定性免疫学检验的性能验证与质量控制(牛广华).ppt

定性免疫学检验的性能验定性免疫学检验的性能验证与质量控制证与质量控制ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心ISO15189认可中大家到困惑的问题认可中大家到困惑的问题 定性免疫项目如：定性免疫项目如：ELISA检测、自身抗体检测、自身抗体免疫印迹试验、抗核抗体免疫荧光（免疫印迹试验、抗核抗体免疫荧光（IIF）检测）检测质量控制和性能验证及验证内容？如何做？标质量控制和性能验证及验证内容？如何做？标准？准？2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座22021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座3ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心5.5.1.1 5.5.1.1 检检验验方方法法和和程程序序的的分分析析性性能能验验证证内内容容应应参参考考试试剂剂盒盒说说明明书书上上明明确确标标示示的的性性能能参参数数进进行行验验证证，至至少少应应包包括括：检检出出限限、符符合合率率（采采用用国国家家标标准准血血清清盘盘或或临临床床诊诊断断明明确确的的阴阴阳阳性性样样品品各各2020份份或或与与其其他他分分析析方方法法比比对对），如如为为定定量量方方法法应应验验证证精精密密度度（包包括括重重复复性性和和中中间间精精密密度度）；并并应应明明确确检检验验项项目目的的预预期期用用途途，如如筛筛查查、诊断诊断、确认确认。5.5 检验程序检验程序CNAS-CL39：2012医学实验室质量和能力认可准则在临床医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学检验领域的应用说明免疫学检验领域的应用说明-2014改版改版2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座4ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心n试剂盒说明书（先决条件！）试剂盒说明书（先决条件！）n国际和或国内标准国际和或国内标准性能验证的合格标准从何而来？性能验证的合格标准从何而来？2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座52021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座62021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座7ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心n筛查试验筛查试验n诊断试验诊断试验n确认实验确认实验nC50C50nC5C5nC95C95概念准备概念准备2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座8ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心n筛查试验用于检测整个人群或部分人群中分析物的筛查试验用于检测整个人群或部分人群中分析物的存在情况。存在情况。n一般而言，筛查试验应当具有较高的临床敏感性一般而言，筛查试验应当具有较高的临床敏感性（即临床检出率大于（即临床检出率大于95%95%），对其特异性的要求（和），对其特异性的要求（和阳性预测值）则取决于对各种因素的综合考虑。阳性预测值）则取决于对各种因素的综合考虑。如粪便隐血检测如粪便隐血检测筛查试验筛查试验2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座9ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心n用于临床怀疑某种特定疾病或状况是否存在。用于临床怀疑某种特定疾病或状况是否存在。n诊断试验需具有良好的敏感性和特异性。诊断试验需具有良好的敏感性和特异性。n诊断试验后如需进行确认试验，对诊断试验的特诊断试验后如需进行确认试验，对诊断试验的特异性要求可以稍微降低。异性要求可以稍微降低。如各种微生物培养如各种微生物培养诊断试验诊断试验2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座10ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心n确认试验用于验证筛查试验或者诊断试验结果的确确认试验用于验证筛查试验或者诊断试验结果的确认。认。n对于确认试验，特异性比敏感性更为重要。对于确认试验，特异性比敏感性更为重要。如梅毒密螺旋体抗体荧光吸收试验（如梅毒密螺旋体抗体荧光吸收试验（FTA-ABSFTA-ABS）确认试验确认试验2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座11ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心n一一份份样样本本，在在多多次次重重复复实实验验中中各各有有50%50%的的几几率率获获得得阳阳性或阴性的结果时该分析物的浓度。性或阴性的结果时该分析物的浓度。