异性的提高帮助帮助临床区分卡介苗接种和床区分卡介苗接种和环境分枝杆菌感染境分枝杆菌感染引起的引起的“假阳性假阳性”，避免了，避免了临床的无效用床的无效用药检测灵敏度的提高灵敏度的提高有利于有利于临床床对结核病的早核病的早发现、早治、早治疗，避免，避免了疾病的了疾病的传播与播与扩散散快速快速48小小时出出结果果体外体外r-r-干干扰素素释放放试验阴性阴性结果果提示患者体内不存在提示患者体内不存在针对结核杆菌特异的效核杆菌特异的效应T细胞。胞。假阴性假阴性结果：果：感染感染阶段不同；段不同；少数免疫系少数免疫系统功能不全功能不全/疾病；疾病；实验非正非正常操作。常操作。阳性阳性结果果提示患者体内存在提示患者体内存在针对结核杆菌特异的效核杆菌特异的效应T细胞，患者存在胞，患者存在结核感染。但是否是活核感染。但是否是活动性性结核病，需核病，需结合合临床症状和其它床症状和其它检测指指标综合判断。合判断。假阳性假阳性结果：果：4种种环境分枝杆菌感染境分枝杆菌感染时：M.kansasii（堪（堪萨斯）、斯）、M.szulgai（苏氏）、氏）、M.marinum（海）、（海）、M.gordonae（戈登）（戈登）体外体外r-r-干干扰素素释放放试验WHO 2014 WHO 2014 潜伏潜伏结核感染管理指南核感染管理指南建建议：1、在HIV感染人群、与肺结核患者密切接触的成人和儿童、开始接受抗肿瘤坏死因子（TNF）治疗的患者、接受透析治疗的患者、准备接受器官或血液移植的患者、以及硅肺患者中开展LTBI系统检测和治疗。检测LTBI建议使用-干扰素释放试验（IGRA）或结核菌素皮试（TST）。2、对于羁押人员、医务人员、来自结核病高负担国家的移民、无家可归者、以及吸毒人员，可以有条件地开展LTBI系统检测和治疗。3、对于糖尿病人、酒精依赖者、吸烟成瘾者、低体重者，如果他们不属于以上1和2的情况，并不建议常规开展LTBI的系统检测。体外体外r-r-干干扰素素释放放试验LTBILTBI筛查和和诊断的建断的建议流程流程体外体外r-r-干干扰素素释放放试验关于IGRA用于诊断LTBI的研究文献比较多，在这方面的结论也比较成熟。Richeldi的综述认为T-SPOT.TB诊断LTBI的敏感度高于TST，而QFT-GIT诊断LTBI的敏感度与TST相似；无论人群是否接种后卡介苗，T-SPOT.TB和QFT-GIT在诊断LTBI的特异度方面均优于TST。-Richeldi.L.Anupdataonthediagnosisoftuberculsosisinfection.AmJRespirCritCareMed,2006,174:736-742.Menzies等在2007年发表的一篇纳入8项研究的meta分析论文中指出，IGRA对于普通人群，尤其是曾经接种过卡介苗的人群诊断LTBI具有较高的特异度；但和TST一样，IGRA的敏感度差强人意，两者均不能区别LTBI和活动性结核病-MenziesD,PaiM,ComstockG.Meta-analysis:newtestsforthediagnosisoflatenttuberculosisinfection:areasofuncertaintyandrecommendationsforresearch.AnnInternMed,2007,146:340-354.IGRA诊断断LTBI的价的价值体外体外r-r-干干扰素素释放放试验IGRAIGRA诊断活断活动性性结核病的价核病的价值 在南非进行的1项募集到491例痰涂阴疑为肺结核患儿的研究中，结合临床资料、胸片以及TST结果诊断肺结核的曲线下面积为85%（95%CI 80%90%）。该研究最重要的价值在于发现，T-SPOT.TB相对于临床资料、胸片以及TST的综合判断价值而言，并没有增加额外的诊断价值。LingDI,NicolMP,PaiM,etal.IncrementalvalueofT-SPOT.TBfordiagnosisofactivepulmonarytuberculosisinchildreninahigh-burdensetting:amultivariableanalysis.Thorax,2013,68:860-866.