DB43∕T 1823-2020 茄果类蔬菜烟草花叶病毒病综合防控技术规程(湖南省).pdf

ICS 65.020 816 湖DB43 南省地万标准DB43/T 1823-2020 茄果类蔬菜烟草花叶病毒病综合防控技术规程Regulations for Integrated Prevention and Control Technology ofthe Solanaceous Vegetable Tobacco Mosaic Diseases 2020-08-25发布2020-11-25实施沽用薛Z毛旨芮王土w且主李雪辛苦王里走司发布DB43/T 1823-2020 目次前言.III I 范围.2 圳范性才|用文件. 3 术语和;主义. 4 发生规律. 5 病芹诊断.1 .5. 1 烹内检测. 6 防泊方法.2 6.1 防的原则.2 6. 2 农业防治26. 3 生物防治. . . . . . . . . . . . .2 6.4 田间诊断26. .5 化学防治.2 7 档案管理.3 附录A(资料性附录)茄果类蔬菜烟草花叶病毒病症状.4附录B(规范性附录)茄果类蔬菜烟草花叶祸毒分子生物学检查.5 附录c(规范性附录)药剂防治州毒的伞览表7附录o(资料忡附录)茄果类蔬菜烟草花叶的毒拍山间调查.8 附录E(资料性附录)茄果类蔬菜烟草花叶的毒拍防控效果评估.9I DB43/T 1823-2020 目IJ1=1 本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容nJ能涉及专利。本文件的发布机构不屈担识别这些专利的责任。本标准由湖南省农业农村厅提出O本标准向湖南省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位:湖南省植物保护研究所、湖南省蔬菜研究所、东北农业大学、永州市农业科学研究所、平江县农业农村用、保靖县农业农村用、津市市植保植检站、武冈市农业农村用植保植检站、安乡县植保植检站。本标准主要起草人:刘勇、张德咏、彭静、张战池、程晓非、周涛、吕军、王俊华、马家湘、摩用信、叶波、高阳、张卓、张松柏、我l、书娥、诅I钢、彭谦泽。III DB43/T 1823-2020 茄果类蔬菜烟草花叶病毒病综合防控技术规程1 范围本标准规定了茄果类蔬菜烟草花叶病毒病的术语和定义、发生划律、病需诊断、防治力法、档案管理等技术要求O本标准适用I茄果类蔬菜由烟草花叶病毒CTobccomosaic virus, TMV)侵染号|起的花叶病毒病的综合防控。2 规范性引用文件下列文件对于本文11的所周是必不可少的。凡是注日期的引用文刊，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB 4285 农药支全使用标准NY!T 1276农药安全使用规范总则3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1 烟草花日十病毒病Tobacco Mosaic Virus Disease 由烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)引起的可在自然条件下，通过田间机械摩擦进行传播的伞类严重危害柏物的耐毒祸。4 发生规律烟草花叶病毒通过侵染蔬菜生产农事沾动巾机械损伤造成的做伤口感染相株。不卫生栽培是造成流行的主要原因;在病、健株间往来触摸，施用未腐熟有机肥，培带有病毒的土壤部可加重病毒传染。士壤板结，气候干旱，田间线上扎为害较重的地块发病重。TMV能在多中1I植物上越冬。初侵染源为带病残体和其古奇主植物，另外未充分腐熟的带毒肥料也可引致初侵染。5 病害诊断5. 1 室内检测采用TRlzol法捉取植株叶片总RNA，反转录合成cDNA，通过特异性PCR扩士曾获得目的片段，凝胶电泳及分子测序鸟在定目的片段的大小及准确性。扩增片段与阳性对照样品比对一致，表明植物叶片中携带该病毒，具体立法和检测结果见附录BoD843/T 1823-2020 6 防治方法6. 