DB43∕T 1825-2020 茄果类蔬菜黄瓜花叶病毒病综合防控技术规程(湖南省).pdf

ICS 65.020 816 湖DB43 南省地万标准DB43/T 1825-2020 茄果类蔬菜黄瓜花叶病毒病综合防控技术规程Regulations for Integrated Prevention and Control Technology ofthe Solanaceous Vegetable Cucumber Mosaic Diseases 2020-08-25发布2020-11-25实施沽用薛Z毛旨芮王土w且主李雪辛苦王里走司发布DB43/T 1825-2020 目次前言.III I 范围.2 圳范性才|用文件. 3 术语和定义4 发生规律. 5 病芹诊断.1 .5. 1 田间诊断-.5.2 室内检洲.2 6 防泊方法.2 6.1 防泊原则26. 2 农业防治. . . . . . . . . . . . .2 6. 3 物理防治26.4 生物防治.3 6. 5 化学防治.3 7 档案管理.3附录A(资料性附录)茄果类蔬菜黄瓜花叶祸毒的症状.4 附录B(规范性附录)茄果类蔬菜黄瓜花叶祸毒分子生物学鉴主5附录c(规范性附录)药剂防治恼毒祸及传毒害虫览表.7 附录o(资料忡附录)茄果类蔬菜黄瓜花叶的毒拍山间调查.8 附录E(资料性附录)茄果类赢菜黄瓜花叶病毒病防控效果评估.9 I DB43/T 1825-2020 目IJ1=1 本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容nJ能涉及专利。本文件的发布机构不屈担识别这些专利的责任。本标准由湖南省农业农村厅提出O本标准向湖南省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位:湖南省植物保护研究所、湖南省蔬菜研究所、东北农业大学、理县农业农村局、新化县植保植检站、呆靖县农业农村用、?工华瑶族自泊县农业农村用、永外1m农、111科学研究所、安乡县植保植1我站、此冈市农业农村同植保植检站、泸溪县农业农村局。本标准主要起草人:刘勇、张德咏、彭静、张战池、程晓非、张强鑫、廖基常、王俊华、赵明平、周涛、潘求一、廖m信、陈湘云、高阳、张卓、张松柏、未春H军、谢钢、彭谦泽。III DB43/T 1825-2020 茄果类蔬菜黄瓜花叶病毒病综合防控技术规程1 范围本标准规定了茄果类蔬菜黄瓜花叶病毒病的术语和定义、发生划律、病需诊断、防治力法、档案管理等技术要求O本标准适用I茄果类蔬菜向黄瓜花叶病毒(Cucumber mosic virus, CMV)侵染号|起的花叶病毒病的综合防控。2 规范性引用文件下列文件对于本文11的所周是必不可少的。凡是注日期的引用文刊，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB 4285 农药支全使用标准NY!T 1276农药安全使用规范总则3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1 黄瓜花日十病毒病Cucumber Mosaic Virus Disease 由黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus, CMV)引起的可在自然条件下，通过田间机械摩擦lim牙虫进行性播的伞类严重危害柏物的病毒祸。3. 2 非持久型传毒Non-Persistent Transmission 介休昆虫取食病毒后，病毒斗、进入虫休的血淋巴和唾液腺即可被传播，病毒在虫体内的持毒时间扎有几秒或几分钟，一般昆虫蜕皮后Il失去传毒力。4 发生规律黄瓜花叶病毒通过侵染蔬菜生产农事活动中机械损伤造成的微伤口感染植株。自然条件下，黄瓜花叶病毒通过蜡虫以非持久型传毒JJ式传播，有60多种蜡虫可传播该病毒。黄瓜花叶病毒病最适发病温度为20C，病毒斗气要在越冬蔬菜、多年牛:树木及农用杂草上越冬，不能在病残体上越冬。冬季及早春气温低，越冬断虫数量少，CMV发病较轻。如遇翌春比较干旱，植株旺长前温度出现较大波动，有干热风，叫导致CMV大流行。此外，如果阴雨天较多，环境相对湿度大，虫牙虫发!牛少，则CMV发病较轻。5 病害诊断5. 1 田间诊断D843/T 1825-2020 黄瓜花叶病毒病在茄果类击k菜的整个生育期均可发生。柏株感病后，叶片呈深绿与浅绿相间的花叶状、不同程度的皱缩、畸形，严重时叶片反卷:茎部节问缩短，茎畸形，严重时病株口十片枯萎、重病株簇生小叶，植株矮化甚至萎缩枯死。