体外体外r-r-干干扰素素释放放试验无论是HIV感染者还是非HIV感染者，IGRA的诊断效率与TST相比较均无优势。这些资料清楚地表明，在中低收入国家，IGRA和TST一样对于诊断成人活动性结核病没有任何价值1。另有研究指出，IGRA较低的阳性预测值限制其在中低收入国家成为临床常规检测活动性结核的手段2。实际上，世界卫生组织专家组基于现有的证据明确指出，在中低收入国家不能以IGAR代替常规的微生物诊断方法用于肺结核和肺外结核的诊断3。1.MetcalfeJZ,EverettCK,SteingartKR,etal.Interferon-gammareleaseassaysforactivepulmonarytuberculosisdiagnosisinadultsinlow-andmiddle-incomecountries:systematicreviewandmeta-analysis.JInfectDis,2011,204:S1120-1129.2.KangYA,LeeHW,HwangSSetal.Usefulnessofwhole-bloodinterferon-gammaassayandinterferon-gammaenzyme-linkedimmunospotassayinthediagnosisofactivepulmonarytuberculosis.Chest,2007,132:959-965.3.WHO.StrategicandTechnicalAdvisoryGroupforTuberculosis(STAG-TB):reportofthetenthmeeting.Geneva:WorldHealthOrganization,2010.http:/www.who.int/tb/advisory_bodies/stag_tb_report_2010.pdf.Accessed1December2013.体外体外r-r-干干扰素素释放放试验活动性结核病通过有效的抗结核治疗后，结核杆菌载量下降，效应T细胞数量会随之减少，所以理论上IGRA结果应从阳性转变为阴性，但临床实践中发现IGRA结果转阴率非常低。Chiappini等在2012年发表的一篇meta分析中指出，T-SPOT.TB（3项研究）在结核病患者抗结核治疗后转阴率为5.71%-13.93%，QFT-GIT（7项研究）在结核病患者抗结核治疗后转阴率为14.28%-41.89%，说明IGRA在评价抗结核治疗方面作用是有限的。ChiappiniE,FossiF,BonsignoriF,etal.Utilityofinterferon-releaseassayresultstomonitoranti-tuberculartreatmentinadultsandchildren.ClinTher,2012,34:1041-1048.IGRA在在评价抗价抗结核治核治疗中的效用中的效用小小 结SputumSputum 涂片涂片涂片涂片培养培养培养培养孵育孵育8周周（阳性）（阳性）比例法比例法比例法比例法药药敏敏敏敏试验试验孵育孵育孵育孵育4 4周周周周观观察生察生察生察生长长情况情况情况情况 涂片涂片涂片涂片/TB-DNA/TB-DNA/TB-RNATB-RNA （阳性）（阳性）分子分子诊断断/药敏技敏技术液体培养及液体培养及药敏敏试验 平均平均平均平均时间时间2020天天天天只需只需只需只需2-32-3天天天天WHOWHO推荐推荐TBTB实验室室诊断路径断路径武武汉市肺科医院市肺科医院结核病核病实验室室诊断技断技术培养：固体培养：固体BD960液体液体分子生物学：分子生物学：TB-DNARNATB-DNARNA NTM NTM分型分型涂片：抗酸、涂片：抗酸、荧光光金胺金胺O罗丹明丹明B耐耐药基因基因XpertXpert、HainHain探探针溶解曲溶解曲线分析分析鉴别诊断：断：T-spotT-spot、ADAADA、ACEACE药敏敏试验：固体、液体固体、液体武武汉肺科肺科检验科科PZAFace the problem and find the best solution谢谢聆听聆听谢谢聆听聆听