芳酸类非甾体抗炎药物.ppt

第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析 第六章第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析芳酸类非甾体抗炎药物的分析 典型药物的结构与性质典型药物的结构与性质 鉴别试验鉴别试验特殊杂质及其检查法特殊杂质及其检查法含量测定含量测定4123体内药物分析体内药物分析5熟悉熟悉:主要芳酸类非甾体抗炎药物杂质的结构,危害,检查方法与限度 了解了解:影响芳酸类非甾体抗炎药物稳定性的主要因素,体内样品与临床监测 掌握掌握:芳酸类非甾体抗炎药的结构和性质 主要芳酸类药物的鉴别,检查和含量测定的原理与特点 概述概述结构特点结构特点药物特点药物特点药物特点药物特点理化特性理化特性分析方法分析方法作用作用临床临床基本基本结构结构基本基本性质性质鉴别鉴别,检查检查含量测定含量测定;体内分析体内分析l抗炎抗炎,抗风湿抗风湿,止痛止痛,退热退热 l关节炎关节炎,发热发热,慢性疼痛慢性疼痛l芳基取代羧酸芳基取代羧酸l游离羧基和苯环游离羧基和苯环l酸性酸性;水解性水解性;光谱特性光谱特性l基团基团(酚酚)/元素元素 (硫硫)特性特性lFe3+;UV,IR,LCl中间体或水解产物中间体或水解产物l酸碱滴定酸碱滴定;UV;HPLCl体内过程与分析体内过程与分析非甾体抗炎药(NSAIDs)是一类不含有甾体骨架的抗炎药,是目前临床使用最多的药物种类之一第一节第一节 典型药物的结构与性质典型药物的结构与性质一、典型药物与结构特点一、典型药物与结构特点 二、主要理化性质二、主要理化性质一、典型药物与结构特点一、典型药物与结构特点 羧基状态 游离游离:水杨酸水杨酸,阿司匹林阿司匹林,双水杨酯双水杨酯,二氟尼柳二氟尼柳,甲芬那酸甲芬那酸,布洛芬布洛芬,酮洛芬酮洛芬,萘普生萘普生,吲哚美辛吲哚美辛盐盐/酯酯:双氯芬酸钠双氯芬酸钠,双水杨酯双水杨酯酰胺酰胺:吡罗昔康吡罗昔康,美洛昔康美洛昔康 具有苯环和羧基 水杨酸水杨酸 阿司匹林阿司匹林 双水杨酯双水杨酯 二氟尼柳二氟尼柳一、典型药物与结构特点一、典型药物与结构特点 苯环结构特征 邻羟基苯甲酸邻羟基苯甲酸:水杨酸水杨酸,阿司匹林阿司匹林,双水杨酯双水杨酯,二氟尼柳二氟尼柳邻胺基苯甲酸邻胺基苯甲酸:甲芬那酸甲芬那酸二苯甲酮二苯甲酮:酮洛芬酮洛芬羟基不饱和酮羟基不饱和酮:吡罗昔康吡罗昔康,美洛昔康美洛昔康杂环杂环:吲哚美辛吲哚美辛,吡罗昔康吡罗昔康,美洛昔康美洛昔康特殊元素特殊元素:二氟尼柳二氟尼柳(氟氟);双氯芬酸钠双氯芬酸钠/吲哚美辛吲哚美辛(氯氯)吡罗吡罗/美洛昔康美洛昔康(硫硫)对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚 尼美舒利尼美舒利二、主要理化性质二、主要理化性质(一)酸性l较强酸性较强酸性:原料药可在中性乙醇或甲醇原料药可在中性乙醇或甲醇,丙酮等丙酮等水溶性有机溶剂中水溶性有机溶剂中,用氢氧化钠直接滴定用氢氧化钠直接滴定l双氯芬酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生,吲哚美辛:羧基不与苯环直接相连羧基不与苯环直接相连,酸性较弱酸性较弱l吡罗昔康,美洛昔康,尼美舒利,对乙酰氨基酚:酰胺结构酰胺结构,无明显酸性无明显酸性 pKa=3.49 2.95 