酶的竞争性抑制作用.ppt

一、实验目的一、实验目的1、通过实验证明组织中存在、通过实验证明组织中存在琥珀酸脱氢酶琥珀酸脱氢酶2.验证丙二酸是琥珀酸脱氢酶的验证丙二酸是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂竞争性抑制剂*竞争性抑制的特点竞争性抑制的特点(4)抑抑制制程程度度取取决决于于抑抑制制剂剂与与酶酶的的相相对对亲亲和和力力及及底物浓度底物浓度(1)I 与与 S结构类似，竞争酶的活性中心结构类似，竞争酶的活性中心(2)E 既既可可以以结结合合 S 也也可可以以结结合合 I,但但是是不不能能同同时时结结合两者合两者(3)I 与与 E的活性中心结合后的活性中心结合后,E 分子失去催化活性分子失去催化活性二、实验原理二、实验原理竞争性抑制作用竞争性抑制作用v琥珀酸琥珀酸在在琥珀酸脱氢酶琥珀酸脱氢酶催化下脱氢生成催化下脱氢生成延延胡索酸胡索酸，脱下的氢被受氢体接受。本实验，脱下的氢被受氢体接受。本实验用亚甲蓝（用亚甲蓝（MBMB）作为受氢体，）作为受氢体，蓝色蓝色亚甲蓝亚甲蓝接受琥珀酸脱下的氢由蓝色还原成接受琥珀酸脱下的氢由蓝色还原成无色无色的的甲烯白（甲烯白（MBHMBH2 2）。）。v丙二酸丙二酸与琥珀酸分子结构相似，能竞争与琥珀酸分子结构相似，能竞争性抑制琥珀酸脱氢酶。性抑制琥珀酸脱氢酶。通过观察在由通过观察在由不不同浓度同浓度的琥珀酸与丙二酸组成的反应体的琥珀酸与丙二酸组成的反应体系中使等量亚甲蓝系中使等量亚甲蓝退色的程度退色的程度，从而鉴，从而鉴定丙二酸对琥珀酸脱氢酶的定丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用抑制作用和和抑制程度抑制程度。当抑制剂浓度较低时当抑制剂浓度较低时随着抑制剂浓度的增高随着抑制剂浓度的增高当抑制剂浓度高达一定程度当抑制剂浓度高达一定程度三、实验器材三、实验器材1、组织捣碎机、组织捣碎机2、试管、试管3、试管架、试管架4、滴管、滴管5、恒温水浴箱、恒温水浴箱四、实验试剂四、实验试剂:1、0.1mol/L磷酸缓冲液（磷酸缓冲液（pH7.4）2、1.5%琥珀酸钠溶液琥珀酸钠溶液3、1%丙二酸钠溶液丙二酸钠溶液4、0.02%亚甲蓝溶液亚甲蓝溶液5、液状石蜡、液状石蜡五、实验方法五、实验方法1、匀浆液的制备、匀浆液的制备 新鲜家兔肝脏洗净表面血液，剪去筋膜，称重。新鲜家兔肝脏洗净表面血液，剪去筋膜，称重。按按20%的浓度加入的浓度加入pH 7.4的的0.1 mol/L磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液，放于组织捣碎机中充分捣碎，过滤备用。放于组织捣碎机中充分捣碎，过滤备用。2、按表操作、按表操作 配制琥珀酸脱氢酶的催化作用及其可逆性抑制反配制琥珀酸脱氢酶的催化作用及其可逆性抑制反应体系应体系 试剂试剂（滴）（滴）管管号号1.5%琥珀酸钠琥珀酸钠1%丙二酸钠丙二酸钠蒸馏水蒸馏水肝匀浆液肝匀浆液0.02%亚甲蓝亚甲蓝11020101021010101010310102010420101010将各管将各管混匀混匀，加少量液体石蜡封盖液面，隔，加少量液体石蜡封盖液面，隔绝绝空气。然后把空气。然后把各管置于各管置于37水浴箱中保温水浴箱中保温10-15分钟，随时观察各管的颜分钟，随时观察各管的颜色变化并记录结果色变化并记录结果。管管 号号 1 2 3 4 七、注意事项七、注意事项 1、加加试剂试剂前一定要将前一定要将试试管清洗管清洗干干净净2、加入液体石蜡后就不要再加入液体石蜡后就不要再摇动试摇动试管。避免管。避免空气中的氧接触反空气中的氧接触反应应溶液，使得溶液，使得还还原型的甲原型的甲烯烯白重新氧化成白重新氧化成蓝蓝色色3、37水浴保温水浴保温过过程中，要注意随程中，要注意随时观时观察各察各试试管的褪色管的褪色情况情况 六、实验结果六、实验结果 管管 号号 1 2 3 4六、思考题六、思考题1、解释各管颜色变化的原因、解释各管颜色变化的原因2、本实验中液体石蜡起什么作用？、本实验中液体石蜡起什么作用？3、各管中的反应体系配好后为什么不能再摇动、各管中的反应体系配好后为什么不能再摇动?4、制备肝匀浆时用磷酸盐缓冲液，可否换用蒸、制备肝匀浆时用磷酸盐缓冲液，可否换用蒸馏水，为什么？馏水，为什么？5、举例你所学过的以竞争性抑制为作用机制的、举例你所学过的以竞争性抑制为作用机制的临床药物，阐述其发挥药效的生化机理。临床药物，阐述其发挥药效的生化机理。