T∕SHZSAQS 00129-2022 绵羊腹腔镜胚胎移植操作技术规程.pdf

ICS 65.020.30 CCS B 41 团体标准 T/SHZSAQS 001292022 绵羊腹腔镜胚胎移植操作 技术规程 2022- 10 -05 发布 2022-10-05 实施 石河子市质量标准化协会 发 布 T/SHZSAQS 001292022 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 3.1 胚胎 . 1 3.2 受体母羊 . 1 4 受体母羊的选择及处理 . 1 4.1 受体母羊的选择 . 1 4.2 受体母羊的处理 . 2 5 腹腔镜胚胎移植操作 . 2 5.1 术前准备 . 2 5.2 腹腔镜手术操作 . 3 6 受体母羊饲养管理 . 4 7 受体母羊妊娠诊断及管理 . 5 7.1 妊娠诊断 . 5 7.2 妊娠母羊管理 . 5 附录 A（规范性附录） 受体羊同期发情处理流程 . 6 附录 B（资料性附录） 表 A.1 药品及手术器械 . 7 附录 C（资料性附录） 表 A.2 胚胎移植登记表 . 8 T/SHZSAQS 001292022 II 前 言 本文件参照GB/T1.1-2020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则给出的规则起草。 本文件起草单位：新疆农垦科学院畜牧兽医研究所、北屯市中瑞牧业有限公司。 本文件主要起草人：张振良，倪建宏，刘长彬，卢守亮，刘昱成，万鹏程，傅祥伟，郭延华，王晶晶，李国保，张银雷。 T/SHZSAQS 001292022 1 绵羊腹腔镜胚胎移植操作技术规程 1 范围 本文件规定了绵羊腹腔镜胚胎移植操作的术语与定义及受体母羊的选择、 胚胎移植手术前处理、胚胎移植手术操作、胚胎移植手术后处理、受体母羊术后饲养管理等。适用于绵羊腹腔镜胚胎移植的操作。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 27949 医疗器械消毒剂通用要求 GB/T 15981 消毒器械灭菌效果评价方法 NY/T 826 绵羊胚胎移植技术规程 NY/T 1184 兽医手术刀 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 胚胎 指受精卵正常分裂分化后的28细胞、桑葚胚、囊胚。 3.2 受体母羊 指繁殖生理状态与供体羊处于同一时期，能够独立完成妊娠、产羔及哺乳的健康母羊。 4 受体母羊的选择及处理 4.1 受体母羊的选择 4.1.1 年龄在26周岁的经产母羊。 4.1.2 T/SHZSAQS 001292022 2 体质健壮，生殖器官和繁殖机能正常，无传染病。 4.1.3 无自然流产史，断奶30d以上，可正常发情。 4.2 受体母羊的处理 4.2.1 受体母羊进行同期发情处理，处理流程见附录A。 4.2.2 胚胎移植前加强饲养管理，适量补充维生素A、维生素D、维生素E和微量元素。 5 腹腔镜胚胎移植操作 5.1 术前准备 5.1.1 手术器械消毒 将手术所用器械进行组装，并放入加有新洁尔灭的消毒液中备用，手术所用药品、器械见附录B，消毒评价参照GB/T15981。 5.1.2 受体羊保定 将受体母羊四肢朝上放在轮式羊胚胎移植架上（专利号：ZL2017 2 1247593.7）。 5.1.3 麻醉 肌肉注射麻醉药，注射量根据药品说明书确定。 5.1.4 刮毛 用肥皂水打湿受体母羊腹部的毛， 用刀片刮去乳头下方15cm15cm范围内的毛， 然后用纸巾擦去水渍和羊毛。 5.1.5 消毒 先用装有5%的碘酊喷壶对刮完毛的皮肤消毒，再用75%的医用酒精进行脱碘，最后纸巾顺势擦去，即消毒完成。 T/SHZSAQS 001292022 3 5.2 腹腔镜手术操作 5.2.1 胚胎分级 在体视显微镜下对胚胎进行分级鉴定，按照发育阶段分为桑葚胚、早期囊胚、囊胚、扩张囊胚和孵化囊胚，按照胚胎外形分为A、B、C、D四个等级。 