4.26二、主要理化性质二、主要理化性质(二)水解性l酯键酯键:阿司匹林阿司匹林/双水杨酯双水杨酯l酰胺键酰胺键:吲哚美辛吲哚美辛,吡罗昔康吡罗昔康,美洛昔康美洛昔康,尼美舒利尼美舒利,对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚l水解反应及其产物的特性反应水解反应及其产物的特性反应鉴别鉴别l水解可快速水解可快速,定量定量含量测定含量测定(剩余碱量法剩余碱量法)l美洛昔康 定过量的氢氧化钠水解定过量的氢氧化钠水解 剩余的氢氧化钠用盐酸回滴定剩余的氢氧化钠用盐酸回滴定美洛昔康二、主要理化性质二、主要理化性质(三)吸收光谱特性l紫外特征光谱紫外特征光谱:鉴别鉴别;含量均匀度含量均匀度,溶出度溶出度/释放度释放度l红外特征光谱红外特征光谱:鉴别鉴别酮洛芬l酚羟基酚羟基:对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚,水杨酸与水杨酸与Fe3+显色显色鉴别鉴别 l二苯甲酮二苯甲酮:酮洛芬与苯肼缩合显色酮洛芬与苯肼缩合显色鉴别鉴别 l硫硫:美洛昔康热分解后产生的硫化氢美洛昔康热分解后产生的硫化氢与醋酸铅生成黑色硫化铅与醋酸铅生成黑色硫化铅鉴别鉴别(四)基团/元素特性第二节第二节 鉴别试验鉴别试验一、与三氯化铁反应一、与三氯化铁反应(显色显色)二、缩合反应（二、缩合反应（显色、沉淀显色、沉淀）三、重氮化三、重氮化-偶合反应（偶合反应（显色显色）四、氧化反应（四、氧化反应（显色显色）五、水解反应（五、水解反应（沉淀与臭气沉淀与臭气）六、特征元素反应六、特征元素反应七、光谱法七、光谱法八、色谱法八、色谱法一、与三氯化铁反应一、与三氯化铁反应n中性或弱酸性中性或弱酸性(pH值值46)条件下进行条件下进行,强酸性强酸性溶液中配位化合物分解溶液中配位化合物分解1.水杨酸反应一、与三氯化铁反应一、与三氯化铁反应n对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚:水溶液加三氯化铁试液显水溶液加三氯化铁试液显蓝紫色蓝紫色2.酚羟基反应二、缩合反应二、缩合反应n酮洛芬的酮洛芬的二苯甲酮二苯甲酮,在酸性下与在酸性下与二硝基苯肼二硝基苯肼缩缩合生成橙色合生成橙色偶氮化合物沉淀偶氮化合物沉淀三、重氮化三、重氮化-偶合反应偶合反应n对乙酰氨基酚酸中水解生成对乙酰氨基酚酸中水解生成对氨基酚对氨基酚,游离游离芳芳伯氨基伯氨基与与亚硝酸钠亚硝酸钠试液重氮化试液重氮化,重氮盐重氮盐再与碱再与碱性性-萘酚偶合萘酚偶合生成生成红色偶氮化合物红色偶氮化合物 四、氧化反应四、氧化反应l甲芬那酸甲芬那酸:溶于硫酸溶于硫酸,被重铬酸钾氧化显深蓝被重铬酸钾氧化显深蓝色色随即变为棕绿色随即变为棕绿色l吲哚美辛吲哚美辛:溶液在硫酸酸性下与重铬酸钾溶液溶液在硫酸酸性下与重铬酸钾溶液共热共热,被氧化显紫色被氧化显紫色l在盐酸溶液中与亚硝酸钠溶液反应显绿色在盐酸溶液中与亚硝酸钠溶液反应显绿色,放置后放置后渐变黄色渐变黄色 五、水解反应五、水解反应l阿司匹林阿司匹林,水解得水杨酸钠与醋酸钠水解得水杨酸钠与醋酸钠,酸化生酸化生成水杨酸白色沉淀成水杨酸白色沉淀;并发生醋酸的臭气并发生醋酸的臭气l双水杨酯水解后酸化双水杨酯水解后酸化,生成白色水杨酸沉淀生成白色水杨酸沉淀;2 CH3COONa+H2SO4 2 CH3COOH+Na2SO4六、特征元素的反应六、特征元素的反应l氯氯的鉴别的鉴别与碱共热分解产生氯化物与碱共热分解产生氯化物,显氯显氯化物的鉴别反应化物的鉴别反应u双氯芬酸钠双氯芬酸钠:与碳酸钠炽灼灰化与碳酸钠炽灼灰化,加水煮沸加水煮沸,滤过滤过,滤液显氯化物鉴别反应滤液显氯化物鉴别反应 