DB34∕T 3053-2017 白酒中非挥发性有机酸的测定 高效液相色谱-串联质谱法(安徽省).pdf

ICS 67.040 C 53 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 30532017 白酒中非挥发性有机酸的测定 高效液相色谱-串联质谱法 Determination of non-volatile organic acids in Baijiuhigh performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry 文稿版次选择 2017 - 12 - 30 发布 2018 - 01 - 30 实施安徽省质量技术监督局发 布 DB34/T 30532017 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽白酒标准化技术委员会提出并归口。 本标准起草单位：安徽瑞思威尔科技有限公司、安徽古井贡酒股份有限公司、安徽润安信科检测科技有限公司、安徽文王酿酒股份有限公司。 本标准主要起草人：周庆伍、李安军、刘国英、马雷、沈小梅、王银辉、刘露、汤有宏、胡心行、丁峰、崔磊、杨恩贺。 DB34/T 30532017 1 白酒中非挥发性有机酸的测定 高效液相色谱-串联质谱法 1 范围 本标准规定了高效液相色谱-串联质谱法测定白酒样品中非挥发性有机酸含量的分析方法。 本标准适用于白酒中酒石酸、苹果酸、没食子酸、绿原酸、咖啡酸、对香豆酸、阿魏酸含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法原理 去除待测白酒中的易挥发物质，经高效液相色谱分离，选择质谱检测器进行定性、定量。采用外标法定量检测非挥发性有机酸的含量。 4 标准物质与试剂 除另有规定外，所用试剂均为色谱纯，水为符合 GB/T 6682 的实验室用一级水。 4.1 乙腈 配制色谱流动相使用。 4.2 7 种非挥发性有机酸物质标准品 酒石酸、苹果酸、没食子酸、绿原酸、咖啡酸、对香豆酸、阿魏酸，化合物信息见附录A，纯度均大于 99.5。 4.3 甲酸 配制色谱流动相使用。 4.4 0.1甲酸溶液 准确吸取 1.00 mL 甲酸，用适量的水稀释，转移至 1000 mL 容量瓶中，用水定容，经 0.22 m水相滤膜抽滤待用。 4.5 0.1甲酸-乙腈溶液 准确吸取 250 L 甲酸加入至 250 mL 容量瓶中，使用乙腈定容，经 0.22 m 有机相滤膜抽滤待用。 DB34/T 30532017 2 4.6 有机酸混合标准储备液（1 mg/mL） 分别称取上述有机酸标准品 100 mg（精确至 0.1 mg），置于 100 mL 容量瓶中，用水定容，即作为混标储备液；然后将其放置于 4冰箱中保存，有效期 3 个月。 4.7 有机酸混合标准使用液 用水将 4.6 有机酸混合标准储备液稀释成 20 g/mL，40 g/mL，80 g/mL，160 g/mL，200 g/mL系列浓度的标准工作溶液。 5 仪器与设备 5.1 高效液相色谱-串联质谱仪：配置 ESI 源。 5.2 电子分析天平：感量 0.1 mg。 5.3 氮吹仪。 5.4 真空抽滤装置。 5.5 微孔滤膜：0.22 m（水相、有机相）。 6 分析步骤 6.1 液相色谱参考条件 色谱柱：C18 色谱柱（2.1 x 50 mm，1.8 m）或具备同效其它色谱柱； 色谱柱温为：45； 流动相：A 相为（4.5）；B 相为（4.4）； 流速为：0.25 mL/min； 洗脱方式：梯度洗脱； 进样体积：2 L； 运行时间：5 min； 高效液相色谱梯度洗脱条件（见表 1）。 表1 高效液相色谱梯度洗脱条件 时间 /min 流动相体积分数 / 梯度曲线 A B 0.0 0 100 6 0.5 20 80 6 1.0 10 90 6 2.0 30 70 6 2.5 30 70 6 3.0 0 100 6 3.5 0 100 6 5.0 0 100 6 DB34/T 30532017 3 6.2 质谱仪 MS/MS 的参考条件 离子化模式为：电喷雾离子源 ESI(-)； 脱溶剂气温度为：500； 脱溶剂气流量为：1000 L/h； 锥孔气流量为：50 L/h； 毛细管电压为：3.0 kV； 采集模式：多反应监测（MRM）模式。 