1 防治原则坚持预防为主，综合防治的植保方针和经讲、有效、安全、简易、规范的原则，从农用二十;态系统整体出发，保护生物多样性，合理管理生产环境，减少病毒病原来源，协调运用农、1;防治、生态调控和生物防治等各种防控技术，改变病属物的最适生存条件，提高农作物抗病能力O当农业防治、生物防治兀法将病害控制在经济闽值以下时，适当使用高效、低毒、民残留和低污染的药剂控制病原物的为需，尽量减少化学农药的使用，去全、经济、有效地将病需造成的损失控制在经济允许水平以下。6. 2 农业防治6.2. 1 品种选择与种子消毒选择抗病l1JG耐病主栽品种。茄果类蔬菜种子括种前用55C温开水浸种15min，去除种子表明的病原菌和茹液，国10%的磷酸二铀溶液浸种O.5 h左右，扔山后用清水冲洗3次后播种:成采用包;在4种子。6. 2. 2 田间卫生保持田间洁沽，1青理田间杂草及周i!11甘虫杂草:及时摘除病叫，拔除病株，病n和病株移至J&高种植H的地方集中销毁。6. 2. 3 肥水管理科学进行肥水管理，控制化学肥料的使用。在作物的不同生育期喷施300借光合细茵茵剂，增强其对病害的抵抗力O6. 3 生物防治可选用农用微生物生防菌剂或氨王在寡糖素等防治茄果类蔬菜黄瓜花叶的毒祸。般零星发病山块连续喷施2次，轻病症回块连续喷施3-4次，中度以上发病田块连续喷施5-6次，每次喷施问隔5d-7 d。药剂及用法见附录co6. 4 田间诊断茄果类蔬菜感染烟草花叶病毒后，嫩叶出现叶片侧脉及支脉组织出现半透明等明脉症状:随后叶片出现厚度不均匀、斑点，呈现出黄绿相间的不同区域，重病的叶片出现大面积的褐色坏死斑，口十片形状扭曲、皱缩、边缘|址内弯曲，重病植株植株严重矮化甚至死亡。症状特征详见附录A。6. 5 化学防治6.5. 1 炯草花叶病毒病以预防为主，定期喷施高效低毒农药进行防治，严禁使用同家明令禁止使用的高毒、高残留化学农药，化学农药交替使用。通常在苗期开始喷施药剂，之后连续日前面3-4次，每次喷施间隔7-10d，进行病毒病预防与防治。农纠的安全隔离期要符合GB4285的规定，常用药剂及用沾见附录C。6. 5. 2 根据目间定点系统调查和普查调查恬况，结合气象因素分析，及时对病害发牛进行预测预报，当病需达到影响经济阔值时，对整片作物进行科学的病虫害防泊。2 DB43/T 1823-2020 7 档案管理用间防治炯草花叶病毒病防治方法应如实做好记载，及时检查药剂使用情况及效果，建立防控档案。具体调查内容及评估h去参见附录D和Eo3 D843/T 1823-2020 附录A(资料性附录)茄果类蔬菜烟草花叶病毒病症状茄果类蔬菜感染烟草花叶病毒后，心叶出现叶片明脉或轻微花叶症状:随后新叶及中部叶片出现花叶症状，植株轻微矮化:随着病毒的进二步侵染，叶片畸形、皱缩，严重时，整株叶片严重花叶、畸形，植株明显矮化，甚至死亡。番茄植株感染烟草花叶病毒的典型肝状见图Al，辣椒植株感染烟草花叶病毒的典型症状见图A20图A1番茄植株感染烟草花叶病毒症状图A2辣椒植株感染烟草花叶病毒症状4 DB43/T 1823-2020 附录B(规范性附录)茄果类蔬菜烟草花日十病毒分子生物学检查1.叶片总RNA的捉取(1)取约O.1 g叶片于2mL RNase-free离心管，液氮速冻后冷冻组织研靡，至样品研磨为均匀粉末。(2)在样品解冻前，加入1mL Trizol.充分混匀，军温静置5min，加入O.2 mL三氯甲:院，涡旋晨荡15s，静置1-2mi日，至出现明显分层，40C 12000 g离心15mino (3)小心吸取离心盯上洁液l二1.5日lLRNase-free离心管，加入等体积75%乙醇，-20oC沉淀1-2h, 40C 12000 g离心10min，弃上洁。(4) 1 mL 7.5%乙醇重iEEII;淀，-80oC长时间保存或40C7500 g离心5mi口。(5)重复操作(4)，弃上洁后瞬离离心管，1吏管壁上的液体集中于离心管底部。