l硫硫的鉴别的鉴别经高温分解产生硫化氢气体经高温分解产生硫化氢气体,遇遇醋酸铅生成硫化铅黑色沉淀醋酸铅生成硫化铅黑色沉淀u美洛昔康美洛昔康:试管中炽灼试管中炽灼,产生的气体使湿润的醋酸产生的气体使湿润的醋酸铅试纸显黑色铅试纸显黑色七、光谱法七、光谱法(一一)紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法1.最大吸收波长法最大吸收波长法:双氯芬酸钠溶液双氯芬酸钠溶液:276nm有最大吸收有最大吸收吡罗昔康片吡罗昔康片,含量测定溶液含量测定溶液:243与与334nm最大吸收最大吸收2.最大与最小吸收波长法最大与最小吸收波长法:布洛芬及制剂氢氧化钠溶液布洛芬及制剂氢氧化钠溶液:265,273nm最大吸收最大吸收245,271nm最小吸收最小吸收259nm肩峰肩峰 七、光谱法七、光谱法(一一)紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法3.吸光度法吸光度法:甲芬那酸盐酸甲芬那酸盐酸-甲醇溶液甲醇溶液:279与与350nm最大吸收最大吸收吸光度吸光度(20g/ml)分别分别:0.690.74与与0.560.604.吸光度比值法吸光度比值法:二氟尼柳盐酸二氟尼柳盐酸-乙醇溶液乙醇溶液:251与与315nm最大吸收最大吸收吸光度比值应为吸光度比值应为4.24.6 七、光谱法七、光谱法(二二)红外分光光度法红外分光光度法阿司匹林阿司匹林 峰位峰位(cm-1)归归属属33002300vO-H(羧羧基基)1760,1690vC=O(羧羧酸酸酯酯和和羧羧酸酸)1610,1570,1480,1460vC=C(苯苯环环)1310,1230,1180vC-O(羧羧酸酸酯酯和和羧羧酸酸)775Ar-H(邻邻位取代苯位取代苯环环)330023001760,169016101460 13101180775八、色谱法八、色谱法(一一)薄层色谱法薄层色谱法个别药物制剂采用溶剂提取法去除辅料后个别药物制剂采用溶剂提取法去除辅料后IR鉴别鉴别;部分药物制剂采用部分药物制剂采用TLC鉴别鉴别:二氟尼柳二氟尼柳,美洛昔康等美洛昔康等(二二)高效液相色谱法高效液相色谱法随着随着HPLC在药物制剂含量测定中的大量应用在药物制剂含量测定中的大量应用,更多更多应用应用HPLC进行制剂的鉴别进行制剂的鉴别:阿司匹林等多种制剂均直接取含量测定项下记录的阿司匹林等多种制剂均直接取含量测定项下记录的HPLC色谱图进行鉴别色谱图进行鉴别 当TLC和HPLC均有收载时:二者可任选其一如美洛昔康片的鉴别 药物名称药物名称特殊杂质特殊杂质游离水杨酸与有关物质游离水杨酸与有关物质/FeCl3阿司匹林/双水杨酯甲芬那酸二氟尼柳第三节第三节 特殊杂质及其检查法特殊杂质及其检查法2.3-二甲基苯胺有关物质 6-甲氧基-2-萘乙酮 氨基酚和对氯苯乙酰胺A.TLC;B.HPLCGC萘普生对乙酰氨基酚一、一、阿司匹林阿司匹林与与双水杨酯双水杨酯(一一)阿司匹林阿司匹林与与双水杨酯的合成双水杨酯的合成一、一、阿司匹林阿司匹林与与双水杨酯双水杨酯(二二)阿司匹林中游离水杨酸与有关物质阿司匹林中游离水杨酸与有关物质1.游离水杨酸游离水杨酸:酚羟基易被空气酚羟基易被空气(氧氧)逐渐氧化逐渐氧化生成淡黄生成淡黄,红红棕至深棕色棕至深棕色醌型化合物醌型化合物1.