临界点（临界点（C50）浓度的定义）浓度的定义C502021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座12ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心n这这里里的的C50C50指指的的是是一一个个处处于于试试剂剂检检测测临临界界点点的的样样本本浓浓度，其一旦确定，是不变的。度，其一旦确定，是不变的。n试试剂剂盒盒CUT-OFFCUT-OFF值值指指的的是是一一个个判判断断某某一一次次测测定定结结果果的的由由阴阴性性和和阳阳性性对对照照信信号号值值按按一一定定公公式式计计算算出出来来的的信信号号值，每次测定都会有所差异。值，每次测定都会有所差异。C50与试剂盒阳性反应判断值（与试剂盒阳性反应判断值（CUT-OFF值）的区别值）的区别2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座13ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心n一一份份样样本本，在在多多次次重重复复实实验验中中有有95%95%的的几几率率获获得得阴阴性性结果时该分析物的结果时该分析物的浓度浓度。C5 浓度的定义浓度的定义C52021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座14ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心n一一份份样样本本，在在多多次次重重复复实实验验中中有有95%95%的的几几率率获获得得阳阳性性结果时该分析物的浓度。结果时该分析物的浓度。C95 浓度的定义浓度的定义C952021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座15ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心n应熟悉待验证的试剂或系统应熟悉待验证的试剂或系统n进进行行必必要要的的培培训训，包包括括样样本本的的处处理理和和储储存存、试试剂剂的的处处理理和和储储存存、合合理理的的检检测测方方案案、对对结结果果合合理理的的解解释释以以及系统的质量控制等。及系统的质量控制等。n制定质量保证计划制定质量保证计划n确定患者样本的数量及强弱（评价重复性）确定患者样本的数量及强弱（评价重复性）n确定比较的方法确定比较的方法性能验证专业知识技能准备性能验证专业知识技能准备2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座16ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心n质控品：可为商品质控品，有阳性和阴性。质控品：可为商品质控品，有阳性和阴性。nC50C50和和可可能能的的C5C5（低低于于C50C50浓浓度度20%20%）及及C95C95浓浓度度样样本本（高高于于C50C50浓浓度度20%20%）：用用于于重重复复性性及及最最低低检检出出限限验验证，不少于证，不少于4040次检测量）次检测量）n临临床床样样本本或或血血清清盘盘（准准确确性性验验证证）（不不少少于于5050份份阳阳性和阴性样本）性和阴性样本）样本准备样本准备2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座17ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心n进行重复性研究时，理想情况下需绘制在规定条件下候选方进行重复性研究时，理想情况下需绘制在规定条件下候选方法的整个不精密度曲线，然而具体操作时法的整个不精密度曲线，然而具体操作时需要检测的样本数量需要检测的样本数量较大较大n可使用一个可使用一个简单的方法简单的方法，即为待评价的检测方法建立分析物，即为待评价的检测方法建立分析物的临界浓度，并判定某一特定浓度范围，例如的临界浓度，并判定某一特定浓度范围，例如C5020%C5020%，是否，是否包含了包含了C5-C95C5-C95区间区间。n若若-20%-20%到到+20%+20%浓度范围包含了浓度范围包含了C5-C95C5-C95区间，那么区间，那么20%20%或距离或距离C50C50更远浓度的样本更远浓度的样本将得到一致的检测结果将得到一致的检测结果，即在，即在 C5-C95 C5-C95区间区间之外的样本检测结果可认为是精密的，浓度之外的样本检测结果可认为是精密的，浓度C95C95，将持续得到，将持续得到阳性结果，浓度阳性结果，浓度C595%95%。作作为为诊诊断断试试验验，检检测测敏敏感感性性和和特特异异性性均均应应95%95%。作作为为确确认认试试验验特特异性应异性应98%-99%98%-99%。定性免疫检验项目敏感性、特异性要求定性免疫检验项目敏感性、特异性要求2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座40ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心建议使用计分可信区间建议使用计分可信区间以上公式中，以上公式中，1.961.96是从标准正态分布对应的是从标准正态分布对应的9595可信区间可信区间得来的。若置信水平改变，则得来的。若置信水平改变，则1.961.96也应被相应的百分位点也应被相应的百分位点所替代。所替代。