A级：透明带完整无缺陷、薄厚均匀，胚龄与发育阶段相一致，卵裂球轮廓清楚，透明度适中，细胞密度大，卵裂球均匀，无游离细胞或很少，变形细胞比例少于10%。 B级：透明带完整无缺陷、薄厚均匀，发育阶段基本符合胚龄，轮廓清楚，明暗度适中或稍暗或稍浅，细胞密度较小，卵裂球较均匀，有小部分游离细胞，变形细胞比例为1020%。 C级：透明带完整或有缺陷，轮廓不清楚，色泽过暗或过淡，细胞密度小，突出细胞占一多半，细胞变形率为3040%。 D级：透明带完整或有发育停滞、变性、卵裂球少而散，为不可用胚胎。 5.2.2 吸取胚胎 5.2.2.1 用1mL注射器连接移胚针，并吸约0.5cm的保存液。 5.2.2.2 吸入约0.3cm的空气。 5.2.2.3 吸取含胚胎的保存液0.5cm左右。 5.2.2.4 吸入0.2cm空气。 5.2.2.5 吸取0.3cm左右的保存液。 5.2.3 手术操作 5.2.3.1 在母羊乳头下方810cm处，用手术刀尖在母羊腹中线左侧的乳房基部25cm处纵切一个0.5cm的切口，刺破皮肤即可，注意避开可见的血管。 T/SHZSAQS 001292022 4 5.2.3.2 用穿刺针从切口处斜向刺入腹腔内，取出穿刺针，向腹腔内充适量的二氧化碳气体，插入内窥镜观察。 5.2.3.3 用腹腔镜的光源照射右侧，避开血管用手术刀划开1cm 左右的切口，从切口插入子宫钳，可以借助子宫钳拨动母羊腹腔内的器官和脂肪，使子宫能够暴露在光源观察的范围内。 5.2.3.4 找到子宫后先观察卵巢上黄体的情况， 对卵巢上有黄体或者黄体较多的一侧用子宫钳夹住子宫角并拖出，用37盐水冲洗子宫角，用子宫角打孔器（专利号：ZL 2015 2 0272750.4）在子宫上打孔，然后插入移胚针将胚胎送进子宫内。 5.2.4 术后处理 5.2.4.1 缝合 将1cm左右的伤口用缝合线进行术后缝合，缝合时要将外皮和肌肉层同时缝合。 5.2.4.2 消毒 用红霉素软膏分别涂抹左右两侧伤口， 然后用5%的碘酊对伤口进行消毒， 完成后将受体母羊从保定架上取下，48小时内持续关注受体母羊健康状况。 6 受体母羊饲养管理 6.1 禁止饲喂发霉、变质和冰冻结块的饲料。 6.2 保持圈舍清洁、干燥、卫生，通风良好，供给充足清洁的饮水。 6.3 适量补充微量元素，减少应激，尽量避免在此阶段驱虫、药浴等。 6.4 T/SHZSAQS 001292022 5 胚胎移植完后的13d要注意观察受体母羊的行为， 关注伤口的变化， 及时处理异常情况。 7 受体母羊妊娠诊断及管理 7.1 妊娠诊断 受体母羊在完成胚胎移植后的35 d左右进行B超妊娠诊断。 7.2 妊娠母羊管理 将妊娠后的母羊根据怀孕时间、体况等进行分群管理，加强补饲，适当的增加运动。 T/SHZSAQS 001292022 6 A A 附 录 A（规范性附录） 受体羊同期发情处理流程 图A.1受体羊同期发情处理流程 B T/SHZSAQS 001292022 7 B C 附 录 B（资料性附录） 表A.1 药品及手术器械 序号 项目 药品及手术器械 规格 数量/单位 用途 1 同期发情 孕酮阴道栓（CIDR） 50个/袋 100/个 羊同期发情处理 2 孕马血清促性腺激素（PMSG） 1000IU/瓶 50/瓶 羊同期发情处理 3 胚胎移植药品 静松灵 5mL/瓶 4/瓶 羊术前麻醉 4 青霉素 2.5g/瓶 100/瓶 羊抗菌消炎 5 酒精 500 mL/瓶 2/瓶 术前皮肤消毒 6 生理盐水 500 mL/瓶 2/瓶 清洗 7 碘酊 500 mL/瓶 2/瓶 术前、术后皮肤消毒 8 胚胎移植器械 子宫钳 专用 1/个 夹住子宫角并从腹腔内拉出 9 打孔器 专用 1/个 子宫角上打孔 10 移胚针 专用 1/个 将胚胎转移到子宫角 11 腹腔镜 专用 1/套 胚胎移植操作 12 体视显微镜 专用 2/个 胚胎镜检分级 T/SHZSAQS 001292022 8 C D 附 录 C（资料性附录） 表 A.2 胚胎移植登记表 移植时间 受体羊号 黄体数量 黄体位置 供体羊号 胚胎等级 移植数量 移植位置 B超结果 产羔数 初生重 移植时间 受体羊号 -