游离水杨酸游离水杨酸:l ChP 用水杨酸与用水杨酸与 Fe3+生成紫堇色配离子的生成紫堇色配离子的原理原理,用稀硫酸铁铵溶液显色法检查用稀硫酸铁铵溶液显色法检查p 供试品溶液制备过程中阿司匹林水解供试品溶液制备过程中阿司匹林水解l ChP2010采用采用1%冰醋酸甲醇溶液制备供试冰醋酸甲醇溶液制备供试品溶液品溶液(防阿司匹林水解防阿司匹林水解);并用并用RP-HPLC检查检查 2.有关物质有关物质:l阿司匹林中阿司匹林中“有关物质有关物质”系指除系指除“游离水杨游离水杨酸酸”外的合成原料外的合成原料(苯酚苯酚)及副产物及副产物2.有关物质有关物质:阿司匹林阿司匹林 水杨酸水杨酸 乙酰水杨酰水杨酸乙酰水杨酰水杨酸a:阿司匹林供试品阿司匹林供试品(10mg/ml)；b:0.5%自身对照自身对照(50 g/ml)；c:0.05%自身对照自身对照(灵敏度试验灵敏度试验5 g/ml)；d:水杨酸对照水杨酸对照(10 g/ml)；e:空白空白一、一、阿司匹林阿司匹林与与双水杨酯双水杨酯(三三)双水杨酯双水杨酯中游离水杨酸中游离水杨酸利用水杨酸与三价铁生成有色配离子的原理利用水杨酸与三价铁生成有色配离子的原理,用硝酸铁溶液显色用硝酸铁溶液显色,在在530nm的波长处测定的波长处测定吸光度吸光度,限度为限度为0.5%;双水杨酯片同法检查双水杨酯片同法检查,限度为限度为1.5%第四节第四节 含量测定含量测定一、酸碱滴定法一、酸碱滴定法二、紫外二、紫外-可见分光光度法可见分光光度法三、高效液相色谱法三、高效液相色谱法一、酸碱滴定法一、酸碱滴定法酸碱酸碱滴定法滴定法水解后剩余量滴定法阿司匹林阿司匹林 USP,BP,JP非水溶液滴定法吡罗昔康吡罗昔康具有吡啶环具有吡啶环,显碱性显碱性,可在冰醋酸溶液中用可在冰醋酸溶液中用高氯酸滴定液滴定高氯酸滴定液滴定 剩余量滴定法美洛昔康美洛昔康水及与水混溶的有机溶水及与水混溶的有机溶剂中难溶剂中难溶,溶于氢氧化溶于氢氧化钠滴定液后盐酸回滴定钠滴定液后盐酸回滴定 直接滴定法水杨酸水杨酸,阿司匹林阿司匹林,双水双水杨酯杨酯,二氟尼柳二氟尼柳,甲芬那甲芬那酸酸,布洛芬布洛芬,酮洛芬酮洛芬,萘普萘普生生,尼美舒利尼美舒利(一一)直接滴定法直接滴定法1.测定法测定法本品约本品约0.4g,精密称定精密称定,加中性乙醇加中性乙醇(对酚酞指示液显中性对酚酞指示液显中性)20ml溶解后溶解后,加酚酞指示液加酚酞指示液3滴滴,用氢氧化钠滴定液用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定滴定T=18.02mg2.讨论讨论滴定在不断振摇下稍快进行滴定在不断振摇下稍快进行,防阿司匹林水解防阿司匹林水解受阿司匹林的水解产物水杨酸及醋酸的干扰受阿司匹林的水解产物水杨酸及醋酸的干扰3.应用应用水杨酸水杨酸,阿司匹林阿司匹林,双水杨酯双水杨酯,二氟尼柳二氟尼柳,甲芬那酸甲芬那酸,布洛芬布洛芬,酮洛芬酮洛芬,萘普生及尼美舒利萘普生及尼美舒利(二二)剩余量滴定法剩余量滴定法1.原理原理美洛昔康含有与羰基共轭的烯醇式羟基美洛昔康含有与羰基共轭的烯醇式羟基,具有羧酸性质具有羧酸性质,可用氢氧化钠滴定液滴定可用氢氧化钠滴定液滴定？本品甲醇？本品甲醇,乙醇乙醇,丙酮及水中难溶丙酮及水中难溶,定量过量的氢氧定量过量的氢氧化钠滴定液溶解后化钠滴定液溶解后,用盐酸滴定液回滴定用盐酸滴定液回滴定2.