2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座41ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心敏感性、特异性的计算举例敏感性、特异性的计算举例表：待评价试剂与诊断标准相比较进行敏感性、特异性的计算举例表：待评价试剂与诊断标准相比较进行敏感性、特异性的计算举例n敏感性敏感性=100%88/102=86.3%=100%88/102=86.3%n特异性特异性=100%336/338=99.4%=100%336/338=99.4%n敏感性和特异性的95%置信区间为敏感性(74.3%,93.2%)和特异性(96.7%,99.9%)。2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座42ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心概概 述述n如果如果没有可用的诊断标准没有可用的诊断标准，那么厂家需提供待评价，那么厂家需提供待评价试剂试剂与某一已验证方法进行比较与某一已验证方法进行比较的结果，在这种情况的结果，在这种情况下，则不能够计算敏感性和特异性，而是计算阳性符下，则不能够计算敏感性和特异性，而是计算阳性符合率和阴性符合率。合率和阴性符合率。n这这种种计计算算反反映映的的并并非非方方法法的的准准确确度度，而而是是待待评评价价试试剂和已验证方法的一致性程度剂和已验证方法的一致性程度。阳性符合率和阴性符合率阳性符合率和阴性符合率2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座43ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心表：待评价试剂与已验证方法相比较进行阳性符合率和阴性符合率的计算表：待评价试剂与已验证方法相比较进行阳性符合率和阴性符合率的计算阳性符合率和阴性符合率的计算阳性符合率和阴性符合率的计算阳性符合率阳性符合率=a/(a+c)100%=a/(a+c)100%。阴性符合率阴性符合率=d/(b+d)100%=d/(b+d)100%。总符合率总符合率=(a+d)/(a+b+c+d)100%=(a+d)/(a+b+c+d)100%。n需需要要特特别别说说明明的的是是，阳阳性性符符合合率率可可以以解解释释为为已已验验证证方方法法检检测测结结果果为为阳阳性性的样本中待评价试剂的阳性率，的样本中待评价试剂的阳性率，2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座44ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心表表：待待评评价价试试剂剂与与已已验验证证方方法法相相比比较较进进行行阳阳性性符符合合率率和和阴阴性性符符合合率率的的计计算举例算举例阳性符合率和阴性符合率的计算举例阳性符合率和阴性符合率的计算举例阳性符合率阳性符合率=80/88 100%=90.9%=80/88 100%=90.9%。阴性符合率阴性符合率=342/352 100%=97.2%=342/352 100%=97.2%总符合率总符合率=(80+342)/440 100%=95.9%=(80+342)/440 100%=95.9%95%置信区间为：敏感性(78.8%,96.4%)和特异性(93.5%,98.8%)。2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座45ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心n每每次次实实验验，应应立立即即记记录录所所有有原原始始检检测测数数据据并并复复核核，以早期发现分析系统及人为误差的来源。以早期发现分析系统及人为误差的来源。n一一旦旦发发现现某某些些结结果果是是由由可可解解释释的的误误差差引引起起的的，则则应应将其记录下来，同时，这些结果不能用于数据分析。将其记录下来，同时，这些结果不能用于数据分析。n如不能确定误差产生的原因，则保留原始结果。如不能确定误差产生的原因，则保留原始结果。数据收集的检查数据收集的检查 2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座46ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心n第三方质控品第三方质控品n检测系统配套质控品检测系统配套质控品n自制质控品自制质控品质控品的来源质控品的来源5.6 检验结果质量的保证检验结果质量的保证-室内质控室内质控2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座47ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心n基基质质：应应尽尽量量选选择择人人血血清清基基质质，工工程程菌菌或或动动物物源源性性的的基基质质由由于于人人体体内内有有大大量量的的异异嗜嗜性性抗抗体体的的存存在在引引起起非非特特异异或或中中和和反反应应造造成成假假失失控控。稀稀释释液液也也应应用用人人血血清清，冻冻干干品品复复溶溶可可以以使使用用生生理理盐盐水水，避避免免使使用用动动物物源源性性的的小牛血清等。小牛血清等。n稳稳定定性性：室室内内质质控控需需要要观观察察一一段段时时间间，一一般般选选择择生生产产者者声声明明在在一一定定保保存存条条件件下下如如2-82-8或或-20-20以以下下有有效效期期为为6 6个个月月以以上上。