症状特征详见附录A。5. 2 室内检测采用TRlzol法捉取植株叶片总RNA，反转录合成cDNA，通过特异性PCR扩I曾获得目的片段，凝胶电泳及分子测序毕定目的片段的大小及准确性。扩增片段与阳性对照样品比对一致，表明植物叶片中携带该病毒，具体方法和检测结果见附录Bo6 防治方法6. 1 防治原则坚持预防为主，综合防治的植保方针和经济、有效、支全、简易、规范的原则，从农田生态系统整体山发，保护生物多样性，合理管理生产环境，减少病毒病原来源，协调运用农业防怡、物理阳泊、生态调控和生物阳治等各种阳控技术，改变病原物的最适生存条件，提高农作物抗病能力O当农业防泊、物理防治、生物防悄无法将病害控制;在经济阀值以V时，适当使用高效、低毒、低残留和低污染的药剂控制病原物的为害，尽量减少化学农药的使用，安全、经济、有效地将病害造成的损失控制在经济允许水平以L6. 2 农业防治6.2. 1 品种选择与种子消毒选择抗的或耐怕主栽品种。茄果类蔬菜种于J翻中前用.5.50C温开水浸种1.5min，去除种子表明的病以菌平日军占液，用10%的磷酸芝铀溶液浸种0.5h左右，捞f十1后用清水冲洗3次后捂种;或采用包衣种子。6. 2. 2 田间卫生保持田间清洁，清理田间杂草及周边带上江杂草;及时摘除病叶，拔除病株，病叶和病株移车远离和1I植凹的地方集中销毁。6. 2. 3 肥水管理科学进行肥水管理，控制化学肥料的使用。在作物的不同生育期喷施300倍光合细菌菌剂，增强其对病害的抵抗力。6. 3 物理防治6.3. 1 设置防虫网使用40目以上的防虫网隔离传毒介体。6. 3. 2 色根诱杀定植后在田间;悬挂30cmX40 cm的诱虫黄板，黄板密度为每亩20-30块，黄板底部略高于植株顶瑞3cm-.5 cm，粘满声:虫或失去粘性后及时更换。2 DB43/T 1825-2020 6. 4 生物防治可选用农用微生物生防雨剂或氨基寡糖素等防治茄果类蔬菜黄瓜花口十病毒病。一般苓星发病田块连续喷施2次，轻病抗凹块连续喷施3-4次，中度以上发病用块连续喷施5-6次，每次喷施问隔5d-7 d。药剂及用法见附录ca6. 5 化学防治6.5. 1 黄瓜化叶病毒病以预阳为主，定期喷施高效低毒农药进行防治，严禁使用国家明令禁止使用的自毒、高残留化学农药，化学农药交替使用O通常在苗期开始喷施药剂，之后连续喷施3-4次，每次喷施间隔7-10d，进行病毒病预防与防治。农药的安全隔离期要符合GB4285的规定，常用药剂及用沾见附录ca6. 5. 2 防治传毒介体昆虫。田间蜡株率二三5时，选择使用高效、低吉、易阵解农药进行防治。一般零星发病田块连续喷施2次，轻病症回块连续喷施3-4次，中度以上发病田块连续喷施5-6次，每次喷施问阳7-10do仅去j的安全阳离期要符合GB4285的规定，常用药剂及用法见附录ca6. 5. 3 根据田间定点系统调查和普查调查情况，结合气象囚京分析，及时对病虫害进打预测预报，当病虫害达到影响经济间值时，对整片作物进行科学的病虫害防治。7 档案管理时间防治黄瓜花叶病毒祸阳治方法所如实做好记载，及时检查药剂使用情况及效果，建立|珩控档案。具体调查内容及评估方法参见附录D和Eo3 D843/T 1825-2020 附录A(资料性附录)茄果类蔬菜黄瓜花叶病毒病症状茄果类蔬菜感染黄瓜花叶病毒后，症状表型多样，茵期幼叶呈深绿与淡绿相间的花叶状、不同程度的皱缩、畸形。成株染病新叶呈黄绿相间的花叶状，病叶扭山畸形，叶片变厚，严重时叶片反卷:茎部节问缩短，茎畸形，严重时病株叶片枯萎、重病株簇牛小叶，植株矮化甚至萎缩枯死。在田间普通花叶病与茧瓜花叶病很相似，难以区别，结合分子生物学应法鉴定。番茄植株感染黄瓜花叶病毒的典型症状见图Al，辣椒植株感染黄瓜花叶病毒的典型肝状见图A20图A1番茄植株感染黄瓜花叶病毒症状图A2辣椒植株感染黄瓜花叶病毒症状4 DB43/T 1825-2020 附录B(规范性附录)茄果类蔬菜黄瓜花日十病毒分子生物学鉴定1.叶片总RNA的捉取(1)取约O.1 g叶片于2mL RNase-free离心管，液氮速冻后研磨至样品为均匀粉末。(2)在样品解冻前，加入1mL Trizol，充分混匀，室温静置5min，加入O.2 mL三氯甲:院，涡旋震荡1.5s，静置1-2mi口，至出现明显分层，4C 12000 g离心15mino (3)小心吸取离心后上洁液于1.5 mL RNase-free离心管，加入等体积75%乙醇，-20C沉淀1-2h, 4 C 12000 g离心10min，弃上洁。(4) 1 mL 75%乙醇重悬沉淀，-80C长时间保存或4C7500 g离心5mino (.5 )重复操作(的，弃上洁忻瞬离离心管，使管壁上的液体集中T离心管底部。