测定法测定法本品约本品约0.4g,精密称定精密称定,精密加氢氧化钠滴定液精密加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)25ml,微温溶解微温溶解,加中性乙醇加中性乙醇(对溴麝香草对溴麝香草酚蓝指示液显中性酚蓝指示液显中性)100ml与指示液与指示液10滴滴,用盐酸滴定用盐酸滴定液液(0.1mol/L)滴定滴定;T=35.14mg(三三)水解后剩余量滴定法水解后剩余量滴定法1.原理原理阿司匹林酯结构在碱性溶液中易水解阿司匹林酯结构在碱性溶液中易水解,加入定量过量的氢加入定量过量的氢氧化钠滴定液氧化钠滴定液,加热使酯键水解后加热使酯键水解后,再用硫酸滴定液再用硫酸滴定液回滴定剩余的氢氧化钠滴定液回滴定剩余的氢氧化钠滴定液2NaOH+H2SO4Na2SO4+2H2O2.测定法测定法(USP32-NF27)本品约本品约1.5g,精密称定精密称定,加氢氧化钠滴定液加氢氧化钠滴定液(0.5mol/L)50.0ml,缓缓煮沸缓缓煮沸10min,放冷放冷,加酚酞指示液加酚酞指示液,用硫酸用硫酸滴定液滴定液(0.25mol/L)滴定滴定;T=45.40mg(四四)非水溶液滴定法非水溶液滴定法1.原理原理吡罗昔康具有吡啶环吡罗昔康具有吡啶环,显碱性显碱性,可在冰醋酸溶液可在冰醋酸溶液中用高氯酸滴定液滴定中用高氯酸滴定液滴定 2.测定法测定法本品约本品约0.2g,精密称定精密称定,加冰醋酸加冰醋酸20ml使溶解使溶解,加加结晶紫指示液结晶紫指示液1滴滴,用高氯酸滴定液用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液显蓝绿色滴定至溶液显蓝绿色,并将滴定的并将滴定的结果用空白试验校正结果用空白试验校正T=33.14 mg/ml第五节第五节 体内药物分析体内药物分析一、一、血浆中阿司匹林与水杨酸的血浆中阿司匹林与水杨酸的HPLC测定法测定法二、二、血浆中布洛芬的血浆中布洛芬的HPLC测定测定 与立体选择性代谢研究与立体选择性代谢研究 二、布洛芬的立体选择性代谢二、布洛芬的立体选择性代谢 l布洛芬布洛芬(Ibuprofen,IBP)的左、右旋光异构体在体内的的左、右旋光异构体在体内的药理活性及代谢过程存在显著差异药理活性及代谢过程存在显著差异l体外右旋体的药理作用是左旋体的体外右旋体的药理作用是左旋体的160倍倍,体内仅为体内仅为1.4倍倍;主要原因是在体内无活性的主要原因是在体内无活性的R-(-)-布洛芬部分转化为布洛芬部分转化为活性的活性的S-(+)-布洛芬布洛芬l 色谱条件与洗脱程序p 手性柱手性柱Chiralcel OJ-H柱柱(2504.6mm,5m)p 非手性柱非手性柱SiO2柱柱(504.6mm,5m)p 流动相正己烷流动相正己烷-异丙醇异丙醇-三氟醋酸三氟醋酸(96.5:3.5:0.1)p 预处理流动相为正己烷预处理流动相为正己烷-异丙醇异丙醇(99.5:1)p 利用柱切换技术用流动相将预处理洗脱保留时间在利用柱切换技术用流动相将预处理洗脱保留时间在1.704.09min范围内的非手性柱流出组分正冲进入手性柱范围内的非手性柱流出组分正冲进入手性柱二、布洛芬的立体选择性代谢二、布洛芬的立体选择性代谢l血浆样品处理:样品0.2ml,加内标溶液0.05ml,涡旋混匀,加0.1mol/L醋酸钠溶液(pH 3.7)0.2ml,涡旋混匀,加入正己烷-异丙醇(95:5)3ml,涡旋萃取7min,低温离心(3000r/min)7min,上清液于50水浴中空气吹干;残留物溶于0.1ml流动相,涡旋混匀1min,进样40lA.