要要特特别别注注意意开开瓶瓶有有效效期期和和冻冻干干质质控控物物复复溶溶后后分分装装瓶瓶的的有有效效期期与与原原装装瓶瓶有有效效期期的的区区别别，通通常常前前二二者者的的有有效效期期要要短短许许多多。实实验验室室应应对对这这些些有有效效期期进行验证。进行验证。5.6 检验程序的质量控制检验程序的质量控制质控物的选择质控物的选择 2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座48ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心n质控物数量、实验位置和频次：质控物数量应满足质控物数量、实验位置和频次：质控物数量应满足一个批号至少半年的实验量。每分析批至少安排一个一个批号至少半年的实验量。每分析批至少安排一个弱阳性弱阳性和一个和一个阴性阴性质控，检测位置不能固定而应随机质控，检测位置不能固定而应随机放置。放置。n试剂盒所设的试剂盒所设的阴、阳性内对阴、阳性内对照照是用来计算是用来计算CUT OFFCUT OFF值值或阈值或阈值的，也有相应的有效性判断标准，但只能在同的，也有相应的有效性判断标准，但只能在同批号试剂内使用，批号试剂内使用，不能作为质控指标不能作为质控指标，质控必须是可质控必须是可以监控到不同批号试剂间的变化的外对照。以监控到不同批号试剂间的变化的外对照。质控物的选择质控物的选择 2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座49ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心n高值或超高值阳性血清是用来监控高值或超高值阳性血清是用来监控“HOOK“HOOK效应效应”的的，应该在引进分析方法或试剂盒时评价，不需要长期监应该在引进分析方法或试剂盒时评价，不需要长期监控，同时其测定值远高于控，同时其测定值远高于CUT OFF CUT OFF 值对边缘结果的监值对边缘结果的监控也无任何价值。控也无任何价值。质控物的选择质控物的选择 2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座50ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心o质控品水平：质控品水平：n阴性质控品阴性质控品：特定项目人阴性血清混合物（若为：特定项目人阴性血清混合物（若为ELISA或或CLIA质控品浓度宜质控品浓度宜0.5倍临界值左右）倍临界值左右）n阳性质控品阳性质控品：特定项目人阳性血清混合物：特定项目人阳性血清混合物oANA 1:1000oanti-dsDNA 1:100或以上或以上oanti-ENA 中强度阳性：若组合式检测，至少有中强度阳性：若组合式检测，至少有2个项目为阳性个项目为阳性质控物的选择质控物的选择 2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座51ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心o质控品水平：质控品水平：n弱阳性质控品弱阳性质控品：oELISA、CLIA：临界值：临界值24倍的样本倍的样本oIIF:比临界值高比临界值高1个滴度。特定项目人阳性血清或阴阳个滴度。特定项目人阳性血清或阴阳性血清混合物。性血清混合物。nANA：1：1001:320，ANA模型：斑点型，或均质模型：斑点型，或均质型，或核仁型，或胞浆型等（可以每型，或核仁型，或胞浆型等（可以每6个月变换，存储质控个月变换，存储质控品至少有品至少有2个模型！）个模型！）nanti-dsDNA：1:101:32nanti-ENA：低度阳性或：低度阳性或临界值临界值24倍的样本倍的样本（若组合式（若组合式检测，至少有检测，至少有2个项目为弱阳性）个项目为弱阳性）质控物的选择质控物的选择 2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座52ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心大大量量的的临临床床免免疫疫项项目目无无商商品品化化的的质质控控物物供供应应，实实验验室室需自制，其步骤为：需自制，其步骤为：1 1 收收集集阳阳性性血血清清(无无明明显显溶溶血血、黄黄胆胆、脂脂肪肪血血和和污污染染血血清清)到到一一定量（至少够本室使用定量（至少够本室使用6 6个月以上的量）；个月以上的量）；2 2 传染性病原体需经传染性病原体需经5656、1010小时灭活后使用；小时灭活后使用；3 0.2m3 0.2m生物滤膜过滤，去除纤维沉淀物和细菌；生物滤膜过滤，去除纤维沉淀物和细菌；4 4 稀释，用正常人血清稀释；稀释，用正常人血清稀释；5 5 IIFIIF方方法法ANAANA弱弱阳阳性性质质控控品品（均均质质型型），将将混混合合血血清清浓浓度度调调整整到其到其临界值（临界值（1:1001:100）或高）或高1 1个滴度（个滴度（1:3201:320）或之间）或之间；6 6 测测定定值值，与与定定值值参参考考品品进进行行对对比比、求求值值，无无参参考考品品时时选选择择在在2-42-4倍倍Cut OffCut Off值值附近的阳性值；附近的阳性值；6 6 分装小瓶（每日用量），加盖、贴签，分装小瓶（每日用量），加盖、贴签，-20-20冻存备用；冻存备用；7 7 稳定性及瓶间差评价。稳定性及瓶间差评价。