(6)移液检小心吸出多余液体，风干5-10mino加入50-100L去RNase水浴解。(7)凝胶电泳和NanoDrop检测RNA的质量和浓度，-80C保存备用。2. RT-PCR扩增日的片段(1)使用HiScript11 1st Strand cDNA Synthesis Kit试剂盒逆转录，反应体系见h表:Total RNA 10XRT Mix 试剂HiScript 11 Enzyme Mix Reverse primer (1011 M) RNase free H20 表B1逆转录反应体系体积(L)1.0 2. 0 2. 0 1.0 定容主20反应程序2.5C:5 min, .50C: 45 min, 85C: 2 mino cDNA产物直接使用或-20C保存:(2)引物序列病毒CvIV 号|物4号称CMV-F CMV-R (3) PCR扩增，反应体系见下表:成分10XransStart Top buff巳r2.5 mM dNTP TransStart Top DNA Polymerase Forward primer (10 VI) R巳verseprimer (10 VI) 巳DNi棋板ddH20 表B2引物序列引物序列CGGTC G TATTGCTTCCTTCTT TTAAC CACCTG CGGTCTGAA 表B3PCR扩增反应体系体和、(L)5.0 4. 0 1.0 1.0 1.0 1.0 定容豆豆50片段长度(bp)639 5 D843/T 1825-2020 反应程序94C预变性10min, 9rc变性30s, 58C退火30s, 72C延伸2min 30 s，循巧、30次:最后72C延伸20min, 4C保存。2. PCR产物凝胶电泳检测1%琼脂糖i疑胶电泳检测，取5L扩增产物与2LSYBR Green 1染料、3L10ading buffer 混匀，点入点样孔，加入电泳级忡液，100 V，电泳30mino电泳结束后，凝胶成像系统观察井拍照、记录。扩增片段与阳性样品大小一茧，则说明植株被CMV侵染，结果见附录图BL6 1000 750 500 M 1 2 3 4 5 6 7 + 图81植株叶片摆带CMV检测M:Mark, 1-7:植株样品+:阳性对照。阴性对照DB43/T 1825-2020 附录G(规范性附录)药剂防治病毒病及传毒害虫一览表表C1药剂防治黄瓜花日十病毒病及传毒害虫一览表防治防治药剂使J+j施用安个间隔期史时防治时期对象剂量方法(天)次数20%盐酸叫琳肌乙酸恫可湿11粉200 g/甫喷雾5 3 病情指数二三5齐U5%氨基男;糖素可i容机水剂100 mL/甫喷雾1 3 病情指数二三5病毒8%宁南霉素水剂80 g/甫喷雾收获期收扶病情指数二三5病:斗0%毒氟叫时;j、肌80 g/由喷雾5 病情指数二三512%寡糖香草硫缩f山西主微乳剂25-50 g/宙喷雾收获期收获3 于内青指数二511%氧虫高氧氟，1放衰悬浮剂15 mL/商喷雾5 2 ?内青指数二主510%涣氨虫耽版可分散泊悬浮剂35 mL/由喷雾3 3 病情指数主主5蜘虫1.5%肯参碱可溶液剂35 mL/由喷雾10 1 病情指数二三55%高氯院虫眯乳泊35 mL/由喷雾7 2 病情指数二三57 D843/T 1825-2020 附录D(资料性附录)茄果类蔬菜黄瓜花叶病毒病田间调查表D1防治档案记录表格前在病害发曾使闯过防治方法防治病当在当前使用病情发病率防治日期作物生情出毒病或转毒害虫作物防治方法指数(% ) 效果(%) 8 附录E(资料性附录)茄果类蔬菜黄瓜花日十病毒病防控效果评估E1 植株病情分级标准(以株为单位)每块田，5点耳其样法，每个点选择20株以上的植株O级:全株兀病毒病症:1级:心叶脉明或轩微花叶，病株兀明显矮化;3级1/3片花叶但不变形，或病株矮化为正常株高的3/4以上:DB43/T 1825-2020 一-5级:1/31/2叶片花叶，或少数叶片变形，或主脉变黑，或病株矮化为正常株高的2/33/4;7级1/22/3叶片花叶，政变形成主侧脉坏死，成病株矮化为正常株高的1/22/3;9级:全株叶片花叶，严重变形或坏死，或病株矮化为正常株高的1/2以上。E2 普查调查田间病害程度计算病害普遍率(%)二发病株数/全团总株数50为大发生30-50为严重发生15-30为发生15轻度发生。E3 足点调查计算发祸率二发祸株数/调查株数X100 病情指数=2: (各级株数病情级数值)/ (调查总书|二数X9) X 100; 防治效果= (对照祸情一处理州情)/对照病情X 1000 9