布洛芬和内标对照品；B.空白血浆；C.空白血浆+布洛芬和内标；D.血浆样品1.R-(-)-布洛芬；2.S-(+)-布洛芬；3.内标(p-BBA)二、布洛芬的立体选择性代谢二、布洛芬的立体选择性代谢l方法学验证方法学验证 p线性范围与定量限线性范围与定量限:布洛芬:200.208mg/L;S-(+)-布洛芬:100.104mg/Lp精密度与准确度精密度与准确度(10,2.5,0.625mg/L):日内,日间RSD6.5%准确度:布洛芬100.2%103.2%;S-(+)-布洛芬93.3%105.8%;R-(-)-布洛芬97.3%107.1%p萃取回收率萃取回收率(10,2.5,0.625mg/L):布洛芬80.0%85.9%;S-(+)-布洛芬84.1%86.6%;R-(-)-布洛芬82.2%85.6%二、布洛芬的立体选择性代谢二、布洛芬的立体选择性代谢l方法应用 p8名男性健康志愿者口服名男性健康志愿者口服300mg布洛芬缓释胶囊布洛芬缓释胶囊pS-(+)-布洛芬的布洛芬的AUC0-t均数占布洛芬均数占布洛芬(消旋体消旋体)的的60%,是是R-(-)-布洛芬的布洛芬的148%pS-(+)-布洛芬的布洛芬的Cmax均数占布洛芬均数占布洛芬(消旋体消旋体)的的59%,是是R-(-)-布洛芬的布洛芬的136%单剂量多剂量Thank You!Thanks二、二、甲芬那酸甲芬那酸(一一)合成工艺合成工艺 甲芬那酸主要以邻甲芬那酸主要以邻-氯苯甲酸氯苯甲酸(o-chloroben-zoic acid)和和2,3-二甲基苯胺二甲基苯胺(2,3-dimethyl-aniline)为原料为原料,在铜的催化下缩合而成在铜的催化下缩合而成 二、二、甲芬那酸甲芬那酸(二二)2,3-二甲基苯胺的检查二甲基苯胺的检查 ChP曾采用曾采用HPLC法检查法检查:单单1杂质的限量为杂质的限量为0.1%杂质总量为杂质总量为0.5%ChP2010规定规定HPLC法检查法检查:“有关物质有关物质”GC检查检查:2,3-二甲基苯胺二甲基苯胺(0.01%0.01%)三、三、二氟尼柳二氟尼柳(一一)合成工艺合成工艺 原料原料(I):2,4-二氟苯胺二氟苯胺中间体中间体(II):2,4-二氟联苯二氟联苯中间体中间体(III):4-(2,4-二氟苯基二氟苯基)苯乙酮苯乙酮中间体中间体(IV):4-(2,4-二氟苯基二氟苯基)苯酚乙酯苯酚乙酯中间体中间体(V):4-(2,4-二氟苯基二氟苯基)苯酚苯酚产品产品(VI):二氟尼柳二氟尼柳三、三、二氟尼柳二氟尼柳(二二)有关物质有关物质A和和B的检查的检查 1.有关物质有关物质A的检查的检查TLC(正相):l极性较小的杂质极性较小的杂质l单单1杂质的限量为杂质的限量为0.5%2.有关物质有关物质B的检查的检查HPLC(反相):n极性较大的杂质极性较大的杂质n各面积的和为各面积的和为0.5%四、萘普生四、萘普生(一一)合成工艺合成工艺 原料原料(I):2-萘甲醚萘甲醚中间体中间体(II):6-甲氧基甲氧基-2-乙酰萘乙酰萘(6-甲氧基甲氧基-2-萘乙酮萘乙酮)中间体中间体(III):2-羟基羟基-2-(6-甲氧基甲氧基-2-萘基萘基)丙酸丙酸产品产品(IV):萘普生萘普生 四、萘普生四、萘普生(二二)6-甲氧基甲氧基-2-萘乙酮及其它有关物质萘乙酮及其它有关物质1.