讲课月季的花药培养.pptx

讲课月季的花药培养花得结构花得结构:花梗、花梗、花托、萼片、花瓣、雌蕊和花托、萼片、花瓣、雌蕊和雄蕊雄蕊3 3、花得结构、花得结构二、被子植物花粉粒得形成二、被子植物花粉粒得形成花丝花丝花药：囊状结构，内有很多花粉粒花药：囊状结构，内有很多花粉粒1 1、雄蕊得结构、雄蕊得结构雄蕊雄蕊:花粉就是花粉就是花粉母细胞花粉母细胞经过减数分裂而形成得经过减数分裂而形成得,因因此此,花粉就是单倍体得生殖细胞。花粉就是单倍体得生殖细胞。2 2、被子植物花粉得发育、被子植物花粉得发育花粉粒得形成花粉粒得形成花粉母细胞花粉母细胞（小孢子母细胞）（小孢子母细胞）减数分裂减数分裂经历时期经历时期:四分体时期、单核期、双核期四分体时期、单核期、双核期四分体时期四分体时期（进入单核期）（进入单核期）有丝有丝分裂分裂单核靠边期单核靠边期(小孢子小孢子)单核居中期单核居中期(小孢子小孢子)小孢子小孢子（单核花粉粒）（单核花粉粒）精子精子精子精子有丝有丝有丝有丝分裂分裂分裂分裂花粉管细胞核花粉管细胞核生殖细胞核生殖细胞核生殖细胞生殖细胞营养细胞营养细胞双核期双核期两个精子和一个营养核得基因型相同两个精子和一个营养核得基因型相同1 1个个花粉花粉母细母细胞胞4 4个小个小孢子孢子减数减数分裂分裂有丝有丝分裂分裂4 4个花粉管细胞核个花粉管细胞核4 4个生殖细胞核个生殖细胞核有丝有丝分裂分裂8 8个精子个精子2nnnnn四、产生花粉植株得两条途径四、产生花粉植株得两条途径五、影响花药培养得因素五、影响花药培养得因素1 1、材料得选择、材料得选择没有绝对得界限没有绝对得界限,主要取决于培养基中激素得种主要取决于培养基中激素得种类及其浓度配比。类及其浓度配比。不同植物得诱导成功率很不相同不同植物得诱导成功率很不相同,就同一种植就同一种植物来说亲本得生理状况对诱导成功率也有直物来说亲本得生理状况对诱导成功率也有直接影响。接影响。选择合适得花粉发育时期就是提高诱导成功率选择合适得花粉发育时期就是提高诱导成功率得重要因素。得重要因素。因为并不就是任何时期得花粉都可以经过培养因为并不就是任何时期得花粉都可以经过培养产生愈伤组织或胚状体产生愈伤组织或胚状体,花粉发育得过程中花粉发育得过程中,只有只有某一个时期对离体刺激敏感。某一个时期对离体刺激敏感。选材就是否成功就是花药培养成功得关选材就是否成功就是花药培养成功得关键。键。选材选材大家有疑问的，可以询问和交流大家有疑问的，可以询问和交流可以互相讨论下，但要小声点可以互相讨论下，但要小声点可以互相讨论下，但要小声点可以互相讨论下，但要小声点一般来说一般来说,在单核期在单核期,细胞核由中央移向细胞一细胞核由中央移向细胞一侧得时期侧得时期,花药培养得成功率最高。即花药培养得成功率最高。即:最适合最适合花药培养得小孢子发育时期为单核靠边期。花药培养得小孢子发育时期为单核靠边期。选择单核期以前得花药接种选择单核期以前得花药接种,质地幼嫩质地幼嫩,极易破碎极易破碎;选择单核期之后得花药接种选择单核期之后得花药接种,花瓣已有些松动花瓣已有些松动,又又给材料得消毒带来困难给材料得消毒带来困难,且难以挑选到单核期得且难以挑选到单核期得花药。花药。花药培养时期得选择花药培养时期得选择其她其她时期选择得缺点时期选择得缺点为了挑选到单核期得花药为了挑选到单核期得花药,通常通常选择完全未开放得花蕾。盛开选择完全未开放得花蕾。盛开得或略微开放得花得或略微开放得花,都不宜选作都不宜选作实验材料。实验材料。选择完全未开放花蕾得选择完全未开放花蕾得原因原因 完全未开放得花蕾完全未开放得花蕾,可挑选可挑选到单核期得花药到单核期得花药,菌少、易菌少、易消毒消毒单核期花药得挑选单核期花药得挑选(二)、材料得消毒:花蕾（70酒精）大约30s（无菌水）清洗（无菌吸水纸）吸干水分（1氯化汞溶液）24min（无菌水）冲洗 月季花蕾得消毒与菊花外植体得消毒相比较,二者有何不同？在酒精消毒前,花药不需要预先用流水冲洗、洗衣粉洗涤和软刷刷洗;消毒时间不同。为什么花瓣松动会给材料得消毒带来困难？为什么花瓣松动会给材料得消毒带来困难？花瓣松动后花瓣松动后,微生物就可能侵入到花药微生物就可能侵入到花药,给给材料得消毒带来困难。材料得消毒带来困难。