DB34∕T 3891-2021 蔬菜中腐霉利快速检测胶体金免疫层析法(安徽省).pdf

lCS 67.080.20 CCS B 31 DH34 .1-. 文徽省山巳T目，万标准DB34/T 3891-2021 蔬菜中腐霉利快速检测胶体金免疫层析法Rapid detection of procymidone in vegetables Colloidal gold immunochromatography assay 2021-06-08发布2021-07-08实施安徽省市场监督管理局发布D834/T 3891-2021 目IJ1=1 本文件按照GB/T1. 1-2020 (标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由安徽省产品质量监督检验研究院提出。本文件由安散省市场监督管理局归口。本文件起草单位:安散省产品质量监督检验研究院、合肥工业大学、食品营养与安全研究中心、安徽省食品药品检验研究院、杭州、|傲敏生物科技有限公司、江苏美正生物科技有限公司、安徽华测检测技术有限公司。本文件主要起草人:姚帮本、陈伟、姚丽、陈赵然、李云、闰超、童宁、郭佳佳、?长居舟、祝红吉、陆乐、徐建国、乔东晴、吴基杰、庄琼、陶云峰、王相召、王平、王海翔、陆华进、高君、陈欣。D834/T 3891-2021 蔬菜中腐霉利快速检测肢体金免疫层析法1 范围本文件规定了蔬菜中腐霉利的胶体全免疫层析快速检测方法。本文件适用于韭菜、番茄、茄于、辣椒、黄瓜、蘑菇类(鲜)中腐霉利的快速检测。检测限:韭菜为O.2 mg/kg;番茄、黄瓜为2mg/kg;茄子、辣椒、蘑菇类(鲜)为5mg/kg。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件:不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB 2763 食品安全国家标准食品中农药最大残留限量GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4 原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中残留的腐毒利与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和检测线(T线)上包被原的结合，从而导致检测线(T线)颜色变浅或消失，通过检测线(T线)与控制线(C线)颜色深浅比较，对样品中残留的腐霉利进行定性判定。5 试剂或材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯。5. 1 水:应符合GB/T6682，二级水。5. 2 腐霉利:纯度去99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。5. 3 甲醇.(CHOH) 5.4 氧化铀(NaCl)5.5 氧化锦(KC1)5. 6 磷酸氢二铀(NaPOJ)5. 7 磷酸二氢伺(KH，P01)5.8 10%甲醇溶液:吸取10mL甲醇(5.3)，用水(5.1)定容至100此，混匀。5.9 稀释液:分别称取氧化铀(5.4)8g、氯化锦(5.5)0.2 g磷酸氢二铀(5.6)1.44g、磷酸二氢佣(5.7)0.24 g于1000mL烧杯中，加水(5.1)充分搅拌溶解后定容至1000mL。5.10 10g/L的腐霉利标准储备液:准确称取腐霉利(5.2)0.lg(精确至O.OOOlg)，用甲醇(5.3) 溶解，定容至10mL -20oC冷冻避光保存，有效期12个月。D834/T 3891-2021 5.11 200 mg/L的腐毒利标准中间液:准确移取10g/L的腐霉利标准储备液(5.10)200L至10mL 容量瓶中，甲醇(5.3)定容。40C冷藏避光保存，有效期3个月。5.12 2 mg/L的腐霉利标准工作溶液:准确移取200mg/L的腐霉利标准中间液(5.11)100L至10mL 容量瓶中，10%甲醇溶液(5.8)定容。40C冷藏避光保存，有效期1个月。6 仪器和设备6. 1 电子天平:感量分别为0.01g和0.01mgo 6. 