溶液制备溶液制备l 供试品溶液供试品溶液:0.5mg/ml流动相溶液流动相溶液l 对照品溶液对照品溶液:6-甲氧基甲氧基-2-萘乙酮萘乙酮(杂质杂质I),50g/mll 对照溶液对照溶液:供试品溶液供试品溶液1ml+对照品溶液对照品溶液2ml200ml2.限度限度 n 杂质杂质I:不得大于杂质不得大于杂质I峰面积峰面积(0.1%)n 其他单个杂质其他单个杂质:不得大于杂质不得大于杂质I峰面积的峰面积的2倍倍(0.2%)n 各杂质总量各杂质总量:不得大于对照溶液中萘普生峰面积不得大于对照溶液中萘普生峰面积(0.5%)五、对乙酰氨基酚五、对乙酰氨基酚 (一一)合成工艺合成工艺(二二)有关杂质有关杂质:对硝基酚对硝基酚,对氨基酚对氨基酚,对氯苯胺对氯苯胺,对氯苯乙酰胺对氯苯乙酰胺,o-乙酰乙酰基对乙酰氨基酚基对乙酰氨基酚,偶氮苯偶氮苯,氧化偶氮苯氧化偶氮苯,苯醌和醌亚胺苯醌和醌亚胺 1.对氨基酚及对氨基酚及(其它其它)有关物质有关物质HPLCl 对氨基酚对氨基酚:0.005%l 有关物质有关物质:单个单个0.1%;总量总量0.5%2.对氯苯乙酰胺对氯苯乙酰胺(极性较小)HPLC(0.005%)(三三)水解后剩余量滴定法水解后剩余量滴定法3.两步滴定法两步滴定法水解后剩余量滴定法的改进水解后剩余量滴定法的改进 阿司匹林片剂阿司匹林片剂:水解产物水杨酸及醋酸水解产物水杨酸及醋酸;稳定剂酒石酸或枸橼酸稳定剂酒石酸或枸橼酸两步滴定法两步滴定法:l第第1步步:中和中和,中和干扰物和阿司匹林的游离羧基中和干扰物和阿司匹林的游离羧基l第第2步步:水解与滴定水解与滴定,水解后剩余量滴定法水解后剩余量滴定法阿司匹林片含量测定方法阿司匹林片含量测定方法(ChP2005)如下如下:本品本品10片片,精密称定精密称定,研细研细,精密称取片粉精密称取片粉(阿司匹林阿司匹林0.3g),中性乙醇中性乙醇(酚酚酞指示液显中性酞指示液显中性)20ml,振摇振摇,加指示液加指示液3滴滴,滴加氢氧化钠滴定液滴加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)至溶液显粉红色至溶液显粉红色,精密加氢氧化钠滴定液精密加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)40ml,加热加热15min,放冷放冷,用硫酸滴定液用硫酸滴定液(0.05mol/L)滴定滴定;T=18.02mg(三三)水解后剩余量滴定法水解后剩余量滴定法l含量计算含量计算供试品中阿司匹林的含量供试品中阿司匹林的含量,由水解时消耗的碱量计算由水解时消耗的碱量计算n第第1步步:中和时中和时,阿司匹林的游离羧酸中和阿司匹林的游离羧酸中和n第第2步步:水水解解后后剩剩余余量量滴滴定定法法时时阿阿司司匹匹林林与与氢氢氧氧化化钠钠反反应的摩尔比为应的摩尔比为1:1n滴定度滴定度:T=0.1(1/1)180.16=18.02(mg/m1)n片剂含量片剂含量:二、紫外二、紫外-可见分光光度法可见分光光度法(一一)直接分光光度法直接分光光度法二氟尼柳二氟尼柳,美洛昔康美洛昔康,尼美舒利制剂尼美舒利制剂,对乙酰氨基酚及其对乙酰氨基酚及其部分制剂部分制剂;二氟尼柳胶囊含量测定二氟尼柳胶囊含量测定:l精密称取内容物适量(二氟尼柳0.1g),置100ml量瓶,加溶剂(0.1mol/L的盐酸乙醇溶液)适量,超声处理10min,用溶剂稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液5ml,置l00ml量瓶,用溶剂稀释至刻度,摇匀,在315nm的波长处测定吸光度;另取二氟尼柳对照品,用溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含50g的溶液作为对照品溶液,同法测定,计算l式中式中,D为供试品溶液稀释体积为供试品溶液稀释体积(ml,D=100100/5=2000);标示量标示量为胶囊剂的规格为胶囊剂的规格(mg/粒粒)二、紫外二、紫外-可见分光光度法可见分光光度法(二二)柱分配色谱柱分配色谱-紫外分光光度法紫外分光光度法 