6.3 标准曲线的制作 在液相色谱条件 6.1 和质谱条件 6.2 下测定系列浓度的有机酸标准使用液 4.7， 以质量浓度为横坐标，峰面积或响应值为纵坐标，绘制标准曲线。 6.4 试样制备与测定 6.4.1 试样的制备 准确吸取 5.00 mL 待测白酒样品于比色管中，在 60下进行氮吹处理，去除待测白酒样品中的易挥发物质，直至样品剩余 12 mL，转移至 5 ml 容量瓶中，用水定容，经 0.22 m 水系滤膜过滤后获得待测样品。 6.4.2 试样的测定 采用外标校准曲线法定量测定。 在 6.1 液相色谱条件和 6.2 质谱条件下测定某一浓度的有机酸标准使用液和试样溶液。 标准使用液和试样溶液中有机酸的响应值均应在标准曲线的检测范围内。 6.4.3 定性判断 在同一色谱/质谱条件下进行标准溶液和样品溶液的测定，如果样品溶液中检出的色谱峰的保留时间与某标准物质色谱峰的保留时间一致， 所选择的检测离子对的质荷比也一致， 而且监测离子对的相对丰度比与相当浓度标准溶液的监测离子对的相对丰度比的偏差不超过表2 规定范围， 则可判定样品中存在相应的目标成分。 7 种有机酸总离子流图见附录B，定性、定量离子见附录C。 表2 定性确定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 / 50 20-50 10-20 10 允许的相对偏差 / 20 25 30 50 7 结果计算与表述 试样中有机酸的含量（g/L）按式（1）进行计算： cnX . (1) 式中： X 试样中有机酸的含量，单位为微克每升（g/L）； c 从标准曲线中计算出样品溶液中目标物的质量浓度，单位为微克每升（g/L）； n 试样的稀释倍数。 DB34/T 30532017 4 8 精密度 本标准在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 20。 DB34/T 30532017 5 A A 附 录 A （资料性附录） 7 种有机酸化合物信息 7 种有机酸类化合物信息见表A.1。 表A.1 7 种有机酸类化合物信息 序号 中文名称 英文名称 CAS号 分子式 1 酒石酸 Tartaric acid 87-69-4 C4H6O6 2 苹果酸 Malic acid 97-67-6 C4H6O5 3 没食子酸 Gallic acid 149-91-7 C7H6O5 4 绿原酸 Chlorogenic acid 327-97-9 C16H18O9 5 咖啡酸 Caffeic acid 331-39-5 C9H8O4 6 对香豆酸 p-Coumaric acid 501-98-4 C9H8O3 7 阿魏酸 Ferulic acid 1135-24-6 C10H10O4 DB34/T 30532017 6 B B 附 录 B （资料性附录） 7 种有机酸标准物质的超高效液相色谱-质谱总离子流图 7 种有机酸标准物质的超高效液相色谱-质谱总离子流图见图B.1。 图B.1 7 种有机酸标准物质的超高效液相色谱-质谱总离子流图 注：7 种有机酸化合物的出峰顺序依次为：0.72 min 酒石酸，0.97 min 苹果酸，1.37 min 没食子酸，1.70 min绿原酸，2.73 min 咖啡酸，2.93 min 对香豆酸，3.02 min 阿魏酸。 DB34/T 30532017 7 C C 附 录 C （资料性附录） 7 种有机酸质谱监测参数条件 7 种有机酸质谱监测参数条件见表C.1。 表C.1 7 种有机酸质谱监测参数条件 分析物 母离子 子离子 定量离子对 锥孔电压 (V) 碰撞电压 (eV) 酒石酸 148.94 86.98 148.98134.05 28 10 134.05 8 苹果酸 132.90 115.0 133.0115.0 30 9 没食子酸 168.87 125.46 168.87125.4630 14 绿原酸 353.06 179.10 353.06191.0726 12 191.07 咖啡酸 178.93 135.07 178.93135.0772 30 对香豆酸 162.87 119.30 162.94119.3030 15 阿魏酸 192.99 134.03 192.99178.0634 12 178.06 10 _