2 移液器20200L，1001000队，110 mL 6. 3 旋涡混合器。6.4 匀浆机。6.5 离心机:转速二三4000r/mino 6. 6 胶体金免疫层析检测试纸条。6. 7 离心管1.5 mL、50mL。7 样品制备7. 1 试样制备蔬菜样品取样部位按GB2763的规定执行，将适量(约500g)待测样品切醉泪匀均一化制成匀浆备用。7. 2 试样前处理7.2.1 韭菜准确称取制备后试样2g(精确至O.01 g)于50mL离心管中，加入稀释;夜(5.9)6.0mL，振荡混匀2min, 4000 r/min室温高心2日ln，取上清液即为待测液。7. 2. 2 番茄、黄瓜准确称取制备后试样2g(精确至O.01 g)于50mL离心管中，加入稀释;夜(5.9)6.0mL，振荡混匀2min, 4000 r/min室温高心2min，上洁液备用。取1.5 mL离心管，吸取900L稀释液(5.9), 加入100L上清液，了昆匀即为待测液。7. 2. 3 茄子、辣椒、蘑菇类(鲜)准确称取制备后试样2g (精确至O.01 g)于50mL离心管中，加入稀释液(5.9)6.0 mL，振荡泪匀2min, 4000 r/min室温高，心2min，上清液备用。取1.5 mL离心管，吸取960L稀释液(5.9), 加入40L上清液，昆匀即为待测液。8 测定8. 1 所有操作需在室温下(200C:!:50C)进行。8.2 吸取100L待测液于金标微孔中，上下抽吸510次，室温条件下进行孵育5mino将试纸条吸水海绵端垂直向下插入金标做孔中，室温条件下反应6min。从微孔中取出试纸条，弃去试纸条下端的样品垫，观察显色情况，进行结果判定。2 D834/T 3891-2021 8. 3 空白试验:称取空白试样，按照7和8.2的步骤同法操作。8.4 加标质控试验:准确称取空白试样2g (精确至o.01 g)置于50mL离心管中，加入适量腐霉利标准工作液(5.12)，使待测液中腐霉利的终浓度为0.2mg/kg，按照7和8.2的步骤同法操作。9 结果分析9. 1 结果判定9. 1. 1 无效控制线(C线)不显色，表明操作不正确或试剂条无效。判定示意图见图10无敷阴性图l目视判定示意图9.1.2 阴性阳性C结T缉检测线(T线)颜色比控制线(C线)颜色深或者检测线(T线)颜色与控制线(C线)颜色相当，表明样品中腐霉利残留低于方法检测限，判定为阴性。判定示意图见图l。9.1.3 阳性检测线(T线)不显色或检测线(T线)颜色比控制线(C线)颜色浅，表明样品中腐毒利残留的含量高于方法检测限，判定为阳性。判定示意图见图109. 2 质控试验要求空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。否则表示不满足质控试验要求，此批样品结果无效。10 性能指标10. 1 灵敏度灵敏度应二三95%。10.2 特异性3 D834/T 3891-2021 特异性应?:95%。10.3 假阴性率假阴性率应三三5%。10.4 假阳性率假阳性率应三三5%。注:性能指标计算力法见附录Ao4 D834/T 3891-2021 样品情况怯阳性阴性总数显著性差异(X 2) 灵敏度Cp+，%) 特异性Cp一，%) 假阴性率(pf-，%) 假阳性率(pf+，%) 相对准确度(，%) c 注:附录A(资料性)定性方法性能指标计算方法表.1性能指标计算表检测结果b阳性阴性Nll N12 N21 N22 N1二Nll+n2N2二N21十N222= (1 N1，-N1-1) / CNN21) , 自由度Cdf) =1 p+=Njj/Nl P-=N2/N2 pf-=N/Nj=100灵敏度pf+=N21/N二=100特异性( Njj+N2二)/ (Nl+N二)几由参比方法检验得到的结果或者样品中实际的公议值结果;h由待确认方法检验得到的结果。灵敏度的计算使用确认后的结果:总数N1二Nll+n2N2二N21+N22N二n+N2或N1+N2t为方法的检测结果相对准确性的结果，与致性分析和浓度检测趋势情况综合评价。N:任何特定单元的结果数，第个下标指行，第个下标指列。示例Nll表示第-行，第列，N1表示所有的第行，N，表示所有的第一歹川N12表示第行，第穴列。5