自制质控品自制质控品2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座53ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心n不同保存条件下不同保存条件下 以数值计算方法：以数值计算方法：抽样方法同均一性抽样方法同均一性 2-8 2-8：CVCV值、累计值、累计CVCV值，稳定期值，稳定期 -80 -80：CVCV值、累计值、累计CVCV值，稳定期值，稳定期 室温：室温：CVCV值、累计值、累计CVCV值，稳定期值，稳定期 以定性判定方法：以定性判定方法：抽样方法同均一性抽样方法同均一性 2-8 2-8：滴度的符合率，累计符合率，稳定期：滴度的符合率，累计符合率，稳定期 -80 -80：滴度的符合率，累计符合率，稳定期：滴度的符合率，累计符合率，稳定期 室温：滴度的符合率，累计符合率，稳定期室温：滴度的符合率，累计符合率，稳定期质控品稳定性的评价质控品稳定性的评价1 1）均一性评估：同批号质控品随机抽取）均一性评估：同批号质控品随机抽取5 5支（瓶），支（瓶），80%80%符合为合格。符合为合格。2 2）稳定性评估：评估）稳定性评估：评估1 1周，周，1 1月，月，3 3月，月，6 6月，月，1 1年。有效期一般可标定为年。有效期一般可标定为1 1年。年。2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座54ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心o纯定性试验：纯定性试验：如免疫印迹、斑点渗滤等，除膜条本如免疫印迹、斑点渗滤等，除膜条本身的内对照外：身的内对照外：n每检测日或分析批，应使用弱阳性和阴性质控品两每检测日或分析批，应使用弱阳性和阴性质控品两个水平进行质控。个水平进行质控。n质控判定规则质控判定规则o阴性质控品的检测结果为阴性阴性质控品的检测结果为阴性o弱阳性质控品的检测结果为弱阳性弱阳性质控品的检测结果为弱阳性纯定性试验的质控要求纯定性试验的质控要求如：抗如：抗ENA抗体谱检测抗体谱检测2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座55ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心o以滴度或稀释度判定的试验：如间接免疫荧光法、凝集试验以滴度或稀释度判定的试验：如间接免疫荧光法、凝集试验等，等，n每检测日或分析批，应使用弱阳性和阴性质控品两个水每检测日或分析批，应使用弱阳性和阴性质控品两个水平进行质控。平进行质控。n质控判定规则：质控判定规则：o阴性质控结果为阴性阴性质控结果为阴性o弱阳性质控结果在弱阳性质控结果在靶值上下一个滴度或稀释度靶值上下一个滴度或稀释度纯定性试验的质控要求纯定性试验的质控要求如：ANA、anti-dsDNA、ANCA、AMA、SMA等2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座56ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心o用数值判定结果的试验：如用数值判定结果的试验：如ELISAELISA、CLIACLIA等。等。n浓度：弱阳性质控品浓度宜在浓度：弱阳性质控品浓度宜在2 24 4倍临界值左右，阴性倍临界值左右，阴性质控品浓度宜质控品浓度宜0.50.5倍临界值左右（两个水平）。倍临界值左右（两个水平）。n频次：若是频次：若是ELISAELISA应每板做质控，若是应每板做质控，若是CLIACLIA每分析批做每分析批做质控。质控。n质控判定规则：至少利用其多规则中一个偶然误差及一个质控判定规则：至少利用其多规则中一个偶然误差及一个系统误差规则。系统误差规则。12s警告，警告，13s和和22s失控失控。纯定性试验的质控要求纯定性试验的质控要求如：如：anti-PR3anti-PR3、ACLACL、anti-CCPanti-CCP等等2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座57ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心n发现问题发现问题n分析问题产生的原因分析问题产生的原因n采取纠正措施加以改进，进而预防采取纠正措施加以改进，进而预防n验证和追踪验证和追踪 避免同样的问题出现第二次！避免同样的问题出现第二次！失控原因分析及处理失控原因分析及处理2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座58ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心n阳阳性性质质控控品品失失控控的的常常见见原原因因:污污染染、温温育育时时间间不不稳定、偶然误差。稳定、偶然误差。n阴阴性性质质控控品品的的常常见见失失控控原原因因：污污染染、洗洗板板不不干干净净、标本间的交叉污染。标本间的交叉污染。n处处理理措措施施：全全自自动动加加样样系系统统 一一次次性性吸吸头头的的使使用用，洗洗板板机机的的维维护护，洗洗液液的的定定期期更更换换，温温育育温温度度和和温温育育时时间间的的保保证证，加加样样器器的的准准确确，荧荧光光显显微微镜镜的的维维护。护。