菌落总数的测定方法.ppt

菌落菌落总总数的数的测测定方法定方法食品微生物食品微生物检验检验的指的指标标菌落的概念菌落的概念菌落菌落总总数的概念数的概念菌落菌落总总数的数的测测定意定意义义菌落菌落总总数的数的测测定方法定方法目录:食品微生物食品微生物检验检验的指的指标标 食食品品在在食食用用前前的的各各个个环环节节中中，被被微微生生物物污污染染往往往往是是不不可可避避免免的的。评评价价食食品品被被微微生生物物污污染染的的程程度度，要要采采用用微微生生物物检检验验指指标标采采进进行行。常常采采用用的的微微生生物物检检验验指指标标为为三三项项细细菌菌指指标标，即即细细菌菌数数量量(主主要要是是菌菌落落总总数数)、大大肠肠菌群最近似数和致病菌。菌群最近似数和致病菌。一一菌落菌落总总数的概念数的概念 1.菌落菌落总总数数 菌落：菌落：指指细细菌在固体培养基上生菌在固体培养基上生长长繁殖繁殖而形成的能被肉眼而形成的能被肉眼识别识别的生的生长长物，它是由物，它是由数以万数以万计计相同的相同的细细菌集合而成。菌集合而成。菌落菌落总总数：数：指一定数量或面指一定数量或面积积的食品的食品样样品，在一定条件下品，在一定条件下进进行行细细菌培养，使每一菌培养，使每一个活菌只能形成一个肉眼可个活菌只能形成一个肉眼可见见的菌落，然的菌落，然后后进进行菌落行菌落计计数所得的菌落数量。通常以数所得的菌落数量。通常以lg或或1ml或或lcm2样样品中所含的菌落数量来表品中所含的菌落数量来表示。示。二二菌落菌落总总数的数的测测定意定意义义 菌落菌落总总数是食品数是食品卫卫生指生指标标中的重要中的重要项项目，目，主要作主要作为为判定食品被判定食品被污污染程度的指染程度的指标标。检检测测食品中的菌落食品中的菌落总总数，可以了解食品在生数，可以了解食品在生产产中，从原料加工到成品包装受外界中，从原料加工到成品包装受外界污污染染的情况，从而反映食品的的情况，从而反映食品的卫卫生生质质量。量。菌落菌落总总数越多，数越多，说说明食品的明食品的卫卫生生质质量越量越差，食品被病原菌差，食品被病原菌污污染的可能性越大。而染的可能性越大。而菌落菌落总总数越少，数越少，说说明食品的明食品的卫卫生生质质量越好，量越好，食品被病原菌食品被病原菌污污染的可能性越小。染的可能性越小。三三菌落菌落总总数的数的测测定方法定方法菌落菌落总总数的数的测测定方法有定方法有国家国家标标准准测测定方法定方法和和菌落菌落总总数的快速数的快速测测定定法。法。1.国家国家标标准准测测定方法：定方法：（一）原理：（一）原理：菌落菌落总总数的数的测测定是根据微生物在固体培养基上所生定是根据微生物在固体培养基上所生产产的菌落的菌落的生理及培养特征的生理及培养特征进进行的。即一个菌落代表一个行的。即一个菌落代表一个单细单细胞。胞。测测定定时时，首先将待，首先将待测测培养培养样样品制成均匀的，一系列不同稀品制成均匀的，一系列不同稀释释度的稀度的稀释释液，并尽量是液，并尽量是样样品中的微生物品中的微生物细细胞分散，是指胞分散，是指单单个个细细胞胞状状态态存在再取一定稀存在再取一定稀释释倍数的一定稀倍数的一定稀释释液接种到培养基上，使其液接种到培养基上，使其均匀分布。菌落由均匀分布。菌落由单单个个细细胞生胞生长长繁殖而成，因此通繁殖而成，因此通过统计过统计菌落的菌落的数目，可数目，可计计算出算出样样品中的含菌数。品中的含菌数。我我们计们计算出菌落数是培养基上算出菌落数是培养基上 长长出来的活的菌落数。出来的活的菌落数。（二）（二）仪仪器器设备设备 培养基箱，恒温水浴培养基箱，恒温水浴锅锅，天平，三角瓶，天平，三角瓶，灭灭菌培菌培养皿，养皿，灭灭菌菌试试管，玻璃珠，均管，玻璃珠，均质质机，机，灭灭菌刀，菌刀，镊镊子子;酒精灯。酒精灯。（三）培养基和（三）培养基和试剂试剂1.营营养养琼琼脂培养基：按脂培养基：按GB 4789.28中中4.7规规定。定。2.磷酸磷酸盐缓盐缓冲稀冲稀释释液：按液：按GB 4789.28中中3.22规规定。定。3.生理生理盐盐水。水。4.75%乙醇。乙醇。