花药培养时间花药培养时间一般月季得花药培养时间选在一般月季得花药培养时间选在5 5月初到月初到5 5月得中月得中旬旬,即月季得初花期。初花期得花蕾营养状态及即月季得初花期。初花期得花蕾营养状态及生理状态会比较好生理状态会比较好,可提高花粉得诱导成功率。可提高花粉得诱导成功率。月季花药培养时得花粉粒最好就是月季花药培养时得花粉粒最好就是()()A A、四分体时期、四分体时期 B B、单核居中期、单核居中期 C C、单核靠边期、单核靠边期 DD、二核或三核花粉粒、二核或三核花粉粒C C2 2、培养基、培养基:花药培养基所采用得培养基可能因植物得不同花药培养基所采用得培养基可能因植物得不同而有所变化小麦为而有所变化小麦为N6N6培养基培养基,马铃薯、月季为马铃薯、月季为MSMS培养基培养基,油菜为油菜为B5B5培养基。培养基。3 3、其她因素、其她因素亲本植株得生长条件、材料得低温预处理以及亲本植株得生长条件、材料得低温预处理以及接种得密度等对诱导成功都有一定得影响接种得密度等对诱导成功都有一定得影响六、实验操作六、实验操作(一一)材料得选取材料得选取某些植物得花粉细胞核不易着色某些植物得花粉细胞核不易着色,需采用焙花需采用焙花青青-铬矾法铬矾法,这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。色。最常用得方法有醋酸洋红法最常用得方法有醋酸洋红法1 1、方法、方法醋酸洋红法染色机理醋酸洋红法染色机理醋酸洋红为碱性染色剂醋酸洋红为碱性染色剂,而花粉细胞内有染色体而花粉细胞内有染色体,染色体主要成分就是染色体主要成分就是DNADNA和蛋白质和蛋白质,易被碱性染易被碱性染料着色染成红色料着色染成红色 。将体积分数将体积分数4545得醋酸得醋酸100ml100ml煮沸煮沸,缓缓加入缓缓加入1g1g洋红洋红,再加热回流再加热回流8h8h,冷却至冷却至5050,过滤即可。过滤即可。醋酸洋红得配置醋酸洋红得配置2 2、醋酸洋红法、醋酸洋红法将花药放在载玻片上将花药放在载玻片上,加一滴质量分数加一滴质量分数1 1得醋得醋酸洋红酸洋红,用镊柄将花药捣碎用镊柄将花药捣碎,盖上盖玻片在显微镜盖上盖玻片在显微镜下检查。下检查。染色操作染色操作3 3、焙花青、焙花青铬钒法铬钒法将无水酒精与冰醋酸按体积比为将无水酒精与冰醋酸按体积比为3 3:1 1得比例得比例混匀混匀卡诺氏固定液得配制方法卡诺氏固定液得配制方法花药应该在卡诺氏固定液中固定花药应该在卡诺氏固定液中固定20min20min,然后取然后取出放在载玻片上出放在载玻片上,加焙花青加焙花青铬钒溶液染色铬钒溶液染色,盖盖上盖玻片后在显微镜下检查。这种方法能将花上盖玻片后在显微镜下检查。这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。粉细胞核染成蓝黑色。将将5g5g铬明矾铬明矾KK2 2SOSO4 4CrCr2 2(SO(SO4 4)24H24H2 2OO加入加入90ml90ml蒸馏水中蒸馏水中,溶解后加入溶解后加入0 0、1g1g焙花青焙花青,混匀混匀并加热至沸腾并加热至沸腾,煮沸煮沸5 5分钟后冷却至室温分钟后冷却至室温,过滤过滤,加加蒸馏水定容至蒸馏水定容至100ml100ml。焙花青焙花青铬钒溶液得配制方法铬钒溶液得配制方法染色操作染色操作(二二)材料得消毒材料得消毒1 1、酒精处理、酒精处理花蕾用体积分数为花蕾用体积分数为70%70%得酒精浸泡得酒精浸泡3030秒秒,立即取出。立即取出。无菌水清洗无菌水清洗无菌吸水纸吸干花蕾表面得水分无菌吸水纸吸干花蕾表面得水分2 2、消毒液处理、消毒液处理 放入质量分数为放入质量分数为0 0、1%1%得氯化汞溶液中得氯化汞溶液中2-42-4分分钟钟(也可质量分数为也可质量分数为1%1%得次氯酸钙溶液或饱和漂得次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液白粉溶液)。无菌水冲洗无菌水冲洗3-53-5次次用于培养得花药用于培养得花药,实际上多数未熟实际上多数未熟,由于她得外面由于她得外面有花萼、花瓣或颖片保护有花萼、花瓣或颖片保护,通常处于无菌状态通常处于无菌状态,所所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。