失控原因分析及处理失控原因分析及处理2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座59ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心微量加样器的质量保证微量加样器的质量保证2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座60ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心检定或校准：检定或校准：至少每年至少每年1 1次次n加样器的校准加样器的校准 可可依依据据ISO/DIS8655ISO/DIS8655文文件件和和国国家家技技术术监监督督局局颁颁发发的的有有关关定定量量、可可调调移移液液器器的的中中华华人人民民共共和和国国国国家家计计量量检检定定规规程程定定量量、可可调调移移液液器器试试行行检检定定规规程程（JJG646-90JJG646-90）规规定定的的重重量量测测试试方方法法。这这是是目目前用于此类仪器有效的校准方法。前用于此类仪器有效的校准方法。微量加样器的质量保证微量加样器的质量保证2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座61ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心n测定波长：测定波长：400-750nm400-750nmn吸吸光光度度范范围围：0.0-4.00.0-4.0，线线性性误误差差2.0%2.0%，精精密密度度CV0.2%CV0.2%n光光学学系系统统：垂垂直直光光路路多多通通道道（硅硅胶胶管管或或光光导导纤纤维）维）n检测速度：数秒检测速度：数秒n震板功能震板功能n温育功能温育功能n软件功能软件功能酶标仪的质量保证：酶标仪的性能酶标仪的质量保证：酶标仪的性能2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座62ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心n酶酶标标仪仪校校准准至至少少1 1年年1 1次次，可可由由计计量量部部门门或或厂厂家家完成，实验室验证完成，实验室验证酶标仪的质量保证：酶标仪的校准酶标仪的质量保证：酶标仪的校准核心：比色测定的核心：比色测定的 准确性准确性 线性线性 精密性精密性2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座63ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心荧光显微镜的质量保证荧光显微镜的质量保证稳定激发光稳定激发光优质光路优质光路光强校验光强校验2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座64ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心n校校准准：至至少少每每年年1 1次次，可可有有厂厂家家完完成成，实实验验室室验验证证n汞灯：寿命一般汞灯：寿命一般200200小时，及时更换小时，及时更换n正正确确使使用用：尤尤其其开开机机、关关机机（两两次次开开启启光光源源间间隔要在隔要在2020分钟以上）分钟以上）荧光显微镜的质量保证荧光显微镜的质量保证2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座65ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心n5.6.3.15.6.3.1应应按按照照CNAS-RL02CNAS-RL02能能力力验验证证规规则则的的要要求求参参加加相相应应的的能能力力验验证证/室室间间质质评评。应应保保留留参参加加能能力力验验证证/室间质评的检测结果、回报表和证书。室间质评的检测结果、回报表和证书。5.6 检验结果质量的保证检验结果质量的保证-能力验证能力验证2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座66ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心n5.6.3.25.6.3.2对对没没有有开开展展能能力力验验证证/室室间间质质评评的的检检验验项项目目，实实验验室室应应通通过过与与其其他他至至少少2 2个个以以上上实实验验室室（如如已已获获认认可可的的实实验验室室或或其其它它使使用用相相同同检检测测方方法法的的配配套套系系统统的的同同级级别别或或高高级级别别医医院院的的实实验验室室）比比对对的的方方式式判判断断检检验结果的可接受性，并应满足如下要求：验结果的可接受性，并应满足如下要求：（a a）规定比对实验室的选择原则；规定比对实验室的选择原则；（b b）样品数量：至少样品数量：至少5 5份份，包括阴性和阳性；，包括阴性和阳性；（c c）频率：至少频率：至少每年每年2 2次次；（d d）判定标准：应有判定标准：应有80%80%的结果符合要求；的结果符合要求；（e e）结结果果不不一一致致时时，应应分分析析不不一一致致的的原原因因，必必要要时时，采采取取有有效效的的纠纠正正措措施施，并并定定期期评评价价实实验验室室间间比比对对对对其其质质量量的的改改进进作用，保留相应的记录。作用，保留相应的记录。5.6 检验结果质量的保证检验结果质量的保证-实验室比对实验室比对2021/3/29 星期一实验室认可系列培训讲座星期一实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座67ISO15189实验室认可系