皿(四四)检验检验程序程序 菌落菌落总总数的数的检验检验程序如下程序如下 检检 样样 做成几个适当倍数的稀做成几个适当倍数的稀释释液液 选择选择23个适宜稀个适宜稀释释度度 各以各以1mL分分别别加入加入灭灭菌平皿内菌平皿内 每皿内加入适量每皿内加入适量营营养养琼琼脂脂 361 482h菌落菌落计计数数报报 告告 (五五)操作步操作步骤骤 （一）、（一）、检样检样稀稀释释及培养及培养 （1）以无菌操作）以无菌操作,将将检样检样25g(或或mL)剪碎放于含有剪碎放于含有225mL灭灭菌生理菌生理盐盐水或其他稀水或其他稀释释液的液的灭灭菌玻璃瓶内或菌玻璃瓶内或灭灭菌乳菌乳钵钵内内,经经充分振充分振摇摇或研磨做成或研磨做成1 10的均匀稀的均匀稀释释液。液。固体固体检样检样在加入稀在加入稀释释液后液后,最好置均最好置均质质器中以器中以8 00010 000r/min的速度的速度处处理理1min,做成做成1 10的均匀稀的均匀稀释释液。液。（2）用用1mL灭灭菌吸管吸取菌吸管吸取1 10稀稀释释液液1mL,沿管壁徐徐沿管壁徐徐注入含有注入含有9mL灭灭菌生理菌生理盐盐水或其他稀水或其他稀释释液的液的试试管内管内(注注意吸管尖端不要触及管内稀意吸管尖端不要触及管内稀释释液液),振振摇试摇试管管,混合均匀混合均匀,做做成成1 100的稀的稀释释液。液。(3)另取另取1mL灭灭菌吸管菌吸管,按上条操作按上条操作顺顺序序,做做10倍倍递递增稀增稀释释液液,如此每如此每递递增稀增稀释释一次即一次即换换用用1支支1mL灭灭菌吸管。菌吸管。(4)根据食品根据食品卫卫生生标标准要求或准要求或对标对标本本污污染情况的估染情况的估计计,选选择择23个适宜稀个适宜稀释释度度,分分别别在做在做10倍倍递递增稀增稀释释的同的同时时,即即以吸取以吸取该该稀稀释释度的吸管移度的吸管移1mL稀稀释释液于液于灭灭菌平皿内菌平皿内,每每个稀个稀释释度做两个平皿。度做两个平皿。(5)稀稀释释液移入平皿后液移入平皿后,应应及及时时将凉至将凉至46营营养养琼琼脂培养脂培养基基(可放置于可放置于461水浴保温水浴保温)注入平皿注入平皿约约15mL,并并转动转动平皿使混合均匀。同平皿使混合均匀。同时时将将营营养养琼琼脂培养基脂培养基倾倾入加有入加有1mL稀稀释释液的液的灭灭菌平皿内作空白菌平皿内作空白对对照。照。(6)待待琼琼脂凝固后脂凝固后,翻翻转转平板平板,置置361温箱内培养温箱内培养482h。(二二)、菌落菌落计计数方法数方法 做平板菌落做平板菌落计计数数时时,可用肉眼可用肉眼观查观查,必要必要时时用放大用放大镜检查镜检查,以防以防遗遗漏。在漏。在记记下各平板下各平板的菌落数后的菌落数后,求出同稀求出同稀释释度的各平板平均菌度的各平板平均菌落落总总数。数。2、菌落、菌落总总数的快速数的快速测测定方法定方法1.1.适用范适用范围围用于各用于各类类食品及食品及饮饮用水中菌落用水中菌落总总数的数的测测定。定。2.2.方法原理方法原理将培养基、凝胶和将培养基、凝胶和酶酶显显色色剂剂等加等加载载在在试纸试纸片，片，经经加加样样、培养后，培养后，细细菌菌落在菌菌落在纸纸片上片上显现显现出出红红色菌斑，通色菌斑，通过过技技数数报报告告结结果。果。3.3.操作方法操作方法（1 1）无菌称取）无菌称取样样品品25g25g（或（或25mL25mL）放入含有）放入含有225mL225mL无菌水无菌水的玻璃瓶（均的玻璃瓶（均质质袋）内，袋）内，经经充分振充分振摇摇（均（均质质）做成）做成1:101:10的稀的稀释释液。用液。用1mL1mL灭灭菌吸管吸取菌吸管吸取1:101:10稀稀释释液液1mL1mL，注入含有注入含有9mL9mL灭灭菌生理菌生理盐盐水的水的试试管内，用管内，用1mL1mL灭灭菌吸管菌吸管反复吸吹制成反复吸吹制成1:1001:100的稀的稀释释液、。以此液、。以此类类推，做出推，做出1:10001:1000等稀等稀释释度的稀度的稀释释液，每个稀液，每个稀释释度更度更换换一支一支灭灭菌菌吸管。吸管。（2）一般食品选3个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如食用纯水和矿泉水等）可直接用原液检测。将检验纸片放在水平台面上，揭开上面的透明薄膜，用灭菌吸管吸取样品原液或稀释液1mL,均匀加到中央的圆圈内，轻轻将上盖膜放下，精置5min（3）从中间向周围轻轻推刮，使水分在圆圈内均匀分布，并将气泡赶走。（4）将加了样的检验纸片每6片叠放在仪器，放入自封袋中，平放在37培养箱内培养1524h。取出纸片观察结果。ppt制作：制作：xxxx 学号：学号：xxxxxx