(6)移液检小心吸山多余液体，风干5-10min。加入50-100L去RNase水溶解。(7)凝胶电泳和NanoDrop检测RNA的质量和浓度，-80oC保存备用。2.盯-PCR扩增目的片段(1)使用HiScript11 1st Strand cDNA Synthesis Kit试剂盒逆转录，反肉体系见下表:Total RNA 10XRT Mix HiScript II Enzyme Mix 试剂表B1逆转录反应体系体积(L)1.0 2. 0 2. 0 Rev巳rseprimer (10M) 1. 0 RNase free 主容至20反应程序250C:5 min, 50oC: 45 min, 850C: 2 mino cDNA 产物直接使用或200C保存;(2)引物序列病毒CvIV 号|物4号称CMV-F CMV-R (3) PCR扩增，反应体系见下表:成分10XnmsStart Tp buffer 2.5 mM dNTP TransStart Top DNA Polymerase Forward primer (1011 VI) R巳vers巳primer0011 VI) 巳DNi棋板ddH20 表B2引物序否IJ引物序列A TA TGGCAACGG CAGATTCG GCAATGATGG A G ACTGGTGTAG 表B3PCR扩增反应体系体和、(L)5. 0 4. 0 1.0 1.0 1.0 1.0 定容至50片段长度Cbp)1153 5 D843/T 1823-2020 反应程序94C预变性10min, 9rc变性30s, 58C退火30s, 72C延伸2min 30 s，循巧、30次:最后72C延伸20min, 4C保存。2. PCR产物凝胶电泳检测1%琼脂糖i疑胶电泳检测，取5L扩增产物与2LSYBR Green 1染料、3L10ading buffer 混匀，点入点样孔，加入电泳级忡液，100 V，电泳30mino电泳结束后，凝胶成像系统观察井拍照、记录。扩增片段与阳性样品大小一茧，则说明植株被TMV侵染，结果见附录图BL6 2000 1000 75 500 11 1咱,3 5. ,6 7 + 号_.图81植株叶片摆带TMV检测M:Mark, 1-7:植株样品+:阳性对照。阴性对照DB43/T 1823-2020 附录G(规范性附录)药剂防治病毒病一览表表C1药剂防治茄果类蔬菜烟草花叶病毒病一览表防治防治药剂使山剂量施用方法安个间隔期史山次数防治时期对象20%盐酸叫琳肌乙酸铜可湿11粉剂1,50 g/甫喷宴5 3 病情指数二三55%氨基:男;糖素可溶tl水剂100 mL/甫喷雾1 3 病情指数二三5病毒病:11%衷;糖口可呱可i容卡|粉剂40 g/甫喷雾5 病情指数二三52%香茹多糖水剂40 mL/由喷雾收获期收获病情指数二三57 D843/T 1823-2020 附录D(资料性附录)茄果类蔬菜烟草花叶病毒病田间调查表D1防治档案记录表格前在病害发曾使闯过防治方法防治病当在当前使用病情发病率防治日期11物生情出毒病或转毒害虫作物防治方法指数(% ) 效果(%) 8 附录E(资料性附录)茄果类蔬菜烟草花日十病毒病防控效果评估E1 植株病情分级标准(以株为单位)每块田，5点耳其样法，每个点选择20株以上的植株O级:全株兀病毒病症:1级:心叶明脉或轩微花叶，病株兀明显矮化;3级:心叶及中音1日叶片花叶，.QG病株矮化为正常株高1113/4以上:一-5级:心叶及中部叶片花叶，少数叶片畸形、皱缩，或植株矮化;7级:重花叶，多数叶片畸形、皱缩，植株矮化:9级:整株叶片严重花叶、畸形、植株明显矮化，甚至死亡。E2 普查调查田间病害程度计算病害普遍率C)二发病株数/全团总株数50为大发生30-50为严重发生15-30为发生15轻度发生。E3 足点调查计算发祸率二发祸株数/调查株数X100 病情指数=2: (各级株数病情级数值)/ (调否总株数X9)X100;防治效果=(对照的情一处理病情)/对照抽情X 1000 DB43/T 1823-2020 9