lUSP32-NF27则采用柱色谱分离法消除阿司匹林胶囊则采用柱色谱分离法消除阿司匹林胶囊和栓剂中辅料及降解产物的干扰和栓剂中辅料及降解产物的干扰 l柱分配色谱柱分配色谱-紫外分光光度法不需特殊仪器紫外分光光度法不需特殊仪器,结果重现结果重现性较好性较好,但操作较繁琐但操作较繁琐三、高效液相色谱法三、高效液相色谱法l阿司匹林栓的含量测定阿司匹林栓的含量测定:取本品5粒,精密称定,置小烧杯中,在4050水浴上微温熔融,在不断搅拌下冷却至室温,精密称取适量(阿司匹林0.1g),置50ml量瓶中,加溶剂(1%冰醋酸的甲醇溶液)适量,在4050水浴中充分振摇使阿司匹林溶解,放冷,用溶剂稀释至刻度,摇匀,置冰浴中冷却1小时,取出,迅速滤过,取续滤液作为供试品贮备液;精密量取供试品贮备液5ml,置100ml量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀,精密量取10l进样分析;按外标法以峰面积计算 l流动相中添加冰醋酸是为抑制阿司匹林的解离流动相中添加冰醋酸是为抑制阿司匹林的解离,消除色谱峰拖尾消除色谱峰拖尾;同时同时,流动相及供试液中的醋酸也可抑制阿司匹林的水解流动相及供试液中的醋酸也可抑制阿司匹林的水解lD为稀释体积为稀释体积(ml,D=50 100/5=1000);标示量为栓剂规格标示量为栓剂规格(mg/支支)一、血浆中阿司匹林与水杨酸测定一、血浆中阿司匹林与水杨酸测定lASA在体内迅速转化为活性代谢物在体内迅速转化为活性代谢物(SA),进一步转化为进一步转化为非活性代谢物水杨尿酸及葡糖醛酸结合物非活性代谢物水杨尿酸及葡糖醛酸结合物l在进行阿司匹林药代动力学研究时在进行阿司匹林药代动力学研究时,要求同时监测原形要求同时监测原形药物药物ASA和活性代谢物和活性代谢物SAl 质谱条件l 离子化方式:电喷雾电喷雾(ESI)离子源离子源,负离子模式负离子模式;l 扫描方式:多反应监测多反应监测(MRM)l ASA:m/z 178.9136.8l SA:m/z 136.992.8l 4-ABS(内标物内标物):m/z 162.9118.9一、血浆中阿司匹林与水杨酸测定一、血浆中阿司匹林与水杨酸测定l血浆样品处理:血浆200l,置1.5ml离心管中,加1mol/L盐酸溶液50l和内标溶液200l,混匀,加入乙酸乙酯600l,振荡1min,离心(13 000 r/min)5min;取上层清液,吹干,加流动相300l复溶,取10l进样l空白血浆与定量下限QC样品色谱图一、血浆中阿司匹林与水杨酸测定一、血浆中阿司匹林与水杨酸测定l结果与讨论p 人血浆中阿司匹林和水杨酸线性范围人血浆中阿司匹林和水杨酸线性范围 2510 000ng/ml(r0.990)p 定量下限定量下限(LOQ)为为25ng/mlp 日内和日间精密度日内和日间精密度RSD15%准确度准确度RE15%p 适用于阿司匹林的人体药代动力学研究适用于阿司匹林的人体药代动力学研究谢谢您的观看！